CC BY
143Микробиология, вирусология
УДК: 615.471-078.33
ОСОБЕННОСТИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ И ГЕПАТИТА С (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
ОРЫНБАЕВА ЗУХРА НАУРЫЗБАЕВНА
магистр кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ташкентской медицинской академии.
Город Ташкент. Республика Узбекистан ЁДГОРОВА НОДИРА ТУРГУНОВНА кандидат медицинских наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ташкентской медицинской академии.
Город Ташкент. Республика Узбекистан МАХМУДОВА ИЖОБАТ АБДУЛБОСИД КИЗИ студент Ташкентской медицинской академии. Город Ташкент. Республика Узбекистан АННОТАЦИЯ
В этом обзоре литературы содержится информация об этиологии, распространении, эпидемиологии заболевания, существующих диагностических процедурах и диагностических проблемах и новостях в связанных с гепатитом С и ВИЧ-инфекциях. В настоящее время в Узбекистане ежегодно регистрируется до 4 000 новых случаев ВИЧ. На сегодняшний день в республике проживает 30 000 ВИЧ инфицированных. Исходя из этово, все еще остро стоит вопрос о существенном отставании отечественной лабораторной диагностики от современных тенденций мировой практики, то есть использование передовых, современных методов диагностики данных заболеваний.
Ключевые слова: Полимеразная цепная реакция, Сухая пробирка, Синдром приобретенного иммунодефицита и гепатита С.
ГЕПАТИТ С ВА ОИВ-ИНФЕКЦИЯСИДА ЛАБОРАТОР ТАШХИСНИНГ УЗИГА ХОСЛИГИ
ОРЫНБАЕВА ЗУХРА НАУРЫЗБАЕВНА
Тошкент тиббиёт академиясининг микробиология, вирусология ва иммунологии кафедраси магистри.
Тошкент шахри. Узбекистон Республикаси ЁДГОРОВА НОДИРА ТУРГУНОВНА тиббиёт фанлар номзоди, Тошкент тиббиёт академиясининг микробиология, вирусология ва иммунология кафедраси доценти. Тошкент шахри. Узбекистон Республикаси
МАХМУДОВА ИЖОБАТ АБДУЛБОСИД КИЗИ Тошкент тиббиёт академиясининг талабаси.
Тошкент шахри. Узбекистон Республикаси АННОТАЦИЯ
Мазкур адабиётлар тахлилида ОИВ-инфекцияси ва Гепатит С нинг этиологияси, тарцалиши, касаллик эпидемиологияси, мавжуд диагностика усуллари цамда ташхисдаги муаммо ва янгиликлар буйича маълумотлар тацдим этилган. %озирги вацтда Узбекистонда %ар йили 4000 гача ОИВ полати цайд цилинади. Республикамизда бугунги кунда 30 000 нафар ОИВ-инфекцияси билан зарарланганлар яшаб келмоцда. Шуларга асосланиб, бу касалликларга лаборатория шароитида аниц ташхис цуйиш, яьни энг замонавий усулларни цуллаш буйича изланишлар олиб бориш долзарб муаммолигича цолмоцда.
Калит сузлар: Полимера занжир реакцияси, цуруц пробирка, орттирилган иммун танкислиги синдроми ва гепатит С.
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
FEATURES OF LABORATORY DIAGNOSIS OF HIV INFECTION
AND HEPATITIS C
ORYNBAYEVA ZUKHRA NAURYZBAYEVNA
master of department of microbiology, virology and immunology of the Tashkent medical academy. City of Tashkent.
Republic of Uzbekistan YODGOROVA NODIRA TURGUNOVNA candidate of medical sciences, the associate professor of microbiology, virology and immunology of the Tashkent medical academy. City of Tashkent. Republic of Uzbekistan MAKHMUDOVA IZHOBAT ABDULBOSID KIZI student of the Tashkent medical academy.
