CC BY
27
УДК 616.155.194.7:[616.411:612.42]-07 © Н.С. Федоровская, Д.А. Дьяконов, Н.А. Федоровская, 2013
Н.С. Федоровская, Д.А. Дьяконов, Н.А. Федоровская
ОСОБЕННОСТИ Т-КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА В СЕЛЕЗЕНКЕ ПРИ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови»
ФМБА России
При изучении морфологических и иммуногистохимических особенностей Т-клеточного состава в гистологических срезах селезенки установлено увеличение количества общей популяции CD3+-лимфоцитов, обусловленное повышением числа CD8+-цитотоксических лимфоцитов у всех больных апластической анемией вне зависимости от тяжести патологического процесса и сроков выполнения спленэктомии. Уменьшение содержания Т-хелперов (CD4+-позитивных клеток) в большей степени характерно для лиц с тяжелой формой заболевания и не связано с продолжительностью болезни до операции.
Ключевые слова: апластическая анемия, селезенка, иммуногистохимия.
N.S. Fedorovskaya, D.A. Dyakonov, N.A. Fedorovskaya
THE PECULIARITIES OF T-CELLULAR STATE IN THE SPLEEN IN APLASTIC ANEMIA
The morphologic and immunohistochemical features of T-cellular contain in histological slices of spleen were stadied and stated the increase of common population number of CD3+-lymphocytes because of increase of CD8+ number of cytotoxic lymphocytes in all patients with aplastic anemia not depending on severity of pathological process and dates of fulfillment of splenectomy. The decrease of content of T-helpers (CD4+-positive cells) in the main degree may be characteristic for persons with severe form of disease and may be not connected with duration of disease before operation.
Key words: aplastic anemia, spleen, immunohistochemistry.
Введение. Одним из важных звеньев патогенеза апластической анемии (АА) является иммунная агрессия, направленная на клетки-предшественники гемопоэза. Это подтверждается повышением количества активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, инверсией хелперно-цитотоксического соотношения, увеличением продукции цитокинов (ИЛ-2, у-интерферона, фактора некроза опухолей-а) данными клетками, ингибирующими гемопоэз и чувствительность клеток к гемопоэти-ческим факторам [2, 3, 6].
Спленэктомия является одним из видов иммуносупрессии, эффективность которой объясняется удалением большой массы активированных лимфоцитов, ответственных за выработку негативных регуляторов гемопоэза [1, 4, 5]. Однако данный вопрос изучен недостаточно и требует проведения дальнейших исследований в этом направлении. Анализ субпопуляций Т-лимфоцитов и их функционального состояния при АА в гистологических срезах селезенки с применением современных методов исследования, таких, как иммуногистохимия, позволяет расширить понимание роли данного лимфоидного органа в патогенезе этого тяжелого заболевания.
Цель: изучить особенности Т-клеточного состава (популяций CD3 , CD4 , CD8 , NK ) в селезенке у больных АА в зависимости от тяжести заболевания и сроков выполнения спленэктомии.
Материалы и методы исследования. Проведен морфометрический анализ гистологических срезов селезенки у 39 пациентов с АА. Из них у 15 (38,5 %) больных была установлена нетяжелая апластическая анемия (НАА) и у 24 (61,5 %) пациента - тяжелая степень заболевания (ТАА). В зависимости от длительности предоперационного периода все больные были разделены на две группы: с продолжительностью от начала заболевания до спленэктомии 2 месяца (1 группа, n = 25) и более 2 месяцев (2 группа, n = 14). Количество больных мужского пола было в 1,6 раза больше, чем женского (24 против 15, соответственно). До операции все больные принимали глюкокортикостероиды в дозе 1 мг/кг массы тела. Из общего количества пациентов АА 18 параллельно получали
циклоспорин-А и циклофосфамид (комбинированная иммунодепрессивная терапия (КИДТ)).
Для оценки клеточного состава послеоперационных селезенок было выполнено иммуногисто-химическое исследование с помощью иммунопероксидазного метода, проводившееся на срезах с парафиновых блоков толщиной 3-5 мкм. При окрашивании использовали первичные антитела CD3, CD4, CD8, CD57 (NK) в рабочих разведениях, а также систему визуализации EnVISION, PEROXIDASE (DAB+) (Dako, Швейцария). Сравнительный анализ выполняли с образцами селезенок (судебно-медицинские вскрытия), взятых от 20 лиц, скончавшихся скоропостижно и не имевших в анамнезе заболеваний системы крови.
