CC BY
41
DOI: 10.17816/KMJ2020-145
© 2020 Авторы УДК 616.7: 611.42: 616.441-006
Особенности иммунофенотипической диагностики В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний методом проточной цитометрии
Юлия Юрьевна Чуксина*, Елена Васильевна Катаева, Татьяна Алексеевна Митина
Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского, г. Москва, Россия
Реферат
Цель. Оценить информативность традиционных и дополнительных маркёров (CD200, CD305) при иммунофенотипической диагностике у пациентов с В-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями методом проточной цитометрии.
Методы. Иммунофенотипическое исследование методом четырёхцветной проточной цитометрии проведено 204 пациентам с различными вариантами В-клеточных неходжкинских лимфом. Материалом для исследования служили периферическая кровь и костный мозг. Оценивали экспрессию CD45, CD19, CD20, CD22, CD79b, CD79a, CD5, CD10, CD23, FMC7, CD43, CD38, CD11c, CD103, CD25, CD200, CD305, лёгких цепей иммуноглобулинов (kappa/lambda) с помощью моноклональных антител (Becton Dickinson, США). Оценку интенсивности экспрессии антигенов проводили по параметру средней интенсивности флюоресценции (y.e.). Результаты. Традиционная позитивная экспрессия FMC7 выявлена только у половины пациентов с различными вариантами лейкемизации неходжкинских лимфом, в то время как нетипичная позитивная экспрессия CD23 отмечена у пациентов с лимфомой маргинальной зоны селезёнки и фолликулярной лимфо-мой в 27,3 и 28,6% случаев соответственно. При лимфоме из клеток мантийной зоны позитивная экспрессия CD200 выявлена в значительно меньшем количестве наблюдений, что сопровождалось и достоверным снижением средней интенсивности флюоресценции CD200 по сравнению с опухолевыми клетками В-клеточ-ного хронического лимфолейкоза. Показатель средней интенсивности флюоресценции CD305 при воло-сатоклеточном лейкозе достоверно выше, чем при лейкемизации лимфомы маргинальной зоны селезёнки c «ворсинчатыми» лимфоцитами.
Вывод. Выявлена различная степень информативности некоторых традиционных маркёров при иммунофенотипической диагностике В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний методом проточной цитометрии; использование дополнительных маркёров CD200 и CD305 показало их высокую информативность при дифференциальной диагностике между различными вариантами В-клеточных лимфопролифератив-ных заболеваний со сходной иммунофенотипической и морфологической характеристиками лимфоидных элементов.
Ключевые слова: В-клеточные лимфопролиферативные заболевания, проточная цитометрия, маркёры CD200, CD305.
Для цитирования: Чуксина Ю.Ю., Катаева Е.В., Митина Т.А. Особенности иммунофенотипической диагностики В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний методом проточной цитометрии. Казанский мед. ж. 2020; 101 (1): 145-153. DOI: 10.17816/KMJ2020-145.
Features of immunophenotypic finding B-cell lymphoproliferative diseases by flow cytometry
J.J. Chuksina, E.V. Kataeva, T.A. Mitina
Moscow Régional Scientific and Research Clinical Institute named after M.F. Vladimirskiy, Moscow, Russia Abstract
Aim. To assess the information content of conventional and additional immunophenotypic markers (CD200,
Адрес для переписки: tchuxina2009@yandex.ru
© 10. «Казанский мед. ж.», №1
Поступила 29.10.2019; принята в печать 24.12.2019.
145
CD305) in the differential diagnosis B-cell lymphoproliferative diseases by flow cytometry. Methods. An immunophenotypic study using 4-color flow cytometry was performed in 204 patients with different variants of B-cell non-Hodgkin's lymphomas. The study material included peripheral blood and bone marrow. The expression of CD45, CD19, CD20, CD22, CD79b, CD79a, CD5, CD10, CD23, FMC7, CD43, CD38, CD11c, CD103, CD25, CD 200, CD 305, light chains of immunoglobulins (kappa/lambda) using monoclonal antibodies (Becton Dickinson, USA) was evaluated. The intensity of antigen expression was assessed using mean fluorescence intensity (y. e.).
