CC BY
24
ВЕТЕРИНАРНАЯ МЕДИЦИНА
УДК 619:616.995.122-084:633.2.033
Пастбищная профилактика фасциолёза: растительный моллюскоцид из аира обыкновенного Горчаков Владимир Викторович, кандидат биол. наук, вед. научный сотрудник, Воротников Владимир Петрович, кандидат биол. наук, мл. научный сотрудник, ФГБНУ «НИВИ НЗ России», г. Нижний Новгород, Россия
E-mail: [email protected]
Высокая заболеваемость домашних (50-80%) и диких (67,4%) животных фасциолёзом расширяет территорию инвазии Fasciola heрatica, что создает реальную угрозу повышения степени риска и ухудшения эпизоотической ситуации в Нечерноземной зоне РФ по антропозоогельминтозу. Паразит пытается противостоять применению средств химиотерапии, вырабатывая новые защитные механизмы резистентности на всех этапах. Фасциолезный цикл развития трематод способен противостоять аномальным изменениям погодных условий и в течение 3-х лет активизировать эпизоотический процесс. Значительное сокращение численности промежуточных хозяев фасциолы обыкновенной уменьшает и возможность заражения животных, снижая порог экономического ущерба. Для разрыва биологического цикла фасциол наиболее доступным моллюскоцидом является медный купорос. Однако, обладая значительной моллюскоцидной активностью, он не лишен ряда недостатков, ограничивающих масштабы его использования. Высокотоксичен в отношении выпасающихся животных, рыб, земноводных, гидробионтов и растительности, обладает кумулятивными свойствами и до 19-25 месяцев активен в водоемах на пастбищах. Цель исследования - изучение моллюскоцидных свойств у растения Аира обыкновенного на обитателей экосистем пастбищ пресноводных моллюсков семейства Lymnaeidae и Planorbidae - промежуточных хозяев трематод животных, рыб и птиц. Исследования выполняли в аквариальной лаборатории института и хозяйствах Нижегородской области. Из аира фармакопейным способом готовили препарат Лимацид-А и испытывали на моллюскоцидные, токсические и кумулятивные свойства. Полученные результаты свидетельствуют об эффективности Лимацид-А в отношении регуляции численности моллюсков L. truncatula, L. subangulata, L. goupili - промежуточных хозяев фасциолы обыкновенной на пастбищах Нечерноземья. Моллюскоцидная активность препарата из Аира обыкновенного на прудовиков в форме порошка достигала 94-96%, а экстракта 95-100%. Лимацид-А оказывает 86-98% овоцидное воздействие и на яйца кладок прудовиков. Применение моллюскоцидов с таким уровнем активности способно сократить зараженность животных первого года выпаса Fasciola heрatica в 10-14 раз.
Ключевые слова: трематодозы, профилактика, моллюски, растения, моллюскоцид, дезинвазия, пастбища, пруды
При изучении формирования очагов стентности на всех этапах биологического
цикла развития. Во Франции в последние годы наблюдается рост инвазионной активности мирацидиев Fasciola hepatica в отношении моллюска Lymnaea (Galba) truncatula. Предполагается, что таким путём паразит пытается противостоять широкому применению для борьбы с фасциолёзом триколобендазола и других средств химиотерапии [3]. В Сербии возрастает потенциальный риск дальнейшего ухудшения ситуации в отношении географического распространения печёночной двуустки, активно занимающей новые территории [4].
