CC BY
10
КРАТКИЕ СООБщЕНИЯ Brief communications
DOI: 10.21055/0370-1069-2021-1-148-151
УДК: 616.932:579(470.61)
М.И. Ежова, Д.А. Левченко, И.В. Архангельская, В.Д. Кругликов, Н.Б. Непомнящая
особенности БиологичЕСКих СвойСТв VIBRIO CHOLERAE, изолированных в процессе мониторинга водных объектов роСТовА-нА-дону С 1989 по 2018 год
ФКУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт», Ростов-на-Дону, Российская Федерация
Цель - изучение особенностей биологических свойств штаммов холерных вибрионов, обнаруженных в объектах окружающей среды (ООС) на территории Ростова-на-Дону с 1989 по 2018 год. Материалы и методы. Бактериологическими, молекулярно-биологическими и статистическими методами изучены 73 штамма холерных вибрионов 01, 0139 и 1702 штамма non01/non0139 серогрупп, выделенные за 30-летний период. Результаты и обсуждение. Установлено, что в Ростове-на-Дону выделено 78,0 % токсигенных штаммов от всех изолированных из ООС на территории России, среди которых 2 - генетически не измененные. Обнаружен штамм Vibrio cholerae 01 classical и 72 штамма V. cholerae El Tor, из которых 70 % относились к серовару Огава, а 3 % нетоксигенных штаммов оказались чувствительны к классическому фагу. Статистически выявлена «очень слабая прямая связь» между выделением штаммов V. cholerae O1, 0139 и V. cholerae nonO1/nonO139, у которых определены доминирующие серогруппы (067, 076, 075, 053, 016), а у 18 % штаммов показана атипичность по агглютинабельности. Выявление биологических особенностей штаммов V. cholerae способствует оптимизации мониторинговых исследований.
Ключевые слова: холерные вибрионы, мониторинг, токсигенные, нетоксигенные, серотипирование.
Корреспондирующий автор: Ежова Мария Ивановна, e-mail: Ezhova_MI@antiplague.ru.
Для цитирования: Ежова М.И., Левченко Д.А., Архангельская И.В., Кругликов В.Д., Непомнящая Н.Б. Особенности биологических свойств Vibrio cholerae, изолированных в процессе мониторинга водных объектов Ростова-на-Дону с 1989 по 2018 год. Проблемы особо опасных инфекций. 2021; 1:148-151. DOI: 10.21055/0370-1069-2021-1-148-151
Поступила 06.04.2019. Отправлена на доработку 22.04.2019. Принята к публ. 14.02.2020.
M.I. Ezhova, D.A. Levchento, I.V. Arkhangelskaya, V.D. Kruglikov, N.B. Nepomnyashchaya
Features of the Biological Properties of Vibrio cholerae Isolated during the Monitoring of Water Bodies in Rostov-on-Don from 1989 to 2018
Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute, Rostov-on-Don, Russian Federation
Abstract. The goal is to study the features of the biological properties of Vibrio cholerae strains found in environmental objects (EO) on the territory of Rostov-on-Don from 1989 to 2018. Materials and methods. Bacteriological, molecular biological and statistical methods were used to study 73 strains of cholera vibrios O1, O139 and 1702 strains of nonO1/nonO139 serogroups isolated over a 30-year period. Results and discussion. It was found that in Rostov-on-Don, 78.0 % of toxigenic strains were isolated from all isolated from environmental protection in Russia, among which 2 were genetically unchanged. The V. cholerae O1 classical strain and 72 V. cholerae El Tor strains were found, of which 70 % belonged to the Ogawa serovar, and 3 % of the nontoxigenic strains were susceptible to the classical phage. A "very weak direct relationship" was statistically revealed between the isolation of V. cholerae O1, O139 and V. cholerae nonO1/nonO139 strains, in which the dominant serogroups (O67, O76, O75, O53, O16) were identified, and 18 % of the strains showed atypical agglutinability. Revealing the biological characteristics of V. cholerae strains contributes to the optimization of monitoring studies.
Key words: cholera vibrios, monitoring, toxigenic, nontoxigenic, serotyping.
Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest. Corresponding author: Maria I. Ezhova, e-mail: Ezhova_MI@antiplague.ru.