Results. Conventional FMC7-positive expression revealed only half patients with different variants of leu-kemization of non-Hodgkin's lymphomas, whereas atypical positive expression of CD23 was observed in patients with marginal spleen lymphoma and follicular lymphoma in 27.3 and 28.6% of cases, respectively. In mantle cell lymphoma, expression of CD200 in B-cell was detected in a significantly smaller number of observations, accompanied by a significant decrease in the average intensity of CD200 fluorescence compared to B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells. The mean fluorescence intensity (MFI) of CD305 in hairy cell leukemia is significantly higher than in splenic marginal zone lymphoma (SMZL) with "villous" lymphocytes. Conclusion. Different levels of the information content of some conventional markers were revealed in differential immunophenotypic diagnosis of B-cell lymphoproliferative diseases by flow cytometry; the use of additional markers CD200 and CD305 was highly informative in differential diagnostics between different variants of B-cell lymphoproliferative diseases with similar immunophenotypic and morphological characteristics of lym-phoid elements.
Keywords: B-cell lymphoproliferative diseases, flow cytometry, CD200, CD305 markers.
For citation: Chuksina J.J., Kataeva E.V., Mitina T.A. Features of immunophenotypic finding B-cell lymphoproliferative diseases by flow cytometry. Kazan medical journal. 101 (1): 145-153. DOI: 10.17816/KMJ2020-145.
Преимущества метода многоцветной проточной цитометрии определяют широкие возможности его использования, прежде всего в диагностике и классификации лимфопроли-феративных заболеваний (ЛПЗ) [1], мониторинге остаточного опухолевого клона, оценке факторов прогноза и резистентности к терапии. Традиционное морфологическое исследование при ЛПЗ не позволяет определить принадлежность опухолевых лимфоидных клеток к какой-либо линии (Т-, В- или N^1 или стадии дифференцировки. Метод проточной цитоме-трии позволяет быстро выявить клональность опухолевых В-лимфоцитов, коэкспрессию основных для конкретной опухоли поверхностных и/или цитоплазматических маркёров. Однако не всегда иммунофенотипическая характеристика опухолевых лимфоцитов отдельных пациентов соответствует классической картине того или иного варианта В-ЛПЗ, что затрудняет интерпретацию полученных данных и может привести к неверному диагнозу.
В некоторых публикациях [2-5] появились данные об использовании относительно новых моноклональных антител в диагностической панели для иммунофенотипирования В-ЛПЗ. Мы проанализировали информативность традиционных и дополнительных иммунофе-нотипических маркёров (CD200, CD305) при различных вариантах В-клеточных ЛПЗ.
CD200 (0X2) — трансмембранный глико-протеид, относящийся к суперсемейству имму-
ноглобулинов, экспрессируется на тимоцитах, покоящихся и активированных Т- лимфоцитах, В-лимфоцитах, дендритных, эндотелиальных клетках, нейронах, но отсутствует на NK-клет-ках, моноцитах, гранулоцитах, тромбоцитах. Опухолевые В-клетки характеризуются яркой гомогенной экспрессией CD200 при В-клеточ-ном хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ), волоса-токлеточном лейкозе (ВКЛ), значительно слабее её выраженность при лимфоме клеток мантийной зоны (ЛКМЗ) [4, 5]. Экспрессию CD200 считают неблагоприятным прогностическим признаком при множественной миеломе [6-8].
CD305, или LAIR-1 (от англ. Leukocyte-Associated Ig-Like Receptor-1), — трансмембранный гликопротеид, относится к суперсемейству иммуноглобулинов, экспрессируется на значительной части Т-, В-, NK-лимфоцитов, моноцитах, дендритных клетках, тимоцитах. Экспрессию LAIR-1 отмечают на ранних стадиях дифференцировки В-лимфоцитов, но она отсутствует на плазмобластах и плазмоцитах. Кроме того, LAIR-1 может функционировать как ингибирующий рецептор на Т- и NK-лим-фоцитах [9, 10].
В рекомендациях Европейского консорциума по проточной цитометрии (EuroFlow) маркёр LAIR-1 включён в дифференциально-диагностическую панель В-ЛПЗ для диагностики ВКЛ (Leukemia, 2012).