Использование химических веществ в качестве моллюскоцидов является одним из эффективных приёмов пастбищной профилактики трематодозов, в частности фасциолёза. При этом достигается значительное сокращение численности моллюсков - промежуточных хозяев гельминтов, соответственно этому и сокращается возможность заражения животных. При сдерживании популяции моллюсков ниже порога уровня экономической вредности теряется возможность возникновения острой формы фасциолёза [5]. Для разрыва биологического цикла фасциол наиболее доступным и
фасциолёзной инвазии на пастбищах Северо-Востока Нечернозёмной зоны РФ отмечено, что численность промежуточных хозяев ам-фибионтных моллюсков подрода Galba во временных биотопах с 2010 г. (аномально жаркое лето) к 2012 г. восстановилась до 75%, а их поражённость личинками F. hepatica достигла средних величин - 1%. К осени 2013 г. популяция моллюсков в биотопах этого типа возросла выше среднего уровня - 147 экз./м2, а инвазированность партенитами F. hepatica -2-3%. Тенденция роста неблагополучия к 2013-2015 гг. отмечается и в других регионах Нечерноземья: в Удмуртской Республике [1], Московской и сопредельных, особенно в Калининградской обл., где фасциолёз у 37-50% коров, овец - 39-80%, а пятнистые олени поражены на 67,4% [2]. Это свидетельствует, что фасциолёзный цикл развития трематод способен противостоять аномальным изменениям погодных условий и в течение 3-х лет активизировать эпизоотический процесс. Установлено, что в ответ на применение синтетических-химических антгельминтиков у фасциол вырабатываются новые защитные механизмы рези-
часто применяемым моллюскоцидом является сульфат меди (медный купорос). Однако, обладая значительной моллюскоцидной активностью, он не лишён ряда недостатков, ограничивающих масштабы его использования: высокотоксичен в отношении рыб, земноводных (лягушки, тритоны), гидробионтов и растительности, обладает кумулятивными свойствами и долго сохраняется в водоёмах. Остаточное моллюскоцидное действие хлористой и коллоидной меди в чистой воде продолжается до 16-25 месяцев, а в воде, содержащей органические вещества, - 6-19 месяцев. Медный купорос в сумме с другими техногенными загрязнителями, скапливающимися на пастбищах вследствие промышленных выбросов, вполне обоснованно может усиливать токсическое воздействие и является причиной отравлений у выпасающихся животных [6]. Более совершенными в плане экологических проблем охраны чистоты окружающей среды являются моллюскоциды не химического, а растительного происхождения как средства, малотоксичные для не целевых объектов и не обладающие кумулятивными свойствами. Поэтому выявление растений с такими свойствами является актуальным.
Цель исследований - изучение моллю-скоцидных свойств у растения Аира обыкновенного (Acorus calamus L.) на пресноводных моллюсков семейства Lymnaeidae и Planor-bidae - промежуточных хозяев трематод сельскохозяйственных животных, рыб и птиц.
Материал и методы. Исследования выполнены, в аквариальной лаборатории ФГБНУ «НИВИ НЗ России» и базовых хозяйствах Нижегородской области. Объектами исследования являлись пресноводные моллюски: Lymnaea truncatula, L. subangulata, L. goupili (промежуточные хозяева (ПХ) фасциолы обыкновенной); L. ovata, L. peregra, L. stagna-lis, L. palustris, L. auricularia (ПХ возбудителей трематодозов животных, птиц, рыб); Plano-rbarius corneus, Planorbis planorbis (ПХ па-рамфистомат, эхиностомат) и растительный препарат Лимацид-А из аира обыкновенного, приготовленного фармакопейным способом.
Лимацид-А использовали в форме порошка и экстракта, который готовили из корневищ, корней, листьев и стеблей - цветоносов аира обыкновенного. Порошок получали измельчением растительного сырья 20% влажности до частиц размером 1-3 мм, досушиванием до 12-14%. Для приготовления экстрактов в качестве экстрагентов использовали 50-70% этиловый спирт, дистиллированную
воду и нашатырный спирт. Спиртовой экстракт готовили в соотношении сырья к экстра-генту 1:(5-15) (с увеличением плотности сырья использовали повышенное фармсоотношение ингредиентов). Лекарственное сырьё измельчали до частиц размером 1-3 мм, навеску сырья помещали в экстракционный аппарат с мешалкой и паровым обогревом, добавляли расчётное количество экстрагента, выдерживали 24-48 ч при t 35-45оС и постоянном перемешивании и 6-10 ч при t 50-65оС с последующим фильтрованием и сгущением под вакуумом до надлежащей консистенции. В зависимости от плотности сырья водный экстракт 1:(5-15) настаивали 16-48 часов, перемешивая при t 65-85оС, затем нагревали до 100оС, охлаждали, фильтровали и выпаривали. Экстракцию 6-11% нашатырным спиртом осуществляли при t 35-45оС, перемешивая в течение 48-72 ч, фильтровали и сгущали под вакуумом.
Для обработки пастбищ экстрактами аира обыкновенного применяли маточные растворы, которые готовили в воде с температурой 65-80оС. Дезинвазию пастбищ проводили в период активного состояния моллюсков - в конце мая (после спада талых вод) - июне или августе - начале сентября при t воды не ниже +14оС и pH не выше 7,6. При более холодной погоде и щелочной реакции среды эффективность обработок резко понижалась. Обработку прудов проводили весной до заполнения их водой для зарыбления и при появлении моллюсков после зимовки, осенью после спуска прудов и облова. Препараты аира на пастбище в места обитания моллюсков (лужи, заболоченные и прибрежные участки водоёмов, каналы, канавы, очаги, мочажины, ямы) и в ложе спущенного пруда вносили в форме маточного раствора с помощью опрыскивателя, а в форме порошка - вручную с наветренной стороны. Перед дезинвазией пастбищ и спущенных прудов прекращали внесение органических и минеральных удобрений, а выпас КРС на этих участках начинали после гибели моллюсков. Экспозиция 5 суток.
