CC BY
27= ^^
Научные статьи
УДК 616.211-006.5-078
ОСОБЕННОСТИ VEGF ПРИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ХРОНИЧЕСКОГО ПОЛИПОЗНОГО РИНОСИНУСИТА
У. Н.Вохидов
ГУ «Ташкентская медицинская академия», г. Ташкент, Республика Узбекистан
(Зав. каф. ЛОР-болезней - доц. У. С. Хасанов)
FEATURES OF VEGF IN IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF VARIOUS FORMS OF CHRONIC POLYPOID RHINOSINUSITIS
U. N. Vokhidov
Tashkent Medical Academy, Tashkent, the Republic of Uzbekistan
Целью исследования явилось изучение VEGF при иммуногистохимии различных форм хронического полипозного риносинусита. Нами были исследованы 45 больных хроническим полипозным ри-носинуситом за 2013 г., которым проводилось оперативное вмешательство с последующим морфологическим и иммуногистохимическим исследованием макропрепарата. Исследование показало, что в полипах больных с нейтрофильным полипозным риносинуситом отмечается более выраженная активация VEGF, чем в полипах больных с эозинофильным полипозным риносинуситом.
Ключевые слова: хронический полипозный риносинусит, морфологическое исследование, иммуно-гистохимическое исследование, VEGF.
Библиография: 8 источников.
The purpose of this study was to investigate VEGF in immunohistochemistry of various forms of chronic polypoid rhinosinusitis. We studied 45 patients with chronic polypoid rhinosinusitis in 2013, who underwent surgery followed by morphological and immunohistochemical studies of macropreparations. The study showed that polyps of patients with neutrophilic polypoid rhinosinusitis had greater activation of VEGF than in polyps of patients with eosinophilic polypoid rhinosinusitis.
Key words: chronic polypoid rhinosinusitis, morphological study, immunohistochemical study, VEGF.
Bibliography: 8 sources.
Хронический полипозный риносинусит (ХПРС) -хроническое воспалительное заболевание слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух, характеризующееся образованием и рецидивирующим ростом полипов, состоящих преимущественно из отечной ткани, инфильтрированной эозино-филами и нейтрофилами [1, 3].
Многие авторы отдают ведущую роль в развитии ХПРС эозинофилам, инфильтрирующим строму полипа [2], не учитывая при этом тип гистологического строения и другие варианты клеточной инфильтрации стромы полипозно-измененной слизистой оболочки. В зависимости от инфильтрации стромы слизистой оболочки полости носа разными типами клеток полипы делят на инфекционные (нейтро-фильные) и аллергические (эозинофильные). Это обстоятельство основано на преобладании эозино-филов при аллергическом характере воспаления и нейтрофилов при неаллергическом воспалении [5].
Одним из наиболее мощных стимуляторов миграции эозинофилов является сосудистый эн-дотелиальный фактор роста (VEGF, англ. Vascular endothelial growth factor) - сигнальный белок, вырабатываемый клетками для стимулирования васку-логенеза (образование эмбриональной сосудистой
системы) и ангиогенеза (рост новых сосудов в уже существующей сосудистой системе). Производство белков VEGF может быть вызвано в клетках, которые не получают достаточного количества кислорода. Когда клетка испытывает дефицит в кислороде, она производит один из факторов транскрипции -фактор, индуцируемый гипоксией (Н№). Данный фактор (помимо других функций, в частности модуляции эритропоэза, т. е. образования эритроцитов в костном мозге) стимулирует высвобождение белков VEGF. Циркулирующий белок VEGF затем связывается с VEGF-рецептором на клетках эндотелия и активирует действие тирозинкиназы, запуская ангио-генез [7, 8].
VEGF способствует отеку слизистой оболочки и росту полипов, его эффект приблизительно в 50 000 раз больше, чем у гистамина. Иммуно-гистохимическое исследование слизистой оболочки носа показало, что VEGF-белок вырабатывается эн-дотелиоцитами кровеносных сосудов. В эпителиальных клетках носовых полипов также выявлена экспрессия VEGF [6].
VEGF как митоген эндотелиальных клеток участвует в развитии полипов. Иммуногистохимиче-ский анализ носовых полипов детей показал уве-
Российская оториноларингология № 3 (76) 2015
личение окрашивания VEGF в эндотелии сосудов и увеличение среднего количество кровеносных сосудов, которые коррелировали с размерами носовых полипов [7]. Другие также показали повышенную экспрессию VEGF и его рецептора, локализованных в эндотелии, базальных мембранах, периваскуляр-ных пространствах и эпителиях полипов [4, 8]. Эти исследования показывают, что эпителий является существенным, но не единственным источником VEGF в тканях полипов [4]. Тем не менее на сегодняшний день не было никаких исследований роли
VEGF как эпителиального митогена при ХПРС. Поэтому мы предположили, что VEGF является центральным путем, по которому регулируется рост эпителиальных клеток дыхательных путей.