Цель исследования — оценить информативность традиционных и дополнительных имму-
нофенотипических маркёров (CD200, CD305) при дифференциальной диагностике В-ЛПЗ методом проточной цитометрии.
Иммунофенотипическое исследование проведено 204 пациентам с подозрением на В-ЛПЗ в научно-исследовательской лаборатории ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского». Также обследована группа из 20 пациентов с реактивным лимфоцитозом, у которых наличие В-ЛПЗ было исключено. Материалом для исследования служили периферическая кровь и костный мозг.
Исследования были одобрены на заседании независимого комитета по этике ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского» (протокол №10 от 15.10.2015) и проведены с получением добровольного и информированного согласия пациентов.
Возраст пациентов варьировал от 30 до 80 лет, средний возраст составил 56±15 лет.
Иммунофенотипическое исследование проводили методом лазерной проточной цитоме-трии, применяя четырёхцветный проточный цитофлюориметр FACSCalibur (Becton Dickinson, США) с использованием программного обеспечения CellQwest, моноклональных антител, конъюгированных с флюоресцентными красителями (производство BD Biosciences, США). Использовали следующую панель моноклональных антител: Анти-CD45-FITC, Per-CP или Per-CP-Cy5,5, APC; анти^3^1ТС, анти^19-АРС, Per-CP или Per-CP-Cy5,5; ан-ra-CD20-FITC, Per-CP или Per-CP-Cy5,5; ан-ra-CD5, анти-FMC^ анти^38, анти^103, анти-CD43, анти-sIg kappa, меченные FITC; ан-ra-CD(16+CD56), анти-CDm, анти^23, ан-ra-CD56, анти-CD22, анти-CD79b, анти-CD25, анти-CDUc, анти-sIg lambda, меченные PE. Дополнительно в панель были включены моно-клональные антитела анти-CD200 — PE (Clone MRC 0X-104 BD Pharmingen), анти^305^Е (Clone DX26 BD Pharmingen).
Иммунофенотипическое исследование проводили с применением стандартной методики пробоподготовки. Критерием позитивности считали наличие экспрессии антигена на поверхности или в цитоплазме более чем 20% опухолевых клеток. Оценку интенсивности экспрессии антигенов проводили по параметру средней интенсивности флюоресценции (MFI — от англ. Mean Fluorescence Intensity), выраженной в условных единицах (у.е.).
Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием стати-
стической программы Statistica 8.0 c расчётом средней величины и квадратичной ошибки средней (М±т). Для определения статистической значимости различий в средних значениях количественных показателей использовали t-критерий Стьюдента. Частоту антигенов в исследуемых когортах пациентов сравнивали по критерию Фишера.
Из 204 обследованных пациентов ХЛЛ был диагностирован у 104, у 18 человек — ВКЛ, у 41 пациента — ЛКМЗ, у 34 больных — лим-фома маргинальной зоны селезёнки (ЛМЗС), у 7 пациентов — лейкемизация фолликулярной лимфомы. Диагноз ЛКМЗ был подтверждён ци-тогенетическими исследованиями t(11;14) и/или выявлением экспрессии циклина D1 иммуноги-стохимическими методами.
Данные по оценке традиционных иммуно-фенотипических маркёров при В-ЛПЗ представлены в табл. 1.
Общий иммунофенотипический признак всех В-ЛПЗ — обнаружение рестрикции мембранных лёгких цепей иммуноглобулинов (kappa- либо lambda-тип), что служит подтверждением клональности В-лимфоцитов при опухолевой трансформации. Оценка интенсивности экспрессии CD20 по параметру MFI позволяет дифференцировать клетки В-ХЛЛ с низкой/слабой (dim) степенью экспрессии от остальных опухолевых клеток В-ЛПЗ, для которых характерна промежуточная (mod), либо высокая/яркая (bright) интенсивность экспрессии данной молекулы, что служит одним из основных традиционных дифференциально-диагностических критериев, позволяющих отличить ХЛЛ от зрелоклеточных лимфом и ВКЛ. Общепринятым традиционным иммунофено-типическим признаком лейкемизации неходж-кинских лимфом и ВКЛ считают позитивность FMC7, который обычно не экспрессирован при ХЛЛ, что также служит дифференциально-диагностическим критерием.