Citation: Ezhova M.I., Levchento D.A., Arkhangelskaya I.V., Kruglikov V.D., Nepomnyashchaya N.B. Features of the Biological Properties of Vibrio cholerae Isolated during the Monitoring of Water Bodies in Rostov-on-Don from 1989 to 2018. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2021; 1:148-151. (In Russian). DOI: 10.21055/0370-1069-2021-1-148-151 Received 06.04.2019. Revised 22.04.2019. Accepted 14.02.2020.
Ezhova M.I., ORCID: https://orcid.org/0000-0003-4254-3313 Levchenko D.A., ORCID: https://orcid.org/0000-0002-5073-2918
После заноса холеры в Россию в 60-е годы прошлого века в Ростове-на-Дону в период с 1971 по 1987 год из воды поверхностных водоемов и стоков изолировано 393 штамма Vibrio cholerae El Tor различной эпидемической опасности [1, 2]. В дальней-
Kruglikov V.D., ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6540-2778 Nepomnyashchaya N.B., ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0868-6791
шем нестабильность эпидемиологической обстановки по холере в Ростове-на-Дону была связана с обнаружением в объектах окружающей среды (ООС) возбудителя этой инфекции на фоне эпидемического благополучия. Имеются единичные публикации,
касающиеся биологической характеристики выделенных на данной административной территории штаммов холерных вибрионов различных серогрупп и охватывающие разные временные периоды [3, 4]. Актуальность проведения настоящего исследования обосновывается необходимостью обобщения данных по особенностям результатов комплексных исследований водных ООС Ростова-на-Дону на виб-риофлору. Нам представляется, что ретроспективный комплексный анализ за тридцатилетний период биологических свойств штаммов V. с^1егае, выделенных референс-центром по мониторингу холеры (с правом хранения изолированных культур), дополненный новыми данными по изолированным штаммам в 1989-2000 гг. и в 2018 г., будет способствовать оптимизации мониторинговых исследований на основе изучения вариабельности фено- и генотипи-ческих характеристик штаммов в сравнении с ток-сигенными штаммами о1, изолированными из оос на других административных территориях страны, а также на основе данных о происхождении штаммов холерных вибрионов 01, 0139 и отсутствия/наличия статистически достоверной связи между вы-деляемостью штаммов V. сЫ1егае 01 и V. сЫ1егае поп01/поп0139 на территории Ростова-на-Дону.
Целью работы явилось изучение особенностей биологических свойств и характеристика штаммов холерных вибрионов, обнаруженных в 00с на территории Ростова-на-Дону за период 1989-2018 гг.
Материалы и методы
Объектами исследования являлись пробы воды поверхностных водоемов и сточных вод из девяти стационарных точек (с.т.), закрепленных за Ростовским-на-Дону противочумным институтом в плане практической помощи: с.т. № 1 - р. Дон, правый берег у Державинского спуска, место сброса аварийных стоков; № 2 - р. Темерник, устье впадения в р. Дон, неорганизованное водопользование; № 3 - сточные воды, городские очистные сооружения, приемная камера КНС № 4; № 4 - р. Дон, правый берег у железнодорожно-автодорожного моста «Западный обход», неорганизованное водопользование; № 5 - протока Мертвый Донец, левый берег, 500 м ниже автодорожного моста (на кумжинскую рощу), место неорганизованного рекреационного водопользования; № 6 - р. Темерник, ботанический сад, у моста, сброс сточных вод; № 7 - р. Дон, правый берег, 200 м ниже впадения р. Темерник (у железнодорожного моста), место сброса аварийных стоков; № 8 - р. Дон, правый берег, Кировский спуск, напротив здания экипажа № 2 РМК им. Г.Я. Седова, место сброса аварийных стоков; № 9 - р. Темерник, правый берег, в проекции жилого дома по ул. Волоколамская, д. 1б. Выделение, идентификацию и изучение биологических свойств культур V. с^1егае, изолированных в процессе мониторинга с 1989 по 2018 год, осуществляли бактериологическими, молекулярно-
биологическими и статистическими методами согласно действующим нормативным документам, ПЦР проводили в соответствии с инструкциями к диагностическим препаратам на приборе «Терцик МС-2» («ДНК-Технология»). Результаты обрабатывали с помощью стандартного программного обеспечения Word 2010 и Statistica-10.