В каждой серии лабораторных экспериментов использовали по п = 100 экз. определенного вида прудовиков или катушек. В полевых опытах численность лименеид или планорбид в их естественных биотопах составляла от 25 до 158 экз./м2. Исследования на моллюскоцидные свойства аира обыкновенного проводили по методике В.В. Горохова и В.С. Осетрова [5].
Изучение токсических СК10, СК50, СК100 (на низших ракообразных, бентосе, земноводных, водной растительности) и LD50, LDl00 (на
белых 2,5-3-месячных 30 экз. мышах массой тела самцов и самок 25-26 г и крысах 30 экз. обоего пола m = 180-200 г) и кумулятивных Ккум (на 10 экз. белых беспородных крысах-самцах m = 180-210 г) свойств Лимацид-А выполняли по стандартным методам [5, 7, 8, 9].
Результаты и их обсуждение. Аир обыкновенный (Acorus calamus L.) - многолетнее травянистое растение семейства Ароидные - (Araceae). Распространено в средней и южной полосе европейской части России, в Западной и Восточной Сибири, на Дальнем Востоке. Аир обыкновенный растёт по окраинам болот, на заболоченных лугах, по берегам вдоль медленно текущих рек и ручьёв, озёр, прудов, каналов и канав. Корневище содержит: дубильные вещества - до 12%, аскорбиновую кислоту - до 150 мг, специфический для вида гликозид акорин - 1,1% и эфирное масло - 4,8-5,0%, крахмал - до 20%, смолы, фитонциды, камедь и слизь. В состав эфирного масла входят моно- и сесквитерпены: а-пинен, (+) - камфен, (+) - камфора, борнеол, ß-эле-мен, а-каламен, акорон, а также фенольные соединения — азарон. Листья: дубильные вещества - 8-12%, аскорбиновую кислоту до 150 мг, эфирные масла - 2,5-3%. В медицине корневища акоруса в форме водного отвара или спиртовой настойки применяют в качестве
ароматической горечи для возбуждения аппетита и улучшения пищеварения, а также в качестве тонизирующего средства. Препараты обладают антимикробным, фунгицидным, противовоспалительным и дезодорирующим действием. В практике терапии болезней животных препараты аира в форме настоя, болюсов, кашек, отваров и микстур назначают внутрь при хронических гастритах, энтеритах, диспепсиях, гепатитах, холециститах в качестве мочегонного средства, а в форме порошка или спиртового настоя применяют для наружной обработки гноящихся ран и язв. Аир обыкновенный используют в качестве репел-лентного средства: пучки душистых листьев отпугивают насекомых-паразитов в помещении. Эфирное масло акоруса эффективно в борьбе с личинками пластинчатоусых жуков, вредителей корней декоративных растений. Препарат из Acorus calamus в Китае рассматривают как потенциальный фумигант в борьбе с амбарными вредителями при хранении зерновой сельскохозяйственной продукции [10].
Экспериментальными исследованиями в лабораторных условиях (табл.) выявлена выраженная моллюскоцидная активность порошка и экстракта препарата Лимацид-А на пресноводных моллюсков (94-100%) и их яйцекладки (86-98%).
Таблица
Моллюскоцидная активность препаратов на основе растительного сырья аира обыкновенного, %
Форма растительного сырья Моллюски
L. truncatula, L. subangulata, L. goupili L. auricularia, L. ovata, L. peregra, L. stagnalis, P. planorbis, P. corneus
Температура воды 25-31оС, pH 6,7-7,1
Экстракт Доза: 2,0 г/л 98,0 93,0 100,0 98,0
Температура воды 18-25оС, pH 6,6-7,0
Порошок Доза: 8,0 г/л 94,0 86,0 94,0 88,0
Примечание: в числителе - гибель моллюсков, в знаменателе - гибель кладок моллюсков
При изучении LD50 и LD100 токсических свойств растительного средства установлено, что двукратное внутрижелудочное и подкожное введение препарата в максимально возможных дозах не вызывало токсического влияния на организм теплокровных животных, что согласно классификации токсических веществ ГОСТ 12.1.007-76 относится к IV классу «малоопасные вещества». В результате изучения кумулятивных свойств Лимацида-А при пероральном введении крысам Ккум составил более 3,5, т.е. превышал значение < 1, и охарактеризован как «препарат, не обладающий кумулятивными свойствами». Известно, что
аир не содержит основных токсических растительных веществ: алкалоидов, сердечных гли-козидов, циангликозидов, тиогликозидов, са-понин-гликозидов, гликоалкалоидов и фото-сенсибилизирующих пигментов, щавелевой, пировиноградной, щавелевоуксусной и а-кетоглутаровой кислот [11].