City of Tashkent. Republic of Uzbekistan ABSTRACT
This literature review provides information on the etiology, spread, epidemiology of the disease, existing diagnostic procedures and diagnostic problems of hepatitis C and news in HIV related infections. Currently, up to 4,000 new HIV cases are registered annually in Uzbekistan. Today, there are 30,000 HIV-infected people in the country. Based on these, it is still a matter of underdevelopment of laboratory diagnosis, is the use of the most up-to-date methods for these diseases.
Keywords: polemerase chain reaction, dry test tube, acquired immune deficiency syndrome, Hepatitis C.
Гепатит C — антропонозное вирусное заболевание с парентеральным инструментальным путём заражения. Заражение также возможно через поврежденную кожу и слизистые, наиболее опасным фактором передачи является кровь. Часто протекает в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием без желтушных форм и с клонен к хронизации. Гепатит C называют «ласковой
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
убийцей» из-за способности маскировать истинную причину под видом множества других заболеваний - [1].
После того, как в 1970-х годах были выделены возбудители гепатитов А и В, стало очевидным существование ещё нескольких вирусных гепатитов, которые стали называть гепатитами «ни А, ни В» (non-A, non-B hepatitis, или NANBH). Решающий шаг в обнаружении инфекционного агента таких гепатитов был сделан в 1989 году, когда в крови больных была обнаружена вирусная РНК, характерная для флавивирусов. Этот возбудитель гепатита назвали вирусом гепатита C - [2].
Парентеральный вирусный гепатит C вызывается РНК-содержащим вирусом с размером вириона 35-50 нм, относящимся к семейству Flaviviridae. (рис.1.)
Рисунок 1. Строение вируса гепатита С
Вирусные частицы HCV имеют оболочку, содержающиеся в крови в следовых количествах и ассоциированы с липопротеинами низкой плотности и антителами к белкам вируса гепатита ^ Вирусы, выделенные из комплексов с липопротеинами и анти-ИОУ антителами, имеют диаметр 60-70 нм. При электронно-микроскопическом изучении на поверхности вириона выявлены хорошо выраженные выступы высотой 6-8 нм. Сегодня известно 7 генотипов вируса (рис.1.2.)
Вирус иммунодефицита человека относится к семейству Ре^ом^ае, подсемейству ЬепИм^ае («ленти» - замедленный, длительный).
Рисунок 2. Схема строения вируса иммунодефицита человека
(ВИЧ, AIDS).
Характерными особенностями ретровирусов являются уникальное строение генома и наличие фермента - обратной транскриптазы (РНК-зависимая ДНК- полимераза). Присутствие обратной транскриптазы в структуре вируса обеспечивает обратную направленность потока генетической информации: не от ДНК к РНК, а, наоборот, от РНК к ДНК - [16, 22, 23].
На сегодняшний день известно 2 антиген варианта вируса -ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые различаются по структурным и антигенным характеристикам. ВИЧ-1 является наиболее патогенным для человека - [16, 20, 22]. В Узбекистане циркулирует преимущественно ВИЧ-1.
Капсид содержит 2 молекулы РНК, ферменты, нуклеопротеины и белки. Сам капсид состоит из около 2000 копий белка Р24. Капсид окружен оболочкой, состоящей из матричного белка р17, сверху находится наружная двухслойная липопротеиновая оболочка,
пронизанная 72 гликопротеиновыми шипами. Каждый такой шип состоит из 3 молекул трансмембранного гликопротеина Р41 и 3 молекул поверхностного гликопротеина Р120.
Вирус содержит следующие ферменты, необходимые для репликации: обратная транскриптаза (ревертаза); интеграза; протеаза.
На подавлении активности этих ферментов основано действие большинства антиретровирусных препаратов - [19].
Эпидемиология и распространенность ВИЧ-инфекции и
Гепатита С
Источником инфекции являются больные с активным гепатитом C и латентные больные — носители вируса.
Вирус гепатита C передается через кровь. Чаще всего он передается:
-в результате употребления инъекционных наркотиков при совместном использовании устройств для инъекций;
-в медицинских учреждениях из-за повторного использования или недостаточной стерилизации медицинского оборудования, особенно шприцев и игл;
-и при переливании непроверенной крови и продуктов крови.