Иммунофенотип лимфоцитов при ХЛЛ характеризовался классическими признаками: позитивной экспрессией антигенов CD5, CD23, CD43, отсутствием экспрессии CD10, FMC7. Все пациенты с ХЛЛ демонстрировали слабую (dim) экспрессию молекулы CD20, часть пациентов (4,5%) имели нетипичную яркую (bright) экспрессию CD22, у 33,8% пациентов обнаружено отсутствие мембранной экспрессии CD79b. У 14,4% больных не было выявлено рестрикции по мембранным лёгким цепям иммуноглобулинов. Отсутствие молекулы CD79b на поверхности клеток В-ХЛЛ может служить признаком делеции (13)(q14.3) или нарушения формиро-
Таблица 1. Частота выявления позитивных дифференциально-диагностических антигенов при различных вариантах В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний (доля наблюдений, %)
Вариант Хронический лимфолейкоз/ лимфоцитарная лимфома Лимфома клеток мантийной зоны Фолликулярная лимфома Лимфома маргинальной зоны селезёнки Волосатокле-точный лейкоз
АГ N=104 N=41 N=7 N=34 N=18
CD19+ 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
CD20+ 100,0 dim* 80,0 bright; 20,0 dim 100,0 bright 85% bright; 15% dim 100,0 bright
CD22+ 95,5 dim; 4,5 bright* 85,0 bright; 15,0 dim 100,0 bright 85% bright; 15% dim 100,0 bright
CD79b+ 66,2 dim 88,6 bright 100,0 bright 92% bright; 7,5% dim 100,0 bright
CD10+ 0,0 5,7 100,0 0,0 5,5
CD5+ 98,6 100 0,0 0,0 22,2
CD23+ 92,3 11,4 28,6 27,3 11,1
FMC7+ 4,8 57,1 57,1 54,5 88,9
CD43+ 98,6 14,3 33,3 12,1 0,0
CD103+ 0,0 0,0 0,0 0,0 77,7
CD25+ 73,3 70,4 14,3 50,0 81,3
CD38+ 26,0 45,2 43,0 0,0 12,5
Рестрикция мембранных лёгких цепей иммуноглобулина (SIg k/L) 86,6 97,4 57,1 100,0 82,4
^Примечание: dim — низкая интенсивность флюоресценции; bright — высокая интенсивность флюоресценции.
вания В-клеточного рецепторного комплекса [11]. 26% пациентов демонстрировали позитивную экспрессию CD38 на клетках В-ХЛЛ, что расценивают как иммунофенотипический показатель неблагоприятного прогноза и резистентности к терапии [12]. У 73% пациентов с ХЛЛ обнаружена позитивная экспрессия рецептора к интерлейкину-2 (CD25) на опухолевых В-лимфоцитах в диапазоне от 20 до 89% позитивных клеток. По данным литературы, у таких больных отмечают более агрессивное течение заболевания, есть связь с хромосомными аномалиями, стимуляцией ТоП-Ике-рецеп-торов [13, 14]. По нашим данным, выраженная экспрессия CD25 на клетках В-ХЛЛ уже на этапе первичной иммунофенотипической диагностики служит маркёром высокой вероятности рефрактерности к проводимой терапии и низкого качества ремиссии заболевания, а также может быть показателем прогрессирования или развития рецидива заболевания [15].
Иммунофенотипический профиль опухолевых В-лимфоцитов при лейкемизации ЛКМЗ характеризовался позитивной экспрессией CD5,
отсутствием экспрессии CD23, CD43, CD10. У 20 и 15% пациентов с ЛКМЗ выявлена слабая (dim) экспрессия CD20 и CD22 соответственно, у 11,4% пациентов отсутствовала экспрессия CD79b. Позитивная экспрессия FMC7 выявлена только у 57,1% пациентов.
Особой проблемой при иммунофенотипиро-вании становится дифференциальная диагностика между CD5-позитивными ХЛЛ и ЛКМЗ при вариабельности антигенов CD23, реже CD43, а также при вариабельности интенсивности экспрессии CD20. Использование маркёра CD200 может помочь в разрешении этой проблемы. Оценка экспрессии CD200 у исследованных пациентов представлена в табл. 2 и 3.
