CC BY
31
БИОМАРКЕРЫ
УДК 616.36-002.14:578.891]-07:616.15-097078.33
I. V Evsegneeva1, Yu. S. Ptytsyna2,I. A. Otmakhova2, D. V Novikov3, O. V. Utkin2,
T. V. Chesnokova2, V. V. Novikov3, A. V. Karaulov1
THE ALTERATON IN THE LEVEL OF SOLUBLE HLAI CLASS MOLECULES IN THE SERUM OF PATIENTS WITH HEPATITIS B AND C
1I. M. Sechenov Medical Academy, Moscow
2Medical State Academy, Nizhny Novgorod 3N. I. Lobachevsky University, Nizhny Novgorod
ABSTRACT
The contents of soluble HLA class I molecules (sHLA-I) in serum of patients with viral hepatitis B and C have been determined by immune-enzyme assay. The serum content of sHLA-I was increased at acute hepatitis B, chronic hepatitis B, acute and chronic hepatitis C and at mixed hepatitis B+C. The presence of HBe-antigen was associated with the increasing of sHLA-I level at acute hepatitis B. The absence of hepatitis C virus RNA was associated with the elevating of sHLA-I level at chronic hepatitis C.
Key words: viral hepatitis B, viral hepatitis C, soluble HLA I class molecules.
И. В. Евсегнеева1, Ю. С. Птицына2, И. А. Отмахова2, Д. В. Новиков3, О. В. Уткин2,
Т. В. Чеснокова2, В. В. Новиков3, А. В. Караулов1
ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ В УРОВНЕ РАСТВОРИМЫХ МОЛЕКУЛ ИЬАI КЛАССА В КРОВИ БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТАМИ ВИС
1 Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова
2 Нижегородская государственная медицинская академия
3 Нижегородский госуниверситет им. Н. И. Лобачевского
РЕЗЮМЕ
С помощью иммуноферментного метода определено содержание растворимых молекул ИЬЛ I класса ^НЬА-1) в сыворотке крови больных вирусными гепатитами В и С. Обнаружено повышение сывороточного уровня sHLA-I у больных острым и хроническим гепатитом В, острым и хроническим гепатитом С, а также у больных острым гепатитом В на фоне хронического гепатита С. Установлено, что у больных острым гепатитом В наличие НВе-антигена ассоциировано с повышением сывороточного уровня sHLA-I, а у больных хроническим гепатитом С повышение сывороточного содержания sHLA-I ассоциировано с отсутствием в крови РНК вируса гепатита С.
Ключевые слова: вирусный гепатит В, вирусный гепатит С, растворимые молекулы HLAI класса.
ВВЕДЕНИЕ
Растворимые антигены HLA I класса (sHLA-I) обнаружены во многих биологических жидкостях, в т. ч. в сыворотке и плазме крови, слюнной жидкости, перитонеальных диализатах и моче [10]. Установлено, что значительные количества sHLA-I секретируются активированными лимфоцитами как in vitro, так и in vivo. Активация может происходить в результате воздей-
ствия митогенов и различных антигенов [4, 9]. Показано, что молекулы sHLA-I являются продуктами протео-литического отщепления от мембраны и/или альтернативного сплайсинга мРНК. Молекулы sHLA-I могут модулировать реактивность цитотоксических Т-клеток и стимулировать апоптоз в условиях in vitro, поддерживая толерантность. Они могут связываться с СЭ8-моле-кулами на поверхности Т-лимфоцитов, препятствуя
распознаванию презентируемых антигенных пептидов [17]. Активность естественных киллеров также подвержена модулирующему действию молекул бНЬА-
I. Показано, что в их присутствии ингибируется узнавание естественными киллерами клеток-мишеней [5]. Молекулы бНЬАТ могут вызывать также РаБ/РаБЬ-за-висимый апоптоз КК-клеток, взаимодействуя с 008-антигеном на их поверхности [15].
