CC BY
41
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
чалось между исследуемыми группами. В группе больных представлены носители аллелей с 4-кратным, 2-кратным, 5-кратным повторами, но не встречались носители редкого аллеля с 3-кратным повтором, тогда как частота этого аллеля в контроле составила 0,5 %.
На втором этапе был проведен анализ распределения гаплотипов +3953 ГЬ-1р — Ш-1га и параметров сцепления. В группе больных НЯК было выявлено 6 гаплотипов, в группе сравнения — 8. Согласно параметрам сцепления аллель с заменой +3953*Т Ш-1р сцеплен с аллелем 4г Ш-1га (в группе НЯК D = 0,046; х2 = 17,6; р < < 0,01; в группе сравнения D = 0,039; х2 = 16,7; р < < 0,01), а предковый аллель +3953*С Ш-1р — с мутантным аллелем 2г Ш-1га (в группе НЯК D = 0,043; х2 = 15,4; р < < 0,01; в группе сравнения D = 0,039; х2 = 17,5; р < < 0,01). В обоих группах наиболее часто встречающимися были гаплотипы +3953*С — 2г (в группе НЯК Н = 0,25; в группе сравнения Н = 0,21), +3953*С — 4г (в группе НЯК Н = 0,52; в группе сравнения Н = 0,53), +3953*Т -4г (в группе НЯК Н = 0,19; в группе сравнения Н = 0,18). Отмечено незначительное снижение частоты встречаемости гаплотипа +3953*Т — 2г в группе больных НЯК, не имеющее прогностической значимости для восприимчивости к НЯК (Н = 0,022 ^ Н = 0,06; р = 0,14). В группе больных НЯК не было отмечено носителей редкого га-плотипа +3953*С — 3г.
Заключение. Проведенное исследование позволяет считать, что формирование предрасположенности/ устойчивости к неспецифическому язвенному колиту у русских Челябинской области, вероятно, не связано с исследуемыми генами.
ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА, ВЫЗВАННОГО Fc-ФРАГМЕНТАМИ ДО, НЕСУЩИМИ АНТИГЕННЫЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ ДЛЯ РЕГУЛЯТОРНОГО РЕВМАТОИДНОГО ФАКТОРА
Столярова Е.Ю., Сидоров А.Ю., Падерина Л.А., Чалый И.А.
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет», Ижевск, Россия
Введение. В недавно проведенных нами исследованиях, нацеленных на выяснение механизмов регуляции ауто-реактивных лимфоцитов был выявлен новый, ранее не известный, фактор негативной регуляции аутореактивности, препятствующий развитию экспериментально вызванных аутоиммунных заболеваний. Было показано, что данный фактор представляет собой антиидиотипические антитела к лимфоцитам против антигенов-индукторов экспериментально вызванных аутоиммунных заболеваний и в тоже время обладает специфичностью к неоантигенным детерминантам на Fc-фрагментах гомологичного IgG. Способность взаимодействовать с Fc-фрагментами IgG позволила отнести антиидиотипические антитела с регуляторными свойствами к ревматоидному фактору, который получил название регуляторный ревматоидный фактор (регРФ) (Beduleva, 2017). Было показано, что иммунизация Fc-фрагментами гомологичного IgG, стимулирующая продукцию регРФ, редуцирует симптомы артрита, подавляет продукцию аутоантител к коллагену в модели коллаген-индуцированного артрита крыс (Beduleva, 2017; МешЫко^ 2015), что, в свою очередь, позволяет рассматривать Fc-
фрагменты IgG, несущие антигенные детерминанты для регРФ, как основу принципиально новой перспективной вакцины для лечения артрита. Для разработки схемы иммунизации вакциной важно знать механизм активации лимфоцитов, продуцирующих регРФ, Fc-фрагментами IgG. Исследование кинетики продукции регРФ является подходом, позволяющим частично раскрыть механизм активации В-лимфоцитов, продуцирующих регРФ, предположить роль Т-хелперов в активации регРФ-продуцирующих лимфоцитов, вызываемой Fc-фрагментами IgG.
Цель и задачи. Провести сравнительный анализ кинетики регРФ в ответ на введение Fc-фрагментов IgG, несущих неоантигенные детерминанты для регРФ, и антител к аутологичным и гетерологичным Т-зависимым антигенам.