Результаты и обсуждение
За изучаемый период в ходе проведения мониторинга исследовано 3219 проб воды поверхностных водоемов и стоков (2882 и 337 соответственно). В результате выделено 73 штамма V. cholerae 01 и 0139, из которых 67 штаммов - из поверхностных водоемов и 6 - из стоков (70 штаммов V. cholerae O1 и 3 штамма V. cholerae O139). Из 70 штаммов V. cholerae O1 по 30 штаммов изолировано из рек Дон и Темерник, 4 - из протоки р. М. Донец, 6 -из стоков, а из трех штаммов V. cholerae O139 один штамм - из р. Темерник, два - из р. Дон. Наибольшее число штаммов (19) обнаружено в пробах воды из с.т. № 6, а наименьшее (3) - из с.т. № 8. Три неток-сигенных штамма V. cholerae O139 изолированы из с.т. № 6 и 7.
Анализ показал, что в период 1989-1998 гг. изолирован только один нетоксигенный штамм V. cholerae O1 El Tor, а начиная с 1999 г. в пробах воды стали обнаруживаться штаммы V. cholerae различных биоваров, эпидзначимости и серогрупп (01, 0139), генетически измененные и неизмененные. при этом отмечалось выделение холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп, кроме 2011, 2012 и 2017 гг. вместе с тем статистически отмечена первая особенность результатов мониторинга на холеру в Ростове-на-Дону, которая заключалась в тенденции увеличения количества выделяемых штаммов V. cholerae 01 с 1999 по 2018 год.
сезонность обнаружения культур холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп в водных 00с Ростова-на-Дону в изучаемый период характеризовалась тем, что большинство штаммов изолировано в июле и августе (45,2 и 31,5 % соответственно), а в мае, июне и сентябре - 1,4, 12,3 и 9,6 % соответственно.
При идентификации изолированных культур 01 и 0139 серогрупп подтверждена их принадлежность к виду V. cholerae по таксономическим признакам и определены особенности биологических свойств. следует отметить, что в процессе мониторинга выделен только один штамм, относящийся к классическому биовару, остальные - к V. cholerae 01 El Tor, что также является особенностью результатов проведенных исследований.
У изолированных штаммов V. cholerae 01 (70 штаммов) принадлежность к серовару 0гава установлена у большинства штаммов - 51 (73,0 %), к серовару Инаба - у 16 (23,0 %), к серовару Гикошима - у 3 (4,0 %).
Проблемы особо опасных инфекций. 2021; 1
краткие сообщения
Все штаммы холерных вибрионов 0139 серо-группы относились к нетоксигенным.
Обнаружение семи токсигенных штаммов на фоне эпидемического благополучия в Ростове-на-Дону среди 70 штаммов 01 серогруппы явилось следующей особенностью биологических свойств выделенных культур. За изучаемый период мониторинговых исследований ООС на территории России на фоне эпидемического благополучия 78,0 % токсигенных штаммов выделены в Ростове-на-Дону (семь из девяти штаммов), а два штамма (22,0 %) изолированы в Санкт-Петербурге (2005 г.) и Таганроге (2011 г.). Причем все девять токсигенных штаммов, выделенные на территории России, относились к разным VNTR генотипам, за исключением трех штаммов, выделенных в Ростове-на-Дону в 2001 г., одного штамма, изолированного в 2014 г., и одного -в Таганроге в 2011 г. Токсигенные штаммы выделены однократно и при повторных исследованиях не обнаруживались. Нельзя обойти вниманием тот факт, что в литературе встречаются редкие эпизодические сообщения об обнаружении в водных ООС токсигенных штаммов холерных вибрионов 01 серогруппы при отсутствии больных и носителей [5, 6].