Концентрация сывороточной формы молекул главного комплекса гистосовместимости I класса у здоровых доноров, по данным разных авторов, составляет от 357 до 1328 нг в 1мл [6, 14]. Повышенный уровень растворимых молекул НЬАI класса наблюдается при различных воспалительных, аутоиммунных и инфекционных заболеваниях, в т. ч. и при вирусных гепатитах [16].
Цель работы — исследование сывороточного уровня бНЬАТ во взаимосвязи с особенностями течения вирусных гепатитов В и С.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работе использовали образцы сыворотки крови 115 здоровых доноров, а также больных вирусными гепатитами В и С, находившихся на лечении в Нижегородской городской инфекционной больнице № 2. Содержание бНЬА-1 тестировали в 135 образцах сыворотки крови больных острым гепатитом В (ОГВ), в 40 — больных хроническим гепатитом В (ХГВ), в 75 — больных острым гепатитом С (ОГС) и в 95 — больных хроническим гепатитом С (ХГС). Были протестированы также 56 образцов сыворотки крови больных, коинфицированных вирусами гепатитов В и С (ХГС и ОГВ). Сывороточное содержание молекул бНЬАТ определяли разработанным ранее иммуно-ферментным методом с использованием моноклональных антител ИКО-53 против альфа-цепи молекул НЬА I класса и меченных пероксидазой хрена моноклональных антител ИКО-216 против в2-микроглобулина [2]. Результаты выражали в условных единицах (и/т1). Оценивали также сывороточный уровень общего, конъюгированного и свободного билирубина, активность аланинаминотрансферазы (АЛТ). Маркеры вирусных гепатитов В и С определяли с помощью имму-ноферментных тест-систем фирмы «Вектор-Бест». Наличие РНК вируса гепатита С определяли с помощью ОТ-ПЦР.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
У доноров крови сывороточный уровень растворимых молекул НЬА I класса составил 1098,0+57,5 и/т1. В сыворотке крови поступивших в стационар больных ОГВ сывороточный уровень молекул бНЬА-! был увеличен в 1,6 раза (р<0,05) и сохранялся повышенным на протяжении всего периода пребывания в стационаре, обнаруживая лишь тенденцию к нормализации (табл. 1). При ХГВ сывороточное содержание молекул бНЬАТ было повышено в 1,35 раза (р<0,05), что подтверждает полученные ранее данные [7].
У больных ОГВ в начальный период манифестации клинических проявлений обнаружена положи-
Таблица 1
Уровень sHLA-I молекул в сыворотке крови больных гепатитами В и С
Группа обследованных sHLA-I, U/ml Р
Здоровые доноры 1098,0±57,5
Больные ОГВ: при поступлении в стационар 3-я неделя в стационаре по окончании курса лечения 1821,0± 174,6 1628,01182,6 1601,0± 186,6 <0,05 <0,05 <0,05
Больные ХГВ 1487,0+147,4 <0,05
Больные ОГС: при поступлении в стационар по окончании курса лечения 1386,0+148,7 1977,0+264,7 >0,05 <0,05
Больные ХГС 1539,0+128,2 <0,05
Больные ОГВ на фоне ХГС 2332,01205,9 <0,05
тельная корреляция между содержанием sHLA-I и уровнем АЛТ (л,=0,366, ^<0,05). Как известно, высвобождение в кровь АЛТ происходит при нарушениях внутренней структуры гепатоцитов, повышении проницаемости клеточных мембран, что свойственно как острому вирусному гепатиту, так и рецидивам хронического гепатита [1]. Полученные данные указывают на возможность существования связи между повреждением клеток печени и повышением уровня sHLA-I. Молекулы HLAI класса представлены во всех ядерных клетках организма. Можно предположить, что рост уровня молекул sHLA-I в сыворотке крови происходит в результате массовой гибели гепатоцитов и выделения в кровь продуктов их деградации. С другой стороны, молекулы sHLA-I могут продуцироваться цитотоксическими Т-лимфоцитами вследствие их активации или выполнения ими эффекторной функции [12]. В таком случае повышенная концентрация молекул sHLA-I является фактором, ограничивающим высокую цитотоксическую активность Т-клеточного звена иммунитета. Как в первом, так и во втором случае высокий уровень молекул sHLA-I можно рассматривать как механизм снижения разрушающего потенциала цитотоксических Т-клеток.