Исходя из вышесказанного целью данного исследования явилось изучение VEGF при иммуноги-стохимии различных форм хронического полипоз-ного риносинусита.
Пациенты и методы исследования. Материалом данного исследования послужили парафиновые срезы операционного материала, удаленно-
Рис. 1. Увеличение в х200 раз. Носовой полип. При морфоло- Рис. 2. Увеличение в х200 раз. Носовой полип. При морфологическом исследовании определяется преобладание нейтро- гическом исследовании определяется преобладание эозино-фильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа. фильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа.
Рис. 3. Увеличение в х200 раз. Иммуногистохимическое исследование полипов, удаленных у больных с эозинофильным поли-
позным риносинуситом.
Рис. 4. Увеличение в х200 раз. Иммуногистохимическое исследование полипов, удаленных у больных с нейтрофильным по-
липозным риносинуситом.
го во время эндоскопических операций в полости носа и околоносовых пазухах 45 больных в возрасте 18-77 лет, которые находились на стационарном лечении в 3-й клинике Ташкентской медицинской академии (32 мужчины и 13 женщин) в 2013 г. Морфологическое исследование было проведено в лаборатории морфологии 3-й клиники Ташкентской медицинской академии, иммуно-гистохимическое исследование - в лаборатории иммуногистохимии Российского научного центра радиологии и хирургических технологий (Санкт-Петербург, Россия). Оба исследования проводили на парафиновых срезах операционного материала толщиной 3 мкм. Морфологическое исследование проводилось с окраской гематоксилин-эозином с последующим увеличением в 200 раз. С помощью морфометрии выявляли формы полипозного ри-носинусита путем определения преобладания инфильтрации эозинофилами или нейтрофилами. Иммуногистохимическую демаскировку антигенов осуществляли путем нагревания срезов в цитратном буфере (рН 6,0) или в трис-ЭДТА-буфере (рН 9,0) в водяной бане в течение 30 мин при температуре 95 °С. Использовали первичные поликлональные кроличьи антитела к VEGF, готовые к использованию. Срезы инкубировали с первичными антителами в течение 30 мин при температуре 20-22 °С во влажной камере. Затем, после серии промываний от несвязавшихся антител, срезы инкубировали с системой визуализации Envision 30 мин при температуре 20-22 °С. После серии промываний от несвя-завшейся системы визуализации на срезы наносили хромоген - диаминобензидин - на 5 мин для проявления результата реакции. Результаты проведенных исследований оценивали при увеличении 40*10 на световом микроскопе. Статистическую обработку данных исследования проводили по программе Microsoft Excel 2010 (Microsoft Corp., США).
Результаты исследования. При морфологическом исследовании слизистой оболочки полипов больных с ХПРС констатировали десквамацию мерцательного эпителия вплоть до базального слоя. Собственная пластинка слизистой оболочки была отечной, густо инфильтрированной эозинофилами
Научные статьи
и нейтрофилами, плазматическими, бокаловидными клетками. Сосуды собственной пластинки крове-наполнены.
При морфометрии послеоперационного материала у 33 (73,3%) препаратов отмечалось преобладание эозинофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа и околоносовых пазух, у 12 (26,7%) препаратов отмечалось преобладание нейтрофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа и околоносовых пазух (рис. 1, 2). В связи с этим, больные были разделены на две группы: с хроническим эозинофильным полипозным ри-носинуситом и с хроническим нейтрофильным по-липозным риносинуситом.
При иммуногистохимическом исследовании макропрепаратов обеих групп выявление маркера VEGF различалось между собой. При иммуногисто-химическом исследовании макропрепарата эозино-фильного полипозного риносинусита отмечали накопление маркера VEGF на поверхности эпителия, однако в самой его строме не выявляли. При иммуногистохимическом исследовании макропрепарата нейтрофильного полипозного риносинусита в строме полипа отмечали диффузную экспрессию маркера VEGF, которая была интенсивной и занимала 1/3 стромы (рис. 3, 4).
В макропрепарате эозинофильного полипозного риносинусита отмечаются отек стромы и несколько больших кровеносных сосудов, внутри которых имеется большое количество эритроцитов, однако отсутствие экспрессии VEGF свидетельствует о хорошем кровоснабжении эозинофильной ткани полипов. Это определяет аллергический фон заболевания, протекающего с обильным слизетечением.
