CC BY
87
Клиническая онкогематология. 2017;10(2):169-75
Clinical oncohematology. 2017;10(2):169-75
ЛИМФОИДНЫЕ ОПУХОЛИ LYMPHOID TUMORS
Роль поверхностного маркера CD200 в дифференциальной диагностике злокачественных В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний
Ю.В. Миролюбова, Е.А. Стадник, Т. С. Никулина, В.В. Стругов, Т.О. Андреева, Ю.В. Вирц, Р.В. Грозов, А.Ю. Зарицкий
ФГБУ «Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341
РЕФЕРАТ
Актуальность и цели. Проточная цитофлюориметрия успешно используется в диагностике злокачественных лимфопролиферативных заболеваний. Однако иногда встречаются атипичные ситуации, сложные для интерпретации, что служит основанием для поиска новых маркеров, имеющих дифференциально-диагностическое значение. Цель — анализ экспрессии СD200 у больных со злокачественными В-клеточными лимфопролифера-тивными заболеваниями.
Материалы и методы. Обследовано 187 пациентов с хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), 14 — с лимфомой из клеток зоны мантии (ЛЗМ), 9 — с лимфомой из клеток маргинальной зоны (ЛМЗ), 5 — с волосатоклеточным лейкозом (ВКЛ). У 12 человек наличие опухоли не подтвердилось. Пациентам выполняли клинический анализ крови, иммуно-фенотипирование лимфоцитов периферической крови или костного мозга, цитогенетическое исследование. Части пациентов дополнительно проводилось иммуногистохимиче-ское исследование материала, полученного при трепано-биопсии костного мозга или биопсии лимфатических узлов. Результаты. У всех больные ХЛЛ и ВКЛ наблюдалась экспрессия CD200, средняя интенсивность флюоресценции была выше по сравнению с другими группами. В группе ЛЗМ преобладали пациенты с отсутствием экспрессии CD200. В то же время в 2 наблюдениях отмечалась промежуточная и отчетливая экспрессия CD200 c умеренной интенсивностью флюоресценции. В группе ЛМЗ экспрессия CD200 была гетерогенной. Заключение. Отсутствие экспрессии CD200 исключает диагноз типичного ВКЛ и ХЛЛ. В таких ситуациях требуются цитогенетическое и иммуногистохимическое исследования опухолевых клеток для полной верификации диагноза, прежде всего ЛЗМ или ЛМЗ.
Ключевые слова: CD200, проточная цитометрия, диагностика, хронический лимфолейкоз, лимфо-ма из клеток зоны мантии, лимфома из клеток маргинальной зоны, волосатоклеточный лейкоз.
Role of Superficial CD200 Marker in Differential Diagnosis of Malignant B-Cell Lymphoproliferative Diseases
YuV Mirolyubova, EA Stadnik, TS Nikulina, VVStrugov, TO Andreeva, YuV Virts, RV Grozov, AYu Zaritskey
Federal Almazov North-West Medical Research Centre under the Ministry of Health of the Russian Federation, 2 Akkuratova str., Saint Petersburg, Russian Federation, 197341
ABSTRACT
Background & Aims. Flow cytometry is successfully used for diagnosis of malignant lymphoproliferative disorders. However, there are atypical cases that are difficult to interpret; thus, new markers relevant for the differential diagnosis are to be searched for. The aim is to analyze CD200 expression in patients with B-cell lymphoproliferative disorders. Materials & Methods. 187 patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL), 14 patients with mantle cell lymphoma (MCL), 9 patients with marginal zone lymphoma (MZL), and 5 patients with hairy cell leukemia (HCL) were enrolled in the study. Neoplasm was not confirmed in 12 subjects. The patients underwent the following tests: CBC, immunophe-notyping of peripheral blood or bone marrow lymphocytes, and a cytogenetic test. In some cases, an additional im-munohistochemical test of bone marrow trepanobiopsy or lymph node biopsy samples was required. Results. In all cases of CLL and HCL, the CD200 expression was positive; mean fluorescence intensity was higher in these cases as compared to other groups. Negative expression of CD200 prevailed in MCL patients; however, at the same time 2 cases of intermediate and positive expression were reported, both showing moderate fluorescence intensity values. CD200 expression was heterogeneous in MZL patients.
Conclusion. The CD200 negative expression excludes typical HCL and CLL. Additional cytogenetic and immunnohistoсhemical tests should be performed in such cases to verify the diagnosis, first of all, MCL or MZL.