ВГС передается также сексуальным путем и может передаваться от инфицированной матери ее младенцу; однако эти виды передачи являются гораздо менее распространенными. Гепатит С не передается через грудное молоко, пищевые продукты, воду или при безопасных контактах, например объятиях, поцелуях и употреблении продуктов или напитков совместно с инфицированным лицом. Оценки, полученные в результате моделирования, позволяют предположить, что в 2015 г. в мире произошло 1,75 миллиона случаев инфицирования ВГС (23,7 случая инфицирования ВГС на 100 000 человек в глобальных масштабах) - [27, 29].
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
В России 2012 года по Современная эпидемиология гепатита С проводили исследования (Мукомолов С.Л., Левакова И.А., Сулягина Л.Г., Синайская Е.В., Болсун Д.Д., Иванова). Результате показано, что основные эпидемиологические закономерности ГС, выявленные на начальном этапе изучения заболевания (более низкая интенсивность ОГС по сравнению с острыми формами гепатита В, очень низкая вовлеченность в эпидемический процесс детей до 14 лет, существенное значение искусственных путей передачи вируса ГС, высокая хрониогенность), сохраняются и в настоящее время.
Распространенность вирусного гепатита С. В мире насчитывается более 170 млн. с HCV инфекцией и 2 млн. с гепатитом С в хронической форме. С каждым годом эти цифры растут, что связано с распространением наркомании и внутривенным введением наркотиков. Ежегодно от осложнений, вызванных гепатитом С, погибает около 350 тысяч человек. Диаг.1.
Диаграмма 1. Рост смертности от гепатита
Вирусные гепатита С являются причинами цирроза, печеночной недостаточности, кровотечений пищеварительного тракта, гепато-
целлюлярной карциномы и основными этиологическими факторами поражения печени, требующими трансплантации органа -[27, 29].
До настоящего времени открытие вируса иммунодефицита человека вызывает обширный общественный резонанс. Прямым следствием является небывало высокое финансирование разработок, направленных на диагностику, лечение больных, профилактику ВИЧ/СПИД, а также фундаментальных исследований. В середине 80-х годов в них включились и выдающиеся ученые с мировым именами, и молодые специалисты многих стран. В результате очень скоро о ВИЧ стало известно значительно больше, чем о некоторых других, давно описанных инфекциях. Например, база данных Национальной медицинской библиотеки США на начало 2000 года содержала информацию о 48 703 публикациях, касающихся ВИЧ (о вирусе гриппа - в два раза меньше). Хотя пандемия ВИЧ/СПИД продолжается три десятилетия и на борьбу с ней ежегодно расходуются триллионы долларов США, она регистрируется во всех странах мира.
Генеральный директор ВОЗ 1 декабря 2010 года, во Всемирный день борьбы со СПИД ом, отметил, что эпидемию СПИД а удалось остановить. За последние 10 лет число новых ВИЧ-инфекций снизилось почти на 20%. Число смертей, связанных со СПИДом, уменьшилось почти на 20% за последние 5 лет, а общее число людей, живущих с ВИЧ, стабилизировалось. Вместе с тем он отметил, что к концу 2009 года в мире проживало 33,3 млн. больных ВИЧ-инфекцией, в том числе 15,9 млн. женщин, 2,5 млн. детей, за год вновь заразилось 2,6 млн. человек, умерло 1,8 млн. больных, остались сиротами 16.6 млн. детей. Каждый день в мире семь тысяч человек заражаются ВИЧ.
ВИЧ-инфекция является не только медицинской, но и глубоко социальной проблемой. Болезнь поражает, прежде всего, людей
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
репродуктивного и трудоспособного возраста, протекает длительно и остается заболеванием со 100% летальностью - [ВОЗ, 2007]. Она угрожает экономической стабильности многих, в том числе развитых стран, так как с внедрением антиретровирусной терапии продолжительность жизни больных растет, как следствие, кумулятивное число живущих с ВИЧ и нуждающихся в ежедневном дорогостоящем лечении и постоянном лабораторном обследовании увеличивается. Поэтому проблема ВИЧ/СПИД а является одним из постоянно обсуждаемых вопросов на высшем государственном уровне, на совещаниях стран «восьмерки».
