CC BY
14References
1. Baktygaliyeva A.T. Productive qualities and biological features of young growth of the Kazakh white-headed breed of different genotypes: the abstract of the thesis for a degree of candidate of science / Baktygaliyev, Asemgul Temirkhanovna, Orenburg, - 2017. - 25 pages - the Text: direct
2. Influence of trial and error methods of the meat cattle on increase in production efficiency of beef / O.A. Sutorma, D.A. Randelin, V.V. Randelina-Text: direct // Innovative ways in development of resource-saving production technologies and processings of agricultural products: mat. междунар. науч. - практ. конф. - Volgograd: Politekhnik, - 2010.-№ 2 - Page 102-105.
3. Influence of technology of contents on natural resistance of an organism of bull-calves/accusative / V.P. Kovalenko, E.A. Azhmuldinov, K.S. Kutbangaliyev - the Text: direct // Messenger of meat cattle breeding. - 2003. - Issue 56. - Page 284-288.
4. Humoral factors of natural immunity at the cattle of meat breeds / Kurtsev N.V., Britvina E.I. - Text: direct // Problems of meat cattle breeding. Тр. VNIIMS, - 1978. - t.23. - Part 1. - Page 141-144.
5. Natural resistance of animals in the conditions of industrial technology / G. I. Belkov, N.V. Kurtsev, V.P. Sidorova, etc. - the Text: direct // Theses докл. науч. - практ. конф. - M, -1983. - Page 24.
6. Natural resistance of animals at various types of feeding and Contents / Plyashchenko S.I., Sidorov V.T. - Text: direct//Veterinary science, - 1983.-№ 2. - Page 22-25.
7. Dependence of natural resistance from Conditions of Keeping/Gorlov I.F. - Text: direct//Sb. тр. VNITI of a MMS and PPZh. Volgograd, - 1996. - Page 10-15. - Text: direct
8. Science/Matara H.S. Productive and biological features of young growth of mondolongsky breed of different gender and age groups: the abstract of the thesis for a scientific degree competition Candidate of Science/Matara Hardzhinder Singh, Orenburg, - 2017.-19 pages -the Text: direct
9. Methodological principles of studying of adaptation of farm animals / Smirnov V.S -Text: direct//Zootechnics. - 1995. - No. 3. - Page 14-17.
10. Some interior indicators of young growth of cattle depending on Contents / Kutbangaliyev technology of K. S. - the Text: direct//Prospects of development of meat cattle breeding / Mat. междунар. науч. - практ. конф., devoted 70 anniversaries ВНИИМСа. Orenburg, -2000. - Page 65-66.
11. Randelin D.A. Natural resistance of an organism of bull-calves of meat breeds//the-innovative directions in development of agricultural production: mat. науч. - практ. конф. / VNIIMS, Russian Academy of Agrarian Sciences. Orenburg, - 2012. - Page 60-61. - Text: direct
12. Sidorov, V.T. Natural immunity and its age and pedigree differences / Minsk: A harvest, - 1972. - 23 pages - the Text: direct
Ethology - fundamentals of technology of meat cattle breeding / Cherekayev A.V. - the Text: direct//Zootechnics. - 1995.-No. 6. - Page 16-20.
УДК 619:615.9:599.323.4 DOI 10.33632/1998-698Х.2020-5-18-26
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТРОЙ И ХРОНИЧЕСКОЙ ТОКСИЧНОСТИ АНТИДОТА РР-2 НА ГИДРОБИОНТАХ
Асланов Р.М. - доктор биологических наук, профессор, Макаева А.Р. - кандидат биологических наук, Макаева В.И. Альмитова Л.И.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», (420075, г. Казань, Научный городок-2, e-mail: vnivi@mail.ru)
Фосфорорганические пестициды занимают одно из лидирующих мест среди препаратов, используемых в сельском хозяйстве. Доказана их высокая эффективность в защите животных и растений. ФОП с успехом используются в сельскохозяйственной отрасли в качестве инсектицидов и акарицидов. При этом, несмотря на доказанную целесообразность использования в народном хозяйстве, ФОП отличает высокая опасность для человека и животных. Существующая в настоящее время ситуация с лечением отравлений фосфорорганическими пестицидами влечет необходимость разработки новых отечественных эффективных антидотов, одним из основных компонентов которых являются холинолитики. В статье представлены результаты экспериментальных исследований, целью которых было изучение параметров острой и хронической токсичности нового отечественного антидота РР-2, синтезированного в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Опыты проведены на прудовиках и рыбах гуппи. Для этого животных помещали в растворы антидота. Оценивали выживаемость, поведение и массу особей. По результатам экспериментов установлено, что острая токсичность антидота для прудовиков составляет 150,00 ± 13,8 мг/дм3, для рыб - 125,99 ± 12,82 мг/дм3.
