CC BY
25
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
лф, а также исходное содержания ThH-лф являются наиболее информативными показателями для прогнозирования эффекта БТ Численность !Ы7-лф превышающая 18,6% от CD3+CD4+ и снижение активности СДГ в популяции Treg ниже, чем на 15% относительно референсных значений позволяют прогнозировать нестойкий терапевтический ответ на БТ. Длительное течение заболевания (более 5 лет) до начала БТ сопровождается выраженным уменьшением активности СДГ в популяциях Т-хелперов, что снижает эффективность БТ.
Выводы. Иммуноцитохимическое исследование и им-мунофенотипирование лимфоцитов периферической крови у пациентов с ВЗК имеют прогностическую значимость и позволяют с высокой вероятностью прогнозировать эффект лечения блокаторами TNFa. Полученные результаты обосновывают раннее назначение БТ для получения стойкого терапевтического эффекта. Детям с ВЗК показано динамическое определение метаболической активности лимфоцитов и своевременная коррекция выявленных изменений, в том числе препаратами, улучшающими энергетический обмен клетки.
ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ НА СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ПРИ КОМОРБИДНОСТИ САХАРНОГО ДИАБЕТА ТИПА II (СД2) И ХОБЛ В ПЕРИОД ПЕРИМЕНОПАУЗЫ
Попкова А.С.
Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва, Россия
Введение. Основой прогрессирования СД2 при ко-морбидности с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) является хроническое воспаление — комплексный иммунопатологический процесс, включающий реакции врожденного и адаптивного иммунитета. Значимая роль в этих процессах принадлежит провоспалитель-ным цитокинам. Изменение их баланса приводит к нарушениям не только в зоне воспаления, но и на системном уровне. У этих больных наблюдается подавление фагоцитарной активности нейтрофилов, дисбаланс различных субпопуляций Т-лимфоцитов, снижение содержания В-лимфоцитов. В развитии коморбидности СД2 с ХОБЛ нельзя исключить также влияние половых гормонов, особенно в старшем возрасте. Изменения их физиологических концентраций вызывают раннюю инволюцию тимуса и селезенки и, как следствие, нарушения клеточного и гуморального иммунитета. Однако данные о состоянии гуморального звена врожденного и адаптивного иммунитета при коморбидности СД2 с ХОБЛ, протекающих на фоне гормональных расстройств в период перименопау-зы, практически отсутствуют.
Цель. Исследовать влияние гормонального дисбаланса у пациенток с СД2, протекающего на фоне ХОБЛ и климактерического синдрома, на содержание провос-палительных цитокинов и иммуноглобулинов в биологических жидкостях.
Материалы и методы. Было обследовано 100 женщин с СД2 на фоне стабильно протекающей ХОБЛ 2 степени тяжести по GOLD (2011) (среднетяжелой) и климактери-
ческого синдрома либо без такового (группа сравнения) в возрасте 43-55 лет. Содержание цитокинов проводили в бронхо-альвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) и сыворотке крови больных методом проточной цитоф-луорометрии (Beckman Coulter FC500, США) с использованием наборов реактивов для мультикомплексного определения цитокинов (BMS810FF) человека в соответствии с инструкциями производителя. Анализ полученных данных проводили лицензированной программой разработчика FlowCytomix Prover. 3.0. Содержание IgM, IgG, IgA определяли в сыворотке крови больных с помощью иммуноферментного анализа (R&D Systems, США). Статистическую обработку проводили с помощью критерия (t) Стьюдента.
Результаты. Сравнительный анализ содержания цитокинов в БАЛЖ и сыворотке крови больных СД2, отягощенного ХОБЛ и климактерическим синдромом, выявил достоверное увеличение концентраций IL-1ß, IL-6, IL-8, TNFa и IFNy, по сравнению с группой сравнения, что свидетельствует о наличии как местного, так и системного воспаления. Оценка содержания IgM, IgG и IgA в сыворотке крови этих больных показала, что их уровень достоверно ниже нормы практически здоровых женщин. Из полученных данных следует, что коморбидность СД2 с ХОБЛ, протекающих в период перименопаузы, приводит к истощению иммунной системы и развитию иммунодефицита B-клеточного звена иммунитета.