ВИЧ-инфекция остается беспрецедентной по своим размерам глобальной проблемой в области здравоохранения. По оценкам, ВИЧ уже унес жизни более 25 миллионов человек во всем мире и вызвал глубокие демографические изменения в наиболее затронутых странах - [9, 24, 31].
Во всем мире, по оценкам, на молодых людей в возрасте 15-24 лет приходится 45% новых ВИЧ- инфекций. В 2009 году, по оценкам, ВИЧ заразились 430 000 [240 000-610 000] детей моложе 15 лет.
Распространенность ВИЧ- инфекции в Республике Узбекистан находится на концентрированной стадии своего развития - [9].
Начиная с 2000 г., регистрация новых случаев ВИЧ-инфекции увеличивалась ежегодно от 1,4 до 3,5 раз. Если в 2000 г. было зарегистрировано 154 ЛЖВ, то в 2009г. - 4016 (14,0 на 100000 населения). Рост регистрации ВИЧ- инфицированных связан как с увеличением числа новых случаев ВИЧ- инфекции, так и с повышением показателя выявляемости в связи с расширением тестирования на ВИЧ (диаг.2.).
Диаграмма 2. Динамика регистрации новых случаев ВИЧ-инфекции в Республике Узбекистан (1987 - 2009 гг.)
По состоянию на 31.12.2009 г. в Республике Узбекистан зарегистрировано 15 892 лиц, живущих с ВИЧ. ВИЧ-инфекция распространяется по регионам неравномерно. Так, в г. Ташкенте зарегистрирована почти треть от числа выявленных случаев (21,8% -в 2009г. и 35,1% - за весь период эпидемии) - [9].
Особенности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции и
Гепатита С
История лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции берет начало в 80-х годах ХХ столетия. В настоящее время, прежде всего, используются иммунологические, молекулярно-биологические и гематологические методы. Молекулярно-биологические (полимераз-ная цепная реакция, ПЦР) методы имеют высокую стоимость и для первичного скрининга не используются. Серологические методы основаны на определении антител к вирусу, обладают высокой чувствительностью и специфичностью и являются преимущественными в выявлении ВИЧ-инфекции. Первые тест-системы позволяли определять антитела только к ВИЧ типа 1. Затем, по мере усовершенствования технологии, стала возможной серодиагностика обоих типов вируса. Тест-системы, применявшиеся в ХХ веке,
позволяют определить только Ig G, относятся к I и II поколениям и в настоящее время не имеют широкого применения. Тест-системы III поколения позволяют определять Ig G и Ig M с более коротким, чем у первых двух поколений, периодом «серологического окна» (от 20 дней с момента заражения). Наиболее современными являются тест системы IV поколения (комбинированные). Они предназначены для одновременного выявления антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и антигена р24 ВИЧ-1, что позволяет сократить период «серологического окна» на 2-Знедели. Динамика виремии после заражения подробно изучена для ВИЧ-1. Последовательность возникновения лабораторных маркеров выглядит следующим образом: Латентный период - первые10 дней после инфицирования маркеры не определяются. Период «серологического окна» - это интервал между заражением и появлением антител. На его продолжительность влияют тип диагностической тест-системы и ее чувствительность. Для этого периода характерно повышение уровня сердцевинного антигена р24, являющегося основным белком, формирующим нуклеокапсид ВИЧ-1. Тест-системы IV поколения сокращают этот период и способствуют более раннему выявлению факта инфицирования. Острая ВИЧ-инфекция -период между появлением РНК ВИЧ в плазме до появления первых антител IgM, циркулирующими в течение виремии. Продолжительность периода также зависит от характера и чувствительности тест-систем. Закрепленная (установившаяся) ВИЧ-инфекция (через 3-12 недель после заражения) - иммунный ответ в виде IgG достаточно выражен для получения положительного ответа с использованием ИФА или Вестерн-блот методик. Через 4 недели после заражения ВИЧ-специфические антитела определяются в 60-65 % случаев, через 6 недель — в 80% случаев, через 8 недель — в 90 % случаев, через 12 недель — в 95 % случае - [8, 17].