Во всех случаях ХЛЛ и в большинстве случаев реактивного лимфоцитоза выявлена позитивная экспрессия CD200 на В-лимфоцитах. Позитивная экспрессия CD200 обнаружена у пациентов с ЛКМЗ в значительно (p=0,000) меньшем количестве наблюдений, чем при ХЛЛ, что согласуется с данными литературы, хотя доля позитивных по CD200 пациентов с ЛКМЗ несколько выше, чем у других исследо-
Таблица 2. Частота выявления позитивных по экспрессии СD200 В-клеток при В-клеточных лимфопролиферативных заболеваниях и реактивном лимфоцитозе (доля наблюдений, %)
Вид патологии Хронический лимфолейкоз/ лимфоцитарная лимфома N=104 Лимфома клеток мантийной зоны N=26 Фолликулярная лимфома N=7 Лимфома маргинальной зоны селезёнки N=29 Волосатокле-точный лейкоз N=15 Реактивный лимфоцитоз N=20
1 2 3 4 5 6
Показатель 104/104* 3/26 4/7 19/29 13/15 19/20
(100,0%) (11,5%) (66,7%) (65,5%) (85,7%) (98,3%)
Примечание: *статистически достоверные различия между хроническим лимфолейкозом и лимфомой клеток мантийной зоны: р12=0,000; р13=0,00016; р14=0,000; р15=0,01496; р16=0,16129.
Таблица 3. Средняя интенсивность флюоресценции (МП) СD200 на опухолевых клетках при различных вариантах В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний и реактивном лимфоцитозе (М±т)
Нозологические формы Хронический лимфолейкоз/ лимфоцитарная лимфома N=30 Лимфома клеток мантийной зоны N=3 Фолликулярная лимфома N=4 Лимфома маргинальной зоны селезёнки N=15 Волосатокле-точный лейкоз N=9 Реактивный лимфоцитоз N=15
1 2 3 4 5 6
MFI CD200, y.e. 370,5±14,6* 131,7±17,7 95,1±18,1 63,8±16,1 326,8±14,0 102,4±6,6
*Примечание: статистически достоверные различия между хроническим лимфолейкозом и лимфомой клеток мантийной зоны: р12=0,0000; р13=0,0000; р14=0,0000; р15= 0,016; р16=0,0000.
вателей [2, 3, 5]. Другие варианты В-ЛПЗ характеризовались большей выявляемостью СБ200 по сравнению с ЛКМЗ. Однако у 11,5% пациентов с ЛКМЗ были обнаружены СБ200-пози-тивные опухолевые В-клетки, в связи с чем мы оценили интенсивность экспрессии СБ200 на В-лимфоцитах по параметру МИ (см. табл. 3).
Наиболее высокий показатель МИ СБ200 обнаружен у больных ХЛЛ и ВКЛ, статистически значимо превышая значения МИ СБ200 у пациентов с ЛКМЗ, фолликулярной лимфомой и ЛМЗС, реактивным лимфоцитозом. Определение МИ СБ200 служит существенным критерием при дифференциальной диагностике СБ5-позитивных ХЛЛ и ЛКМЗ с наличием высокого содержания СБ200+ В-клеток. На рис. 1 представлены цитограм-мы больных ХЛЛ, ЛКМЗ и реактивным лим-фоцитозом, отражающие различные варианты и интенсивность экспрессии антигена СБ200 (пояснения под рисунком).
Особую группу лимфом из клеток мантии составляет так называемый бластоидный под-вариант заболевания, при котором опухолевые клетки имеют бластную морфологию. Имму-нофенотипически у таких пациентов (4 наблюдения) отмечена позитивная экспрессия СБ10, слабая экспрессия СБ45 и СБ19, выраженная позитивная экспрессия активационных антигенов СБ38 и СБ25, в некоторых случаях отсут-
Таблица 4. Показатели экспрессии LAIR-1 (СD305) на опухолевых клетках при лимфоме маргинальной зоны селезёнки и волосатоклеточном лейкозе
Тип В-клеточного лимфопролифератив-ного заболевания Лимфома маргинальной зоны селезёнки N=9 Волосато-клеточный лейкоз N=9
Содержание CD305-позитивных клеток, М±т (%) 44,02±11,98 65,9±8,5
Средняя интенсивность флюоресценции CD305, М±т (y.e.) 325,1±12,7* 1404,9±14,2
Примечание: *p=0,0000.
