CC BY
36Российская оториноларингология № 1 (92) 2018 ^
УДК 616.216.1-002-006.5-091.5:576.8.077.3
doi: 10.18692/1810-4800-2018-1-34-37
РОЛЬ МЕТОДА ИМПРЕГНИРОВАНИЯ СЕРЕБРОМ
ПРИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ ПОЛИПОВ НОСА
Вохидов У. Н.
ГУ «Ташкентский государственный стоматологический институт»,
734003, г. Ташкент, Республика Узбекистан
(Зав. каф. хирургических направлений - доц. Н. Р. Янгиева)
THE ROLE OF SILVER IMPREGNATION METHOD
IN THE IMMUNOHISTOCHEMICAL EXAMINATION OF THE NASAL POLYPS
Vokhidov U. N.
ГУ «Ташкентский государственный стоматологический институт», г. Ташкент, Республика Узбекистан
Целью исследования явилось изучение ретикулярных волокон при различных формах хронического полипозного риносинусита. Нами были обследованы 45 больных с хроническим полипозным риноси-нуситом за 2013 год, которым проводилось оперативное вмешательство с последующим морфологическим и иммуногистохимическим исследованием макропрепарата. Исследование показало, что в полипах больных с «эозинофильным» полипозным риносинуситом отмечаются более выраженный отек и деградация ретикулярных волокон по сравнению с «нейтрофильным» полипозным риносинуситом.
Ключевые слова: хронический полипозный риносинусит, морфологическое исследование, имму-ногистохимическое исследование, ретикулярные волокна.
Библиография: 8 источников.
The objective of the work was the study of reticular fibers in various forms of chronic polypous rhinosinusitis. We have examined 45 patients with chronic polypous rhinosinusitis in 2013, who had undergone surgical treatment with the further morphological and immunohistochemical examination of the macropreparation. The study has revealed that the polyps of the patients with eosinophilic polypous rhinosinusitis displays more expressed oedema and argentophilic fibers degradation in comparison with neutrophilic polypous sinusitis.
Key words: chronic polypous rhinosinusitis, morphological examination, immunohistochemical examination, argentophilic fibers.
Bibliography: 8 sources.
Хронический полипозный риносинусит (ХПРС) - хроническое воспалительное заболевание слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух, характеризующееся образованием и рецидивирующим ростом полипов, состоящих преимущественно из отечной ткани, инфильтрированной эозинофилами и нейтрофилами [1-3].
Традиционно назальный эпителий рассматривается как пассивный барьер, покрывающий полость носа, защищающий ткани от разнообразных патогенов и аллергенов [4]. В то же время постепенно накапливаются данные о том, что эпителий - активный участник иммунологического ответа. При полипозе носа он одновременно является и активным участником патогенеза, и пассивной мишенью патологических процессов [4, 6]. Ретикулярные волокна (диаметр 0,5-2 мкм) - продукт синтеза ретикулярных клеток. Они обнаруживаются при импрегнации со-
лями серебра, поэтому называются еще аргиро-фильными. Эти волокна устойчивы к действию слабых кислот и щелочей и не перевариваются трипсином [5, 6]. Собственно, ретикулярные волокна - дефинитивные, окончательные образования, содержащие коллаген III типа. Ретикулярные волокна слизистой оболочки обеспечивают упругость слизистой оболочки носа и околоносовых пазух [5, 6]. По растяжимости эти волокна занимают промежуточное положение между коллаге-новыми и эластическими [6].
Многие авторы отдают ведущую роль в развитии ХПРС эозинофилам, инфильтрирующим строму полипа [1, 2], не учитывая при этом тип гистологического строения и другие варианты клеточной инфильтрации стромы полипозно-из-мененной слизистой оболочки. В зависимости от инфильтрации стромы слизистой оболочки полости носа разными типами клеток полипы делят на
; 65-я науч.-практ. конф. «Молодые ученые - российской оториноларингологии»
«инфекционные» (нейтрофильные) и «аллергические» (эозинофильные). Это обстоятельство основано на преобладании эозинофилов при аллергическом характере воспаления и нейтрофилов при неаллергическом воспалении [7].
Цель исследования. Изучение ретикулярных волокон при различных формах хронического по-липозного риносинусита.
Пациенты и методы исследования. Материалом данного исследования послужили парафиновые срезы операционного материала, удаленного во время эндоскопической операции в носу и околоносовых пазухах 45 больных, в возрасте 18-77 лет, которые находились на стационарном лечении в 3-й клинике Ташкентской медицинской академии (32 мужчины и 13 женщин) в 2013 году.
Морфологические и иммуногистохимические исследования проводили на парафиновых срезах операционного материала толщиной 3 мкм. Для изучения некоторых морфологических особенностей слизистой оболочки носа проводили морфометрические исследования: подсчет количества, определение оптической плотности ядер и измерение площади тканевого отека в образцах ткани. Для окраски использовали гематоксилин. Результаты оценивали на световом микроскопе Axiostar Plus с увеличением х200. Результаты документировали с помощью программы ВидеоТесТ-Морфология 5.2. О концентрации искомых компонентов в тканях судили по оптической плотности, оцениваемой по числу точек изображения (пикселей), принадлежащих объекту, в одном поле зрения при увеличении х200. С помощью морфометрии выявляли формы полипозного риносинусита путем определения преобладания инфильтрации эозинофилами или нейтрофилами.
