CC BY
38
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^OHaibHoro ymBepcurery BeTepHHapHOi MegnuUHH Ta 6i0TexH0iroriH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7405
ISSN 2519-2698 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:615.9:639. 3.091
Визначення napaMeTpiB гостро'1 токсичностi препарату «Бровермектин-гранулят» на однорiчках коропа
Ю.В. Лобойко, М.М. Данко, О.В. Крушельницька, С.1. Кравець
llobojko@ukr.net
Львiвський нацюнальнийунiверситет ветеринарногмедицини та бютехнологш iменi С.З. Гжицького,
вул. Пекарська, 50, м. Львiв, 79010, Укра'та
У статт1 представлено результати дослгджень щодо визначення параметргв гострог токсичностг протипаразитар-ного препарату з групи макроциклгчних лактотв. Матергалом для дослгдження гострог токсичностг були одноргчки любгн-ського лускатого коропа. У дослгдг використовували препарат «Бровермектин-гранулят» (розробка НВФ «Бровафарма» сершного виробництва; 1 г препарату мгстить: активно дгючу речовину (АДР) гвермектин - 3,5 мг; токоферол ацетат -20 мг). Введення препарату «Бровермектин-гранулят» здшснювали перорально за допомогою зонду в переднш вгддгл кишечника риб. Препарат вводили рибам у форм1 гомогенног суспензгг, виготовленог на 1% розчинг крохмалу гндивгдуально, у дозах 1000, 4000, 8000, 12000, 16000 та 20000 мг/кг м.т. Для встановлення параметргв гострог токсичностг визначали загальний стан г загибель риб; за дозою препарату «Бровермектин-гранулят» вираховували ОЬ50 за методами Г. Кербера, Г. Першина, найменших квадратгв для пробгт-аналгзу кривих летальностг за В.Б. Прозоровським, способом трьох точок за Б.М. Штабським. На даному етат дослгджень було виявлено смертельну (ОЬ10[) та максимально переносиму (ОЬд) дози препарату «Бровермектин-гранулят» для одноргчок коропа. Урезультатг проведених дослгджень встановлено, що 100% загибель риб настае за дози препарату 20000 мг/кг (ОЬ10и), а за введення препарату в дозг 4000 мг/кг (ОЬ0) встановлено виживання 100% риб. Встановлено, що величини середньосмертельног дози препарату «Бровермектин-гранулят» для риб, незалежно вгд методгв тдрахунюв, в основному ствпадали г становили 10932,8-11200 мг/кг маси тгла для одноргчок коропа. Отже, препарат «Бровермектин-гранулят» за перорального введення рибам вгдноситься до 4-го класу токсичностг -малотоксичш речовини.
Ключовi слова: короп, макроциклгчш лактони, бровермектин-гранулят, гостра токсичшсть.
Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,
ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79010, Украина
В статье представлены результаты исследований по определению параметров острой токсичности противопарази-тарного препарата из группы макроциклических лактонов. Материалом для исследования острой токсичности были одногодки любинского чешуйчатого карпа. В опыте использовали препарат «Бровермектин-гранулят» (разработка НПФ «Бро-вафарма» серийного производства; 1 г препарата содержит активно действующее вещество (АДВ) ивермектин - 3,5 мг; токоферол ацетат - 20 мг). Введение препарата «Бровермектин-гранулят» осуществляли перорально с помощью зонда в передний отдел кишечника рыб. Препарат вводили рыбам в форме гомогенной суспензии, изготовленной на 1 % растворе крахмала индивидуально, в дозах 1000, 4000, 8000, 12000, 16000 и 20000 мг/кг. Для установления острой токсичности определяли общее состояние и гибель рыб; по дозе препарата «Бровермектин-гранулят» вычисляли ОЬ50 по методам Г. Кербе-ра, Г. Першина, наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности по В.Б. Прозоровскому, способом трех
Citation:
Loboiko, Yu.V., Danko, M.M., Krushelnytska, O.V., Kravets, S.I. (2017). Determination of the parameters of acute toxicity of «Brovermectin-granulate» on earlings carp. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 19(74), 20-23.
Определение параметров острой токсичности препарата «Бровермектин-гранулят» на одногодках карпа
Ю.В. Лобойко, Н.Н. Данко, Е.В. Крушельницкая, С.И. Кравец
llobojko@ukr.net
точек по Б.М. Штабскому.
На данном этапе исследований определены смертельная (DL10q) и максимально переносимая (DL0) дозы препарата «Бровермектин-гранулят» для одногодок карпа. В результате проведенных исследований установлено, что 100% гибель рыб наступает от дозы 20000 мг/кг (DL100), а при введении препарата в дозе 4000 мг/кг (DL0) установлено выживаемость 100% рыб.