ствовала экспрессия CD79b, но присутствовала экспрессия CD79a. Экспрессии CD200 не было во всех случаях. На рис. 2 представлены варианты позитивной экспрессии антигена CD10, выявленного при фолликулярной лимфоме (А) и бластоидном варианте ЛКМЗ (Б).
Для фенотипа опухолевых клеток фолликулярной лимфомы была характерна яркая (bright) экспрессия всех пан В-клеточных маркёров в 100% наблюдений, позитивность CD10, вариабельность маркёров CD23, CD43 и CD38. В 43% случаев рестрикция лёгких цепей иммуноглобулинов выявлена только при внутрицитоплазматическом окрашивании. Позитивная экспрессия FMC7 обнаружена только
Ш
CL
О О CN
Q О
^ÊÈÈt
Щ А
■ В
'•Ж V.........а-'- ■ и. , ...
ft Б
щЦ
Г
« Ш
CD19 АРС
Рис. 1. Экспрессия CD200 на В-клетках при хроническом лимфолейкозе, реактивном лимфоцитозе и лимфо-ме клеток мантийной зоны (ЛКМЗ): А — хронический лимфолейкоз, экспрессия CD200 на 94% клеток В-хрони-ческого лимфолейкоза, интенсивность флюоресценции (MFI) 350 y.e.; Б — реактивный лимфоцитоз, экспрессия CD200 на 0,12% В-клеток, MFI=112,1 y.e.; В — ЛКМЗ, экспрессия CD200 на 1,22% В-лимфоцитов (негативная), MFI=57,9 y.e.; Г — ЛКМЗ, экспрессия CD200 на 82,9% В-лимфоцитов (позитивная), MFI=115,4 y.e.
Рис. 2. Экспрессия CD10 на В-лимфоидных элементах при фолликулярной лимфоме и бластоидном варианте лимфо-мы клеток мантийной зоны: А — фолликулярная лимфо-ма, экспрессия CD10 на 68,12% В-клеток, интенсивность флюоресценции 105,4 у.е.; Б — лимфома клеток мантийной зоны, бластоидный вариант, экспрессия CD10 на 55,5% В-клеток, интенсивность флюоресценции 88,1 у.е.
у половины обследованных пациентов (57,1%), а позитивная экспрессия CD23 — в 28,6% наблюдений. В последней классификации Всемирной организации здравоохранения (2016) выделен новый вариант преимущественно диффузной CD23-позитивной фолликулярной лимфомы с фенотипом CD10+bcl-2+bcl-6+, характеризующийся более агрессивным течением и del 1p36 [16].
Иммунофенотип В-лимфоцитов при ЛМЗС характеризовался преимущественно яркой (bright) экспрессией всех пан В-клеточных маркёров, отсутствием экспрессии CD5, CD10, CD43, CD103 и CD38, вариабельностью CD23, CD25 и FMC7. В частности, не характерная для данной группы пациентов позитивная экспрессия антигена CD23 обнаружена практически у трети (27,3%) больных, а позитивная экспрессия классического традиционного маркёра FMC7 выявлена только у половины (54,5%) пациентов.
Опухолевые клетки при классической форме ВКЛ демонстрировали яркую (bright) экспрессию всех пан В-клеточных маркёров, отсутствие CD5, наличие позитивной экспрессии антигенов FMC7, CD1k, CD103 и CD25. Из 18 пациентов с иммунофенотипически верифицированным диагнозом ВКЛ у 27,7% нами установлена вариантная форма с позитивной
А m
■ : , ^ ■ .. . e-^v-. i>: t ' îV-
Б I
....., ........
С019 РегСР-Су5.5
Рис. 3. Экспрессия CD305 ^АШ-1) на В-лимфоци-тах при волосатоклеточном лейкозе (ВКЛ) и лимфоме маргинальной зоны селезёнки (ЛМЗС): А — ВКЛ, гетерогенная экспрессия CD305 на 94,5% В-клеток, МР1=1404 у.е.; Б — ЛМЗС, экспрессия CD305 на 59,3% В-клеток, интенсивность флюоресценции 320,5 у.е.