Ключевые слова: антидот, фосфорорганические пестициды, токсичность, гидробионты, отравление.
Как известно, изучение и защита среды обитания человека и животных являются важнейшими направлениями научных исследований.
В настоящее время окружающая среда сталкивается с множеством химических соединений, широко применяемых в сельском хозяйстве, промышленности, медицине и быту. Рост химической промышленности во всех странах приводит к постоянному увеличению частоты контактов человека и животных с чужеродными ксенобиотиками. Потенциальная опасность многих химических соединений отягощается тем обстоятельством, что предельно допустимые дозы (концентрации) для них не существует, т.е. порог действия практически отсутствует.
Особое место среди ксенобиотиков, присутствующих в биосфере, по праву отводится пестицидам. Если попадание в окружающую среду разнообразных по структуре и биологической активности химических соединений является, как правило, незапланированным и крайне нежелательным, то внесение в среду пестицидов, является одним из этапов агротехнической деятельности человека
[4].
В настоящий момент в агропромышленном секторе фосфорорганические пестициды (ФОП) являются одними из наиболее часто применяемых средств. Доказана их высокая эффективность в защите животных и растений. Таким образом, ФОП с успехом используются в сельскохозяйственной отрасли в качестве инсектицидов и акарицидов. Также данные препараты нередко применяют в борьбе с наземными моллюсками, личинками вредных насекомых, грибковыми болезнями растений, сорными травами и другой нежелательной растительностью. При этом, несмотря на доказанную целесообразность использования в народном хозяйстве, ФОП отличает высокая опасность для человека и животных, что обязывает к соблюдению необходимых мер предосторожности при их применении [1, 9]. Существующая в настоящее время ситуация с лечением отравлений ФОП влечет необходимость разработки новых отечественных эффективных антидотов, одним из основных компонентов которых являются холинолитики.
В ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» был синтезирован новый отечественный техно-
логичный эффективный холинолитик (условное обозначение Р-1) и на его основе сконструирован антидот (условное обозначение РР-2). Для практического использования антидота необходимо изучить его свойства (острую и хроническую токсичность и др.). Большинство апробированных методик установления степени токсичности вещества предполагают участие при этом теплокровных животных. В то же время длительность и стоимость данных тестов, этические аспекты использования животных ставят под сомнение обоснованность классических методов. Все чаще встает вопрос применения новых путей и моделей в токсикологии.
Решение данных задач видится в использовании беспозвоночных, как альтернативных в экспериментах с высшими
животными [3, 7, 8].
В связи с вышеизложенным, целью исследования являлось - определение острой и хронической токсичности антидота на прудовиках и рыбах.
Материал и методы. Острый и хронический опыты на гидробионтах проводили по [6]. Для острого опыта на прудовиках использовали по 4 одноразмерных моллюска, которых помещали в емкости 2,5 дм3 с раствором антидота. Острый опыт, продолжительностью 96 часов, проводили при нескольких концентрациях в трех повторностях каждая. Прудовиков в опыте не кормили. Оценивали выживаемость и поведение моллюсков. С целью вычисления концентрации, приводящей к 50%-ной летальности особей, применяли пробит - анализ и следующие формулы [2]:
ь =
N N N N
г2г ' X 2г Хг2г
г =1 г =1 г=1 г=1
X ' X ^ - X Хг2г ■ X У.