Как видно на рис. 1, присутствие HBe-антигена в сыворотке крови больных ОГВ сопровождалось в сравнении с нормой увеличением сывороточного содержания sHLA-I в 2,3 раза (р<0,05). В то же время содержание sHLA-I в сыворотке крови больных ОГВ, отрицательных по HBe-антигену и положительных по антителам к HBe-антигену, превышало норму лишь в 1,3 раза (р>0,05).
Наличие в крови HВe-антигена характеризует высокую репликативную активность вируса гепатита В. Антитела к HВe-антигену, напротив, свидетельству-
8 БИОМАРКЕРЫ
Рис. 1. Сывороточный уровень бНЬА-! у НВеА§(-) и НБеА§(+) больных ОГВ
* Достоверные различия между донорами и НБеА§(+) больными ОГВ
ют о возможно завершенной репликации ДНК вируса гепатита В. Установлено, что высокие титры НВе-ан-тигена соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности, всегда сочетаются с обнаружением полных частиц Дейна. НВе-антиген рассматривается также как маркер высокой инфекционности крови [3]. Таким образом, повышенная концентрация молекул бНЬА-I у больных ОГВ в начале заболевания ассоциирована с высокой репликативной активностью вируса гепатита В и увеличением активности АЛТ. В дальнейшем такая коррелятивная связь теряется у больных ОГВ и не обнаруживается при ХГВ.
У больных ОГС сывороточный уровень бНЬАТ при поступлении в стационар имел лишь тенденцию к повышению (см. табл. 1). Однако к моменту выписки из стационара он статистически достоверно возрастал в 1,9 раза в сравнении с нормой. Повышение сывороточного уровня молекул бНЬА-! было зарегистрировано и у больных ХГС. Полученные результаты находятся в соответствии с результатами предшествующих исследований [8, 11]. Больные ХГС, в крови которых обнаруживалась РНК вируса гепатита С, имели нормальный уровень бНЬА-!. В то же время больные ХГС, отрицательные по РНК вируса гепатита С, характеризовались повышением сывороточного содержания бНЬА-! в 2,9 раза (рис. 2). Кроме того, выявлена отрицательная корреляционная связь между количеством лейкоцитов в периферической крови больных ХГС и сывороточным содержанием бНЬА-!.
ОГВ на фоне ХГС характеризовался повышением уровня сывороточного бНЬА-! в 2,1 раза (р<0,05). Уровень бНЬА-! при микст-гепатите был в 1,3 раза выше, чем при ОГВ (р<0,05), и в 1,5 раза выше, чем при ХГС (р<0,05), что свидетельствует о кумулятивном характере повышения сывороточного содержания молекул бНЬА-!.
ВЫВОДЫ
Таким образом, высокое содержание бНЬА-! в сыворотке крови больных ХГС ассоциировано со снижением вирусной активности и выраженности воспалительных процессов. С этих позиций объясняется более высокий уровень сывороточного бНЬА-! у больных
Рис. 2. Содержание молекул бНЬА-! в сыворотке крови больных ХГС в зависимости от наличия (+) или отсутствия (-) РНК вируса гепатита С
* Достоверные различия между донорами и больными ХГС
ОГС при выписке из стационара в сравнении с периодом манифестации заболевания. Полученные результаты находятся также в соответствии с повышением уровня sHLA-I при успешной интерферонтерапии [13] и снижением сывороточного содержания sHLA-I при прогрессировании ХГС и переходе его в цирроз печени и гепатоклеточную карциному [7].
ЛИТЕРАТУРА
1. Балаян М. С., 'Михайлов М. И. Энциклопедический словарь — вирусные гепатиты. — М.: Амипресс, 1999. — 302 с.