Установлено, что величины среднесмертельной дозы препарата «Бровермектин-гранулят», независимо от методов расчетов, в основном совпадали и составляли 10932,8-11200 мг/кг массы тела для одногодок карпа. Следовательно, препарат «Бровермектин-гранулят» при пероральном введении рыбам относится к 4-му классу токсичности - малотоксичные вещества.
Ключевые слова: карп, макроциклические лактоны, бровермектин-гранулят, острая токсичность.
Determination of the parameters of acute toxicity of «Brovermectin-granulate» on earlings carp
Yu.V. Loboiko, М.М. Danko, O.V. Krushelnytska, S.I. Kravets
llobojko@ukr.net
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyi,
Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine
The paper presents the results of research to determine the parameters of acute toxicity of «Brovermectin-granulate». The material for the study of acute toxicity were of carp earlings. In experiment used drug «Brovermectin-granulate» (1 g of the drug contains: active actiion substance ivermectin - 3.5 mg, tocopherol acetate - 20 mg). The introduction of the drug was carried out orally using a probe in anterior intestine offish. The drug was administered to fish in the form of a homogeneous suspension produced 1 % starch solution individually, in doses of1000, 4000, 8000, 12000, 16000 and 20000 mg/kg of body weight. For settings acute toxicity determined the general condition and death offish; for a dose of the drug (DL50) calculated by methods G. Kerber, H. Pershyn, least squares analysis ofprobit mortality curves for V.B. Prozorovskyj, means three points for B.M. Shtabskyj. At this stage of research it was found lethal (DL100) and maximum tolerated (DL0) dose of «Brovermectin-granulate» for earlings carp. As a result of studies found that 100% death of fish following the dose of20000 mg/kg (DL100), and for the drug at a dose of4000 mg/kg (DL0) set to survival of 100% fish. Established that the value of average lethal dose of «Brovermectin-granulate» for fish regardless of the method of calculation mainly coincided and were 10932,8-11200 mg/kg for earlings carp. Thus, the drug «Brovermectin-granulate» for oral administration to fish belongs to grade 4 toxicity - low toxic substances.
Keywords: carp, macrocyclic lactones, brovermectin-granulate, acute toxicity
Вступ
Бшьшють препаралв, яш застосовуються у вете-ринарнш медициш для корекци р1зних патолопчних сташв, не завжди ввдповщають сучасним вимогам, осшльки е токсичними, мутагенними, чи володшть шшими поб1чними ефектами. У зв'язку з цим, актуа-льним е пошук i створення нових та вивчення юную-чих нетоксичних препарапв бюлопчного походження для використання у рибнищга.
На даний час для боротьби проти ектопаразипв риб застосовують велику шльшсть протипаразитар-них засобiв, однак бшьшють з них е малоефективни-ми або високо токсичними (Davydov et al., 2009).
Вщносно недавно, поряд iз синтетичними третро-!дами i похвдними бензимвдазолу, для практики вете-ринарно! iхтiопатологil були запропоноваш макроци-ктчш лактони. З останшх найбшьш вивчений iверме-ктин у рiзних лжарських формах. 1вермектин - це не однорщна сполука, а сумш двох подiбних за структурою речовин Н2В1а (> 80%) та Н2В1в (< 20%). Вш вщзначаеться меншою токсичнютю, кращою розчин-шстю та б№шою стаб№нютю i володiе широким спектром та високою штенсившстю протипаразитар-но! ди (нематодоцидна, шсектицидна, акарицидна активносп). Однак, застосування iвермектинiв в iхтi-опатологи проводиться вкрай рщко, осшльки, за да-ними деяких авторiв, iвермектин, що надходить у зовшшне середовище, довго збертае актившсть, вш
може бути токсичним для комах та водних безхребет-них тварин. У випадку локального використання iве-рмектину токсичшсть залежить ввд шлькосп тварин, дози препарату, перюду i повторюваностi обробки (Samuelsen, 2010; Veldhoen, 2012; Horsberg, 2012).
Головним завданням доклiнiчноl оцiнки безпеки лшв перед початком клiнiчних випробувань е вивчення в дослвдах in vivo потенцшно! токсичностi (Kocyumbas et al., 2006; Yus'kiv and Berezovs'ky'j, 2008). На основi iвермектину був створений протипа-разитарний препарат «Бровермектин-гранулят», який широко застосовують у твариннищта, однак його вплив на оргашзм риб досi не з'ясований.