Заключение. Таким образом, установлено неблагоприятное влияние гормональных нарушений у женщин в период перименопаузы на течение СД2 при его коморбидности с ХОБЛ. Повышение концентрации провос-палительных цитокинов с одной стороны и снижение содержания иммуноглобулинов с другой стороны способствуют поддержанию местного и системного хронического воспалительного процесса.
РЕГУЛЯТОРНЫЕ Т-ЛИМФОЦИТЫ И СУБПОПУЛЯЦИИ Т-КЛЕТОК ПАМЯТИ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ
Семакова П.Н.1, Олейник Е.К.1, Жулай Г.А.1, Чуров А.В.1, Олейник В.М.1, Барышева О.Ю.2, Марусенко И.М.2
1ФГБУН «Институт биологии Карельского научного центра» РАН, Петрозаводск, Россия 2 ФГБОУВПО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия
Введение. Регуляторные Т-клетки (Tregs) играют существенную роль в контроле иммунного ответа и представляют собой одну из важных мишеней в иммунотерапии аутоиммунитета. Ревматоидный артрит (РА) — это аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, связано с нарущением Т-клеточной толерантности в организме. Количественные и/или качественные изменения в Treg-клетках могут приводить к развитию РА. Вместе с тем остается открытым вопрос о том, как поддерживается численность и функциональная активность Tregs при РА. В литературе накапливаются данные о важной роли Т-клеток памяти с фенотипом CD4+CD45RO+ в развитии аутоиммунных заболеваний. Показано, что на стадии обострения у больных рассеянным склерозом количе-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ство этих клеток возрастает. Есть данные о тесной TCR клональной гомологии между Tregs и CD4+Т-клетками памяти, что может указывать на то, что популяции Tregs пополняются из пула Т-клеток памяти. Это особенно интересно при аутоиммунных процессах, когда антигенные стимулы к образованию Т-клеток памяти могут быть регулярными. Целью исследования стало изучение популяций Tregs и Т-клеток памяти по уровню экспрессии молекулярных маркеров (CD4, CD25, FoxP3, CD45RO) на лимфоцитах периферической крови больных РА.
Материалы и методы. Обследовано всего 23 образца периферической крови больных ревматоидным артритом в возрасте от 33 до 72 лет. Контрольную группу составили 17 образцов крови здоровых доноров в возрасте от 25 до 67 лет. Иммунофенотипирование лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии на приборе Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США). Для оценки экспрессии молекул использовали моноклональные антитела CD4-FITC, CD25-PC5, CD45RO-PC7 (Beckman Coulter, Франция), а также FoxP3-PE (eBioscience, США). Для оценки внутриклеточных маркеров выполняли пер-меабилизацию с использованием коммерческих наборов и согласно инструкции производителя. Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета программ Statistica 6.0, достоверность различий между группами рассчитывали по критерию Манна—Уитни, для выявления и оценки характера связи между признаками использовали коэффициент корреляции Спирмена. Данные представлены в виде M±SD.
Результаты. В работе было проанализировано содержание Treg-клеток с фенотипами CD4+FoxP3+, CD4+CD25+FoxP3+, CD4+FoxP3+CD45RO+ в периферической крови больных РА (n = 27) и здоровых доноров (n = 17). Было отмечено, что у больных РА количество CD4+FoxP3+ (9,8±3,0) и CD4+FoxP3+CD45RO+T-лимфоцитов (8,1±2,4) было повышено по сравнению с донорами (7,1±1,6; 6,0±1,3 соответственно, p < 0,05). Интересно отметить, что у этих больных содержание лимфоцитов с фенотипом CD4+CD45RO+ (73,2±13,1) также отличалось от показателей в контрольной группе (62,5±10,5, p < 0,05). При этом число CD4+CD25+FoxP3+Treg-клеток у больных было на уровне контроля.
Также в группе больных обнаружена положительная корреляция между уровнем CD4+FoxP3+CD45RO+ клеток и с Treg-ассоцироваными фенотипами: CD4+CD25+FoxP3+, CD4+FoxP3+ (r = 0,54, p < 0,02; r = 0,7, p < 0,01 соответственно).