Самым простым, доступным и широко применяемым в практике является иммуноферментный анализ (ИФА)на выявление антител к вирусу СПИД а в крови больных. По сравнению с выделением вируса метод ИФА обладает значительно более высокой чувствительностью, однако менее специфичен из-за возможности получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Антитела к ВИЧ появляются у 90— 95% инфицированных в течение 3 месяцев после заражения, у 5-9% — через 6 месяцев и у 0,5-1% - в более поздние сроки. С развитием заболевания количество антител может снижаться вплоть до полного исчезновения. Забор крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3—5 мл. Материал нельзя длительно хранить, так как наступивший гемолиз (разрушение эритроцитов) повлияет на результаты анализа. Поэтому после взятия крови желательно отделить сыворотку, которая может храниться в холодильнике до 7 дней. Метод ИФА является скрининговым (проверочным). В случае положительного результата анализ в лаборатории проводится дважды (с той же сывороткой) и при получении хотя бы еще одного положительного результата сыворотка направляется для постановки подтверждающего теста - [4, 5].
Иммуноблотинг — тестирование на наличие антител к отдельным вирусным антигенам. Метод иммуноблотинга используется для подтверждения специфичности результата, полученного методом ИФА. Иммуноблотинг позволяет выявить в сыворотке крови инфицированных оболочечные и регуляторные белки ВИЧ. Однако и данный метод иногда дает ложноположительные реакции, например, при исследовании крови больных тропической малярией.
Метод иммунофлуоресценции относительно прост, в качестве антигенов в этой реакции используются различные клеточные линии инфицированных ВИЧ - [7,8].
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
Радиоиммунопреципитация — один из наиболее специфичных и чувствительных методов диагностики СПИД а, однако, для него требуются дорогостоящие радиоактивные материалы и оборудование. Кроме того, для постановки реакции необходимо культивировать инфицированные вирусом клетки - [11, 18, 20, 21, 25].
Метод агглюцинации является одним из наиболее простых, чувствительных и специфичных для определения антител к ВИЧ. Обнаружение антигенов ВИЧ в исследуемом материале основано, главным образом, на тех же принципах, что и выявление антител. Однако существующие методы не позволяют регулярно обнаруживать антигены в материалах, полученных от больных, из-за их низкого содержания. В ряде лабораторий некоторых стран изучается диагностическая ценность новой реакции —энзимной амплификации генов. Эта реакция важна для; уточнения диагностики врожденного СПИДа, так как она позволяет выявлять клетки, пораженные вирусом, а не антитела.
В последние годы решающее значение для прогноза и тяжести ВИЧ - инфекции имеет определение «вирусной нагрузки» (viral load) — определение количества копий РНК ВИЧ в плазме методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Используется определение и других вирусологических маркеров - [26, 13, 14, 17].
По принципу действия амплификаторы ДНК относятся к классу электропневмомеханических устройств, а по назначению - к изделиям медицинского назначения для молекулярно-генетических исследований. Современная практика сложилась таким образом, что допуск к лабораторному применению подобных устройств осуществляется органами контроля Министерства здравоохранения и социального развития РФ. Практически все типы амплификаторов ДНК, выпускаемых в настоящее время, имеют или существенное ограничение по производительности и ресурсу работы, или низкую
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
точность подержания заданной температуры рабочего поля и низкую скорость изменения температуры. Предложено несколько вариантов конструктивных решений, направленных на повышение эффективности работы устройств. Некоторые фирмы, в том числе «Вютейа» (Германия), выпустили устройства, в которых тепловые блоки изготовлены из серебра с позолотой контактных поверхностей. Данное решение позволило несколько повысить эффективность устройства, но привело к значительному удорожанию изделия, и без того недешевого. Средняя стоимость подобных устройств составляет 3,5 . 4,0 тысяч долларов США.