Морфометрический подсчет результатов осуществляли в световом микроскопе со встроенной фото- и видеокамерой Leica (Германия) с помощью программного обеспечения анализа изображений ImageScope Color, версии М с окуляром х 10, при объективах х 10, х 20 и х 100. Гистологические срезы оценивались в 20 полях зрения для каждого образца. С целью статистической обработки применялась программа IBM SPSS Statistics Version 19.0. Для выявления достоверности различий между показателями в сравниваемых группах использовали непараметрические двусторонние критерии Краскела-Уоллеса, Манна-Уитни с учетом поправки Бонферони при множественных сравнениях. Различия считали статистически значимыми при уровне р < 0,05. Результаты исследований представлены с указанием медианы, а также нижнего (25 %) и верхнего (95 %) квартилей для каждой группы.
Результаты исследования и их обсуждение. Анализ распределения Т-лимфоидных элементов установил, что общая популяция этих клеток (CD3 ) отмечалась преимущественно в периартериаль-ных лимфоидных муфтах (ПАЛМ), ближе к центру, окружая сосуд в виде ободка у всех 39 больных АА и в группе сравнения. В меньшем количестве данные клетки локализовались в герминативных центрах, маргинальной зоне и красной пульпе. По процентному содержанию Т-лимфоцитов (CD3 ) отмечено достоверное увеличение данной популяции у всех больных АА, не получавших КИДТ до удаления селезенки, по отношению к группе сравнения (р < 0,05). Кроме того, установлено достоверное повышение числа CD3 -экспрессирующих клеток при НАА, в отличие от пациентов с более тяжелым течением заболевания (таблицы 1-2).
Таблица 1
Процентное содержание в селезенке Т-субпопуляций у больных АА в зависимости от тяжести заболевания
Группы исследования CD3+ CD8+ CD4+ NK+
Группа сравнения (n = 20) 10,2* (8,6; 12,3) 0,3* (0,2; 0,5) 7,1* (5,1; 8,0) 3,2 (2,3; 4,7)
НАА (n = 15) - НАА с КИДТ (n = 6) - НАА без КИДТ (n = 9) 15,3*'" (13,5; 20,4) 13,6 (9,9; 18,0) 15,3* (13,7; 21,6) 4,6* (4,1; 6,0) 4,1* (3,6; 4,8) 5,0* (4,6; 7,1) 5,9 (3,3; 8,5) 5,6 (3,7; 9,3) 6,4 (3,3; 8,5) 3,4 (2,7; 4,8) 3,8 (2,0; 5,5) 3,4 (2,7; 4,6)
ТАА (n=24) - TAA с КИДТ (n = 12) - TAA без КИДТ (n = 12) 11,6** (10,2; 15,4) 10,8 (9,4; 14,1) 11,8* (11,3; 17,7) 4,4* (2,8; 5,7) 3,6* (2,7; 6,0) 4,7* (4,2; 5,5) 3,5* (2,9; 6,5) 3,5* (2,6; 6,9) 3,4* (3,1; 6,2) 3,6 (2,2; 4,9) 3,0 (1,9; 5,6) 3,6 (2,9; 4,6)
Примечание (здесь и далее):* - статистическая значимость различий по отношению к данным группы сравнения; ** - статистическая значимость различий между данными НАА и ТАА
Таблица 2
Процентное содержание в селезенке Т- и КК-клеточных субпопуляций у больных АА
в зависимости от длительности течения заболевания до спленэктомии_
Группы исследования CD3+ CD8+ CD4+ NK+
Группа сравнения (п = 20) 10,2* (8,6; 12,3) 0,3*(0,2; 0,5) 7,1* (5,1; 8,0) 3,2 (2,3; 4,7)
1 группа (п = 25) - 1 группа с КИДТ (п = 8) - 1 группа без КИДТ (п = 15) 13,6* (11,2; 18,0) 12,9 (10,0; 15,7) 15,3* (11,3; 18,0) 4,9* (4,4; 5,6) 4,7* (3,1; 5,8) 4,9* (4,4; 5,6) 4,1* (3,2; 8,3) 5,0 (3,1; 8,4) 4,1* (3,2; 8,3) 3,4 (2,5; 4,6) 2,6 (1,9; 4,9) 3,6 (3,0; 4,2)
2 группа (п = 14) - 2 группа с КИДТ (п = 6) - 2 группа без КИДТ (п = 4) 13,5 (9,4; 14,6) 10,4 (9,2; 14,1) 14,2* (13,6; 15,1) 4,0* (2,8; 6,2) 3,2* (2,7; 4,3) 5,5* (4,4; 7,5) 3,3* (3,0; 5,7) 3,1* (2,6; 5,8) 4,4 (3,3; 6,3) 4,2 (1,9; 5,6) 4.7 (1,8; 6,1) 3.8 (2,1; 4,9)
Повышение количества CD3+-экспрессирующих клеток зависело в основном от значительного увеличения содержания в селезенке цитотоксических лимфоцитов, дающих положительную реакцию с CD8 (р < 0,05), которые локализовались преимущественно в красной пульпе, а также отмечались в пе-риартериальных лимфоидных муфтах. Увеличение количества этой популяции лимфоцитов наблюдалось у пациентов как с различной формой заболевания, так и с разной продолжительностью предоперационного периода (р > 0,05). Цитотоксические лимфоциты, как известно, ответственны за выработку
негативных регуляторов гемопоэза, основными из которых являются у-интерферон и ФНО-а.
