CC BY
15
however, the concentration of whey proteins increases to (60%). The biggest changes are generally in the main proteins of milk: asl -, в -, к -, as2 - caseins, blood albumin, immunoglobulin, в - lactoglobulin, a - lactalbumin, in the latter two proteins the changes are of a counter-directional nature. As a result of of these changes in the clinical form of mastitis milk of the casein group passes into an abnormal albumin group with a ratio of caseins and whey proteins 45:55%. This indicator can be the main criterion for assessing the condition of the udder and the quality of dairy products in mastitis.
Based on the results of the research, it may can also conclude that the treatment of mastitis in cows not fully completely restores the original structure of milk protein in a healthy udder, as the decrease of total protein, casein and whey protein are unchanged, however, the milk has a normal protein structure with a ratio of casein and whey protein 79 : 21%.
Studies have also shown, that in the disease of one quarter of the udder, milk protein composition in healthy quarters have not affected.
УДК 619:576.809.7.852
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ И СОХРАННОСТЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ САПА ПРИ
ДЛИТЕЛЬНОМ ХРАНЕНИИ
Мельникова Л.А.- к.в.н., в.н.с., Иванова. С.В. - к.б.н., с.н.с., *Галиуллин А.К. - д.в.н., профессор, Макаев Х.Н. - д.в.н., профессор
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» *ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана»
Ключевые слова: сап, штамм, биологические свойства, хранение, лиофилизация Key words: sap, strain, biological properties, storage, lyophilization
В Российской Федерации 97 коллекций микроорганизмов, деятельность которых направлена на пополнение, хранение и изучение штаммов различных видов возбудителей, которые необходимы для проведения научных и фундаментальных исследований, а также при разработке и производстве современных индикационных тест-систем, иммунологических препаратов и лекарственных средств.
Проблема длительного хранения микроорганизмов с сохранением ими того состояния, в каком они были выделены, признана в качестве приоритетной во всех странах мира [2].
Из литературных источников известно, что в музеях штаммов микроорганизмов для сохранения бактерий, грибов и вирусов в жизнеспособном и стабильном состоянии используются нес-
колько основных способов: лиофилиза-ция, криоскопирование и периодические пересевы на питательных средах [4]. Наиболее надежным способом длительного хранения клеток является лиофили-зация, обеспечивающая существенное торможение протекающих у них жизненных процессов. Высокий эффект консервации этим методом достигается тем, что клетки, лишаясь свободной воды в условиях криогенных температур, переходят в состояние анабиоза. При этом многие физиологически разнообразные виды бактерий и бактериофаги могут сохранять жизнеспособность в течение 30 и более лет [3,6].
Одной из задач коллекции является систематический и поэтапный контроль за жизнеспособностью штаммов в процессе длительного хранения. С этой целью нами проведена работа по опреде-
лению жизнеспособности лиофилизиро-ванных штаммов 5584 и Муксувар возбудителя сапа, хранящихся в течение 7 и 11 лет соответственно.
Материалы и методы исследований. Для работы взяты штаммы 5584, Муксувар возбудителя сапа, хранящиеся в лиофилизированном виде (защитная среда - обезжиренное молоко) в ампулах по 1 мл при температуре +4оС заложенные на хранение в 2006 и 2010 годах соответственно.
Жизнеспособность лиофилизиро-ванных штаммов проверяли посевом суспензии данных культур из ампул, после суспендирования высушенной массы физраствором. Суспензию исследуемых штаммов засевали на мясо-пептонный агар с 4 % глицерина (МПГА) и в мясо-пептонный бульон с 4 % глицерина (МПГБ). Посевы культивировали при 37оС в течение 3-10 суток. С выросших культур делали посевы для получения второй генерации. Посевной материал проверяли на характерность роста и основные свойства, предусмотренные паспортом.
Тинкториально-морфологические свойства изучали микроскопией мазков, приготовленных из 2-ух суточных агаровых культур взятых в опыт. Мазки фиксировали смесью Никифорова и окрашивали по Граму и синкей Лефлера.
Подвижность определяли методом висячей капли под микроскопом. Для этого готовили взвесь клеток путем внесения в пробирку с агаровой культурой стерильного физиологического раствора. Одну каплю взвеси культуры помещали на покровное стекло, находящееся в чашке Петри, затем предметным стеклом с лункой с ободком из вазелинового масла накрывали стекло с каплей культуры и осторожно переворачивали. Капля культуры должна висеть над лункой. Препараты просматривали под микроскопом.
Биохимические свойства проверяли на дифференциально-диагностических средах. Для выявления сахароли-тических ферментов проводили посевы на среду Гисса, внося культуру в небольшом количестве батериологической петлей. Результат учитывали в течение 6 суток.