В тканях нейтрофильных полипов реже отмечаются большие кровеносные сосуды. В них отмечаются множественные капилляры, в большинстве случаев - накопление их вблизи эпителия. По нашему мнению, большое количество маркера VEGF при хроническом нейтрофильном полипозном ри-носинусите вызвано нехваткой кислорода и кровеносными сосудами, что в последующем может способствовать образованию новой сосудистой сети и фиброзной ткани.
Выводы
Выявление различных форм хронических полипозных риносинуситов является целесообразным для определения течения полипозного процесса с последующим выбором тактики лечения.
Экспрессия маркера фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) более выражена при нейтрофильном полипозном риносинусите, чем при эозинофильном, что свидетельствует о возможности раннего рецидива.
ЛИТЕРАТУРА
1. Allergic Rhinitis and its impact on asthma update (ARIA 2008). The Belgian perspective / Bachert C. [et al.] // B-ENT, 2008. N 4(4). P. 253-257.
2. Eosinophil degranulation patterns in nasal polyposis: an ultrastructural study / M. Armengot L. [et al.]// Am. Jurn. Rhinol Allergy. Sep. Oct. 2009. Vol.23(5). P. 466-470.
3. EPOS 2012: European position paper on rhinosinusitis and nasal polyps 2012. A summary for otorhinolaryngologists // Fokkens W. J. [et al.] // Rhinology. 2012 Mar. Vol. 50 (1).
4. Expression, localization, and significance of vascular permeability/vascular endothelial growth factor in nasal polyps / Gosepath J. [et al.]// Am. Jurn. Rhinol. 2005. Vol. 19. P. 7-13.
Российская оториноларингология № 3 (76) 2015
5. Relationship between clinical measures and histopathologic findings in chronic rhinosinusitis / Soler Z. M. [et al.] // Otolaryngol Head Neck Surg, 2009. Vol. 141. P. 454-461.
6. The role of cytokine in eosinophilic infiltration into nasal polips / Y. Korono// International Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006, Российская ринология. 2006. N 2. C. 31.
7. Vascular endothelial growth factor and children featuring nasal polyps / Hu K. H. [et al.] // Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol. 2007. N 71. P. 23-28.
8. Vascular endothelial growth factor in nasal polyps: a comparison of asthmatic and non-asthmatic patients / Bateman N. D. [et al.] // Clin. Otolaryngol. Allied Sci 2004. N 29. P. 677-681.
Вохидов Улугбек Нуридинович - ст. н. с.-соискатель каф. ЛОР-болезней Ташкентской медицинской академии. Республика Узбекистан. 100000, г. Ташкент, ул. Фароби, д. 2; тел.: (+99890) 345-45-82, (8-371) 262-51-67, e-mail: [email protected]
REFERENCES
1. Allergic Rhinitis and its impact on asthma update (ARIA 2008). The Belgian perspective. Bachert C. [et al.]. B-ENT, 2008, N 4(4), pp. 253-257.
2. Eosinophil degranulation patterns in nasal polyposis: an ultrastructural study. M. Armengot L. [et al.]. Am. J. Rhinol Allergy. Sep. Oct. 2009, vol. 23(5), pp. 466-470.
3. EPOS 2012: European position paper on rhinosinusitis and nasal polyps 2012. A summary for otorhinolaryngologists. Fokkens W. J. [et al.]. Rhinology, 2012 Mar, vol. 50 (1).
4. Expression, localization, and significance of vascular permeability. vascular endothelial growth factor in nasal polyps. Gosepath J. [et al.]. Am J. Rhinol., 2005, N 19, pp. 7-13.
5. Relationship between clinical measures and histopathologic findings in chronic rhinosinusitis. Soler Z. M. [et al.]. Otolaryngol Head Neck Surg, 2009, Vol. 141, pp. 454-461.
6. The role of cytokine in eosinophilic infiltration into nasal polips. Y. Korono. International Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006, Rossiiskaya rinologiya, 2006, N 2, p. 31.
7. Vascular endothelial growth factor and children featuring nasal polyps. Hu K. H. [et al.]. Int J Pediatr Otorhinolaryngol, 2007, N 71, pp. 23-28.
8. Vascular endothelial growth factor in nasal polyps: a comparison of asthmatic and non-asthmatic patients. Bateman N. D. [et al.]. Clin. Otolaryngol. Allied. Sci, 2004, N 29, pp. 677-681.
Vokhidov Ulugbek N. - senior scientific worker - degree-seeking student of the department of ENT diseases of Tashkent medical academy. The Republic of Uzbekistan. 100000, Tashkent, Farobi St., 2, ph. (+99890) 345-45-82, (8-371) 262-51-67, e-mail: [email protected]