Клетки, экспрессирующие CD4+, преобладали в периартериальных лимфоидных муфтах. В меньшем количестве они определялись в красной пульпе. Наряду с этим было выявлено уменьшение количества Т-хелперов (CD4 ) у лиц с тяжелой степенью АА вне зависимости от сроков выполнения спленэктомии и проведенной КИДТ (p < 0,05).
NK-позитивные клетки (CD57) локализовались преимущественно в маргинальной зоне и красной пульпе селезенки. Единичные клетки определялись в периартериальных лимфоидных муфтах. Различий в процентном содержании этих лимфоидных элементов во всех исследуемых группах не обнаружено (p > 0,05).
Заключение. Известно, что наивные Т-лимфоциты в селезенке дифференцируются в эффек-торные Т-лимфоциты. Субпопуляция исходных CD4 Т-лимфоцитов, после презентации антигена активизированная дендритными клетками в ПАЛМ, трансформируется в Th1 и секретирует провос-палительные цитокины типа ИЛ-2, интерферона-у, ФНО-Р, таким образом, путем активации макрофагов влияет на воспалительные реакции. Т-лимфоциты CD8 рециркулируют также через ПАЛМ и, если они входят в контакт с родственным антигеном на антигенпрезентирующих клетках, активируются, пролиферируют и дифференцируются в цитотоксические Т-лимфоциты. Из ПАЛМ, в которых CD8 контактируют с антигеном, Т-лимфоциты выходят после активации и дифференцирования в красную пульпу, а затем могут мигрировать к участкам депонирования антигена на периферии. Известно, что эффекторные Т-лимфоциты CD8 принимают участие в разнообразных системных реакциях организма, включая отторжение аллотрансплантата и аутоиммунное воспаление.
Таким образом, при АА в зависимости от тяжести заболевания и сроков проведения операции в селезенке наблюдалась общая тенденция к повышению содержания иммунокомпетентных клеток. Существенное повышение количества CDS-экспрессирующих клеток у больных АА, в отличие от группы сравнения, связано, в первую очередь, со значительным увеличением количества цитотокси-ческих CD8 -позитивных клеток. Вероятно, селезенка является не только своеобразным фильтром, задерживающим и/или накапливающим в себе активированные Т-лимфоидные элементы, но и служит источником образования CD8 -лимфоцитов с последующим выходом их в кровоток. Удаление селезенки как органа иммуногенеза способствует снижению количества активированных цитотокси-ческих лимфоцитов, а вместе с ними уменьшению содержания негативных регуляторов гемопоэза, которые вырабатываются этими клетками.
Список литературы
1. Программное лечение заболеваний системы крови : сб. алгоритмов диагностики и протоколов лечения заболеваний системы крови / под ред. В. Г. Савченко. - М. : Практика, 2012. - 1056 с.
2. Розанова, О. Е. Цитокинопосредованные аспекты иммунопатогенеза апластической анемии / О. Е. Розанова, Л. Н. Бубнова // Цитокины и воспаление. - 2005. - Т. 4, № 4. - С. 34-38.
3. Розанова, О. Е. Соотношение основных цитокинов - позитивных и негативных регуляторов гемопоэза - у больных апластической анемией в различные фазы заболевания : рецидиве и ремиссии / О. Е. Розанова, Л. Н. Бубнова // Медицинская иммунология. - 2006. - Т. 8, № 2-3. - C. 423-424.
4. Руководство по гематологии : в 3 т. / под ред. А. И. Воробьева; 3-е изд., перераб. и доп. -М. : Ньюдиамед, 2005. - Т. 3. - 416 с.
5. Семикина, Е. Л. Мембранные маркеры и рецептор к интерлейкину-2 лимфоцитов селезенки у детей с апластической анемией : выявление активных субпопуляций / Е. Л. Семикина, Н. А. Тору-барова, В. Н. Жаров // Гематология и трансфузиология. - 1990. - Т. 35, № 8. - С. 24-26.