N
N
X ^ -X Х2г - X х**
г =1 г =1
-Л
С N \2
Х^;
V г=1 У
(1)
N
ь=
1=1
N
X
1=1
(2)
где:
х; - 1-е значение концентрации вещества в мг/дм3;
У! - 1-е значение пробита эффекта, соответствующего определенной концентрации х;;
- 1-е значение весового коэффициента пробита, соответствующего у;; N - число опытов (количество концентраций).
X=Y—* А
где:
X - соответствующее значение летальной концентрации; Y - значение пробита, соответствующее этой концентрации.
Для хронического опыта на прудовиках использовали по 4 моллюска одного размера, которых помещали в емкости 2,5 дм3 с раствором антидота. Хронический опыт проводили в двух повторностях при наибольшей недействующей концентрации, установленной в остром опыте.
Опыт проводился в течение 30 суток. При этом учитывались поведение и выживаемость прудовиков. Исследовались масса моллюсков, мутность их среды обитания во время опыта, интенсивность питания и кислородопотребление. Оценка проводилась на первые, десятые и тридцатые сутки.
Поскольку рыбы зачастую являются конечными звеньями трофических цепей, логически правильно провести следующие опыты именно на рыбах [5].
Для острых опытов на рыбах использовали 1 -2 суточных мальков гуппи. Рыб по 6 особей помещали в емкости с раствором антидота РР-2. Острый опыт продолжительностью 96 часов проводили при нескольких концентрациях в трех повторностях каждая. Рыб в опыте не кормили. Учитывали выживаемость и поведение гуппи. Расчет ЛК 50 производили с помощью формул (1)-(3).
В хронических опытах на гуппи учитывали влияние концентраций 62,0 мг/дм3 и 31,0 мг/дм3, равных У ЛК50 и ХА ЛК50, установленных в острых опытах. Опыты выполняли в трёх повторностях. По 10 мальков возрастом 1 сутки содержали в растворах РР-2 в течение 90 сут. Рыбы контрольной группы содержались в емкостях с отстоянной водопроводной водой. На 1, 10, 30, 60, 90 сут. от начала опытов регистрировали выживаемость, поведение, изменение массы тела и сачковую пробу.
Результаты исследований. Результаты исследования острой токсичности антидота РР-2 на прудовиках представлены в таблице 1.
Испытуемые моллюски, находившиеся в растворе РР - 2 с концентрацией 100 мг/дм3, существенно не отличались в поведении - для них были характерны: активное передвижение, незамедлительная реакция на раздражители. Иная картина наблюдалась в емкостях с концентрацией антидота 120 мг/дм3. Спустя сутки от начала наблюдения прудовики концентрировались у самой кромки воды, таким образом, пытались выбраться из токсичного раствора. В концентрации 140 - 160 мг/дм3 всего через 70 часов от начала эксперимента 50% прудовиков погибли. У выживших прудовиков отмечали отек головы. В конце эксперимента наблюдалось угнетение испытуемых особей, слабая реакция на раздражители, скопление моллюсков на дне. Прудовики из раствора антидота концентрации 180 мг/дм3 спустя 25 минут значительно возбуждались, концентрировались на поверхности. По прошествии суток -хаотично располагались на дне, были неподвижны, наблюдалась пастозность головной части. По истечении двух суток эксперимента погибли 3 прудовика. Отек головы погибших моллюсков вызывал увеличение ее размеров.
В концентрации антидота 200 мг/дм3 100% - ная летальность наблюдалась уже через сутки от начала опыта. Острая токсичность антидота РР-2 для прудовиков составляет: ЛК16 = 110,96 мг/дм3, ЛК50 = 150,00 ± 13,8 мг/дм3, ЛК84 = 189,04 мг/дм3. Расчет доверительных границ ЛК50 при Р < 0,05 позволил дать следующую интер-вальную оценку: ЛК50 = 150,00 (136,2 - 163,8) мг/дм3. Данные из хронического опыта на моллюсках показаны в таблице 2.
