CC BY
27
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
терферонов (IFNa, у), факторов роста VEGF-А, TGF-pi. Исследование проводили на проточном цитофлуороме-тре (BD FACS Canto II Becton Dickinson (США)) в программе BD FACS Diva наборами CBA (Th1/Th2 Cytokines Multiplex Kit, BD Biosciences (США)), данные обрабатывали — в программе FCAP Array, Soft Flow (США). Статистический анализ результатов выполняли в программе BIOSTATD-1998 (t-критерий Стьюдента, критерий Фишера); показатель статистической значимости: p < 0,05.
Результаты. Анализ иммунологических данных группы детей с ЭУ показал наличие всего спектра изучаемых цитокинов СК: в 100% выявлены IL-8, IL-18, VEGF - A, TGF-pi; в 63% — IL6; почти в половине случаев обнаружены IL-ip,2, IFNa; в 42% — IL-12, в трети случаев — IL-5; шесть цитокинов — IL-4, IL-10, IL-17, IFNy, TNFa, р выявлялись реже — в 10-29%. Все эти иммуномедиаторы обеспечивают регуляцию иммунного ответа (направление, силу), воспаления, клеточного хемотаксиса, репарации. В отличие от группы больных, в СК здоровых доноров выявлены 11 из 16 цитокинов: во всех тест-пробах обнаруживались IL-18, VEGF-A, TGF-P1; в 83% выявлен IL-8; в 43% случаев определялись IL-17 и TNFa, почти в трети случаев — IL-12, значительно реже, в 7-21% проб, обнаруживались IL-1P, IL-2, IL-5, TNFp. Ни в одной пробе СК контрольной группы не были выявлены IL-4, IL-6, IL-10, IFNa, IFNy.
Характерным для группы больных стала высокая частота выявляемости по сравнению с контрольной группой цитокинов, отвечающих за инициацию — IL-ф, направление иммунного ответа — IL-2, IL-10, IL-12, IFNy, TNFp, регулирующих воспаление, хемотаксис и пролиферацию — IL-6, IL-8, IFNa.
Концентрация всех обнаруженных цитокинов оказалась существенно выше у детей с ЭУ, со статистически значимым подтверждением для IL-6, TNFa, TNFp, TGF-P1, а также IFNa и у (р < 0,05).
Во ВПК детей с ЭУ выявлены 13 из 16 исследуемых цитокинов: IL-6, IL-8, IL-18; ростовые факторы VEGFA, TGF-P1 — в 84-89% случаев, в половине тест-проб обнаружен IL-1P, у трети — IL-2, реже выявлялись IL-10, TNFa, IFNa, IFNy, IL-12 (21 — 26%); полностью отсутствовали IL-4, 17А и TNFp. При сопоставлении содержания цито-кинов СК и ВПК в группе у детей с ЭУ обнаружено, что концентрация большинства иммуномедиаторов во ВПК была ниже, исключение составил IL-6 — цитокин с плей-отропной активностью, локальный уровень которого существенно превышал таковой в крови.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о патогенетической роли повышения системной продукции комплекса цитокинов различного биологического действия: IL-1, IL-2, отвечающих за инициацию, направление иммунного ответа; TGF-P1, IFNa, регулирующих пролиферативную активность; провоспалительных IL-8, IL-18 и, особенно, IL-6 в развитии осложнений при ЭУ. Значительное усиление системной продукции IFNa, IL-6, а также локальной — IL-6 позволяет предположить гиперактивацию системы врожденного иммунитета. Полученные данные могут быть использованы для практического применения — разработки систем мониторинга и показаний к проведению антицитокиновой терапии.
ИНФОРМАТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ
Слепова О.С., Ковалева Л.А., Вахова Е.С., Кричевская Г.И., Сорожкина Е.С., Гамзаев М.Г.
ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Введение. Туберкулез глаз занимает 4-е место (7,8%) в структуре внелегочного туберкулеза, отличается полиморфизмом симптомов, локализацией воспаления как в переднем, так и заднем отрезке глаза, что значительно затрудняет его клиническую диагностику (Устинова Е.И., Бакаев В.М., 2008).
Цель. Изучить эффективность современных иммунологических тестов: квантиферонового теста (КТ) и сывороточных IgG-противотуберкулезных антител (ПТА) в диагностике туберкулезных заболеваний глаз.