Keywords: CD200, flow cytometry, diagnosis, chronic lymphocytic leukemia, mantle cell lymphoma, marginal zone lymphoma, hairy cell leukemia.
© 2017 практическая медицина
169
Получено: 7 сентября 2016 г. Принято в печать: 3 января 2017 г.
Received: September 7, 2016 Accepted: January 3, 2017
Для переписки: Юлия Владимировна Миролюбова, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341; e-mail: [email protected] Для цитирования: Миролюбова Ю.В., Стадник Е.А., Никулина Т.С. и др. Роль поверхностного маркера CD200 в дифференциальной диагностике злокачественных В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. 2017;10(2):169-75.
DOI: 10.21320/2500-2139-2017-10-2-169-175
For correspondence: Yuliya Vladimirovna Mirolyubova, 2 Akkuratova str., Saint Petersburg, Russian Federation, 197341; e-mail: [email protected] For citation: Mirolyubova YuV, Stadnik EA, Nikulina TS, et al. Role of Superficial CD200 Marker in Differential Diagnosis of Malignant B-Cell Lymphoproliferative Diseases. Clinical oncohematology. 2017;10(2):169-75 (In Russ).
DOI: 10.21320/2500-2139-2017-10-2-169-175
ВВЕДЕНИЕ
Диагностика злокачественных хронических лимфопролиферативных заболеваний (ХЛПЗ) методом проточной цитометрии характеризуется быстротой и высокой степенью воспроизводимости, поскольку материалом для исследования служит либо периферическая кровь, либо аспират костного мозга, которые более доступны по сравнению с опухолевой тканью, получаемой при биопсии. Например, при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) трепанобиопсия подвздошной кости и/или биопсия лимфатического узла достаточно редко используются в рутинной клинической практике.
Разработанные алгоритмы диагностики позволяют успешно дифференцировать большинство иммуноморфологических вариантов В-клеточных ХЛПЗ. На первом этапе традиционно выделяются группы опухолей с фенотипами С019+С05+, СЭ19+10+ и С019+С05-С010-. Следующим шагом у больных с экспрессией С019+С05+ является анализ экспрессии на поверхностной мембране антигенов СЭ23, СЭ22, СЭ79Ь, СЭ20, позволяющий диагностировать типичный ХЛЛ и лимфому из клеток зоны мантии (ЛЗМ) [1-4]. Однако встречаются наблюдения с атипичной экспрессией, когда диагностика затруднена. Например, при ХЛЛ описаны случаи атипично низкой экспрессии СЭ5, СЭ23, СЭ43 и выраженной экспрессии СЭ20, СЭ22, СЭ79Ь. Кроме того, есть наблюдения с экспрессией СЭ23, снижением и отсутствием экспрессии СЭ5 при ЛЗМ. Следует отметить, что, нередко в группу с экспрессией С019+С05+ попадают другие лимфомы (не ХЛЛ и не ЛЗМ), в частности лимфомы из клеток маргинальной зоны (ЛМЗ), лимфоплазмоцитарная лимфома, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), при которых экспрессия СЭ5 нехарактерна [5]. В таких ситуациях диагноз может быть верифицирован по совокупности данных гистологического, иммуноги-стохимического и цитогенетического исследований.
Таким образом, хотя диагностика В-клеточных ХЛПЗ методом проточной цитометрии на основании изучения лимфоидных клеток крови и костного мозга имеет преимущества, в ряде случаев не представляется возможным избежать более инвазивных, трудоемких и требующих большего времени методов. Из этого следует, что диагностическая панель нуждается в усовершенствовании. Одним из маркеров, рекомендуемых для включения в диагностическую панель многими авторами, является СЭ200 [6-15].
Маркер имеет важное значение в дифференциальной диагностике ХЛЛ и ЛЗМ, особенно при сомнительной или атипичной экспрессии других молекул на поверхности опухолевых клеток.
CD200 (ОХ-2) представляет собой мембранный гликопротеид из суперсемейства иммуноглобулинов 1-го типа, кодируемый геном, расположенным в локусе 3q13.2. Антиген в норме экспрессируется на В-лимфоцитах, в т. ч. на В-клеточных предшественниках, определенной популяции Т-лимфоцитов, тимоцитах, эндотелиальных клетках и нейронах. CD200 связывается с CD200-рецептором-1, расположенным на моноцитах, гранулоцитах, субпопуляции Т-лимфоцитов, и вызывает иммуносупрессивный ответ, в частности в противоопухолевом иммунитете. В экспериментах на мышах продемонстрировано, что связывание СD200 со своим рецептором in vitro способствует дифференцировке Т-лимфоцитов в регуляторные клетки [16-18]. Показано также прогностическое значение экспрессии CD200 при ряде неоплазий гемопоэтической ткани [19, 20]. СD200 рассматривается как потенциальный объект таргетной терапии при ХЛЛ и других неоплазиях [18, 21, 22].