Иммуногистохимическое исследование проводили в лаборатории иммуногистохимии Российского научного центра радиологии и хирургических технологий (зав. лабораторией, проф. К. М. Пожарисский). Иммуногистохимиче-ское исследование с импрегнированием серебром проводили при окраске по Гордону-Свиту для определения ретикулярных волокон стромы носовых полипов. Результаты проведенных исследований оценивали при увеличении х400 на световом микроскопе. Статистическая обработка данных исследования проводилась на программе Microsoft Excel 2010.
Результаты исследования. При морфологическом исследовании слизистой оболочки полипов больных ХПРС констатировали десквамацию мерцательного эпителия вплоть до базального слоя, собственная пластинка слизистой оболочки была отечной, густо инфильтрированной эози-нофилами и нейтрофилами, плазматическими,
бокаловидными клетками, сосуды собственной пластинки - кровенаполнены.
Поверхность полипов была покрыта реснитчатым эпителием, который на одних участках был представлен многорядным эпителием, снабженным многочисленными ресничками, а на других - слизеобразующими призматическими клетками, большей частью спущенными или подвергнутыми метаплазии.
При обширных (тотальных) экссудативно-ги-перпластических (полипозных и полипозно-гной-ных) процессах в верхнечелюстной пазухе изменения слизистой оболочки носят трудно обратимый характер. При данных состояниях вмешательства в области латеральной стенки полости носа мы рекомендуем дополнять частичным удалением слизистой оболочки пазухи. Неизмененная слизистая оболочка при этом не удаляется.
Скорее всего, трудно обратимые деструктивно-дистрофические изменения слизистой оболочки, развивающиеся на протяжении многих лет, затрагивают все слои слизистой оболочки верхнечелюстной пазухи, а не отдельные ее участки. В связи с этим мы считаем, что слизистая оболочка с явлениями выраженного фиброза базальной мембраны и отсутствием мерцательного эпителия на фоне очаговой лейкоцитарной инфильтрации и гиалинизации сосудов абсолютно не выполняет своих основных функций. Это создает предпосылки для развития рецидивирующего воспаления в верхнечелюстной пазухе.
Выявленный полиморфизм строения реснитчатого эпителия, кроме теоретического, имеет и большое практическое значение. В настоящее время большинство эндоназальных операций выполняется без учета особенностей морфологического строения слизистой оболочки полости носа. Достаточно часто в целях создания широкого сообщения пораженной пазухи с полостью носа удаляется большой объем важных в функциональном отношении участков мерцательного эпителия.
При морфометрии послеоперационного материала у 33 препаратов (73,3%) отмечалось преобладание эозинофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа и околоносовых пазух, у 12 препаратов (26,7%) отмечалось преобладание нейтрофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа и околоносовых пазух (рис. 1, 2). В связи с этим больные были разделены на две группы: больные с хроническим «эозинофильным» полипозным риносинуситом и больные с хроническим «нейтрофильным» поли-позным риносинуситом.
Учитывая результаты морфологического исследования, можно сказать, что разделение полипов по гистологическому строению на «эози-нофильные» и «нейтрофильные» формы является
Российская оториноларингология № 1 (92) 2018
Рис. 1. Носовой полип. При морфологическом исследовании определяется преобладание нейтрофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа. Увеличение х200.
Рис. 2. Носовой полип. При морфологическом исследовании определяется преобладание эозинофильной инфильтрации стромы слизистой оболочки носа. Увеличение х200.
Рис. 3. Окраска полипов по Гордону, удаленных у больных с «эозинофильным» полипозным риносинуситом. Увеличение х200.
Рис. 4. Окраска полипов по Гордону, удаленных у больных с «нейтрофильным» полипозным риносинуситом. Увеличение х200.
обоснованным, что подтверждается преобладанием тех или других клеточных элементов.
Было проведено импрегнирование серебром (окраска по Гордону-Свиту) ткани носовых полипов для определения характера структурной организации ретикулярных волокон стромы (рис. 3, 4). При данном виде окраски хорошо визуализируются соединительные ретикулярные волокна.
Ретикулярные волокна, которые соединяясь между собой, создают каркас стромы полипов, были разрушены и (или) деградированы, отмечается отек эндотелия сосудов. В строме полипов больных с «эозинофильными» полипозными ри-носинуситами сильная экспрессия белков была
выявлена у всех больных. При «эозинофильных» полипозных риносинуситах отмечается отек, распространенный в виде нескольких вакуолей. Отек состоит из инфильтрированной ткани и жидкости. Ретикулярные волокна разрушены и дегради-рованы, отмечается отек эндотелия сосудов. При «нейтрофильных» полипозных риносинуситах ретикулярные волокна плотно соединены между собой. Строма «нейтрофильных» полипов отличается плотностью, высокой клеточностью и хорошим кровоснабжением (рис. 4). Однако в некоторых образцах (16,1%) экспрессия данных белков была слабой, в то время как в других (66,7%) образцах экспрессия была высокой.
