CC BY
34
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология заболеваний органов зрения Immunology of eye diseases
неоваскулярной форме возрастной макулярной дегенерации (ВМД). Ранее было показано, что неоангиогенез при данном типе патологии глаза связан с повышением концентрации фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), а также других биологически активных веществ во внутриглазной жидкости, жидкости стекловидного тела и сетчатки.
Цель и задачи. Целью настоящего исследования явилось изучение взаимосвязи уровней биологически активных веществ (БАВ) (цитокинов, факторов роста, хемокинов) во внутриглазной жидкости и морфометрических параметров состояния сетчатки у лиц с неоваскулярной формой ВМД. Задачами исследования являлись оценка иммунологического профиля внутриглазной жидкости у лиц с ВМД методом мультиплексного анализа и оценка состояния макуляр-ной области сетчатки по данным оптической когерентной томографии (ОКТ) у лиц с данной патологией с последующим сопоставлением полученных данных.
Материалы и методы. В исследование было включено 23 пациента (5 мужчин, 18 женщин) в возрасте от 63 до 87 лет (средний возраст составил 73,61±1,66 года) с неоваскулярной ВМД, которым было проведено хирургическое вмешательство: оперативное лечение возрастной катаракты и интравитреальное введение ранибизумаба («Луцентис», Novartis Pharma, Швейцария).
Всем пациентам было проведено стандартное офтальмологическое обследование, включая ОКТ макулярной области с определением толщины нейроэпителия сетчатки, высоты и протяженности отслойки нейроэпителия и пигментного эпителия сетчатки, высоты и протяженности хронической неоваскулярной мембраны, наличие фиброза.
Сбор образцов жидкости передней камеры глаза осуществляли с помощью аспирации жидкости передней камеры одного глаза стерильным одноразовым инсули-новым шприцом через парацентез роговицы в ходе проведения стандартного оперативного вмешательства по поводу экстракции катаракты до введения в переднюю камеру глаза каких-либо веществ. Полученные образцы объеме около 0,1-0,2 мл и помещали в стерильные маркированные пробирки типа Эппендорф 0,5 мл. Сразу после сбора образцы замораживали и хранили при температуре -70 °С до проведения анализа. Все образцы были собраны примерно в одно и то же время суток (с 10-00 до 14-00). Анализ внутриглазной жидкости проводили на приборе Luminex Magpix (США) с помощью набора реактивов для мультиплексного анализа Bio-Rad (США). Определяли концентрацию BasicFGF, Eotaxin, G-CSF, GM-CSF, IFNy, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-17A, IL-1ß, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IP-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-1ß, PDGF-BB, RANTES, TNFa, VEGF (всего 27 БАВ).
Полученные данные обрабатывали методами описательной статистики и выражали в виде средней и ее стандартной ошибки (M±m). О наличии взаимосвязи судили по непараметрическому коэффициенту корреляции Спир-мена. Об уровне значимости судили при значении P < 0,05.
Результаты. Исследование показало наличие положительной достоверной корреляционной взаимосвязи между концентрацией моноцитарного хемотаксического протеи-на-1 (MCP-1) во внутриглазной жидкости и увеличением толщины нейроэпителия макулярной области, свидетель-
ствующим о наличии диффузного отека сетчатки при ВМД ^ = 0,49, р < 0,05). Статистически значимых взаимосвязей между концентрацией других оцениваемых БАВ во внутриглазной жидкости и морфометрическими параметрами макулярной области при неоваскулярной ВМД получено не было ^ = -0,45 ... 0,29, р > 0,05).
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что моноцитарный хемотаксический протеин-1, хе-мокин, ответственный за моноцитарную и макрофагаль-ную инфильтрацию тканей, играет важную роль в развитии и прогрессировании отека при возрастной макулярной дегенерации. Ранее была показана аналогичная взаимосвязь с тяжестью диабетического макулярного отека.
ОСОБЕННОСТИ ЛОКАЛЬНОЙ И СИСТЕМНОЙ ПРОДУКЦИИ ЦИТОКИНОВ ПРИ РАЗВИТИИ ОСЛОЖНЕНИЙ У ДЕТЕЙ С ЭНДОГЕННЫМИ УВЕИТАМИ
Петровская М.С., Балацкая Н.В., Денисова Е.В., Катаргина Л.А.
ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Введение. Эндогенные увеиты (ЭУ) — обширная группа воспалительных заболеваний сосудистой оболочки глаза различной этиологии часто с хроническим или рецидивирующим течением. Особенностью ЭУ у детей является раннее и быстрое развитие осложнений, нередко приводящих к потере зрительных функций. Роль иммунной системы, в частности, вклада цитокинов в развитие собственно увеитов убедительно доказана. Однако в плане понимания патогенеза осложнений ЭУ многие вопросы остаются недостаточно изученными. Известно, что глаз обладает «иммунной привилегией», реализуемой как за счет локальных (на уровне глаза, в т.ч. активных и пассивных факторов передней камеры, регламентирующих ответ на антигены), так и системных (на уровне тимуса, селезенки) иммунных механизмов.
Цель и задачи. Исследование содержания цитокинов в сыворотке крови (СК) и влаге передней камеры (ВПК) при постувеальных осложнениях у детей; анализ системной продукции цитокинов в сравнении с группой здоровых.
Материалы и методы. Обследовано 19 детей с ЭУ в возрасте от 3,5 до 13 лет, которым проводилось хирургическое лечение постувеальных катаракт. В 63,1% случаев (12 детей) увеит был ассоциирован с ювенильным идио-патическим артритом, у 1 ребенка (5,25%) — туберкулезной этиологии, у 1 (5,25%) HLA-B27 ассоциированный, в 26,4% случаев (5 детей) этиологию увеита установить не удалось. Ремиссия воспалительного процесса на фоне местной и системной терапии отмечена в 7 (36,8%) случаях, минимальная активность увеита — в 10 (52,7%), вялотекущий процесс — в 1 (5,25%), активный — в 1 (5,25%). 14 здоровых детей (в возрасте от 4 до 16 лет) составили контрольную группу. Материалом иммунологического исследования служили образцы ВПК больного глаза (п = 19), полученные во время операции, СК детей с ЭУ (п = 19) и здоровых доноров (п = 14). В тест — пробах в мультиплексном анализе определяли содержание: интер-лейкинов (Ш-1Р, ГЬ-2, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-8, Ш-10, Ш-12, Ш-17, ГЬ-18), факторов некроза опухоли (ТОТа, Р), ин-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
терферонов (IFNa, у), факторов роста VEGF-А, TGF-pi. Исследование проводили на проточном цитофлуороме-тре (BD FACS Canto II Becton Dickinson (США)) в программе BD FACS Diva наборами CBA (Th1/Th2 Cytokines Multiplex Kit, BD Biosciences (США)), данные обрабатывали — в программе FCAP Array, Soft Flow (США). Статистический анализ результатов выполняли в программе BIOSTATD-1998 (t-критерий Стьюдента, критерий Фишера); показатель статистической значимости: p < 0,05.
Результаты. Анализ иммунологических данных группы детей с ЭУ показал наличие всего спектра изучаемых цитокинов СК: в 100% выявлены IL-8, IL-18, VEGF - A, TGF-pi; в 63% — IL6; почти в половине случаев обнаружены IL-ip,2, IFNa; в 42% — IL-12, в трети случаев — IL-5; шесть цитокинов — IL-4, IL-10, IL-17, IFNy, TNFa, р выявлялись реже — в 10-29%. Все эти иммуномедиаторы обеспечивают регуляцию иммунного ответа (направление, силу), воспаления, клеточного хемотаксиса, репарации. В отличие от группы больных, в СК здоровых доноров выявлены 11 из 16 цитокинов: во всех тест-пробах обнаруживались IL-18, VEGF-A, TGF-P1; в 83% выявлен IL-8; в 43% случаев определялись IL-17 и TNFa, почти в трети случаев — IL-12, значительно реже, в 7-21% проб, обнаруживались IL-1P, IL-2, IL-5, TNFp. Ни в одной пробе СК контрольной группы не были выявлены IL-4, IL-6, IL-10, IFNa, IFNy.
Характерным для группы больных стала высокая частота выявляемости по сравнению с контрольной группой цитокинов, отвечающих за инициацию — IL-ф, направление иммунного ответа — IL-2, IL-10, IL-12, IFNy, TNFp, регулирующих воспаление, хемотаксис и пролиферацию — IL-6, IL-8, IFNa.
Концентрация всех обнаруженных цитокинов оказалась существенно выше у детей с ЭУ, со статистически значимым подтверждением для IL-6, TNFa, TNFp, TGF-P1, а также IFNa и у (р < 0,05).