Таблица 1 - Результаты исследования острой токсичности антидота РР-2 на прудовиках
Группа Концентрация, мг/дм3 (Х) Количество животных Животные пал/выжил Величина эффекта в пробитах Весовой коэф. пробита (2)
1 100 4 0 3,47 2,00
2 120 4 1 4,33 4,10
3 140 4 2 5,00 5,00
4 160 4 2 5,00 5,00
5 180 4 3 5,67 4,10
6 200 4 4 6,53 2,00
Хронический опыт на прудовиках проводили в растворе РР - 2 с концентрацией 100 мг/дм3. Поскольку прудовики опытной группы выделяли больше слизи мутность опытного раствора была больше, чем в контрольной. Активность в питании в экспериментальной группе падала с течением времени. В контрольной группе интенсивность потребления корма была выше. Моллюски экспериментальной группы отличались более слабым кислородо-потреблением. Это говорит о снижении энергообмена под влиянием РР - 2.
По прошествии 10 суток наблюдений у всех особей наблюдалась гиподинамия. В основном, моллюски располагались наверху, у самой кромки. Прирост массы прудовиков по окончании эксперимента составил 0,3547 г, который был заметно ниже, чем у особей, интактной группы - 0,6932 г. Поскольку рыбы зачастую являются конечными звеньями трофических цепей, логически правильно провести следующие опыты именно на рыбах. Ниже, в таблице 3, представлены данные, полученные в ходе острого опыта с мальками.
Таблица 2 - Результаты хронического опыта на прудовиках
Группа Сроки исследования, сут. Длина, мм Ширина, мм Масса, г Мутность раствора, ЕМФ Суточное потребление корма одним прудовиком, г/сут. Потребление кислорода, мг/дм3 •ч
Контроль 1 45±0,71 25±0,71 4,3575 ± 0,0004 0 - 0,0527 ± 0,0001
10 45±0,71 25±0,71 4,2228 ± 0,0001 10,177 ± 0,00489 0,357 ± 0,0100 0,0518 ± 0,0005
30 46±0,71 26±0,71 5,0507 ± 0,0004 17,756 ± 0,0685 0,376 ± 0,0007 0,0514 ± 0,0007
РР-2 1 40±1,41 22±1,41 4,3607 ± 0,0004 0 - 0,0327 ± 0,0004
10 40±1,41 23±1,41 4,5339 ± 0,0004 14,5875 ± 0,0004 0,2723 ± 0,0004 0,0211 ± 0,0001
30 41±1,41 24±1,41 4,7154 ± 0,0004 92,0171 ± 0,0004 0,2647 ± 0,0004 0,0107 ± 0,0001
Таблица 3 - Результаты исследования токсичности антидота РР - 2 при исследованиях на
гуппи
Группа Концентрация, мг/дм3 (Х) Количество животных Количество павших животных Величина эффекта в пробитах Весовой коэф. пробита (2)
1 60 6 0 3,27 1,6
2 80 6 1 4,03 3,5
3 100 6 3 5 5
4 120 6 3 5 5
5 140 6 3 5 5
6 160 6 4 5,43 4,6
7 180 6 5 5,97 3,5
8 200 6 6 6,73 1,6
Мальки, помещенные в раствор с концентрацией 60 мг/дм3 вели себя активно, свободно перемещались по всей емкости. У них не регистрировали существенных изменений. В растворе с содержанием антидота 80 мг/дм3 наблюдалась гибель одной особи через 85 часов с момента начала эксперимента. Мальки в растворах с массовой долей антидота 100-140 мг/дм3 отличались: ослабленностью, нахождением в верхней части емкости, неподвижностью в определенные периоды. Через 90 часов опыта погибли 50% рыб. Рыбы в растворах с содержанием антидота 160-200 мг/дм3 к окончанию первых суток становились подавленными. На некоторое время мальки переворачивались брюхом кверху. В таком перевернутом состоянии перемещались, на какое-то время замирали, практически не отвечали на раздражения. Падежу предшествовало опускание рыб вниз емкости.
При концентрации 200 мг/дм3 через 40 - 46 часа от начала опытов наблюдалась 100% гибель рыб.
Острая токсичность антидота РР - 2 для рыб составляет: ЛК^ = 71,59 мг/дм3, ЛК50 = 125,99 ± 12,82 мг/дм3, ЛКМ = 180,38 мг/дм3. Расчет доверительных границ ЛК50 при Р<0,05 позволил дать следующую интервальную оценку: ЛК50 = 125,99 (113,17 ^ 138,81) мг/дм3.