Материалы и методы. Обследовано 117 пациентов (21-77 лет) с клиническими диагнозами: кератит с изъязвлением роговицы и без — 72, кератоувеит — 8, уве-иты (передний, задний, панувеит) — 35 человек. Проводили полное офтальмологическое обследование, при необходимости назначали консультации смежных специалистов. Иммунологические тесты включали КТ (QuantiFERON®-TB Gold In-Tube, Cellestis Inc., Camegi, Australia), определение ПТА в сыворотке (ИФА, Вектор-Бест, РФ). Сыворотки крови также исследовали на наличие IgM-, IgG-антител к разным антигенам ВПГ, ЦМВ, ВЭБ, IgG-антител к токсоплазме гондии и токсокаре канис для оценки инфицированности пациентов этими офтальмотропными инфекциями и определения их активности.
Результаты. По данным клинико-лабораторного обследования герпесвирусную этиологию заболевания установили у 51,9%, вторичную бактериальную офталь-моинфекцию — у 37,3% пациентов, у 10,8% этиология воспалительного процесса осталась неясной. В целом положительный КТ тест отмечен у 24,8% больных, частота положительных результатов колебалась от 23,4% при кератитах с изъязвлением центральной локализации до 41,7% — при кератоувеитах (р > 0,05). 12 пациентам с положительным КТ проведено углубленное обследование у фтизиатров, туберкулез глаз был подтвержден у 4-х, у 8 человек активная туберкулезная инфекция была исключена. Однако четверо из них ранее перенесли активную форму легочного туберкулеза, положительный КТ по-видимому свидетельствовал о наличии латентной туберкулезной инфекции и позволял отнести этих больных к группе риска. ПТА обнаружены у 12 из 26 обследованных, у 2 из 6 больных с подтвержденным офтальмотуберкуле-зом и 10 из 20 пациентов с заболеваниями глаз нетуберкулезной этиологии (р > 0,05). Уровень ПТА у 2-х пациентов с туберкулезом глаз был очень низкий (несущественно превышал контрольные показатели). Более высокий уровень ПТА отмечен у пациентов с заболеваниями глаз нетуберкулезной этиологии, что ставит вопрос об их возможной протективной роли. В основном туберкулезная этиология у обследованных пациентов устанавливалась на основании клинической симптоматики, инструментального обследования легких и других органов, положительного диаскинтеста и результатов диагностической тест-терапии.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология заболеваний органов зрения Immunology of eye diseases
Заключение. КТ эффективен для диагностики латентной туберкулезной инфекции, что важно для формирования групп риска и выявления отягчающих патогенетических факторов при заболеваниях глаз. Однако как прямой тест для диагностики офтальмотуберкулеза КТ недостаточно информативен. В отличие от туберкулеза легких ПТА в сыворотке крови больных с туберкулезом глаза обнаружены реже (хотя и несущественно) и средний уровень их был ниже, чем при нетуберкулезных заболеваниях.
СКРИНИНГ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ С ПОРАЖЕНИЕМ ГЛАЗ ПРИ БОЛЕЗНИ БЕХЧЕТА
Сорожкина Е.С.1, Балацкая Н.В.1, Давыдова Г.А.1, Лисицына Т.А.2
1ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия 2ФГБНУ«Научно-исследовательский институт ревматологии имени В.А. Насоновой», Москва, Россия
Введение. Болезнь Бехчета (ББ) — хронический рецидивирующий полисистемный васкулит, поражение глаз при котором часто приводит к полной потере зрительных функций и инвалидизации пациентов. Этиология заболевания остается неясной. Помимо возможных выделяемых этиологических факторов ББ (генетической предрасположенности, факторов окружающей среды, вирусных и бактериальных инфекций), ключевая роль отводится иммунопатологическим нарушениям, в частности патологической гиперактивации врожденного и адаптивного звеньев иммунитета. Известно, что в рамках иммунной системы координация между неспецифическими защитными реакциями и специфическим иммунитетом осуществляют цитокины, действуя в обоих направлениях. Регуляторная роль этих иммуномедиаторов активно изучается при ББ, однако, в аспекте глазных поражений (характера течения, тяжести, активности) многие вопросы остаются нерешенными.