Центральной проблемой при создании оборудования для ПЦР-диагностики является проблема повышения его эффективности. Решить данную задачу возможно на основе математического моделирования и исследования рабочих процессов. На сегодняшний день вопросы теории рабочих процессов и разработки методов расчета оборудования для ПЦР-диагностики мало изучены. Некоторые принципы обобщения определены в работе Н.А. Ярышева и Л.Б. Андреевой, в которой проведены анализ и систематизация вариантов исполнения и методов расчета термостати-рующих устройств различных типов. Математическая модель разработана на основе закона сохранения энергии при значительном наборе допущений. В работе получено дифференциальное уравнение объекта термостатирования, находящегося во внутреннем объеме термостатирующего устройства. Предложенный метод дает достаточно хорошие результаты, но обладает следующими недостатками: не позволяет рассчитывать тепловые процессы в динамическом режиме; нельзя рассчитать тепловые поля по объему рабочего тела; расчет конкретной задачи требует значительных преобразований и выкладок; количество решаемых на его основе задач ограничено.
Известны попытки решения подобных задач и аналитическими методами. Предложенный B.C. Зарубиным подход имеет те же ограничения. Максимально в направлении создания методики расчета прецизионных устройств нагрева и охлаждения, работающих в динамическом режиме, продвинулась О.В.Белова. Автором разработан метод расчета, сочетающий в себе конечно-элементную и конечноразностную дискретизацию и использующий численные методы решения на несогласованных сетках. Однако в работе предложена модель только одного варианта исполнения устройства нагрева/охлаждения - на термоэлектрических элементах Пельтье. Кроме того, при построении пространственной модели теплового блока автор заменяет расчетные области, в которые входят полупроводниковые материалы и медные спаи, на некий эффективный объем, теплофизические свойства которого представлены в виде эффективных плотности и коэффициента теплопроводности. Предложенный подход был оригинальным шагом на пути построения практически первой пространственной модели расчета тепловых процессов в динамическом режиме. Однако при решении задачи исследования однородности теплового поля метод не позволяет учитывать неоднородность теплового поля самого источника (в данном случае -элемента Пельтье), а мощность источника в общем случае зависит от пространственных координат и времени.
В результате впервые проведенных исследований теплового взаимодействия реакционной смеси и теплового блока амплифи-катора ДНК в ходе ПЦР установлено, что одной из основных причин низкой воспрозводимости результатов проведения ПЦР является неоднородность теплового поля рабочего тела в переходных режимах работы амплификаторов ДНК, которая может достигать ± (7.8) К при скорости изменения температуры рабочего тела теплового блока (1. .1,5) К/с. Впервые разработана математическая модель и
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
произведен расчет энергетического воздействия химических и физико-химических реакций при матричном синтезе цепей и плавлении ДНК на тепловое состояние реакционной смеси. Установлено, что теплота, выделяемая или поглощаемая в процессе химических и физико-химических реакций (2,0-10'5. 1,0-10"4 Дж), не вызывает существенного изменения теплового состояния реакционной смеси.
Проблема лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции усугубляется несовершенством диагностических тест-систем, обусловленным с одной стороны технологическими трудностями, с другой -высокой генетической изменчивостью вируса и схожестью антигенного состава ВИЧ и некоторых структур организма человека - [12, 28, 30].
Особенностью ВГС является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК-ВГС различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация ВГС, разделяющая их на варианты (их 6-9) и субтипы- генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах. Лабораторная диагностика ГС была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при ГС вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи реком-бинантной технологии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах - С22-3; С33с, С100-3,
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
С200, NS5, S-1-1). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркеров ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgM, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1 - 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты - рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. В нашей стране более широкое распространение получили отечественные подтверждающие твердофазные иммуноферментные тест-системы (так называемы системы «Спектр»), основанные на определении антител к отдельным вирусным антигенам: core, NS3, NS4ab, NS5a. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК ВГС повышается с
Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина» №1 - январь (18) 2018
каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев - [3, 10, 15, 28, 30, 32].
Другими словами, исследования по проведению лабораторной диагностики ВИЧ и Гепатита С проводятся во всем мире. Эффективность этих методов недостаточно изучена. Поэтому создание и внедрение новых диагностических методов в условиях республики Узбекистана является требованием времени.