2. Голенков А. К., 'Митина Т. А., Новиков В. В. и др. Клиническое значение растворимых молекул адгезии (sCD50 — ICAM-3), апоптоза (sCD95) и sHLA класса I при лимфопролиферативных заболеваниях // Рос. био-тер. журн. — 2002. — Т. 1, № 1. — С. 60-64.
3. Соринсон С. Н. Вирусные гепатиты. — СПб.: ТЕЗА, 1997. — 306 с.
1. Brieva J. A., Villar L. M., Leoro G. et al. Soluble HLA class I antigen secretion by normal lymphocytes: relationship with cell activation and effect of interferongamma // Clin. Exp. Immunol. — 1990. — Vol. 82, No. 2.
— P. 390-395.
4. Carbone E., Terrazzano G., Colonna M. et al. Natural killer clones recognize specific soluble HLA class I molecules // Eur. J. Immunol. — 1996. — Vol. 26, No. 3.
— P. 683-689.
5. Ghio M., Contini P., Mazzei C. et al. Soluble HLA class I, HLA class II, and Fas Ligand in blood components: a possible key to explain the immunomodulatory effects of allogeneic blood transfusions // Blood. — 1999.
— Vol. 93, No. 5. — P. 1770-1777.
6. Hagihara M., Shimura T., Takebe K. et al. Serum concentrations of soluble HLA — class I and CD8 forms in patients with viral hepatic disorders // J. Gastroenterol. — 1997. — Vol. 32, No. 3. — P. 338-343.
7. Migliaresi S., Bresciani A., Ambrosone L. et al. Increased serum concentrations of soluble HLA-class I antigens in hepatitis C virus related mixed cryoglobulinaemia // Ann. Rheum. Dis. — 2000. — Vol. 59, No. 1. — P. 20-25.
8. Park C. W., SongH. C., Shin Y. S. et al. Urinary soluble HLA class I antigen in patients with minimal change disease: a predictor of steroid response // Nephron. — 1998. — Vol. 79, No. 1. — P. 44-49.
9. Park C. W., Yun S. N., Yang C. W. et al. Serum and urine soluble HLA class I antigen concentrations are increased in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome // Korean J. Int. Med. — 1997. — Vol. 12, No. 1. — P. 52-57.
10. Piazzolla G., Tortorella C., Fiore G. et al. Immunoresponsiveness in chronic hepatitis patients: correlation between tissue and serum findings // Immunopharmacol. Immunotoxicol. — 1998. — Vol. 20, No. 3. — P. 337-354.
11. Puppo F., Contini P., Ghio M. et al. Soluble human MHC class I molecules induce soluble Fas ligand secretion and trigger apoptosis in activated CD8+ Fas (CD95)+ T lymphocytes // Int. Immunol. — 2000. — Vol. 12, No.
2. — P. 195-203.
12. Puppo F., Picciotto A., Brenci S. et al. Behavior of soluble HLA class I antigens in patients with chronic hepatitis C during interferon therapy: an early predictor marker of response? // J. Clin. Immunol. — 1995. — Vol. 15, No. 4. — P. 179-184.
13. Santoso S., Kiefel V., Volz H., Mueller-Eckhardt C. Quantitation of soluble HLA class I antigen in human albumin and immunoglobulin preparations for intravenous use by solid-phase immunoassay // Vox Sang.
— 1992. — Vol. 62, No. 1. — P. 29-33.
14. Spaggiari G. M., Contini P., Dondero A. et al. Soluble HLA class I induces NK cell apoptosis upon the engagement of killer-activating HLA class I receptors through FasL-Fas interaction // Blood. — 2002. — Vol. 100, No. 12. — P. 4098-4107.
15. Zavazava N.Soluble HLA class I molecules: biological significance and clinical implications // Mol. Med. Today. — 1998. — Vol. 4, No. 3. — P. 116-121.
16. Zavazava N., Kronke M. Soluble HLA class I molecules induce apoptosis in alloreactive cytotoxic T lymphocytes // Nat. Med. — 1996. — Vol. 2. — P. 1005-1007.