При изучении воздействия препаратов из аира на нецелевых обитателей пресных вод установлено, что они вызывали гибель, %: низших ракообразных (дафний, циклопов) - 11-26; бентоса (олигохет, хирономид) - 10-14; земноводные (лягушки, тритоны) исчезли на 2-8 сутки. После детоксикации через 15-25 дней числен-
ность этих гидробионтов восстанавливалась. Препараты аира обыкновенного не вызывают ожогов у растений. Распадаются в воде весной-летом в течение 4-6, осенью - 6-10 суток.
Моллюскоцидная эффективность Лима-цида-А выявлена в производственных условиях на пастбищах и прудах (опыты № 1-6).
Опыт 1. На пастбище в биотопы Lym-naea truncatula (0,38 га) при t воды 14,8-17,5оС и pH 6,9-7,0 вносили экстракт аира обыкновенного в форме маточного раствора из расчёта 2,0 г/л. Отмечали гибель, %: моллюсков -95, их кладок - 88. Опыт 2. На пастбище в биотопы L. Truncatula (0,34 га) при t воды 25,4-28,1оС и pH 6,8-6,9 вносили экстракт аира в форме маточного раствора из расчёта 1,5 г/л. Отмечали гибель, %: моллюсков - 98, их кладок - 93. Опыт 3. В биотопы L. goupili, L. Pa-lustris, L. stagnalis, L. ovata, L. auricularia, Planorbis planorbis, Planorbarius corneus, в мокрое ложе спущенного пруда (0,28 га) при t воды 24,4-28,2оС и pH 6,8-7,0 вносили экстракт аира в форме маточного раствора из расчёта 2,5 г/м2. Отмечали гибель, %: моллюсков - 100, их кладок - 98. Опыт 4. На пастбище в биотопы L. Goupili (0,20 га) при t воды 21,5-23,4оС и pH 6,6-6,9 вносили порошок аира обыкновенного из расчёта 8-9 г/л. Отмечали гибель, %: моллюсков - 94, их кладок - 86. Опыт 5. На пастбище в биотопы L. subangulata (0,28 га) при t воды 24,9-28,1оС и pH 6,9-7,0 вносили порошок аира из расчёта 7-8 г/л. Отмечали гибель, %: моллюсков - 96, их кладок - 91. Опыт 6. В биотопы L. stagnalis, L. ovata, L. peregra, L. auricularia, Planorbis planorbis, Planorbarius corneus, в мокрое ложе спущенного пруда (0,24 га) при t воды 17,4-19,5оС и pH 7,0-7,1 вносили порошок аира из расчёта 25 г/м2. Отмечали гибель, %: моллюсков - 94, их кладок - 88.
Высокая моллюскоцидная эффективность порошка (94-96%) и экстракта (95-100%) аира обыкновенного в опытах № 1 -6 подтверждена не только на чисто пресноводных видах (которые обитают только в воде) 2-х семейств моллюсков, но и на менее уязвимых, ведущих амфибийный образ жизни (из воды могут переселяться на влажные участки суши: L. trun-catula, L. subangulata, L. goupili). Кроме того, препарат Лимацид-А оказывает воздействие 86-98% и на потомство лимнеид и планорбид, безвозвратно останавливая эмбриональное развитие зародышей в яйцах кладок прудовиков и катушек. Установлено комплексное губительное воздействие фитонцидов [5] аира обыкновенного в сумме с растительными вы-
сокомолекулярными фенольными соединениями (дубильными веществами) на вышесо-общённые виды пресноводных моллюсков.