Протеолитическую активность проверяли на 12%-ной желатине, делая посев культур петлей, погружая ее вглубь питательной среды до дна пробирки. Наблюдение за изменением среды вели в течение 20 суток. Кроме этого в обезжиренное молоко вносили 1 -2 капли суспензии смытой физиологическим раствором культуры и наблюдали в течение 30 суток.
Образование сероводорода изучали с использованием индикаторной бумажки, пропитанной ацетатом свинца и прикрепленной пробкой над поверхностью МПГБ. Наблюдение вели в течение 7-10 дней.
Вирулентные свойства лиофили-зированных штаммов проверяли на 10 хомячках Джунгурской породы, путем подкожного ведения в область затылка в дозе 10 млн. клеток.
Все работы с культурами штаммов 5584 и Муксувар возбудителя сапа проводили согласно правил работы с микроорганизмами 1-11 групп патогенности (опасности) СП 1.3.3118-13 и 1.2.036-95 [1,5].
Результаты исследований. Перед исследованиями ампулы проверяли на целостность, в работу брали ампулы, без каких либо видимых повреждений. Ампулы вскрывали и растворяли сухое вещество 1 мл физиологического раствора. Содержимое ампул хорошо растворяются в течение 1 минуты. Результаты проведенных исследований представлены в таблице.
Таблица 1 - Культурально - морфологические и вирулентные свойства лиофилизированных штаммов возбудителя сапа
№ пп Биологические свойства Штаммы
5584 Муксувар
1. Тинкториальные сохранены, Гр- сохранены, Гр-
2 Биохимические не образовывает газ, не ферментирует сахара, сероводород образовывает, молоко не свертывает не ферментирует сахара, сероводород образовывает, молоко не свертывает
5 РА мелкозернистая агглютинация в течение 1 минуты мелкозернистая агглютинация в течение 2 минут
6 РСК 1:5-1:10 1:10
7 Патогенность для лабораторных животных хомяков хомяков
8 МПГА полупрозрачные колонии полупрозрачны е колонии
9 МПГБ пристеночное кольцо пристеночное кольцо, помутнение среды
10 Среда по Павловскому медовый налет ярко-желтого цвета медовый налет ярко-желтого цвета
11 Подвижность отсутствует отсутствует
12 Протеолитические желатин не разжижает желатин не разжижает
Изучая жизнеспособность штаммов 5584 и Муксувар возбуителя сапа лиофилизированных в 2006 и 2010 годах соответственно, установили, что на 4-5 сутки появился рост культур на МПГА в виде полупрозрачных колоний с гладкими краями и перламутровым оттенком, в дальнейшем сливающихся в сплошной слизистый налет. На МПГБ на 3 -5 сутки наблюдали помутнение среды, образование на поверхности нежной пленки или пристеночного кольца, а также вязкого осадка, поднимающегося со дна пробирки штопором и разбивающегося при встряхивании.
На картофеле по Павловскому, культуры через 5 суток образовывали медовый налет ярко-желтого цвета преобре-тающего к 10 дню более темную окраску.
В мазках, приготовленных из двухсуточных агаровых культур, фиксированных в смеси Никифорова и окрашенных по Граму наблюдали грамотри-цательные зернистые палочки с закругленными концами размером 1-5*0,3-0,8 мкм, расположенные одиночно, парно и длинными нитями.
При окраске по Лефлеру регистрировали палочки бледно-голубые с красной зернистостью.
На среде Гисса штаммы не изменяли окраски среды и не образовывали газа, следовательно, не ферментировали сахара. Обезжиренное молоко свертывали без дальнейшей пептонизации.
При проверке агглютинабельных свойств культуры регистрировали положительную реакцию в разведении 1:51:10 с сапной сывороткой для РСК, содержащей противосапные агглютинины. В пластинчатой РА на стекле они давали в течение 1 -2 минут мелкозернистую агглютинацию.
Анализ результатов проведенных исследований позволяют констатировать, что изученные штаммы сохраняли жизнеспособность и основные биологические свойства, соответствующие паспортным данным.
Сохранение жизнеспособности и основных биологических свойств штаммов возбудителя сапа на протяжении 11 и 7 лет стало возможным благодаря лиофи-лизации, при которой происходит высушивание микробной массы из замороженного состояния минуя жидкую фазу под вакуумом. В процессе хранения происходило снижение количества выживших клеток, но оставшихся жизнеспособных бактерий достаточно для восстановления культуры при высеве на питательные среды.