Во многих работах приводятся данные об экспрессии CD200 при различных вариантах В-клеточных неходжкинских лимфом. Отмечается высокая экспрессия CD200 при ХЛЛ и типичном ВКЛ [6-15]. Вместе с тем в случае вариантного ВКЛ экспрессия СD200 низкая [13]. Кроме того, в большинстве наблюдений демонстрируется гетерогенный характер экспрессии СD200 при ЛМЗ. Например, снижение экспрессии СD200 характерно для MALT-лимфом и ЛМЗ селезенки, в то же время при нодальном варианте ЛМЗ экспрессия СD200 значительно выше. При ЛЗМ в большинстве работ описаны крайне низкая экспрессия CD200 или ее полное отсутствие [6, 8-12, 15]. Это имеет чрезвычайно важное значение в дифференциальной диагностике CD19+CD5+ лимфом между ХЛЛ и ЛЗМ. Однако в статье P. Challagundla и соавт. [14] приводятся данные о 3 из 61 наблюдения ЛЗМ с высокой экспрессией СD200, сравнимой с экспрессией при ХЛЛ (всего были исследованы 61 случай ЛЗМ и 119 случаев ХЛЛ). Во всех 3 наблюдениях диагноз ЛЗМ был подтвержден высокой экспрессией циклина D1 по данным иммуногистохимического анализа. Кроме того, в 2 из 3 случаев была обнаружена транслокация t(11;14). Заслуживает внимания, что у всех 3 пациентов отмечалась также атипично высокая экспрессия СD23. Таким образом, было показано, что
низкая экспрессия СЭ200 исключает ХЛЛ. Однако высокая экспрессия СЭ200 не позволяет достоверно исключить ЛЗМ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
С 2013 по 2015 г. обследовано 233 пациента с подозрением на злокачественное ХЛПЗ.
Исследования проводились в центральной клинико-диагностической лаборатории ФГБУ «СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России.
Пациентам выполняли клинический анализ крови, иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови или костного мозга, цитогенетическое исследование, а также анализ миелограммы. Части пациентов дополнительно проводили гистологическое и иммуногистохимическое исследования материала, полученного при трепанобиопсии костного мозга или биопсии лимфатических узлов.
Иммунофенотипический анализ проводился на проточном цитометре BD FACS Calibur c использованием 4-цветной панели. Процедура подготовки проб по стандартному протоколу включала этап инкубации с антителами 1 млн клеток в течение 15 мин при комнатной температуре, лизис с помощью рабочего раствора BD FACS Lyse buffer c отмывкой раствором Cell Wash. При анализе экспрессии поверхностных легких цепей иммуноглобулинов образец предварительно дважды отмывался раствором Cell Wash. В качестве отрицательного контроля использовался уровень аутофлюоресценции клеток без внесения антител.
Для диагностики злокачественных В-лимфопро-лиферативных заболеваний использовался следующий стандартный набор антител: CD45FITC, CD23PE, CD19 PerCP-Cy5.5, CD5APC, CD43FITC, CD38PE, CD22FITC, CD79bPE, CD20FITC, CD200PE, CD3FITC, CD4PE, CD45 PerPC-Cy5.5, CD8APC, CD16FITC, CD56PE, Anti-Kappa FITC/ Anti-Lambda PE/CD19 PerCP-Cy5.5 (все антитела производства BD Biosciences). При необходимости в панель дополнительно включались антитела к CD10, CD103, CD25 и CD11c.
Использовалось стандартное программное обеспечение Cell Quest. На этапе исследования проводился анализ как минимум 50 000 событий. По графику бокового светорассеяния (SSC) vs CD45 выделяли популяцию лимфоцитов, затем из популяции лимфоцитов выделяли гейты CD19+ и CD19+CD5+. Анализ экспрессии CD200 проводился в гейте CD19+CD5+ или СD19+ (при отсутствии экспрессии СD5). Положительной считалась экспрессия более 50 %. Уровень экспрессии 20-50 % оценивался как +/-, экспрессия менее 20 % популяции считалась отрицательной. Как качественная характеристика экспрессии использовались термины «dim», «bright», «moderate» в сравнении с экспрессией на нормальных В-лимфоцитах. Для CD200 анализировалась средняя интенсивность флюоресценции по параметру среднее геометрическое (СГ).