Выводы
Выявление различных форм хронических полипозных риносинуситов является целесообразным для определения течения полипозного процесса с последующим выбором тактики лечения.
При «эозинофильном» полипозном риносинусите отмечается более выраженная воспалительная реакция в виде отека и деградации ретикулярных волокон, чем при «нейтро-фильном» полипозном риносинусите.
65-я науч.-практ. конф. «Молодые ученые - российской оториноларингологии» ЛИТЕРАТУРА
1. Armengot M., L., Garin C. Carda. Eosinophil degranulation patterns in nasal polyposis: an ultrastructural study // Amer. Jurn. Rhinol Allergy. 2009. Vol. 23, N 5. P. 466-470.
2. Bachert C., Jorissen M., Bertrand B., Khaltaev N., Bousquet J. Allergic Rhinitis and its impact on asthma update (ARIA 2008). The Belgian perspective // B-ENT. 2008. Vol. 4, N 4. P. 253-257.
3. Fokkens W. J., Lund V. J., Mullol J., Bachert C., Alobid I., Baroody F. [et al.]. EPOS 2012: European position paper on rhinosinusitis and nasal polyps 2012. A summary for otorhinolaryngologists // Rhinology. 2012. Vol. 50, N 1. P. 1-298.
4. Soler Z. M., Sauer D. A., Mace J., Smith T. L. Relationship between clinical measures and histopathologic findings in chronic rhinosinusitis // Otolaryngol. Head Neck Surg, 2009. Vol. 141. P. 454-461.
5. Sharma R., Lakhani R., Rimmer J., Hopkins C. Surgical interventions for chronic rhinosinusitis with nasal polyps // Cochrane Database Syst. Rev. 2014. Vol. 20. P. 1.
6. Shin S. H., Ye M. K., Kim J. K., Cho C. H. Histological characteristics of chronic rhinosinusitis with nasal polyps: Recent 10-year experience of a single center in Daegu, Korea // Amer. Jurn. Rhinol. Allergy. 2014. Vol. 28, N 2. P. 95-98.
7. Tecimer S. H., Kasapoglu F., Demir U. L., Ozmen O. A., Coskun H., Basut O. Correlation between clinical findings and eosinophil/neutrophil ratio in patients with nasal polyps // Europ. Arch. Otorhinolaryngol. 2015. Vol. 272, N 4. P. 915-921.
REFERENCES
1. Armengot M., L., Garin C. Carda. Eosinophil degranulation patterns in nasal polyposis: an ultrastructural study. Amer. J. Rhinol Allergy. 2009;23(5):466-470.
2. Bachert C., Jorissen M., Bertrand B., Khaltaev N., Bousquet J. Allergic Rhinitis and its impact on asthma update (ARIA 2008). The Belgian perspective. B-ENT. 2008;4(4):253-257.
3. Fokkens W. J., Lund V. J., Mullol J., Bachert C., Alobid I., Baroody F. et al. EPOS 2012: European position paper on rhinosinusitis and nasal polyps 2012. A summary for otorhinolaryngologists. Rhinology. 2012;50(1):1-298.
4. Soler Z. M., Sauer D. A., Mace J., Smith T. L. Relationship between clinical measures and histopathologic findings in chronic rhinosinusitis. Otolaryngol Head Neck Surg, 2009;141:454-461.
5. Sharma R., Lakhani R., Rimmer J., Hopkins C. Surgical interventions for chronic rhinosinusitis with nasal polyps. Cochrane Database Syst. Rev. 2014;20:1.
6. Shin S. H., Ye M. K., Kim J. K., Cho C. H. Histological characteristics of chronic rhinosinusitis with nasal polyps: Recent 10-year experience of a single center in Daegu, Korea. Amer. J. Rhinol. Allergy. 2014;28(2):95-98.
7. Tecimer S. H., Kasapoglu F., Demir U. L., Ozmen O. A., Coskun H., Basut O. Correlation between clinical findings and eosinophil/ neutrophil ratio in patients with nasal polyps. Europ. Arch. Otorhinolaryngol. 2015;272(4):915-921.
Вохидов Улугбек Нуридинович - старший научный сотрудник, ассистент кафедры хирургических направлений Ташкентского государственного стоматологического института. Республика Узбекистан. 100000, Ташкент, ул. Мусаханова, д. 103; тел. (+99890) 345-45-82, e-mail: dr_ulugbek@list.ru
Ulugbek Nuridinovich Vokhidov - senior research associate, teaching assistant of the Chair of Surgical Disciplines of Tashkent State Dental Institute. The Republic of Uzbekistan, 100000, Tashkent, 103, Musakhanova str., tel.: ( + 99890) 345-45-82, e-mail: dr_ulugbek@ list.ru
