CC BY
3
КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 613.263:547.857.5]-074:543.544
f
/С. И. Эллер, Л. Г. Левин, В. В. Пименова, Н. И. Музыченко
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В ЗЕРНЕ
И ЗЕРНОПРОДУКТАХ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Институт питания АМН СССР, Москва
Диагностика зараженности зерна и зернопродуктов насекомыми и клещами во время хранения и транспортировки имеет важное значение для оценки пригодности его для посева и употребления в пищу. Наличие мочевой кислоты в зерне и зернопродуктах рассматривается как один из показателей их загрязненности продуктами жизнедеятельности вредителей [5].
В литературе описан ряд методов определения мочевой кислоты в продовольственном сырье. Наиболее широко распространены следующие методы: колориметрический с использованием мышьяк-фосфорновольфрамового реактива [5], УФ-спектрофотометрический с применением фермента ури-казы [2, 5]. Колориметрический метод имеет ряд недостатков: низкую специфичность, трудоемкость. Более специфичен спектрофотометрический метод, основанный на измерении оптической плотности экстрактов при длине волны ^ 282 нм после их обработки уриказой. Однако этот метод не-* достаточно чувствителен (не более 4 мг%), а реактивы нестабильны. Наиболее достоверные результаты дает прямой метод определения мочевой кислоты на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). ВЭЖХ применялась ранее для определения мочевой кислоты в сыворотке, плазме крови и тканях животных [1, 3, 4].
Цель настоящего исследования — разработка прямого хроматографического метода количественного определения мочевой кислоты в зерне и зернопродуктах с использованием ВЭЖХ.
Метод включает следующие этапы: экстракцию мочевой кислоты из исследуемого образца кипящей водой; разделение, идентификацию и определение содержания мочевой кислоты с помощью ВЭЖХ на силикагеле, химически связанном с октадецилсиланом, с УФ-детектором при длине волны 282 нм. Определение проводили на жидкостном хроматографе «Альтекс», модель 336 с УФ-детектором «Кра-тос», модель 5Р-757. Применяли колонку и предколонку, заполненные силикагелем типа «Ультрасфера ОДС» с разме-
i
Б
Л
о
5
Ю
я
О
5
10
Хроматограммы стандартного раствора мочевой кислоты (/4) и экстракта рисовой крупы, загрязненной мочевой кислотой (Б).
По оси абсцисс — время (в
мин).
ром частиц 5 мкм, длиной 25 и 4,5 см соответственно с внутренним диаметром 0,46 см.
Экстракцию мочевой кислоты из пробы массой 10 г (зерно, крупа, мука) осуществляли в плоскодонной конической колбе вместимостью 500 мл с добавлением 300 мл дистиллированной воды при температуре кипения в течение 10 мин. После охлаждения до 25 °С экстракт фильтровали через складчатый бумажный фильтр, отбирали 10 мл экстракта. Экстракт в количестве от 2 до 20 мкл вводили непосредственно в хроматограф. Степень извлечения мочевой кислоты, добавленной к образцам пшеницы и риса, 90—92 %.
В качестве подвижной фазы использовали 0,04 М водный ацетатный буфер рН 5,8. Скорость подвижной фазы 1 мл/мин. Школа чувствительности УФ-детектора 0,01 или 0,005 единиц оптической плотности.
Для калибровки прибора в хроматограф вводили 1, 3 и 6 мкл стандартного раствора концентрации 2 мкг/мл, содержащего соответственно 2, б и 12 нг мочевой кислоты. Время удерживания мочевой кислоты в этих условиях составляет 8—10 мин. Расчет концентрации мочевой кислоты
(в мг%) в образце проводили по формуле:
»
С
V2.hCT.M
где Vi—объем экстракта, мл; V2 — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; hcт — высота пика, соответствующая данной массе стандарта, мм; h0gp — высота пика мочевой кислоты в образце, мм; т — масса стандарта мочевой кислоты, введенная в хроматограф, нм; М — масса образца, г.
Хроматограммы стандарта мочевой кислоты и экстракта образца приведены на рисунке.
Предел обнаружения метода 0,1 мг%, относительное стандартное отклонение 0,07—0,10. Продолжительность анализа 45 мин.