Результаты хронического опыта представлены в таблице 4. В интактной группе во время всего эксперимента мальки были активны, перемещались по всей емкости, энергично заглатывали корм.
Сачковая проба показала
положительную динамику. Это говорит об увеличении резервной силы особей. Прирост массы гуппи составил 24,3 мг.
Гуппи в растворе с концентрацией РР - 2 31,0 мг/дм3 плавали по всей емкости, корм заглатывали у поверхности. Однако с течением опыта активность особей снижалась. К окончанию эксперимента мальки все больше времени проводили на дне. Отмечалось кратковременное замирание рыб, но при прикосновении сачком обездвиженность на время исчезала, мальки отплывали. Падеж наблюдался на 48, 51, 67, 73 сут с момента начала наблюдения.
По сравнению с предыдущей концентрацией, в растворе с содержанием РР - 2 62 мг/дм3, мальки были более подавлены. Значения сачковой пробы уменьшались и были ниже, по сравнению с раствором антидота 31 мг/дм3 и интактной группой. На 8 сут. зарегистрировали гибель одной рыбы, на 29 сут. - 2 рыб, с 80 по 87 сут. - еще трех рыб. К 13 сут. рыбы чаще опускались на дно, стали вялыми, корм потребляли в толще воды либо, когда он оседал на дно емкости. Прирост массы мальков в растворе с содержанием РР - 2 31,0 мг/дм3 составлял 6,1 мг, а в растворе 62 мг/дм3 был 4,5 мг.
Заключение. Экспериментальным путем был сконструирован новый отечественный эффективный, технологичный антидот ФОП. Изучена его острая и хроническая токсичность на прудовиках и рыбах. ЛК50 антидота РР - 2 для прудовиков составляет 150,00 мг/дм3, для рыб - 125,99 мг/дм3.
Таблица 4 - Результаты хронической затравки гуппи препаратом РР - 2
Срок (сутки) Контроль РР - 2
62 мг/дм3 31 мг/дм3
Животные 10,00 ± 0,00 10,00 ± 0,00 10,00 ± 0,00
1 Масса 4,6 ± 0,4 4,5 ± 0,4 4,4 ± 0,4
Сачковая проба 48,95 ± 0,04 43,40 ± 0,28 45,53 ± 0,31
Животные 10,00 ± 0,00 9,00 ± 0,41 10,00 ± 0,00
10 Масса 6,3 ± 0,2 5,3 ± 0,1 5,7 ± 0,1
Сачковая проба 50,80 ± 1,41 32,73 ± 0,54 39,37 ± 0,41
Животные 10,00 ± 0,00 7,00 ± 0,41 10,00 ± 0,00
30 Масса 13,8 ± 0,4 6,5 ± 0,4 6,6 ± 0,4
Сачковая проба 57,57 ± 0,84 30,00 ± 1,41 34,73 ± 0,36
Животные 10,00 ± 0,00 7,00 ± 0,00 8,00 ± 0,71
60 Масса 15,9 ± 0,4 7,9 ± 0,4 8,2 ± 0,4
Сачковая проба 59,43 ± 0,72 27,68 ± 1,41 40,37 ± 0,41
Животные 10,00 ± 0,00 4,00 ± 0,00 6,00 ± 0,00
90 Масса 28,9 ± 0,42 9,0 ± 0,4 10,5 ± 0,4
Сачковая проба 60,87 ± 0,54 22,20 ± 1,41 39,70 ± 1,41
Литература
1. Новые антидоты при отравлении животных фосфорорганическими и карбаматными пестицидами / Р.М. Асланов, И.Г. Хайрутдинов, Н.Н. Жестков и др. - Текст: непосредственный // Ветеринарный врач. - 2005. - № 2. - С. 7-9.
2. Применение пробит-анализа в токсикологии и фармакологии с использованием программы Microsoft Excel для оценки фармакологической активности при альтернативной форме учета реакций / П.Н. Бабич, А.В. Чубенко, С.Н. Лапач - Текст: непосредственный // Современные проблемы токсикологии. - 2003. - № 4. - С. 81-89.