Метою експерименту було досл1дження класу то-ксичностi лiкарського засобу «Бровермектин-гранулят» за його введення однорiчкам коропа.
MaTepia™ i методи дослiджень
Дослвди з гостро! токсичностi виконували на од-норiчках коропа в акварiумах емнiстю 40 дм3, за-повнених водою зi ставу, за дворазово! повторюва-ностi. Досл1дження виконували на 60 рибах з се-редньою iхтiомасою 42,0 ± 3,0 г, за температури води 21,0 ± 2,0 оС, рН - 7,6 i вмiсту O2 - 6,0 ± 6,5 мг/л, де на кожну дозу було використано по 10 риб, яких адапту-вали впродовж 14 дiб, протягом 24 годин до застосування препарату !х не годували. Оскшьки препарат «Бровермектин-гранулят» у водi е слаборозчинний, то
його вводили рибам у формi гомогенно! суспензп, виготовлено! на 1% розчинi крохмалу iндивiдуально, у дозах 1000, 4000, 8000, 12000, 16000 та 20000 мг/кг маси тша. Шсля введення препарату за рибами проводили спостереження упродовж 96 годин, враховуючи 1х загальний стан, рухливють i реакцiю.
Для визначення гостро! токсичностi визначали загальний стан i загибель риб; за дозою препарату «Бровермектин-гранулят», вираховували DL50 за методами Г. Кербера, Г. Першина, найменших квадратiв для пробiт-аналiзу кривих летальностi за В.Б. Прозоровским, способом трьох точок за Б.М. Штабським (ProzorovskГj, 1962; ЗМаЬБкБ^ ег а1., 1980; Prozorovskfj, 1998).
Результати та \х обговорення
При застосуванш препарату «Бровермектин-гранулят» у дозi вiд 1000 до 4000 мг/кг маси тша не виявлено загибелi однорiчок коропа протягом 96 годин. Пiсля введення препарату рибам не вшзначали суттевих змiн у 1х поведiнцi. Риби активно плавали, видшення iвермектину (АДР препарату) з фекалiями ввдбувалося упродовж 24 годин (фекали бiлого кольо-ру, щшьно! консистенцп, сформованi).
За вищих доз препарату (8000-16000 мг/кг), вщмь чали зниження активностi та загибель окремих риб за 24-48 год. За збшьшення дози до 20000 мг/кг встано-влено, що риби гинули, починаючи з перших годин шсля його введення. Кттчт симптоми загибелi вш препарату в однорiчок коропа виявлялися (за великих доз) у прискоренш дихання, порушеннi координаци руху, опусканш на дно акварiуму з наступною заги-беллю. За зменшення дози вiдмiчали значне тривале пригнiчення риб з наступним летальним к1нцем. Слад зазначити, що за повторного проведения дослщжень були отриманi аиалогiчнi результати.
Отже, на даному етапi дослщжень було виявлено смертельну (DLl00) та максимально переносиму (DL0) дози препарату «Бровермектин-гранулят» в однорiчок коропа. За результатами проведених дослвджень вста-новлено, що 100% загибель риб настае ввд дози препарату 20000 мг/кг (DLl00), а за введення препарату в дозi 4000 мг/кг (DL0) встановлено виживання 100% риб (табл. 1).
Таблиця 1
Показники смертельно'1 (DL1oo) та максимально переносимо! (DL0) доз препарату «Бровермектин-
Щдрахунки середньосмертельно! дози препарату «Бровермектин-гранулят» проводили за р1зними методами. DL50 препарату на однор1чках коропа за обчислення методами Г. Кербера та Г. Першина становила 11200 мг/кг, а у перерахунку на дшчу речовину - 1вермектин - 39,2 мг/кг.
Параметри середньосмертельно1 дози препарату «Бровермектин-гранулят на однор1чках коропа за обчислення методом В. Б. Прозоровського становили: DL50 = 11158,582 (8612,485 - 13704,679) мг/кг, у перерахунку на дшчу речовину - 1вермектин: DL50 = 39,055037 (30,143697 - 47,966376) мг/кг. Параметри середньосмертельно1 дози препарату «Бровермектин-гранулят» на однор1чках коропа за внутршньошлункового введення за обчислення методом Б. М. Штабського становили:
DL50 = 10932,80 (8036,20 - 13829,4) мг/кг, у перерахунку на дшчу речовину - 1вермектин: DL50 = 38,2648 (28,1267 - 48,4029) мг/кг. Визначет та вирахуваш середньосмертельш дози препарату «Бровермектин-гранулят» для однор1чок коропа у перерахунку на готову лжарську форму та дшчу речовину - 1вермектин подан у таблиц 2.