Во ВПК детей с ЭУ выявлены 13 из 16 исследуемых цитокинов: IL-6, IL-8, IL-18; ростовые факторы VEGFA, TGF-P1 — в 84-89% случаев, в половине тест-проб обнаружен IL-1P, у трети — IL-2, реже выявлялись IL-10, TNFa, IFNa, IFNy, IL-12 (21 — 26%); полностью отсутствовали IL-4, 17А и TNFp. При сопоставлении содержания цито-кинов СК и ВПК в группе у детей с ЭУ обнаружено, что концентрация большинства иммуномедиаторов во ВПК была ниже, исключение составил IL-6 — цитокин с плей-отропной активностью, локальный уровень которого существенно превышал таковой в крови.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о патогенетической роли повышения системной продукции комплекса цитокинов различного биологического действия: IL-1, IL-2, отвечающих за инициацию, направление иммунного ответа; TGF-P1, IFNa, регулирующих пролиферативную активность; провоспалительных IL-8, IL-18 и, особенно, IL-6 в развитии осложнений при ЭУ. Значительное усиление системной продукции IFNa, IL-6, а также локальной — IL-6 позволяет предположить гиперактивацию системы врожденного иммунитета. Полученные данные могут быть использованы для практического применения — разработки систем мониторинга и показаний к проведению антицитокиновой терапии.
ИНФОРМАТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ
Слепова О.С., Ковалева Л.А., Вахова Е.С., Кричевская Г.И., Сорожкина Е.С., Гамзаев М.Г.
ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Введение. Туберкулез глаз занимает 4-е место (7,8%) в структуре внелегочного туберкулеза, отличается полиморфизмом симптомов, локализацией воспаления как в переднем, так и заднем отрезке глаза, что значительно затрудняет его клиническую диагностику (Устинова Е.И., Бакаев В.М., 2008).
Цель. Изучить эффективность современных иммунологических тестов: квантиферонового теста (КТ) и сывороточных IgG-противотуберкулезных антител (ПТА) в диагностике туберкулезных заболеваний глаз.
Материалы и методы. Обследовано 117 пациентов (21-77 лет) с клиническими диагнозами: кератит с изъязвлением роговицы и без — 72, кератоувеит — 8, уве-иты (передний, задний, панувеит) — 35 человек. Проводили полное офтальмологическое обследование, при необходимости назначали консультации смежных специалистов. Иммунологические тесты включали КТ (QuantiFERON®-TB Gold In-Tube, Cellestis Inc., Camegi, Australia), определение ПТА в сыворотке (ИФА, Вектор-Бест, РФ). Сыворотки крови также исследовали на наличие IgM-, IgG-антител к разным антигенам ВПГ, ЦМВ, ВЭБ, IgG-антител к токсоплазме гондии и токсокаре канис для оценки инфицированности пациентов этими офтальмотропными инфекциями и определения их активности.
Результаты. По данным клинико-лабораторного обследования герпесвирусную этиологию заболевания установили у 51,9%, вторичную бактериальную офталь-моинфекцию — у 37,3% пациентов, у 10,8% этиология воспалительного процесса осталась неясной. В целом положительный КТ тест отмечен у 24,8% больных, частота положительных результатов колебалась от 23,4% при кератитах с изъязвлением центральной локализации до 41,7% — при кератоувеитах (р > 0,05). 12 пациентам с положительным КТ проведено углубленное обследование у фтизиатров, туберкулез глаз был подтвержден у 4-х, у 8 человек активная туберкулезная инфекция была исключена. Однако четверо из них ранее перенесли активную форму легочного туберкулеза, положительный КТ по-видимому свидетельствовал о наличии латентной туберкулезной инфекции и позволял отнести этих больных к группе риска. ПТА обнаружены у 12 из 26 обследованных, у 2 из 6 больных с подтвержденным офтальмотуберкуле-зом и 10 из 20 пациентов с заболеваниями глаз нетуберкулезной этиологии (р > 0,05). Уровень ПТА у 2-х пациентов с туберкулезом глаз был очень низкий (несущественно превышал контрольные показатели). Более высокий уровень ПТА отмечен у пациентов с заболеваниями глаз нетуберкулезной этиологии, что ставит вопрос об их возможной протективной роли. В основном туберкулезная этиология у обследованных пациентов устанавливалась на основании клинической симптоматики, инструментального обследования легких и других органов, положительного диаскинтеста и результатов диагностической тест-терапии.