Заключение. Повышенное содержание клеток памяти, вероятно, может указывать на антигенспецифическую экспансию клеток в ответ на повторяющиеся, системные воздействия антигена у больных РА. Обнаружена четкая положительная корреляция между клетками памяти и фенотипами, ассоциированными с Tregs. Возможно, Т-клетки памяти при РА характеризуются хроническим состоянием активации и представляют собой постоянный источник конверсии в Treg, что позволяет считать эти клетки перспективной мишенью для иммунотерапии.
Финансирование проекта осуществлялось на средства федерального бюджета на выполнение государственного задания № 0221-2014-0040 и при поддержке гранта РФФИ а № 16-04-00567.
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СЕМЕЙСТВА IL-1 У БОЛЬНЫХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ ЯЗВЕННЫМ КОЛИТОМ
Сташкевич Д.С.1, Петрова Е.О.1, Василенко А.Г.2, Суслова Т.А.3, Бурмистрова А.Л.1
1ФГБОУ ВО «Челябинский государственный университет», Челябинск, Россия
2 ГБУЗ «Челябинская областная клиническая больница», Челябинск, Россия
3 ГБУЗ «Челябинская областная станция переливания крови», Челябинск, Россия
Введение. Неспецифический язвенный колит (НЯК) — хроническое мультифакторное заболевание толстой кишки, характеризующееся иммунным воспалением ее слизистой оболочки и повышенной экспрессией основных провоспалительных цитокинов TNFa, IL-1, IL-6 (Lakatos P.L., 2006). Генами-кандидатами НЯК могут выступать гены про/противовоспалительных цитокинов, прежде всего гены семейства IL-1 (Воробьев Г.И., 2008). Однако результаты геном-ассоциированных исследований, посвященных оценке генетической составляющей НЯК носят противоречивый характер (Nemetz A., 1999; Воробьев Г.И., 2008; Lopez-Hernandez R., 2015). В связи с вышеизложенным, целью исследования явился сравнительный анализ распределения частот встречаемости аллельных вариантов, генотипов и гаплотипов полиморфизма генов IL-ф +3953C/T и IL-1ra VNTR у больных неспецифическим язвенным колитом и здоровых лиц русской популяции Челябинской области.
Материалы и методы. Группа больных НЯК — пациенты ГБУЗ «Челябинская областная клиническая больница» (139 человек). Группа сравнения — потенциальные доноры стволовой клетки крови русской популяции (213 человек) ГБУЗ «Челябинская областная станция переливания крови». Принадлежность к популяционной группе определялась по данным генеалогического анамнеза до третьего поколения (согласно рекомендациям Международного Симпозиума, 1980 г., Лос-Анджелес). Методы исследования: выделение ДНК из образцов периферической крови с использованием реагентов PROTRANS DNA Box 500. Прямая ПЦР-амплификация для VNTR во втором интроне гена IL-1ra (реактивы ИХБФМ СО РАН, г. Новосибирск), аллель-специфическая ПЦР для SNP в полиморфном сайте +3953C/T IL-1P (реактивы ООО НПФ «Литех», Москва), с последующей УФ-детекцией результатов в 3% агарозном геле. Статистическая обработка. Критерии для анализа: частота аллеля, генотипа, частоты гаплотипов (H) и параметры неравновесного сцепления (D, p). Подсчет частот гаплотипов проводился в программе Arlequin 3.5 (Excoffier L., 2010). Достоверность различий оценивалась с помощью критерия Пирсона (%2), точного двустороннего критерия Фишера. Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты. Наблюдаемые в исследовании частоты аллелей и генотипов в выборках больных НЯК и условно здоровых лиц соответствуют ожидаемым согласно закону Харди—Вайнберга.
На первом этапе был проведен анализ распределения частот встречаемости аллелей и генотипов генов IL-1P, IL-1ra. В группе больных НЯК отмечено незначительное снижение частоты встречаемости аллеля с заменой+3953*Т IL-1P (20% vs 24% p = 0,27) за счет снижения носителей гомозиготного генотипа (2,8% vs 6,6% p = 0,096, тенденция). Распределение частот аллелей и генотипов IL- 1ra не разли-