3. Дафнии как тест-объект в токсикогенетических исследованиях / Т.П. Денисова, Е.В. Симонова - Текст: непосредственный // 3-й съезд токсикологов России: тезисы докладов, 2-5 декабря 2008 года / под ред. Г. Г. Онищенко, Б. А. Курляндского. - М., 2008. - С.93-95.
4. Механизмы генотоксичности фосфорорганических соединений / Е.Л. Левицкий, А.Н. Марченко, Ю.И. Губский - Текст: непосредственный // Современные проблемы токсикологии. — 1998. — № 1. — С. 47-50.
5. Оценка токсичности меди для гидробионтов / Макаева, А.Р. - Текст: непосредственный // Ветеринарный врач. - 2015. - № 6. - С. 32-36.
6. Методические указания по разработке нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов предельно допустимых концентраций вредных веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения: № 14702: утв. Росрыболовством 04.08.09, 2009 - Текст: непосредственный.
7. Изучение биологического окисления in vitro для ускоренного прогнозирования метаболической активности промышленных ядов / А.Д. Фролова, Л.В. Луковникова - Текст: непосредственный // Токсикологический вестник, - 1995. - № 4 - С. 9-12.
8. Этика медико-биологического эксперимента в доклинических испытаниях / Г.П. Червонская, Г.П. Панкратова, Л.Л. Миронова и др. - Текст: непосредственный // Токсикологический вестник. 1998. - № 3. - С.2-8.
9. Острые отравления фосфорорганическими соединениями: основные клинические синдромы и механизмы их формирования / О.А. Харченко, Г.М. Балан, Н.Н. Бубало - Текст: непосредственный // Современные проблемы токсикологии. - 2013. - № 1-2. - С. 17-31.
DETERMINATION OF ACUTE AND CHRONIC TOXICITY OF THE ANTIDOTE RR-2 ON
HYDROBIONTS
Aslanov R.M. - Doctor of Biological Sciences, Professor, Makaeva A.R. - Candidate of Biological Sciences, Makaeva V.I., Almitova L.I.
FSBSI «Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety» (420075, Kazan, Nauchny gorodok-2, e-mail: vnivi@mail.ru)
Organophosphate pesticides occupy one of the leading places among the preparations used in agriculture. Their high efficiency in the protection of animals and plants has been proved. Organophosphate pesticides are successfully used in the agricultural industry as insecticides and acaricides. At the same time, despite the proven feasibility of use in the national economy, pesticides are characterized by a high danger to humans and animals. The current situation with the treatment ofpoisoning with organophosphate pesticides necessitates the development of new domestic effective antidotes, one of the main components of this ones are holinolytics. The article presents the results of experimental studies aimed at studying the parameters of acute and chronic toxicity of the new domestic antidote RR-2 synthesized in the FCTRBS. Experiments were carried out on pond fish and guppies. For this purpose, the animals were kept in antidote solutions. Survival, behavior, and weight of specimens were evaluated. According to the results of experiments, the acute toxicity of cholinolytic for ponds is 150.00±13.8 mg/dm3, for fish - 125.99±12.82 mg/dm3.
Keywords: antidote, organophosphate pesticides, toxicity, hydrobionts, poisoning. References
1. New antidotes at poisoning of animals with fosfororganichesky and carbaobscene pesticides / R.M. Aslanov, I.G. Hayrutdinov, N.N. Zhestkov, etc. - the Text: direct // Veterinarian. -2005. - No. 2. - Page 7-9.
2. Application it is punched - the analysis in toxicology and pharmacology with use of the Microsoft Excel program for assessment of pharmacological activity at an alternative form of accounting of reactions / P.N. Babich, A.V. Chubenko, S.N. Lapach - the Text: direct // Modern problems of toxicology. - 2003. - No. 4. - Page 81-89.
3. Water fleas as a test object in the toksikogeneticheskikh researches / T.P. Denisova, E.V. Simonova - the Text: direct // the 3rd congress of toxicologists of Russia: theses of reports, on December 2-5, 2008 / under the editorship of G.G. Onishchenko, B.A. Kurlyandsky. - M, 2008. -Page 93-95.