Выводы. На основании проведённых исследований установлено, что препарат Лима-цид-А из аира обыкновенного обладает моллю-скоцидным действием, которое может быть использовано для дезинвазии небольших постоянных и временных по гидрологическому режиму естественных водоёмов и открытых каналов мелиоративной сети на пастбищах, скотопрогонах, мест водопоя с целью уничтожения моллюсков - промежуточных хозяев возбудителя фасциолёза сельскохозяйственных животных, т.к. относится к малотоксичным соединениям и не вызывает побочных явлений у выпасающихся животных, не снижает их продуктивности, не обладает кумулятивными свойствами. Ранее нами установлено, что применение моллюскоцидов с таким уровнем активности способно сократить заражённость животных (первого года выпаса) Fasciola hepatica в 10-14 раз, что позволяет использовать данный более экологически безопасный метод «как звено» для разработки в последующем новой системы профилактики фасциолёза.
Список литературы
1. Мкртчян М.Э., Мовсесян С.О., Архипов И.А. Эпизоотическая ситуация по гельминтозам крупного рогатого скота в Удмуртской Республике // Российский паразитологический журнал. 2014. № 2. С. 37-41.
2. Горохов В.В. Современная эпизоотическая ситуация и прогноз по основным гельминтозам животных в России на 2015 год // Российский паразитологический журнал. 2015. № 1. С. 10-14.
3. Dreyfuss G., Vignoles P., Rondelaud D. Fasciola hepatica: the infectivity of cattle-origin mira-cidia had increased over the past years in central France // Parasitol Res. 2007. V.101. №4. Р. 1157-1160.
4. Ristic Z.A., Zuko A., Cutuk R., Saljic E., Apic E., Bozic D., Stojcevic D. Infestation with small (Dicrocoelium dendriticum) and large fluke (Fasciola hepatica) in deer hunting ground of special nature reserve «Gornje podunavlje» MESO: The first Groatian meat jour. Croatia, 2012. V.14. №6. P. 496-501.
5. Горохов В.В., Осетров В.С. Моллюскоци-ды и их применение в сельском хозяйстве. М.: Колос, 1978. 224 с.
6. Горчаков В.В. Новые биологические методы в пастбищной профилактике фасциолёза // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. 2005. № 7. С. 117-122.
7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // Под общ. ред. Р.У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005. 832 с.
8. Lim R.R., Rink K.J., Hass H.J., Soage-Echague E. A method for the walecation of cumulation
and subchronic median effective // Arch. Int. Pharmacodyn. 1961. V.130. P.335-353.
9. Гурьев М.М. Исследование острой токсичности комплекса водорастворимых полисахаридов корневищ аира болотного (Acorus calamus L.) // Бюллетень сибирской медицины. 2010. № 1. С. 36-39.
10. Yao Ying-Juan, Cai Wan-Lun, Yang Chang-Yu, Zhang Hong-Yu, Hua Hong-Xia. Fumigant toxici-
ty of beta-asarone extracted from Acorus calamus against four stored grain beetles // Acta entomol. sinica. 2009. V.52. №.4. P. 453-460.
11. Орлов Б.Н. Ядовитые животные и растения СССР. М.: Высш. шк., 1990. 272 с.
12. Горчаков В.В. Средство пастбищной профилактики фасциолеза // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. 2007. №10. С. 80-84.
Pasture prophylaxis of fasciolosis: plant molluscicide from calamus (Acorus calamus) Gorchakov V.V., PhD in biology, leading researcher, Vorotnikov V.P., PhD in biology, assistant researcher
Scientific and Research Veterinary Institute of the Non-Chernozem Zone of the Russian Federation, Nizhny Novgorod, Russia
High prevalence of fasciolosis in livestock (50... 80%) and wild (67.4%) animals enlarges area of Fasciola hepatica infestation resulting in increasing of real hazard of high risk and complicating the epizootic situation in terms of this antropozoohelminthosis in the Non-Chernozem zone of the Russian Federation. The parasite develops some drug resistance mechanisms in all stages of its life cycle. The life cycle enables trematodes to withstand anomal changes in weather conditions and to activize the epizootic process during 3 years. Significant reduction in the number of intermediate hosts of common liver fluke lowers the possibility of contamination of animals resulting in reduction of the threshold of server economic losses. One of the most affordable molluscicides for breaking the biological life cycle of liver flukes is cupper sulphate. In spite of high molluscicidal activity cupper sulphate has some disadvantages limiting the extent of its use. Cupper sulphate is highly toxic against grazing animals, fishes, amphibians, aquatic organisms and vegetable; has cumulative properties and remains active in pasture ponds for 19.25 months. The main goal of the research was to study molluscicidal activity of calamus (Acorus calamus) against inhabitants of pasture ecosystems - freshwater snails of family Lymnaeidae and Planorbidae acting as intermediate hosts of trematodes of animals, fishes and birds. The research was carried out in the aquariology laboratory of the institute and at farms of the Nizhny Novgorod region. The preparation Limazid-A was prepared from calamus according to the pharmacopoeial method. The molluscicidal, toxic and cumulative properties of Limazid-A were studied. Results give evidence on the activity of Limazid-A against snails L. truncatula, L. subangulata and L. goupili acting as intermediate hosts of common liver flukes on the pastures of the Non-Chernozem region. The activity of the preparation from calamus in the form of powder was 94. 96%, and in the form of extract - 95. 100%. The activity of Limazid-A against clutches of pond snails was 86.98%. It was found that the use of molluscicides with such activity level provides reducing Fasciola hepatica infestation of first year grazing animals by 10.14 times.