Кариотипирование выполнялось по стандартной методике. Клетки костного мозга культивировали в течение 72 ч при температуре 37 °С с использованием стандартных реактивов (среда RPMI, эмбриональная телячья сыворотка, Pokewed mitogen). Анализ про-
водился на микроскопе Zeiss Imadger М1 с использованием программы Metasistems Ikaros. Оценивали не менее 20 метафаз. Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) проводилась на интерфазных ядрах с использованием ДНК-зондов компании Vysis CLL FISH Probe Kit по стандартному протоколу. Анализировали не менее 200 интерфазных ядер.
РЕЗУЛЬТАТЫ
У 187 пациентов был диагностирован ХЛЛ, у 14 — ЛЗМ, у 9 — ЛМЗ, у 2 — фолликулярная лимфома, у 5 — ВКЛ, у 6 — Т-клеточные лимфопролиферативные заболевания. Клональное заболевание системы крови было исключено у 12 обследованных лиц с подозрением на ХЛПЗ. Диагностика вариантов ХЛПЗ осуществлялась в соответствии с критериями классификации ВОЗ 2008 г.
У 9 пациентов диагностирована ЛМЗ. Варианты иммунофенотипа были следующие: СЭ5+/- (п = 2), СЭ43+ (п = 1). Экспрессия СЭ200 на опухолевых В-клетках в этой группе была наиболее гетерогенной (0,14-98,0 %), средний показатель — 52,5 % с колебаниями СГ от 3,5 до 132. Экспрессия СЭ200 отмечалась у 6 пациентов с ЛМЗ нодального типа. У 3 пациентов с ЛМЗ селезенки экспрессии СЭ200 не наблюдалось.
У всех 5 пациентов с ВКЛ имела место выраженная экспрессия СЭ200. Экспрессия в среднем составляла 97,2 % со средней интенсивностью флюоресценции (СГ 243,8).
Группу условно здоровых составили лица с абсолютным и относительным лимфоцитозом, у которых в процессе обследования не выявлено лимфопро-лиферативного заболевания. Экспрессия СЭ200 на В-лимфоцитах была положительной в 12 из 13 случаев, в 1 — расценена как +/- (диапазон 43-95 %, в среднем 70 %). Средняя интенсивность флюоресценции по сравнению с группой ХЛЛ была однородно невысокой (СГ 17-69, в среднем 34,62).
В группе ХЛЛ (п = 187) наблюдались следующие атипичные варианты фенотипа: СЭ5+/- (п = 4), СЭ43- (п = 6), СЭ43+/- (п = 3), СЭ23- (п = 3), СЭ23+/- (п = 4), СЭ20Ьг^ (п = 10), CD22bright (п = 6), С079Ыэг^ (п = 12). Экспрессия СЭ200 наблюдалась у всех больных ХЛЛ. Минимальное количество положительных событий составило 66 %, максимальное — 99,9 %, среднее — 97,34 %. При оценке интенсивности экспрессии по СГ показатели колебались от 31 до 689 со средней интенсивностью 187,5. Интенсивность экспрессии СD200 анализировалась в группах больных с различными цитогенетическими нарушениями (табл. 1).
Таблица 1. Интенсивность экспрессии CD200 у больных с различными цитогенетическими нарушениями (п = 187)
Цитогенетическая Среднее
подгруппа Медиана CD200, % геометрическое
de1(11q22.3) 98,50 206,92
del(13q) 98,33 202,33
del(17p13) 97,02 130,40
Трисомия12 95,19 123,23
Без аномалий 98,13 213,64
800
600
400 -
200 -
del(11q) del(17p)del(13q) +12
800
600
400
200
p = 0,007
del(17p)
Остальные
800
600
400
200
p = 0,019
+12
Остальные
Рис. 1. Интенсивность экспрессии CD200 в различных цитогенетических подгруппах при ХЛЛ (п = 187)
Fig. 1. CD200 expression intensity in different cytogenetic subgroups in CLL (n = 187)
0
0
0
Отмечаются статистически значимые различия средней интенсивности флюоресценции между цитогенетическими подгруппами (р = 0,023) (рис. 1, А). У пациентов с трисомией 12 и del(17p) уровень интенсивности флюоресценции статистически значимо ниже, чем в остальных подгруппах (р = 0,007 и р = 0,019 соответственно) (рис. 1, Б и В).