Другая особенность полученных нами результатов заключалась в том, что среди токсигенных штаммов 01, выделенных на территории города, отмечалось наличие как генетически не измененных двух штаммов (V cholerae dassical - 1999 г. и V. cholerae El Tor - 2000 г.), так и большинства (пять штаммов) генетически измененных, содержащих в своем геноме гибридный профаг, имеющий ген rstR типа эльтор, и ген ctxB классического типа (2001, 2003, 2014 гг.) [7]. Кроме того, обнаружены неток-сигенные штаммы с генетической характеристикой ctx- tcp+ (восемь), геномы которых содержали гены острова патогенности VPI при отсутствии полноценного профага СТХф и RS^. Однако у четырех из этих штаммов, выделенных в 2007 г., в геноме выявлен сайт интеграции СТХ профага attRS1 и полноценный pre CTX-элемент, содержащий гены cep, orfU, ace и zot. При генотипировании в расширенном диапазоне детерминант факторов патоген-ности по 43 генам у всех нетоксигенных штаммов с генетической характеристикой ctx- tcp- в геноме присутствовали гены: hcp, toxR, hapA, cef, tolQRA. Остальные гены представлены в различных сочетаниях. Проведенный биоинформационный анализ по результатам секвенирования токсигенных штаммов, выявленных в Ростове-на-Дону за изучаемый период, свидетельствовал об их заносном характере и превалирующей генетической изменчивости [8].
Большинство (60) штаммов V. cholerae 01, выделенных как в Ростове-на-Дону, так и на других административных территориях России, резистентны к холерным диагностическим фагам. Вместе с тем особенностью полученных результатов является обнаружение двух нетоксигенных штаммов V. chole-rae El Tor, чувствительных к классическому фагу.
Принадлежность к определенному фаготипу удалось установить лишь у 13 (18,6 %) штаммов из 70, а именно: к 11-му фаготипу - у двух штаммов (15,4 %), к 13-му фаготипу - у четырех штаммов (30,7 %), к 14-му фаготипу - у двух штаммов (15,4 %), к 16-му фаготипу - у пяти штаммов (38,5 %).
В ходе проведения мониторинга водных объектов Ростова-на-Дону в период 1989-2018 гг. также выделено 1702 штамма V. сЫ1егае поп01/поп0139. Из поверхностных водоемов изолировано 1644 штамма, а из сточных вод - 58. наибольшее количество штаммов в изучаемый период выявлено в пробах из р. Дон - 872 и р. Темерник - 370. Сезонность обнаружения культур V. сЫ1егае поп01/поп0139 из водных ООС Ростова-на-Дону совпадала с сезонностью холерных вибрионов 01, 0139. Большинство штаммов изолировано в июле (28,0 %) и августе (25,0 %), меньшее количество (9,0 %) - в мае.
Анализ динамики выделения штаммов V. ^о1е-гае поп01/поп0139 из проб водных 00С Ростова-на-Дону с 1989 по 2018 год так же, как и в случае с холерными вибрионами V. сЫ1егае 01, 0139, продемонстрировал тенденцию к увеличению их количества.
при сравнении данных с целью определения корреляции между выделением штаммов V. с^1егае 01, 0139 и V. сЫ1егае поп01/поп0139 из одних и тех же с.т. с 1989 по 2018 год выявлена «очень слабая прямая связь», что можно объяснить нацеленностью исследований на обнаружение штаммов 01, 0139, не исключая возможность конкуренции между холерными вибрионами различных серогрупп, что требует дальнейшего исследования.
при серологическом типировании изучаемых штаммов V. сЫ1егае поп01/поп0139 определены представители 64 серогрупп, причем среди культур с определенной серологической принадлежностью доминировали пять серогрупп, которые обнаружены в пробах воды из всех с.т.: 067 (26,0 %), 076 (14,38 %), 075 (9,36 %), 053 (8,67 %) и 016 (11,0 %).
0тмечено, что с 2009 по 2018 год 307 выделенных штаммов холерных вибрионов давали положительный результат в реакции слайд-агглютинации на стекле с диагностической 01 холерной сывороткой, а в некоторых случаях и с типовыми сыворотками, но в конечном итоге идентифицированы с помощью реакции слайд-агглютинации с моноклональными антителами, ИХ-тестов и, в некоторых случаях, с использованием ПЦР (V сЫ1егае поп01/поп0139). при определении серологической принадлежности этих культур установлено, что они относились к 14 серогруппам, среди которых преобладала 016.