4. Genotoxicity mechanisms the fosfororganicheskikh of connections / E.L. Levitsky, A.N. Marchenko, Yu.I. Gubsky - the Text: direct // Modern problems of toxicology. — 1998. — No. 1. — Page 47-50.
5. Assessment of toxicity of copper for hydrobionts / Makayev, A.R. is the Text: direct//Veterinarian. - 2015. - No. 6. - Page 32-36.
6. Methodical instructions on development of standards of water quality of water objects of fishery value, including standards of threshold limit values of harmful substances in waters of water objects of fishery value: No. 14702: утв. Rosrybolovstvo 04.08.09, 2009 - the Text: direct.
7. Studying of biological oxidation of in vitro for the accelerated forecasting of metabolic activity of industrial poisons / A.D. Frolova, L.V. Lukovnikova - the Text: direct // the Toxicological messenger, - 1995. - No. 4 - Page 9-12.
8. Ethics of a medicobiological experiment in preclinical tests / G.P. Chervonskaya, G.P. Pankratova, L.L. Mironova, etc. - the Text: direct // Toxicological messenger. 1998. - No. 3. - Page 2-8.
9. Sharp poisonings with fosfororganichesky connections: the main clinical syndromes and mechanisms of their formation / O.A. Harchenko, G.M. Balan, N.N. Bubalo - the Text: direct//Modern problems of toxicology. - 2013. - No. 1-2. - Page 17-31.
УДК 619:616.98:578.824.11 Б01 10.33632/1998-698Х.2020-5-26-33
ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНА ВИРУСА БЕШЕНСТВА МЕТОДОМ ТРЁХФАЗНОЙ ЭКСТРАКЦИИ
Ахмадеев Р.М. - кандидат ветеринарных наук, Мухамеджанова А.Г., Мифтахов Н.Р. -
кандидат биологических наук, Насыров Ш.М. - кандидат ветеринарных наук, Самерханов И.И. -кандидат биологических наук, Алеева З.З., Арутюнян Г.С., Яруллина Г.М.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, Казань, Научный городок-2, е-шаИ: vnivi@mail.ru)
Представлены результаты изыскания альтернативного способа выделения антигена вируса бешенства, основанного на методе трёхфазной экстракции исходной суспензии и озвучивания на диспергаторе, а также оценки иммунохимических свойств полученного продукта. Исходный вируссодержащий материал органно-тканевого происхождения подвергали экстрагированию путём последовательной обработки насыщенным раствором сульфата аммония (НСА) и бутанола. В целях более полной дезинтеграции экстрагированную взвесь подвергали озвучиванию на ультразвуковом диспергаторе УЗДН - 2Т, после чего антигенные образцы обрабатывали 96% этанолом в разных пропорциях. Антигенные свойства полученных фракций оценивали методами аналитического disc-электрофореза, вестерн - блоттинга и «сэндвич» - ИФА. Показано, что применение ультразвуковой обработки экстрагированной взвеси вируссодержащего материала и последующая обработка 96% этанолом в соотношении 1:1 позволяет более эффективно избавляться от балластных веществ и субвирусных компонентов. Полученный антигенный продукт является мономерным, содержит одну превалирующую белковую фракцию массой 67,2 кДа, что соответствует О-белку вируса бешенства, а также имеет титр в «сэндвич» - ИФА 1:40960. Данные характеристики подтверждают высокую диагностическую эффективность данного антигена и его пригодность для комплектации экспресс-тест-систем на основе ИФА. Описанный способ выделения антигена при помощи химических веществ и ультразвуковой обработки можно рассматривать в качестве доступной и экономичной альтернативы рассматриваемому ранее зональному ультрацентрифугированию в градиентах плотности.
Ключевые слова: гликопротеин вируса бешенства, иммуноферментный анализ, конструирование диагностикумов.
Ввиду того, что сложившаяся мест среди особо опасных инфекций [4,
эпизоотолого - эпидемиологическая 10]. В настоящее время одним из ключевых
ситуация по бешенству в мире не имеет звеньев существующей тактики пре-
тенденции к разрешению, бешенство по- дупреждения распространения инфекции
прежнему, согласно оценкам ВОЗ, является диагностика заболевания,
продолжает занимать одно из ведущих основанная на методах индикации