Заключение. На основании проведенных исследований установлено, что штаммы 5584 и Муксувар возбудителя сапа лиофилизированные в 2006 и 2010 годах, соответственно, хранившиеся при температуре +4оС в течение 11 и 7 лет, сохранили свою жизнеспособность и исходные морфологические, культурально-биохимические свойства и серологиче-
скую активность указанные в паспортах на данные штаммы.
Эти данные подтверждают, что лиофилизация является оптимальным способом длительного сохранения штаммов возбудителя сапа без изменения основных биологических свойств.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности // СП.1.3.3118-13.
2. Галиуллин, А.К. Сап: профилактика и меры борьбы / А.К. Галиуллин, Л.А. Мельникова, Н.К. Букова, С.В. Иванова // Ветеринария. -2003.- № 8, -С.3-8.
3. Галиуллин, А.К. Установление срока хранения лиофилизированных культур штаммов возбудителя сапа / А.К. Галиуллин, Л.А. Мельникова, Р.Р. Зинна-туллин // Совершенствования методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов. Материалы конференции, посвященной 70-летию ВГНКИ 14-15фев.2001.-Москва-2001.-С. 85-86
4. Похиленко, В.Д. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития/ В.Д. Похиленко, А.М. Баранов, К.В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки.-2009.-№4 (12).- С.99-121.
5. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-II групп патогенности // СП 1.2.036-95.
6. Smith, D. The preservation and maintenance of living fungi/D. Smith, A.H.S. Onions.-Kew (Richmond)/-Com-monwealth Mycol. Inst. Publ.-1983.-51p.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ И СОХРАННОСТЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ САПА ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ХРАНЕНИИ
Мельникова Л.А., Иванова С.В., Галиуллин А.К., Макаев Х.Н.
Резюме
Основной целью коллекций микроорганизмов является сохранение биологических свойств штаммов возбудителей при длительном хранении. Одним из способов
длительного хранения микроорганизмов является лиофилизация. В этой связи проверены на жизнеспособность штаммы 5584 и Муксувар возбудителя сапа. Проведен посев суспензии лиофилизированных культур из ампул на мясо-пептонный глицериновый агар и мясо-пептонный глицериновый бульон. Выросшие культуры проверены по тинкториально-морфологическим, биохимическим и агглютинабельные свойства. После хранения 7 и более лет штаммы жизнеспособны, стабильны по биологическим свойствам.
THE DETERMINATION OF THE VIABILITY AND SAFETY OF BIOLOGICAL PROPERTIES OF STRAINS OF THEGLANDERSAGENTDURING LONG-TERM
STORAGE
Melnikova L.A., Ivanova S.V., Galiullin A.K., Makaev Kh.N.
Summary
The main purpose of microorganismcollections is to preserve the biological properties of pathogens strains during long-term storage. One of the long-term storage ways of microorganisms is lyophilization. Strains 5584 and Muksusarglanders agent weretested for the viability.The suspensionof lyophilized cultures from ampoules for meat-peptone glycerin agar and meat-peptone glycerin broth was sown. The grown cultures were checked according totinctorial-morphological, biochemical and agglutinable properties. After the 7-year storage or more the strains are viable, stable according biological properties.
УДК 619:616.24-002.153:612.015.31:636.22/.28-053.2
КОРРЕКЦИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ОБМЕНА МИНЕРАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ У БОЛЬНЫХ БРОНХОПНЕВМОНИЕЙ ТЕЛЯТ В УСЛОВИЯХ ТЕХНОГЕНЕЗА
Наумова О.В. - аспирант ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный аграрный университет»
Ключевые слова: Техногенные провинции, тяжёлые металлы, контаминация, энтеросорбенты, детоксикационная терапия, химиотерапевтические препараты.
Key words: Technogenic province, heavy metals, contamination, enterosorbents, detoxifying therapy, chemotherapy drugs.
На Южном Урале территории землепользования значительного ряда хозяйств находятся в зоне промышленных выбросов предприятий различного хозяйственного назначения [6]. По данным А.М.Гертмана, Т.С. Самсоновой [3] в этих хозяйствах при проведении диспансерного обследования среди взрослого поголовья молочных коров выявлено распространение таких незаразных патологий как остеодистрофия, гепатоз, ацидоз, болезни почек (нефриты и нефрозы) и сердечной мышцы (миокардиты и мио-кардиодистрофии).
Анализ существующих в ветеринарной практике способов лечения отмеченных патологий в условиях высоких техногенных нагрузок показал, что они требуют незамедлительной корректировки, так как одной из основных причин способствующих развитию заболеваний являются соли тяжёлых металлов. Регулировать их уровень возможно только путём применения детоксикационной терапии, используя при этом минеральные энтеросорбенты.
Высокий уровень токсических элементов в рационе животных способст-