В группе пациентов с ЛЗМ (п = 14) наблюдались следующие атипичные варианты иммунофенотипа опухолевых В-лимфоцитов: СЭ23+ (п = 1), СЭ23+/-(п = 1), СЭ5+/- (п = 2), СЭ43+ (п = 1), СЭ22+/- (п = 1). Экспрессия СЭ200 отсутствовала у 12 (85,7 %) из 14 больных. В 1 наблюдении ЛЗМ экспрессия СЭ200 оценивалась как +/- (42,89 %; СГ 43,29), в другом — отмечалась экспрессия СЭ200 в 98 % событий со средней интенсивностью флюоресценции СГ 67. В отличие от данных литературы [20] в обоих случаях, как выраженной, так и промежуточной степени экспрессии СЭ200 на клетках опухоли, сочетания с высокой экспрессией СЭ23 не наблюдалось. С учетом всех случаев средние показатели экспрессии СЭ200 составили 24,21 % со средней интенсивностью флюоресценции СГ 10,95. В табл. 2 представлены данные по экспрессии СЭ200 и СЭ23 у пациентов с ЛЗМ.
Ниже приводятся наблюдения атипичного имму-нофенотипа и дифференциально-диагностического поиска при ЛЗМ.
Таблица 2. Экспрессия CD200 и CD23 у больных лимфомои из клеток зоны мантии (п = 14)
Пациент № СD200, % Среднее геометрическое CD23, %
1 98,00 67,00 9,00
2 0,05 2,00 0,60
3 0,10 4,25 0,10
4 0,10 1,56 1,88
5 0,19 2,07 0,23
6 0,35 2,15 3,67
7 3,56 2,99 6,43
8 0,70 2,12 7,80
9 0,10 2,00 9,86
10 19,50 7,48 3,42
11 1,66 1,77 59,10
12 42,89 43,29 2,09
13 3,80 3,07 37,79
14 0,28 2,62 0,23
Наблюдение 1
Больная, 51 год. ЛЗМ CD200-. Жалобы на слабость, потливость, увеличение лимфатических узлов. В клиническом анализе крови высокий лейкоцитоз (153,2 х 109/л) с абсолютным лимфоцитозом за счет преимущественно зрелых малых лимфоцитов. По результатам проточной цитометрии иммунофенотип популяции лимфоидных клеток: CD19+CD5+CD23+ CD22+CD20bright+CD200-. В данном наблюдении отсутствие экспрессии CD200 позволило предположить наличие ЛЗМ с коэкспрессией СD23. Диагноз был подтвержден данными цитогенетического исследования (FISH) — наличием транслокации t(11;14)(q13;q32), а также обнаружением экспрессии циклина D1 при иммуногистохимическом исследовании биоптата лимфатического узла.
Поскольку существуют только единичные описания ЛЗМ с положительной экспрессией CD200, мы приводим пример такого наблюдения.
Наблюдение 2
Больная, 59 лет. ЛЗМ CD200+. При диспансерном осмотре в 2014 г. отмечено увеличение шейных, надключичных, подключичных, подмышечных, забрюшинных лимфатических узлов, увеличение селезенки. Была выполнена биопсия лимфатического узла. Морфологически определялась диффузная инфильтрация малыми лимфоцитами. Первоначально был поставлен диагноз ХЛЛ, проведено несколько курсов противоопухолевой терапии. Затем, в связи с прогрессированием заболевания (увеличение лимфатических узлов, конституциональная симптоматика) пациентка госпитализирована в ФГБУ «СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова» МЗ РФ.
В клиническом анализе крови отмечалась умеренная тромбоцитопения, абсолютного лимфоцитоза не наблюдалось. В миелограмме лимфоциты составляли 61,65 %. Морфологически лимфоциты представляли собой зрелые клетки типа малых лимфоцитов. Проведено иммунофенотипирование клеток аспирата костного мозга. События CD19+ составляли 82,89 % всех лимфоцитов, СD19+CD5+ — 37,53 %, т. е. экспрессия CD5 была снижена. От популяции CD19+ экспрессия основных диагностических маркеров составила: CD20bright — 98,26 %, CD79b — 95,87 %, CD22 — 97,94 %, CD23 — 8,81 %, CD43 — 0,82 %, CD200 — 98,3 % (рис. 2).