Материалы и методы. Кинетику продукции регРФ у крыс, вызванную Fc-фрагментами IgG крыс, сравнивали с кинетикой продукции антител к гетерологичным антигенам и аутоантигенам. Крыс "%1аг иммунизировали Fc-фрагментами IgG, несущими антигенные детерминанты для регРФ, в дозе 300 мкг, бычьим коллагеном II типа в дозе 400 мкг, основным белком миелина морской свинки в дозе 25 мкг, человеческим сывороточным альбумином в дозе 200 мкг, IgG человека в дозе 150 мкг. Все белки вводили внутрикожно, в составе эмульсии содержащей неполный адъювант Фрейнда (НАФ), кроме ОБМ, который вводили в составе полного адъюванта Фрейнда. Мышей иммунизировали аутоэритроцитами (4,5 х 108 клеток/мышь) внутрибрюшинно. РегРФ определяли методом агглютинации танизированных нагруженных гомологичным IgG эритроцитов. Антитела к белкам определяли методом иммуноферментного анализа. Аутонтитела к эритроцитам мыши определяли в реакции Кумбса.
Результаты. Обнаружено, что при иммунизации крыс Fc-фрагментами IgG крыс, несущими антигенные детерминанты для регРФ, титр регРФ достигает максимума на 7 день после иммунизации, на 14 день снижается до исходного уровня. Титр антител к гетерологичным белковым антигенам (бычий коллаген II типа, основный белок миелина морской свинки, человеческий сывороточный альбумин, IgG человека) достигает максимума на 21-35 дни. Все исследованные антигены являются Т-зависимыми антигенами, что объясняет достижение максимума продукции антител против антигенов к 21-35 дню после иммунизации. Поскольку Fc-фрагменты IgG, несущие неоантигенные детерминанты для регРФ, могут рассматриваться как аутоантиген, была исследована также скорость нарастания аутоантител в крови мышей в ответ на введение аутоэри-троцитов. Титр аутоантител мыши к аутоэритроцитам достигал максимума на 15 день. В отличие от всех исследованных антигенов Fc-фрагменты, несущие антигенные детерминанты для регРФ, индуцируют быстрый и короткий иммунный ответ, что позволяет предполагать, что Fc-фрагменты, несущие антигенные детерминанты для регРФ, являются Т-независимым антигеном и активируют регуляторные, продуцирующие ревматоидный фактор В-лимфоциты без участия Т-хелперов.
Заключение. Продукция регРФ в ответ на введение Fc-фрагментов IgG, несущих антигенные детерминанты для регРФ, носит транзиторный характер с максимумом продукции на 7 день после иммунизации, что позволяет
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
предполагать Т-независимый характер активации регРФ-продуцирующих лимфоцитов Fc-фрагментами IgG.
Работа поддержана грантом РФФИ 16-34-60164 мол_а_дк.
ЭФФЕКТЫ ДЕКСАМЕТАЗОНА НА АКТИВАЦИЮ И РЕПЛИКАТИВНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ CD4+Т-КЛЕТОК ПАМЯТИ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ В СИСТЕМЕ IN VITRO
Тодосенко Н.М., Юрова К.А., Хазиахматова О.Г., Малинина И.П., Литвинова Л.С.
Балтийский федеральный университет им. И. Канта, Калининград, Россия
Введение. Ревматоидный артрит (РА) — аутоиммунное заболевание (АИЗ), патогенез которого опосредован аутореактивными синовиально-подобными CD4+CD45RO+Т-клетками (VanderBorght A. et al., 2001; Spreafico et al., 2016). До настоящего времени патогенетической терапии РА не разработано; основным методом лечения РА является противовоспалительная терапия синтетическими глюкокортикоидами (ГК), использование которых сопровождается развитием побочных эффектов, в т.ч. со стороны иммунной системы.
Цель. Оценка влияния дексаметазона (Dex) на функциональную активность CD4+CD45RO+Т-клеток больных РА в условиях in vitro.