при проведении исследования методом пцР-генотипирования репрезентативной выборки штаммов V. сЫ1егае поп01/поп0139 генов основных факторов патогенности - с£хА и ^срА - у них не обнаружено. Большинство штаммов V. с^1егае поп01/поп0139 отличалось от штаммов 01 се-рогруппы меньшим набором генов дополнитель-
ных факторов патогенности, что свидетельствовало о более низкой вероятности проявления ими вирулентности.
Таким образом, проведенный ретроспективный анализ показал, что за последние 30 лет прослеживается динамичная тенденция к количественному увеличению числа выделяемых из водных 00С Ростова-на-Дону штаммов холерных вибрионов, которые относились к 01 серогруппе с доминированием среди штаммов V. cholerae El Tor представителей серовара 0гава.
Проведенный анализ особенностей биологических свойств выделенных штаммов 01 свидетельствовал о завозном характере токсигенных штаммов, в то же время выделение нетоксигенных штаммов из одних и тех же водных объектов позволило говорить о создавшихся условиях для их циркуляции на данной территории в течение нескольких лет. Кроме того, результаты ретроспекции продемонстрировали многообразие антигенных вариантов V. cholerae non01/non0139 различных серогрупп, циркулирующих в воде поверхностных водоемов и стоках в Ростове-на-Дону, а также появление на данной территории с 2009 г. штаммов, атипичных по признаку агглютинабельности.
В связи с вышеизложенным отмечается необходимость проведения динамичных многолетних микробиологических исследований на наличие холерных вибрионов в поверхностных водоемах и стоках с оптимизацией методов исследования изолированных штаммов (углубленный анализ молекулярно-биологических свойств), их сравнения со штаммами, выделенными на территории России, и выяснения происхождения.
Конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
Список литературы
1. Narkevich M.I., Onischenko G.G., Lomov J.M., Moskvitina E.A., Podosinnikova L.S., Medinsky G.M. The seventh pandemic of cholera in the USSR, 1961-89. Bulletin of the World Health Organization. 1993; 71(2):189-96.
2. Мединский Г.М., Наркевич М.И., Ломов Ю.М., Пинигин А.Ф., Голубев Б.П., Алексеенко В.В., Левчишина Г.И., Кюрегян А.А. Справочник-кадастр распространения вибрионов Эль-Тор в поверхностных водоемах и сточных водах на территории СССР во время 7-й пандемии холеры. Ростов н/Д: Т00 «0фсет»; 1991. 172 с.
3. Москвитина Э.А., Мазрухо А.Б., Арешина 0.А., Адаменко 0.Л., Назаретян А.А., Анисимова Г.Б. Эпидемиологические особенности холеры на современном этапе седьмой пандемии. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2014; 19(4):44-9.
4. Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Ежова М.И. Анализ динамики выделения штаммов холерных вибрионов из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации с 1989 по 2016 гг. с помощью авторской ГИС. Вестник Пермского университета. Серия: Биология. 2017; 1:112-7.
5. Islam A., Labbate M., Djordjevic S.P., Alam M., Darling A., Melvold J., Holmes A.J., Johura F.T., Cravioto A., Charles I.G., Stokes H.W. Indigenous Vibrio cholerae strains from a non-endemic region are pathogenic. Open Biol. 2013; 3(2):120181. DOI: 10.1098/ rsob.120181.
6. Kokashvili T., Whitehouse C.A., Tskhvediani A., Grim C.J., Elbakidze T., Mitaishvili N. Janelidze N., Jaiani E., Haley B.J Lashkhi N., Huq A., Colwell R.R., Tediashvili M. Occurrence and diversity of clinically important Vibrio species in the aquatic environment of Georgia. Front. Public. Health. 2015; 3:232. DOI: 10.3389/ fpubh.2015.00232.
7. Писанов P.B., Ежова М.И., Монахова Е.В., Черкасов
A.B., Краснов Я.М., Водопьянов A.C., Кульшань Т.А., Ливанова Л.Ф., Портенко C.A., Абдрашитова A.C., Кругликов В.Д., Титова C.B. Особенности структуры генома токсигенного штамма Vibrio cholerae El Tor Инаба, выделенного в 2014 г. из открытого водоема в Ростове-на-Дону. Проблемы особо опасных инфекций. 2015; 2:63-7. DOI: 10.21055/0370-1069-2015-2-63-67.