экспрессией либо СБ5, либо СБ10, с отсутствием экспрессии либо СБ103, либо СБ25, либо СБ11с, либо СБ305. В некоторых случаях отсутствовала экспрессия СБ79Ь, но выявлялась экспрессия СБ79а. Только в 48% случаев иммунофенотипически верифицированного диагноза ВКЛ морфологически были выявлены типичные «волосатые клетки» или дана описательная характеристика лимфоидных элементов с цито-плазматическими выростами.
Определённые трудности возникают при диагностике ЛМЗС и ВКЛ, что связано с наличием отростчатых или виллёзных клеток и «волосатых» клеток соответственно при данных заболеваниях. Помимо традиционных антигенов СБ25, СБ11с, СБ103, нами была исследована экспрессия СБ305 (ЪА1Я-1) при ЛМЗС и ВКЛ, что представлено в табл. 4.
Не было обнаружено достоверных различий по содержанию СБ305-позитивных клеток
между данными группами пациентов, но средняя интенсивность флюоресценции CD305 при ВКЛ была достоверно выше, чем при лейке-мизации ЛМЗС (рис. 3). Этот факт может быть использован при иммунофенотипической дифференциальной диагностике этих вариантов В-ЛПЗ со сходной морфологической характеристикой лимфоидных элементов.
ВЫВОДЫ
1. Обнаружены некоторые особенности им-мунофенотипической характеристики опухолевых клеток у пациентов с В-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями.
2. От 7,5 до 20% пациентов с лейкемизацией лимфомы клеток мантийной зоны и лимфомы маргинальной зоны селезёнки могут демонстрировать нетипичную слабую (dim) интенсивность экспрессии CD20, CD22 и CD79b, что затрудняет дифференциальную диагностику с хроническим лимфолейкозом.
3. Позитивная экспрессия традиционного маркёра FMC7, характерная для лейкемизации зрелоклеточных лимфом и волосатоклеточно-го лейкоза, выявлена только у половины пациентов с лимфомой клеток мантийной зоны, фолликулярной лимфомой и лимфомой маргинальной зоны селезёнки.
4. Обнаружено относительно много наблюдений с нетипичной позитивной экспрессией CD23 у пациентов с фолликулярной лимфо-мой и лимфомой маргинальной зоны селезёнки (28,6 и 27,3% соответственно).
5. Позитивная экспрессия CD200 на опухолевых клетках выявлена у пациентов с лим-фомой клеток мантийной зоны в значительно (p <0,0001) меньшем количестве наблюдений, чем при хроническом лимфолейкозе и других вариантах В-клеточных лимфопролифератив-ных заболеваний.
6. Статистически значимое (p <0,001) снижение средней интенсивности флюоресценции CD200 при лимфоме клеток мантийной зоны по сравнению с хроническим лимфолейкозом даёт возможность использования данного критерия в дифференциальной диагностике этих вариантов В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний у больных с высоким содержанием СD200-позитивных опухолевых В-клеток.
7. Показатель средней интенсивности флюоресценции CD305 при волосатоклеточном лейкозе достоверно выше, чем при лейкемизации лимфомы маргинальной зоны селезёнки, что может быть использовано при дифференциальной диагностике этих вариантов В-клеточных
лимфопролиферативных заболеваний со сходной морфологической характеристикой лимфо-идных элементов.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов по представленной статье.
ЛИТЕРАТУРА
1. WHO Classification of Tumours of Haematopoe-tic and Lymphoid Tissues. Ed. S.H. Swerdlow, E. Campo, N.L. Harris et.al. Lyon. 2017; 585 р.
2. Луговская С.А., Кисиличина Д.Г., Почтарь М.Е. и др. Новые маркёры (CD160, CD200, LAIR-1) в диагностике В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Клин. онкогематол. Фудаментал. исслед. и клин. практика. 2013; 6 (1): 45-53. [Lugovskaya S.A., Kisilichi-na D.G., Pochtar M.E. et al. New markers (CD160, CD200, and LAIR-1) in diagnosis of B-cell lymphoproliferative disorders. Klinicheskaya onkogematologiya. Fundamental'nye issledovaniya i klinicheskaya praktika. 2013; 6 (1): 45-53. (In Russ.)]