Список литературы:
1. Ласковый убийца. Чем опасен вирусный гепатит С и как его лечат.Статья из газеты: Лекарственное обозрение № 11(рус.). aif.ru (13 ноября 2014).Проверено 25 января 2016.
2. Houghton M. The long and winding road leading to the identification of the hepatitis C virus. (англ.) // Journal of hepatology. —
2009. — Vol. 51,no. 5. — P. 939—948. — D0l:10.1016/ j.jhep.2009.08.004. —PMID 19781804.
3. Барсукова Т.А. Изучение возможности использования метода "Сухой капли крови" для исследования на АЧС методом ПЦР//В сборнике: В мире научных открытий материалы V Всероссийской студенческой научной конференции. 2016. С. 81-84.
4. Беспалова Л.Ю. Диагностика ВИЧ-инфекции у зависимых от пиоидов людей в Казахстане.//ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2012. Т. 4. № 2. С. 95-100.
5. Бобкова М.Р., Лаповок И.А. Лабораторные методы дифференциальной диагностики острой ранней и текущей ВИЧ-инфекции // Клин. лаб. диагностика.-2007.-№12.-С.25-32.
6. Бочкова М.С., Ольшанский А.Я., Вдовина В.И., и др./ Использование реакции непрямой иммунофлюоресценции в серологической диагностике ВИЧ-инфекции.//Здоровье населения и среда обитания.
2010. № 7. С. 40-42.
7. Бочкова М.С., Ольшанский А.Я., Стаханова В.М., и др.// Непрямая иммунофлюоресценция в комплексной диагностике ВИЧ-
инфекции./ Русский журнал СПИД, рак и общественное здоровье. 2008. Т. 12. № 1. С. 102-103.
8. Воеводская Л.Ю., Золовкина А.Г., Григоричева Л.Г., и др.Опыт использования ADVIA CENTAUR CP (SIEMENS) в диагностике вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции.//Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60. № 9. С. 84.
9. Гашникова Н.М., Тотменин А.В., Саухат С.Р., и др Моле-кулярно - эпидемиологическая характеристика распространения ВИЧ-инфекции на юге России..//ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2013. Т. 5. № 4. С. 73-81.
10. Гавриш И.В. Принципы метода капиллярной сухой крови и его место в лаборатории ИФА СПИД центра.//МЕДИЦИНА, №2, 2012.С 84-85
11. Гумерова И.Ф., Имельбаева Э.А., Насырова Э.С., и др Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции в Республике Башкориостан //Клиническая лабораторная диагностика. 2010. № 9. С. 34a-34b.
12. Дмитриева Л.В., Гутникова М.Ю., Костюнина Л.М., и др.// Использование современных тест- систем в диагностике ВИЧ-инфекции. В книге: Актуальные вопросы ВИЧ-инфекции материалы Международной научно-практической конференции. 2016. С. 245247.
13. Зайцева Н.Н., Ефимов Е.И., Носов Н.Н., и др Современные молекулярно -генетические методы исследования в эпидемиологическом надзоре за ВИЧ-инфекцией.//Журнал МедиАль. 2014.№ 2 (12). С. 122-134
14. Зайцева Н.Н., Носов Н.Н., Парфенова О.В., и др. Современные молекулярно-генетические технологии в надзоре циркуляцией субтипов ВИЧ-1./ Современные технологии в медицине. 2016. Т. 8. № 1. С. 121-127.
15. Кан Н.Г., Казакова Е.И., Латыпов Р.Р. Оценка и адаптация коммерчески доступных наборов для определения ДНК ВИЧ в материале «сухая капля крови» в Узбекистане// В сборнике: Актуальные вопросы ВИЧ-инфекции материалы Международной научно-практической конференции. 2014. С. 52-53
16. Корноушенко Ю.В., Анищенко И.В., Тузиков А.В., и др./ Определение инвариантных элементов структуры третьего вариабельного домена белка GP120 ВИЧ-1 методами молекулярного
моделирования ./ /Математическая биология и биоинформатика. 2011. Т. 6. № 2. С. 298-311.
