CC BY
40
Опыт использования ПЦР в режиме реального времени в амбулаторно-поликлинической практике
Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, цитологическое исследование, вирус папилломы человека, папилломавирусная инфекция
Keywords:
polymerase chain reaction, cytology, HPV, human papilloma virus infection
Лагутина О.Е., Никитина Е.Б.
ФГБУ «Поликлиника №3» ( Москва, Россия) 129090, Россия, Москва, пер. Грохольский, 31 E-mail: Lagutina_polik@mail.ru
Experience in the use of PCR in real time in outpatient practice
Lagutina O.E., Nikitina E.B.
FSBE «Polyclinics № 3» (Moscow, Russia) 31, per. Grokholskiy, Moscow, 129090, Russia E-mail: Lagutina_polik@mail.ru
Резюме
На сегодняшний день, метод ПЦР в режиме реального времени широко востребован в поликлинической практике, позволяет в короткие сроки выявлять возбудителей урогенитальных инфекций, повышая эффективность диагностики и лечения.
Abstract
For today PCR method in real-time is high demanded in polyclinic practice, allows to identify rapidly the pathogens of urogenital infections, increasing the efficiency of diagnosis and treatment.
Наше время характеризуется стремительным развитием молекулярно-генетических технологий, которые все шире используются в медицине. Особое место в этом разделе занимает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Важным преимуществом данного метода является не только высокая производительность, но и возможность определять наличие нескольких возбудителей в минимальном объеме образца. На сегодняшний день неоспорим тот факт, что методы ПЦР диагностики наиболее специфичны и чувствительны. Традиционные микроскопические и микробиологические методы обнаружения микроорганизмов в биологическом материале имеют ряд существенных недостатков. К таким недостаткам относятся низкий процент выявления патологии при микроскопии, длительность проведения анализа и сложность обнаружения внутриклеточных возбудителей культуральным методом. Все это сказывается на сроках получаемых результатов, и как следствие, на выборе стратегии лечения.
Цель работы: оценить роль метода ПЦР в реальном времени для диагностики урогенитальных инфекций в амбулаторно-поликлинической практике.
С 2013 г. данный метод внедрен в работу клинико-диагностической лаборатории ФГБУ «Поликлиника № 3». Работа проводилась на амплификаторах «Rotor-Gene» (QIAGEN, Германия) в режиме реального времени. Использовались тест-системы «АмплиСенс», пробоподго-товка осуществлялась на станции выделения «Xiril AG».
Выполнено 64 тысячи исследований, обследовано 12 313 пациентов из них 4104 мужчин и 8209 женщин. Основной объем исследований (70%) проводился для пациентов в возрасте 25-50 лет. Внедрение мультипраймо-вых панелей для одномоментного определения 2-х, 3-х или 4-х возбудителей позволило в короткие сроки установить этиологию заболевания в большем числе случаев. Значительный объем (40%) от общего количества прове-
денных исследований приходится на выявление условно-патогенных микроорганизмов, таких как Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum, Gardnerella vaginalis, Candida, носительство выявлено в 12% случаев. 35% исследований приходится на об-лигатные патогены (Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis), из них патологические результаты составили 1%.
На сегодняшний день, наиболее эффективным методом обнаружения вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР) является ПЦР-диагности-ка, который наряду с традиционной цитологией входит в программу скринингового обследования женщин. Однако, цитологическое исследование (ЦИ) - это субъективный метод, напрямую зависит от квалификации врача-цитолога, от правильности забора и адекватности исследуемого материала. Мы провели анализ сопоставимости результатов выявления ВПЧ ВКР методами ПЦР и цитологического исследования (ЦИ). В 42% случаев положительные результаты ЦИ и ПЦР совпали. В 23% - папилломавирусная инфекция (ПВИ) не была обнаружена ни одним методом; в 6% - клеточные изменения, выявленные при ЦИ объяснялись другими причинами (не ВПЧ); в 29% случаев ПЦР подтверждала наличие ВПЧ при нормальной цитограмме и данная группа пациентов нуждалась в дополнительном обследовании. В нашей лаборатории выполнено 8900 исследований ДНК ВПЧ ВКР с генотипированием, патология выявлена в 17% случаях. Количественное исследование ДНК ВПЧ ВКР, как правило, проводится для определения величины вирусной нагрузки и оценки эффективности лечения. Всего выполнено 320 количественных определений ВПЧ ВКР, в 37% из них выявлен возбудитель. Высокий процент обнаружения вируса объясняется тем, что это исследование назначается пациентам с ранее установленным присутствием вируса в организме.
Опыт использования ПЦР в условиях поликлиники показал, что диагностика инфекций органов репродукции максимально востребована в возрастной группе 25-50 лет. Применение мультипраймовых панелей повышает эффективность выявления возбудителей и позволяет сократить сроки постановки диагноза. Выявление ДНК ВПЧ ВКР - наиболее эффективный метод, широко исполь-
зуются специалистами в клинической практике для скрининга и контроля лечения ПВИ.
Выводы. Внедрение ПЦР метода в амбулаторно-по-ликлиническую практику позволяет в максимально короткие сроки выявлять возбудителей урогенитальных инфекций, тем самым, повышая эффективность диагностики и лечения.