3. Palumbo G.A., Parrinello N., Fargione G. et al. CD200 expression may help in differential diagnosis between mantle cell lymphoma and B-cell chronic lymphocytic leukemia. Leuk. Res. 2009; 33 (9): 1212-1216. DOI: 10.1016/j.leukres.2009.01.017.
4. Brunetti L., Di Noto R., Abate G. et al. CD200/0X2, a cell surface molecule with immuno-regulatory function, is consistently expressed on hairy cell leukaemia neoplas-tic cells. Br. J. Haematol. 2009; 145 (5): 665-667. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2009.07644.x.
5. Sander B. Mantle cell lymphoma: recent insights into pathogenesis, clinical variability, and new diagnostic markers. Semin. Diagn. Pathol. 2011; 28 (3): 245-255. DOI: 10.1053/j.semdp.2011.02.010.
6. Moreaux J., Hose D., Reme T., Jourdan E. CD200 is a new prognostic factor in multiple myeloma. Blood. 2006; 108 (13): 4194-4197. DOI: 101182/blood-2006-06-029355.
7. Olteanu H., Harrington A.M., Parameswaran H., Kroft S.H. CD200 expression in plasma cell myeloma. Br. J. Haematol. 2011; 153: 408-411. DOI: 10.1111/j.1365-2141.-2010.08555.x.
8. Desoukey N.A., Afify R.A., Amine D.G., Mohammed R.F. CD200 expression in B-cell chronic lymphopro-liferative disorders. J. Investig. Med. 2012; 60: 56-61. DOI: 10.2310/JIM.0b013e31823908f9.
9. Brondijk C., de Ruiter T., Ballering J. et al. Crystal structure and collagenbinding site of immune inhibitory receptor LAIR-1: unexpected implications for collagen binding by platelet receptor GPVI. Blood. 2010; 115 (7): 13641373. DOI: 10.1182/blood-2009-10-246322.
10. Meyaard L. The inhibitory collagen receptor LAIR-1 (CD305). J. Leuk. Biol. 2008; 83: 799-803. DOI: 10.1189/ Jeb.0907609.
11. Alfarano A., Indraccolo S., Circosta P. et al. An alternatively spliced form of CD79b gene may account for altered B-cell receptor expression in B-chronic lymphocytic leukemia. Blood 1999; 93 (7): 2327-2335. PMID: 10090943.
12. Krober A., Seiler T., Benner A. et al. V(H) mutation status, CD38 expression level, genomic aberrations, and survival in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 2002 (100): 1410-1416. PMID: 12149225.
13. Quijano S., López A., Rasillo A. et al. Impact of trisomy 12, del(13q), del(17p), and del(11q) on the immuno-phenotype, DNA ploidy status, and proliferativerate of
leukemic B-cells in chronic lymphocytic leukemia. Cytometry. Part B. Clin. Cytom. 2008; 74B (3): 139-149. DOI: 10.1002/cyto.b.20390.
14. Muzio M., Scielzo C., Bertilaccio M.T. et al. Expression and function of toll like receptors in chronic lymphocytic leukaemia cells. Br. J. Haematol. 2009; 144 (4): 507-516. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2008.07475.x.
15. Чуксина Ю.Ю., Яздовский В.В., Шевелёв С.В. и др. Прогностическая значимость иммунофенотипи-ческих маркёров при оценке минимальной остаточной болезни у больных хроническим лимфолейкозом после проведения иммунохимиотерапии. Рос. иммунол. ж.
2015; 9 (3-1): 236-238. [Chuksina Y.Y., Yazdovskiy V.V., Shevelev S.V. et al. Prognostic significance of immuno-phenotypic markers in the evaluation of minimal residual disease in patients with chronic lymphocytic leukemia after immunochemotherapy. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal. 2015; 9 (3-1): 236-238. (In Russ.)]
16. Katzenberger T., Kalla J., Leich E. et al. A distinctive subtype of t(14;18)-negative nodal follicular non-Hodgkin lymphoma characterized by a predominantly diffuse growth pattern and deletions in the chromosomal region 1p36. Blood. 2009; 113 (5): 1053-1061. DOI: 10.1182/ blood-2008-07-168682.