6. Young, N. S. Current concepts in the pathophysiology and treatment of aplastic anemia / N. S. Young, R. T. Calado, P. Scheinberg // Blood. - 2006. - Vol. 108, № 8. - P. 2509-2519.
Федоровская Надежда Станиславовна, кандидат медицинских наук, руководитель лаборатории пато-морфологии крови, ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России, Россия, 610027, г. Киров, ул. Красноармейская, д. 72, тел.: (8332) 37-24-76, е-таЛ: fednadst@mail.ru.
Дьяконов Дмитрий Андреевич, кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории патомор-фологии крови, ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России, Россия, 610027, г. Киров, ул. Красноармейская, д. 72, тел.: (8332) 67-37-38, е-таП: DiakonovDA@Rambler.ru.
Федоровская Нина Афанасьевна, доктор медицинских наук, профессор, старший научный сотрудник гематологической клиники института, ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России, Россия, 610027 г. Киров, ул. Красноармейская, д. 72, тел.: (8332) 37-24-76, е-таП: kirovniihematology@gmail.com.
УДК 616-008.9-06: 616-056. 52: 616. 67 © Е.Н. Чернышева, Т.Н. Панова, 2013
Е.Н. Чернышева, Т.Н. Панова
ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ЭНДОГЕННЫХ И ЭКЗОГЕННЫХ ФАКТОРОВ В РАЗВИТИИ
ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО СТАРЕНИЯ ПРИ МЕТАБОЛИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ОЖИРЕНИЯ
ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
У 270 пациентов с метаболическим синдромом в возрасте от 30 до 60 лет (162 мужчины и 108 женщин) с помощью метода максимума правдоподобия изучали роль эндогенных и экзогенных факторов в развитии преждевременного старения при различной степени ожирения. У пациентов с индексом массы тела от 30 до 39,9 итоговый индекс Z в 1,25 раза выше, чем у пациентов с индексом массы тела от 40 выше. При любой степени ожирения доля относительного риска возникновения преждевременного старения при метаболическом синдроме крайне высока у пациентов с гиподинамией (в группе с I-II степенью ожирения - 61,8 %, в группе с III и выше степенью - 98,8 %) и перегрузкой калориями (69,7 и 96,4 %, соответственно), наследственность вносит менее значимый вклад.
Ключевые слова: преждевременное старение, экзогенные и эндогенные факторы, степень ожирения, метаболический синдром.
E.N. Chernysheva, T.N. Panova
STUDY OF THE ROLE OF EXOGENIC AND ENDOGENIC FACTORS ON THE SENILISM DEVELOPMENT OF PATIENTS WITH METABOLIC SYNDROME DEPENDING ON THE DEGREE OF OBESITY
In 270 patients with metabolic syndrome, aged 30 to 60 years (162 men and 108 women) using the maximum likelihood method there were studied the role of endogenic and exogenic factors in the development of senilism by varying the degree of obesity. In patients with body mass index 30 to 39,9 the final index Z was in 1,25 times higher than that of patients with a body mass index above 40. At any rate the relative proportion of obesity risk of senilism and metabolic syndrome was very high in patients with a hypodynamia (in the group with the I-II degree of obesity - 61,8 %, in the group III or higher degree - 98,8 %) and calorie overload (69,7 and 96,4 %, respectively), the heredity gave less significant contribution.
Key words: senilism, еxogenic and endogenic factors, degree of obesity, metabolic syndrome.
Введение. Преждевременное старение - это любое ускорение темпа старения, при этом индивидуум «опережает» средний уровень старения той здоровой группы, к которой он принадлежит. Диагностировать преждевременное старение можно, определив биологический возраст (БВ) [5]. Если БВ опережает календарный возраст, то старение развивается преждевременно. Проблема преждевременного старения занимает одно из ведущих мест среди наиболее актуальных вопросов современной науки, поскольку данный процесс способствует раннему развитию возрастной патологии - ишемической болезни сердца, артериальной гипертонии, онкологических заболеваний, сахарного диабета 2-го типа [1]. В свою очередь, возникновение болезней способствует интенсификации темпа старения человека [2]. В организме человека практически все ткани имеют различную скорость старения, в связи с этим в возрастном аспекте индивидуумы имеют все больше различий. В результате календарный возраст нельзя назвать точным отражением процесса старения. На основании изучения БВ имеем возможность сравнить функциональное состояние индивидуумов одного календарного возраста и сопоставить темпы их старения.