При разработке метода была проведена сравнительная оценка эффективности экстракции мочевой кислоты из зерна и зернопродуктов с помощью воды и раствора U2CO3, при этом не было обнаружено существенных различий в эффективности экстракции мочевой кислоты. Сравнение метода ВЭЖХ с колориметрическим показало, что метод ВЭЖХ более достоверен и имеет высокую воспроизводимость. Достоинствами ВЭЖХ являются быстрота определения и простота метода, возможность прямого определения содержания мочевой кислоты в зерне и зернопродуктах непосредственно после водной экстракции, что делает его пригодным для серийных исследований. С помощью данного метода проведен анализ 400 образцов импортной рисовой крупы, пораженной рисовым долгоносиком, и отечественной рисовой крупы и пшеницы, не пораженных вредителями. Среднее содержание мочевой кислоты в импортной рисовой крупе составило 3,5 мг %, тогда как в отечественной рисовой крупе — менее 0,15 мг %.
Таким образом, нами разработан простой метод определения мочевой кислоты в зерне, и зернопродуктах, пригодный для быстрой диагностики загрязненности последних продуктами жизнедеятельности насекомых.
Литература
1. Ванаг И. ГШамовский Г. Г., Шелпакова О. JI. // Лаб.
дело. — 1986. — № 5. — С. 283—286.
2. Azredine Jh., Odile И. et al. // Clin. Chem.
Vol. 31. — Р. 109—112.
1985.
3. Hausen А. E. // Ibid. — 1981. — Vol. 27. — P. 1455. 5. Pachla L. A., Reynolds D. L. et al.//J. Ass. Off. analyt
4. Kiser E. /., Johnson G. F. // J. Bid. — 1978. — Vol. 21. — Chem. — 1987. — Vol, 70. —№ L,
p. 536—540. Поступила 19.01.89
КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 613.632: f,615.916:546.491-07
А. Г. Аладатов, Н. И. Метиль, Г. Е. Рыбина, Л. А. Кравченко,
С. П. Аладатова 1
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ УРОВНЕЙ СОДЕРЖАНИЯ РТУТИ В БИОСРЕДАХ ОРГАНИЗМА
Научно-производственный коллектив «Сатурн», Краснодар; Донецкий университет
(
Несмотря на значительное улучшение условий труда на производствах, использующих ртуть, проблема профессионального меркуриализма остается по-прежнему актуальной.
Хроническое воздействие сравнительно небольших концентраций ртутных паров вызывает скрыто возникающие изменения в организме, при этом состояние ртутной интоксикации развивается постепенно, зачастую маскируясь обилием неспецифических признаков, что затрудняет диагностику профзаболеваний [3,7].
По существующему положению 2 диагностика ртутной интоксикации основывается на совокупности клинических признаков и определенном количестве ртути в моче.
Однако, по данным [2, 6], между содержанием ртути в моче и выраженностью клинических признаков ртутной интоксикации нет четкой взаимосвязи.
Аналогичные наблюдения описаны [3] при обследовании лиц, работающих постоянно в контакте с ртутью.
Выявленное несоответствие выраженности клинических признаков количеству ртути в моче побудили нас проверить объективность существующего принципа диагностики ртутной интоксикации.
Для этого 176 человек, работающих постоянно в контакте с ртутью, были обследованы по специально разработанной тест-карте, отражающей клинико-лабораторные данные (см. приложение).
В целях оптимизации процесса диагностики ртутной интоксикации у работающих во вредных условиях определяли атомно-абсорбционным способом уровень ртути не только в моче, но и в крови [4-, 5]. Кроме того, цитохимическим способом оценивали содержание катионных белков в нейт-рофилах, характеризующих иммунный статус организма [1].
В итоге проведенного обследования весь контингент был распределен на 4 группы по однородности полученных результатов. 1-ю группу составили 45 обследуемых, которые не предъявляли никаких жалоб; содержание ртути у них составило в моче 5,2=1=0,4 мкг/л, в крови 28,4±1,9 мкг/л, количество катионных белков в нейтрофилах — 198,44=7,3 усл. ед.