Таким образом, несмотря на высокую экспрессию CD200, иммунофенотип не соответствовал ХЛЛ. Наи-
1000
800
600
400
200
.••¿.'".'i.-^'Äi:'
100%
75%
50%
25%
i ***p < 0,0001
Здоровые
102 CD200 PE
103
104
Рис. 2. Экспрессия антигена CD200 на опухолевых клетках (зеленый цвет, гейт R2) в наблюдении № 2
Рис. 3. Характеристика экспрессии СD200 при различных вариантах злокачественных лимфопролиферативных заболеваний ВКЛ — волосатоклеточный лейкоз; ЛЗМ — лимфома из клеток зоны мантии; ЛМЗ — лимфома из клеток маргинальной зоны; ХЛЛ — хронический лимфолейкоз.
Fig. 2. CD200 antigen expression in tumor cells (marked with green, Fig. 3. Characteristics of CD200 expression in different types of a gate R2) in °bservati°n N°. 2 malignant lymphoprolipherative diseases
ВКЛ — hairy cell leukemia; ЛЗМ — mantle cell lymphoma; ЛМЗ — marginal zone lymphoma; ХЛЛ — chronic lymphocytic leukemia.
*
0
0
10
10
Таблица 3. Характеристика экспрессии СР200 при злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях
Средние значения Средняя интенсивность _Группа пациентов_Число больных_экспрессии СР200, %_экспрессии 00200
Хронический лимфолейкоз 187 97,34 187,5
Волосатоклеточный лейкоз 5 97,2 243,8
Лимфома из клеток зоны мантии 14 24,21 10,95
Лимфома из клеток маргинальной зоны 9 59,53 34,77 Условно здоровые лица_12_70,0_34,62
более вероятным по данным фенотипирования представлялся вариант ЛМЗ. С целью дифференциальной диагностики было проведено повторное иммуноги-стохимическое исследование подмышечного лимфатического узла. Отмечался диффузный характер инфильтрации лимфоидными клетками, превышающими по размеру малый лимфоцит с выраженной экспрессией циклина D1. Цитогенетическое исследование (FISH) подтвердило наличие транслокации t(11;14)(q13;q32). Был установлен диагноз ЛЗМ. Проведенное лечение вызвало регрессию опухоли.
ОБСУЖДЕНИЕ
При анализе данных иммунофенотипирования клеток периферической крови и костного мозга у лиц с подозрением на злокачественное ХЛПЗ и, в частности, экспрессии СD200 на В-лимфоцитах были выявлены следующие закономерности (рис. 3, табл. 3).
В группе пациентов, у которых ХЛПЗ не диагностировано (п = 12), экспрессия CD200 на В-лимфоцитах определялась во всех наблюдениях. Интенсивность экспрессии CD200 была умеренной.
В группе ХЛЛ у всех 187 больных имела место экспрессия CD200 на опухолевых лимфоцитах, что согласуется с данными литературы. При этом наблю-
далась гетерогенная интенсивность флюоресценции этого маркера. По сравнению с группой здоровых лиц, а также пациентов с ЛМЗ, ЛЗМ средний уровень экспрессии CD200 и интенсивность флюоресценции были выше. Наблюдались различия средней интенсивности флюоресценции в разных цитогенетических подгруппах. У пациентов с трисомией 12 и del(17p) уровень интенсивности флюоресценции был статистически значимо ниже, чем в группах с делецией 11 и 13.
В группе пациентов с ЛЗМ экспрессия СD200 на опухолевых клетках была отрицательной в большинстве случаев (85,7 %). Однако были единичные наблюдения с промежуточной (+/-) и положительной экспрессией этого маркера. У 1 больного интенсивность флюоресценции была сопоставима с частью случаев ХЛЛ. CD200-позитивные случаи ЛЗМ не коррелировали с экспрессией антигена CD23 на В-клетках. Тем не менее средние результаты экспрессии и интенсивности флюоресценции CD200 в группе пациентов с ЛЗМ были наименьшими. Чувствительность отрицательной экспрессии CD200, по нашим данным, при ЛЗМ составила 0,857, а специфичность — 0,986.
У пациентов с ЛМЗ наблюдалась наиболее гетерогенная экспрессия СD200 с диапазоном от крайне отрицательной до высоко положительной. Отмечалась корреляция между вариантом ЛМЗ и
экспрессией СЭ200. Положительные случаи экспрессии СЭ200 были зарегистрированы у больных с нодальным типом лимфомы.