Цель и задачи. Определить содержание цитокинов различного биологического действия в сыворотке крови (СК) у пациентов с увеитами при болезни Бехчета (БУ) и провести сравнительный анализ с группой здоровых доноров.
Материалы и методы. Обследовано 13 пациентов БУ (в возрасте от 25 до 45 лет). В 3-х случаях (23%) отмечен активный процесс; у 77% (10 больных) — минимальная активность увеита, из них у 1 больного с ББ глазных поражений не выявлено.
34 здоровых добровольца без глазной патологии, совместимых по полу и возрасту, составили контрольную группу. Материалом иммунологического исследования служили образцы СК пациентов с БУ (n = 13) и группы здоровых доноров (n = 34). В тест-пробах в мультиплексном анализе определяли содержание: IL-ф, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-12p70, IL-13, IL-18, IFNy, TNFa, GM-CSF, GROa, SDFla, Eotaxin, RANTES, IP-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-ip при помощи тест-системы Procarta Plex™ "Human Th1/Th2 & Chemokine 1 Panel 20 plex" (eBioscience, Австрия) на анализаторе MAGPIX (Luminex
Corp., США) в программе xPONENT 4.1. с последующей обработкой в пакете Procarta Plex Analyst 1.0. Определение трансформирующих факторов роста TGF-ß1, TGF-ß2 проводилось методом твердофазного иммунофермент-ного анализа тест-системами Human TGF-ß1, TGF-ß2 Platinum ELISA (eBioscience, Австрия). Статистический анализ выполняли с использованием программного комплекса StatPlus, при параметрическом распределении в сравнении величин использован метод Стьюдента, критерий значимости — p < 0,05.
Результаты. В СК пациентов с БУ определялись практически все исследуемые иммуномедиаторы, исключение составил IL5. Большинство из них обнаружены в 100% тест-проб: интерлейкины IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-12, IL-18; факторы роста TGF-ß1, TGF-ß2, IFNy, TNFa, хемокины: Eotaxin, IP-10, MCP1, SDF1a, RANTES; в 92% случаев определялся IL-13. Более чем в половине проб (от 61 до 77 %) выявлялись MIP-1a, MIP-1ß, GROa, GM-CSF, IL-2; несколько реже (примерно в трети случаев) обнаруживался IL4.
Анализ СК группы здоровых добровольцев показал наличие практически всех цитокинов за исключением IL-8. Во всех случаях определены 6 цитокинов: трансформирующие факторы роста TGF-ß1, TGF-ß2; хемокины Eotaxin, IP10, MCP1, RANTES; в подавляющем большинстве проб (98%) — MIP-1a,ß и SDF1a; немногим реже, в 79-88%, выявлялись TNFa, IFNy; более чем в половине проб - IL-12, IL-2, IL-18 (56-65%); в 38-47% случаев обнаруживались GM-CSF, IL-13; в 9-18% - GROa, IL-1ß, IL-4. В минимальном количестве проб (3%) определялись IL-5 и IL-6.
Характерной особенностью для группы БУ больных стала высокая частота встречаемости цитокинов, отвечающих за инициацию (IL-1ß) и направление иммунного ответа (IL-12, IFNy, TNFa), а также медиаторов, регулирующих пролиферацию и дифференцировку костномозговых предшественников (GM-CSF) и хемотаксис (GRO-a, IL6, IL-8, IL-18). Анализ содержания цитокинов в СК групп БУ и здоровых доноров показал значительное повышение уровней IL-18, GROa, IP-10 в группе с БУ, при существенном снижении концентрации RANTES и Eotaxin (p < 0,05). Как отмечалось выше, только у одного из обследованных больных с ББ глазных осложнений не было обнаружено, в этом случае уровень системной продукции Eotaxin, GROa, IP-10 находился в пределах нормы.
Заключение. Таким образом, несмотря на ограниченное число наблюдений, высокая частота выявляемости иммуномедиаторов, отвечающих за инициацию и направление иммунного ответа, цитокинов, регулирующих хемотаксис, значительное существенное разнонаправленное изменение их системной продукции в группе пациентов с БУ позволяет предположить гиперактивацию регуляторного звена цитокинов, контролирующего вос-палителый ответ, и особенно факторов, регламентирующих миграцию лейкоцитов в очаг воспаления.