17. Князев В.Ю., Насырова Э.С., Гильманов А.Ж. Некоторые результаты молекулярно -генетического исследования на вирусный гепатит С у ВИЧ-инфицированных пациентов в Республике Башкиристан в рамках реализации приоритетного Национального проекта в сфере Здравоохранения .//Клиническая лабораторная диагностика. 2008. № 9. С. 44-45.
18. Лисицина З.Н., Крутицкая Л.И., Дементьева Н.Е. Затраты на лабораторную диагностику ВИЧ-инфекции согласно стандартам медицинской помощи при болезни, вызванной ВИЧ.//ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2014. Т. 6. № 1. С. 84-89.
19.Лободанов С.А. Тесты для выявления лекарственной устойчивости ВИЧ: настоящее и будущее.//ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2015. Т. 7. № 2. С. 55-60.
20. Никульшина Л.Л., Фоменкова Д.Д. Современные достижения в диагностике ВИЧ-инфекции.//Вестник Совета молодых учёных и специалистов Челябинской области. 2016. Т. 2. № 3 (14). С. 49-51.
21.Матущенко Е.В., Сергеева И.В., Иванов А.Н., и др.Лабора-торная диагностика ВИЧ-инфекции среди населения Сибирского и Дальневосточного Федеральных округов в 2005-2009 ГГ./ //Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2011.№ 18 (18). С. 121-125.
22. Покровский В.В., Ладная H.H., Соколова Е.В. Буравцова Е.В. ВИЧ-инфекция // Информационный бюллетень. 2008. - № 30. - 36 с.
23. Покровский В.В. ВИЧ- инфекция и СПИД. Клинические рекомендации. М.; ГЭОТАР- Медицина.- 2006.-128 с.
24. Рассохин В.В., Бобрешова А.С., Огурцова С.В. Вопросы экономии и эпидемиологии , профилактике, диагностике и клинике ВИЧ-инфекции.//ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2016. Т. 8. № 2. С. 67-70.
25. Скворцов В.В., Тумаренко А.В., Скворцова Е.М. Современные проблемы клинической лабораторной диагностики ВИЧ-инфекцией клиническая диагностика.//Поликлиника. 2010. № 6. С. 2830.
26. Шмакова Т.И., Адушева Т.П., Янович О.А. Об использовании метода полимеразной цепной реакции в диагностике ВИЧ-
инфекции.// Дальневосточный журнал инфекционной патологии.
2008. № 13. С. 73-74.
27. Houghton M. The long and winding road leading to the identification of the hepatitis C virus. (англ.) // Journal of hepatology. —
2009. — Vol. 51,no. 5. — P. 939—948. —D0l:10.1016/j.jhep. 2009.08.004. —PMID 19781804.
28. HIV-1 infection using dried blood spots can be confirmed by BioRad Geenius™ HIV 1/2 confirmatory assay./Fernández McPhee C(1), Álvarez P(1), Prieto L(2),0biang J(3),et al.//J Clin Virol.2015 Feb;63:66-9.
29. Nelson P. K.,Mathers B. M.,CowieB.,Hagan H.,Des Jarlais D.,Horyniak D.,Degenhardt L. Global epidemiology of hepatitis B and hepatitis C in people who inject drugs: results of systematic reviews.^™.) // Lancet (London, England). — 2011. — Vol. 378
30. Chaillet, P., Zachariah, R., Harries, K., Rusangawa, E., Harries, A.D., Dried blood spots are a useful tool for quality assurance of rapid testing in Kigali, Rwanda. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 103, 2009., 634637.
31. Zaltron S.,Spinetti A.,Biasi L.,Baiguera C.,Castelli F. Chronic HCV infection: epidemiological and clinical relevance. // BMC infectious diseases. — 2012.
32. Wilkins T.,Malcolm J. K.,Raina D.,Schade R. R. Hepatitis C: diagnosis and treatment. (англ.) // American family physician. — 2010. — Vol. 81,no. 11. — P. 1351—1357