Все 5 пациентов с ВКЛ имели высокую степень экспрессии СЭ200 с высокой интенсивностью флюоресценции. В нашем исследовании отсутствуют пациенты с вариантной формой ВКЛ, при которой, по данным литературы, имеет место сниженная экспрессия СЭ200.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В заключение следует отметить, что отсутствие экспрессии СЭ200 на опухолевых В-лимфоцитах исключает диагноз ХЛЛ и типичного ВКЛ, что согласуется со всеми изученными нами данными литературы [14-21]. Следовательно, при отсутствии или сниженной экспрессии СЭ200 следует направить диагностический поиск в сторону ЛМЗ и ЛЗМ. Напротив, высокая экспрессия СЭ200 в трудных для интерпретации случаях может учитываться в пользу ХЛЛ. Однако сама по себе экспрессия СЭ200 не свидетельствует о наличии злокачественного лим-фопролиферативного заболевания, т. к. маркер обнаруживается и на нормальных В-клетках. В группе ЛЗМ был зафиксирован случай положительной экспрессии СЭ200. Это снижает дифференциальную диагностическую ценность маркера между ХЛЛ и ЛЗМ. Поскольку и по литературным данным такие случаи единичны, видимо, требуется дальнейшее накопление и анализ наблюдений. У пациентов с ЛМЗ диагностическая ценность определения экспрессии СЭ200 состоит в сопоставлении с другими данными иммунофенотипа, например, при дифференциальной диагностике ЛМЗ с ВКЛ или ХЛЛ.
Таким образом, по нашему мнению, СЭ200 является ценным диагностическим маркером, который должен включаться в стандартную панель иммуно-фенотипирования при злокачественных В-клеточных лимфопролиферативных заболеваниях и анализироваться в комплексе с другими данными лабораторного и гистологического (иммуногистохимического) исследований.
КОНФЛИКТЫ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
ИСТОЧНИКИ ФИНАНСИРОВАНИЯ
Исследование выполнено при финансовой поддержке компании «Астеллас Фарма Юроп Б.В».
ВКЛАД АВТОРОВ
Концепция и дизайн: Ю.В. Миролюбова, Е.А. Стадник. Сбор и обработка данных: Ю.В. Миролюбова, В.В. Стругов, Е.А. Стадник, Ю.В. Вирц, Т.О. Андреева.
Предоставление материалов исследования: Ю.В. Миролюбова, Т.С. Никулина, Р.В. Грозов. Анализ и интерпретация данных: Ю.В. Миролюбова, Е.А. Стадник, В. В. Стругов.
Подготовка рукописи: Ю.В. Миролюбова, Е.А. Стадник, В.В. Стругов.
Окончательное одобрение рукописи: А.Ю. За-рицкий.
БЛАГОДАРНОСТИ
Авторы выражают благодарность врачам Р.И. Ваби-щевич, Н.С. Лазорко, Е.А. Несивкиной, Н.В. Степановой за оказанную помощь в сборе материалов для статьи.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Купрышина Н.А., Тупицын Н.Н. Проточная цитометрия в онкогема-тологии. Часть II. Основы и нововведения в диагностике хронического лимфолейкоза. Клиническая онкогематология. 2012;5(4):349-54.
[Kupryshina NA, Tupitsyn NN. Flow cytometry in hematology malignancies. Part II: ABC and news in diagnostics of chronic lymphocytic leukaemia. Klinicheskaya onkogematologiya. 2012;5(4):349-54. (In Russ)]
2. Стадник Е.А., Стругов В.В., Вирц Ю.В., Зарицкий А.Ю. Хронический лимфолейкоз. Рекомендации по диагностике и лечению. Трансляционная медицина. 2012;17:104-15.
[Stadnik EA, Strugov VV, Virts YuV, Zaritskey AYu. Chronic lymphocytic leukemia. Guidelines for diagnosis and treatment. Translyatsionnaya meditsina. 2012;17:104-15. (In Russ)]
3. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al, eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. 4th edition. Lyon: IARC Press; 2008.
4. Kohnke T, Wittmann VK, Sauter D, et al. Proposal For a Novel Scoring System For The Diagnosis оf CLL. Blood. 2013;122(21):47-5599 (Plenary Abstracts).
5. Morice WG, Kurtin PJ, Hodnefield JM, et al. Predictive Value of Blood and Bone Marrow Flow Cytometry in B-Cell Lymphoma Classification: Comparative Analysis of Flow Cytometry and Tissue Biopsy in 252 Patients. Mayo Clin Proc. 2008;83(7):776-85. doi: 10.4065/83.7.776.
6. Луговская С.А., Кисиличина Д.Г., Почтарь М.Е. и др. Новые маркеры (CD160, CD200, LAIR-1) в диагностике В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. 2013;6(1):45-52.