8. Писанов Р.В., Керманов A.B., Ежова М.И., Кругликов
B.Д. Секвенирование и анализ мутационного профиля генов CTX AB у штаммов Vibrio cholerae, выделенных на территории г Ростова-на-Дону в 1999-2003 гг. В кн: Холера и патогенные для человека вибрионы: Материалы совещания специалистов Роспотребнадзора в г. Ростове-на-Дону. Ростов н/Д; 2014.
C. 95-8.
References
1. Narkevich M.I., Onischenko G.G., Lomov J.M., Moskvitina E.A., Podosinnikova L.S., Medinsky G.M. The seventh pandemic of cholera in the USSR, 1961-89. Bulletin of the World Health Organization. 1993; 71(2):189-96.
2. Medinsky G.M., Narkevich M.I., Lomov Yu.M., Pinigin A.F., Golubev B.P., Alekseenko V.V., Levchishina G.I., Kyuregyan A.A. [Handbook-Inventory of the Distribution of El-Tor Vibrios in Surface Water Bodies and Waste Waters in the USSR during the 7th Cholera Pandemic]. Rostov-on-Don: Offset LLP; 1991.172 p.
3. Moskvitina E.A., Mazrukho A.B., Areshina O.A., Adamenko O.L., Nazaretyan A.A., Anisimova G.B. [Epidemiological features of cholera at the present stage of the seventh pandemic]. Epidemiologiya i Infektsionnyye Bolezni [Epidemiology and Infectious Diseases]. 2014; 19(4):44-9.
4. Levchenko D.A., Kruglikov V.D., Arkhangelskaya I.V., Ezhova M.I. Analysis of the dynamics of isolation of Vibrio cholerae strains from environmental objects on the territory of the Russian Federation from 1989 to 2016 using the author's GIS. Vestnik Permskogo Universiteta. Seriya: Biologiya [Perm University Bulletin. Series: Biology]. 2017; 1:112-7.
5. Islam A., Labbate M., Djordjevic S.P., Alam M., Darling A., Melvold J., Holmes A.J., Johura ET., Cravioto A., Charles I.G., Stokes H.W. Indigenous Vibrio cholerae strains from a non-endemic region are pathogenic. Open Biol. 2013; 3(2):120181. DOI: 10.1098/ rsob.120181.
6. Kokashvili T., Whitehouse C.A., Tskhvediani A., Grim C.J., Elbakidze T., Mitaishvili N., Janelidze N., Jaiani E., Haley B.J., Lashkhi N., Huq A., Colwell R.R., Tediashvili M. Occurrence and diversity of clinically important Vibrio species in the aquatic environment of Georgia. Front. Public. Health. 2015; 3:232. DOI: 10.3389/ fpubh.2015.00232.
7. Pisanov R.V., Ezhova M.I., Monakhova E.V., Cherkasov A.V., Krasnov Ya.M., Vodopyanov A.S., Kulshan T.A., Livanova L.F., Portenko S A.A., Abdrashitova A.S., Kruglikov V.D., Titova S.V. [Features of the genome structure of the toxigenic Vibrio chol-erae El Tor Inaba strain isolated in 2014 from an open water body in Rostov-on-Don]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2015; 2:63-7. DOI: 10.21055/0370-1069-2015-2-63-67.
8. Pisanov R.V., Kermanov A.V., Ezhova M.I., Kruglikov V.D. [Sequencing and analysis of the mutational profile of CTX AB genes in Vibrio cholerae strains isolated on the territory of Rostov-on-Don in 1999-2003]. In: [Cholera and Vibrios Pathogenic for Humans: Materials of the Meeting of Rospotrebnadzor Specialists in Rostov-on-Don]. Rostov-on-Don; 2014. P. 9598.
Authors:
Ezhova M.I., Levchen^о D.Â., Arkhangelskaya I.V., Kruglikov V.D., Nepomnyashchaya N.B. Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute. 117/40, M. Gor'kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation. E-mail: plague@aaanet.ru.
Об авторах:
Ежова М.И., Левченко ДА., Архангельская И.В., Кругликов В.Д., Непомнящая Н.Б. Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт. Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40. E-mail: plague@aaanet.ru.