Таблиця 2
Величини середньосмертельних доз препарату
«Бровермектин-гранулят» для однорiчок коропа
Методи тдрахунюв за: Середньосмертельна доза (DL50) в мг/кг
Одщ^чки коропа (n = 50)
Г. Кербером 11200 39,2
Г. Першиним 11200 39,2
В. Б. Прозоровським 11158,582 (8612,48513704,679) 39,055037 (30,14369747,966376)
Б. М. Штабським 10932,80 (8036,20 -13829,4) 38,2648 (28,1267 -48,4029)
Зазначимо, якщо за дослвдження на токсичшсть новостворених ветеринарних препарапв середньос-мертельш дози, що вираховувались р1зними методами, зб1гаються, тод1 досл1д проведено правильно, а препарат належить до ввдповшного класу токсичносп. У нашому випадку величини середньосмертельно! дози препарату «Бровермектин-гранулят», незалежно вш метод1в пвдрахуншв, в основному ствпадали i становили 10932,80-11200 мг/кг маси тша для однорь чок коропа.
Висновки
За результатами проведених дослщжень встановлено, що 100% загибель однорiчок коропа настае за дози препарату 20000 мг/кг (DLi00), а за введення препарату в дозi 4000 мг/кг (DL0) встановлено виживання 100% риб.
Величини середньосмертельно1 дози препарату «Бровермектин-гранулят», незалежно вщ методiв пiдрахункiв, в основному ствпадали i становили 10932,8-11200,0 мг/кг маси тша для однорiчок коро-па. Препарат «Бровермектин-гранулят» за перораль-ного введення рибам вщноситься до 4-го класу токсичносп - малотоксичнi речовини.
Перспективи подальших дослгджень. У зв'язку з одержаними результатами, виникае потреба дослщити хрошчну токсичшсть препарату «Бровермектин-гранулят» на однорiчках коропа.
гранулят» для однорiчок коропа, мг/кг (n = 60)
Об'ект дослщжень Бровермектин-гранулят У перерахунку на дтачу речовину
DL100 DLq DL100 DL0
Одщ^чки коропа 20000 4000 70 14
EiS^iorpa^inm nocH^aHHH
Davydov, O.N., Abramov, A.V., Kurovskaya, L.Ya. (2009). By'ology'cheski'e preparaty i' xi'mi'cheski'e veshhestva v akvakuFture. K. : Logos (in Russian). Samuelsen, O.B. (2010). A single-dose pharmacokinetic study of emamectin benzoate in cod, Gadus morhua L., held in sea water at 9° C. J. Fish Dis. 33(2), 137142.
Veldhoen, N. (2012). Biological effects of the anti-parasitic chemotherapeutant emamectin benzoate on a non-target crustacean, the spot prawn (Pandalus platyceros Brandt, 1851) under laboratory conditions. Aq. Tox. 108, 94-105. Horsberg, T.E. (2012). Avermectin use in aquaculture.
Curr. Pharm. Biotechnol. 13(6), 1095-1102. Kocyumbas, I.Ya., Maly'k, O.G., Paterega, I.P. (2006). Doklinichni doslidzhennya vetery'narny'x likars'ky'x zasobiv. L'viv: Triada plyus (in Ukrainian).
Yus'kiv, I.D., Berezovs'ky'j, A.V. (2008). Ekspery'mental'ne vy'znachennya gostroyi toksy'chnosti anty'gel'mintnogo preparatu «Ry'bolik». Vetery'narna medy'cy'na. 90, 455-460 (in Ukrainian).
Shtabsks'j, B.M., Gzhegoczki'j, M.Y'., Gzhegoczki'j, M.R. (1980). K metodi'ke opredeleni'ya srednesmertel'nyx doz i' koncentracy'j xi'mi'cheski'x veshhestv. Gi'gi'ena i' sani'tari'ya. 10, 49-51 (in Russian).
Prozorovski'j, V.B. (1962). I'spol'zovani'e metoda nai'men'shy'x kvadratov dlya probi't-anali'za kri'veh letal'nosti'. Farmakologi'ya i' toksi'kologi'ya. 1, 115119 (in Russian).
Prozorovski'j, V.B. (1998). Tabli'chnyj ekspress-metod opredeleni'ya sredni'x effekti'vnyh mer vozdejstvi'ya na bi'ologi'cheski'e ob'ekty. Toksi'kol. vestn. 1, 2832 (in Russian).
Cmammn nadiumm do peda^iï 28.02.2017