Материалы и методы. Материалом исследования служили мононуклеарные лейкоциты (МНК), выделенные из венозной гепаринизированной крови, полученной от 20 условно здоровых доноров (10 женщин и 10 мужчин, средний возраст 35,3±8,9 лет) и 50 больных РА (38 женщин и 12 мужчин, средний возраст 36,4±7,2 лет). МНК получали центрифугированием в градиенте плотности фиколл-урографин (1,077 г/см3) (Pharmacia, Швеция). Выделенные методом сепарации (MiltenyiBiotec, Germany) CD3+CD4+CD45RO+CD14CD19- лимфоциты (далее, CD4+CD45RO+ клетки) (1,0 х 106 кл/мл) инкубировали в бессывороточной среде Искова без/в присутствии Т-клеточного активатора (T-Cell Activation/ ExpansionKithuman, Ac/Exp) (MiltenyiBiotec, Germany) и разных концентраций Dex (Orion Pharma, Россия) при 37 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% CO2 в течение 48 ч. Варианты культивирования: 1) интактная проба (без добавления Ac/Exp и синтетических ГК); 2) проба с добавлением Ac/Exp; 3) пробы с добавлением Ac/Exp и разных концентраций Dex (2; 8; 16; 32; 64 мг). Оценку числа клеток, несущих поверхностные маркеры (CD28, CD25, CD71) проводили методом проточной цитофлюориметрии с помощью моноклональных антител, меченных флуоресцентными метками: ViaBlue, FITC, PE, PECy7 и PerCy5 (eBioscience, США) на приборе «MACSQuantAnalyzer» (MiltenyiBiotec, Германия). Исследование уровня экспрессии гена hTERT проводили методом ПЦР. Последовательности олигонуклеотидных праймеров и протоколы амплификации описаны ранее (Шуплецова В.В., 2015). Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью программы IBM SPSS Statistics 20.
Результаты. В интактных культурах лимфоцитов здоровых доноров число клеток, несущих поверхностные молекулы CD28, CD25 и CD71 достоверно превышало аналогичные показатели в интактных культурах больных РА. Действие Ac/Exp на исследуемые CD4+CD45RO+ культуры сопровождалось увеличением числа CD4+Т-клеток, экс-
прессирующих молекулы CD28, CD25, CD71 (по сравнению с интакгаыми пробами), при этом уровень транскрипции мРНК гена hTERT в Т-клетках, косвенно характеризующий репликативный потенциал, оказался сниженным как в культурах здоровых доноров, так и у больных РА. Со-четанное действие Ac/Exp и Dex на исследуемую культуру лимфоцитов здоровых доноров приводило к дозозависимо-му снижению числа лимфоцитов, экспрессирующих маркеры активации CD25 (г2 = 0,675, p < 0,001) и пролиферации CD71 (г2 = 0, 621, p < 0,001); экспрессия корецептора CD28 и транскрипция мРНК гена hTERT снижались только при действии высоких концентраций ГК (p < 0,05).
Действие комбинации Ac/Exp + Dex на Т-клетки больных РА сопровождалось дозозависимым уменьшением числа CD4+CD28+Т-клеток (г2 = 0,700, p < 0,001) и уровня транскрипции мРНК гена hTERT (г2 = 0,894, p < 0,05); снижение содержания CD4+CD25+/CD71+T-клеток имело равномерный супрессивный характер и не зависело от действующей концентрации Dex.
Заключение. Таким образом, влияние Dex (в системе in vitro) на процессы активации и пролиферации TCR-стимулированных CD4+CD45RO+Т-клеток, полученных у здоровых доноров и больных РА, ассоциированные с экспрессией молекул — CD25, CD28 и CD71, имеет однонаправленный характер, но разную степень выраженности. Выявленное нами уменьшение числа CD4+CD45RO+Т-клеток, несущих мембранные молекулы коактивации (CD25 и CD28) и пролиферации (CD71) с одновременным подавлением экспрессии гена hTERT в CD45RO+Т-лимфоцитах свидетельствует об угнетении репликативного потенциала этих клеток и их терминальной дифференцировке и созревании в эффекторные лимфоциты под действием синтетических ГК.
Работа выполнена в рамках программы повышения конкурентоспособности («дорожной карты») и субсидии «Организация проведения научных исследований 20.4986.2017/ВУ» Балтийского федерального университета им. Иммануила Канта.
ВЗАИМОСВЯЗЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ И КЛИНИЧЕСКИХ СИМПТОМОВ ОСТЕОАРТРИТА В СОЧЕТАНИИ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
Трифонова Е.П., Сазонова О.В., Зонова Е.В.
ФГБОУВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
Введение. Воспалительные процессы, происходящие при остеоартрите (ОА), связаны с изменениями профиля цитокинов в сыворотке крови, которые могут быть ассоциированы с параметрами тяжести течения данного заболевания. Известно, что сахарный диабет 2 типа (СД2) может способствовать поддержанию хронического воспаления и приводить к ускоренной прогрессии коморбидной патологии, в том числе ОА в сочетании с СД2.
Цель и задачи. Изучение уровня провоспалительных цитокинов и маркеров деградации внутриклеточного матрикса (ВКМ) хрящевой ткани в сыворотке крови, с последующей оценкой взаимосвязи с клиническими особенностями у пациентов с ОА коленных суставов в сочетании с СД2.
Материалы и методы. В исследовании приняло участие 98 человек с ОА коленных суставов, удовлетворяющим кри-