[Lugovskaya SA, Kisilichina DG, Pochtar' ME, et al. New markers (CD160, CD200, and LAIR-1) in diagnosis of B-cell lymphoproliferative disorders. Kliniches-kaya onkogematologiya. 2013;6(1):45-52. (In Russ)]
7. Brunetti L, Di Noto R, Abate G, et al. CD200/0X2, a cell surface molecule with immuno-regulatory function is consistently expressed on hairy cell leukaemia neoplastic cells. Br J Haematol. 2009;145(5):665-78. doi: 10.1111/j.1365-2141.2009.07644.x.
8. Palumbo GA, Parrinello N, Fargione G, et al. CD200 expression may help in differential diagnosis between mantle cell lymphoma and B-cell chronic lymphocytic leukemia. Leuk Res. 2009;33(9):1212-6. doi: 10.1016/j. leukres.2009.01.017.
9. Dorfman DM, Shahsafaei A. CD200 (OX-2 Membrane Glycoprotein) Expression in B Cell-Derived Neoplasms. Am J Clin Pathol. 2010;134(5):726-33. doi: 10.1309/ajcp38xrrugsqovc.
10. Sander B. Mantle cell lymphoma: recent insights into pathogenesis, clinical variability, and new diagnostic markers. Semin Diagn Pathol. 2011;28(3):245-55. doi: 10.1053/j.semdp.2011.02.010.
11. Alapat D, Coviello-Malle J, Owens R, et al. Diagnostic Usefulness and Prognostic Impact of CD200 Expression in Lymphoid Malignancies and Plasma Cell Myeloma. Am J Clin Pathol. 2012;137(1):93-100. doi: 10.1309/ajcp59uorcyzevqo.
12. El Desoukey NA, Afify RA, Amin DG, et al. CD200 expression in B-cell chronic lymphoproliferative disorders. J Investig Med. 2012;60(1):56-61. doi: 10.2310/jim.0b013e31823908f9.
13. Pillai V, Pozdnyakova O, Charest K, et al. CD200 flow cytometric assessment and semiquantitative immunohistochemical staining distinguishes hairy cell leukemia from hairy cell leukemia-variant and other B-cell lympho-proliferative disorders. Am J Clin Pathol. 2013;140(4):536-43. doi: 10.1309/ ajcpebk31vqqnddr.
14. Challagundla P, Medeiros LJ, Kanagal-Shamanna R, et al. Differential Expression of CD200 in B-Cell Neoplasms by Flow Cytometry Can Assist in Diagnosis, Subclassification, and Bone Marrow Staging. Am J Clin Pathol. 2014;142(6):837-44. doi: 10.1309/ajcpbv9elxc0ecvl.
15. Sandes AF, de Lourdes Chauffaille M, Regina C, et al. CD200 Has an Important Role in the Differential Diagnosis of Mature B-Cell Neoplasms by Multiparameter Flow. Cytometry. 2013;86(2):98-105. doi: 10.1002/cyto.b.21128.
16. McCaughan GW, Clark MJ, Barclay AN. Characterization of the human homolog of the rat MRC OX-2 membrane glycoprotein. Immunogenetics. 1987;25(5):329-35. doi: 10.1007/bf00404426.
17. Wright GJ, Jones M, Puklavec MJ, et al. The unusual distribution of the neuronal/lymphoid cell surface CD200 (OX2) glycoprotein is conserved in humans. Immunology. 2001;102(2):173-9. doi: 10.1046/j.1365-2567.2001.01163.x.
18. Kretz-Rommel A, Qin F, Dakappagari N, et al. CD200 expression on tumor cells suppresses antitumor immunity: new approaches to cancer immunotherapy. J Immunol. 2007;178(9):5595-605. doi: 10.4049/jim-munol.178.9.5595.
19. Moreaux J, Hose D, Reme T, et al. CD200 is a new prognostic factor in multiple myeloma. Blood. 2006;108(13):4194-7. doi: 10.1182/blood-2006-06-029355.
20. Tonks A, Hills R, White P, et al. CD200 as a prognostic factor in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2007;21(3):566-8. doi: 10.1038/sj.leu.2404559.
21. Moreaux J, Veyrune JL, Reme T, et al. CD200: a putative therapeutic target in cancer. Biochem Biophys Res Commun. 2008;366(1):117-22. doi: 10.1016/j. bbrc.2007.11.103.
22. Kretz-Rommel A, Bowdish KS. Rationale for anti-CD200 immunotherapy in B-CLL and other hematologic malignancies: new concepts in blocking immune suppression. Expert Opin Biol Ther. 2008;8(1):5-15. doi: 10.1517/14712598.8.1.5.