Во 2-ю группу вошли 56 обследуемых с жалобами на общую слабость, снижение аппетита, нарушение сна, непостоянные боли в области сердца. Концентрация ртути в моче равнялась 7,3±0,6 мкг/л, в крови — 31,5±2,2 мкг/л, количество катионных белков в нейтрофилах — 172,9 ±8,2 усл. ед.
В 3-ю группу (группу риска) были включены 34 обследуемых с жалобами на общее недомогание, тремор пальцев рук, раздражительность, головные боли, тахикардию. Содержание ртути в моче составило 9,7±0,8 мкг/л, в крови — 46,7±2,3 мкг/л, количество катионных белков в нейтрофилах — 140,3 ±6,1 усл. ед.
1 В работе принимали участие И. А. Шевчук, Л. С. За-гурская, Г. А. Лещева, Е. Ю. Остроухова, С. В. Сергиен-ко, Т. Ф. Земляная.
2 Приказ Минздрава СССР от 19.06.84 «О проведении обязательных предварительных при поступлении на работу и периодических медицинских осмотров трудящихся, подвергающихся воздействию вредных и неблагоприятных условий труда».
В 4-й группе у 41 обследуемого с установленным диагнозом ртутной интоксикации на фоне множества клинических симптомов (встречавшихся в предыдущих группах) наблюдались специфические признаки: ртутный эритизм, повышенное слюноотделение, металлический привкус во рту, гингивит. Концентрация ртути в моче у этих лиц была на уровне 11,3ч=0,9 мкг/л, в крови — 67,3=Ь2,5 мкг/л. Количество катионных белков в нейтрофилах было снижено до 93,6± ±4,2 усл. ед. при норме у здоровых людей 257,4±9,1 усл. ед.
При относительной общности групповых показателей зачастую наблюдались индивидуальные особенности ряда кли-нико-лабораторных показателей в ответ на воздействие ртути. Действительно, тщательный анализ данных тест-карт выявил, что экскреция ртути с мочой зависит от функционального состояния мочевыделительной системы. Из всего контингента обследованных у 58 на фоне схожей клинической симптоматики и при равнозначных показателях ртути в крови экскреция ее с мочой была достоверно (р<.0,002) различной, что затрудняло определение состояния «ртутьно-сительства». У 39 человек анамнез был отягощен неврологическими заболеваниями, либо таковые были выявлены при дополнительном обследовании..
Для объективности процесса диагностики ртутной интоксикации нами были определены индексы корреляции. С этой целью выраженность клинических признаков у обследованных 4-й группы была сопоставлена с концентрацией ртути в крови и моче отдельно: индекс корреляции (г) для крови 0,83, для мочи 0,37.
Полученные результаты указывают на высокую информативность показателей содержания ртути в крови, поэтому, определяя состояние «ртутьносительства» в процессе диагностики ртутной интоксикации, следует учитывать уровень ртути у обследуемых в крови, а не в моче. Таким образом, существующий принцип определения состояния «ртутьносительства» по количеству элемента, выделяемого с мочой, нельзя считать достаточно объективным.
Однако количественное содержание ртути в крови даже в сочетании с клиническим симптомокомплексом недостаточно полно характеризует состояние организма. Комплексные гигиенические и иммунологические исследования наиболее объективно отражают состояние организма, подвергшегося действию ртути по существующей зависимости доза — время — эффект.
В своей работе, определяли количество катионных белков нейтрофилов, мы получили результаты, представляющие важную информацию для оценки состояния организма.
Несмотря на то что ртуть не относится к ядам, специфическим действием которых является нарушение белкового синтеза, влияние ее на этот важный процесс клеточного обмена весьма существенно [8—10]. Так, сравнивая количество катионных белков в нейтрофилах обследованных при различных патологических состояниях ртутной этиологии с их исходным физиологическим уровнем у здоровых людей (259 усл. ед.), мы установили достоверное снижение этого показателя (рС0,001) во всех наблюдаемых группах, наиболее существенное в 4-й группе с выраженной ртутной интоксикацией. Принимая во внимание антибактериальные, антивирусные свойства катионных белков, можно понять, почему обследуемые 4-й группы чаще подвержены вирус-но-бактериальным инфекциям,