Key words: trematodosis, prophylaxis, snails, plants, molluscicide, disinvasion, pasture, ponds References
1. Mkrtchyan M.E., Movsesyan S.O., Arkhipov I.A. Epizooticheskaya situatsiya po gel'mintozam krupnogo rogatogo skota v Udmurtskoy respublike. [Epizootic situation in terms of bovine helminthosis in Udmurt Republic]. Rossiyskij parazitologicheskij zhurnal.
2014. no. 2. pp. 37-41.
2. Gorokhov V.V. Sovremennaya epizootiches-kaya situatsiya i prognoz po osnovnym gel'mintozam zhivotnykh v Rossii na 2015 god. [Contemporary epizootic situation in terms of main helminthosis of animals in Russia in 2015]. Rossiyskij parazitologicheskij zhurnal.
2015. no. 1. pp. 10-14.
3. Dreyfuss G., Vignoles P., Rondelaud D. Fasciola hepatica: the infectivity of cattle-origin miracidia had increased over the past years in central France. Parasitol Res. 2007. Vol. 101. no. 4. pp. 1157-1160.
4. Rrstic Z.A., Zuko A., Cutuk R., Saljic E., Apic E., Bozic D., Stojcevic D. Infestation with small (Dicro-coelium dendriticum) and large fluke (Fasciola hepatica) in deer hunting ground of special nature reserve «Gornje podunavlje» MESO: The first Croatian meat jour. Croatia, 2012. Vol. 14. no. 6. pp. 496-501.
5. Gorokhov V.V., Osetrov V.S. Mollyuskotsidy i ikh primenenie v sel'skom khozyaystve. [Molluscicides and their use in agriculture]. Moscow: Kolos, 1978. 224 p.
6. Gorchakov V.V. Novye biologicheskie metody v pastbishchnoj profilaktike fastsioleza. [New biological
methods of pasture prophylaxis of fasciolosis]. Agrarnaya nauka Evro-Severo-Vostoka. 2005. no. 7. pp. 117-122.
7. Rukovodstvo po eksperimental'nomu (doklini-cheskomu) izucheniyu novykh farmako-logicheskikh veshchestv. [Guidance on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances]. Pod obshch. Red. R.U. Khabrieva. 2-e izd., pererab. i dop. Moscow: Meditsina, 2005. 832 p.
8. Lim R.R., Rink K.J., Hass H.J., Soage-Echague E. A method for the walecation of cumulation and subchronic median effective. Arch. Int. Pharmacodyn. 1961. Vol.130. pp. 335-353.
9. Gur'ev M.M. Issledovanie ostroj toksichnosti kompleksa vodorastvorimykh polisakharidov kornevishch aira bolotnogo (Acorus calamus L.). [Study of acute toxicity of water soluble polysaccharides of rhizome of calamus]. Byulleten'sibirskoy meditsiny. 2010. no. 1. pp. 36-39.
10. Yao Ying-Juan, Cai Wan-Lun, Yang Chang-Yu, Zhang Hong-Yu, Hua Hong-Xia. Fumigant toxicity of beta-asarone extracted from Acorus calamus against four stored grain beetles. Acta entomol. sinica. 2009. Vol. 52. no. 4. pp. 453-460.
11. Orlov B.N. Yadovitye zhivotnye i rasteniya SSSR. [Poisonous animals and plants of USSR]. Moscow: Vysshaya shkola, 1990. 272 p.
12. Gorchakov V.V. Sredstvo pastbishchnoj profi-laktiki fastsioleza. [Remedy for pasture prophylaxis of fasciolosis]. Agrarnaya nauka Evro-Severo-Vostoka. 2007. no. 10. pp. 80-84.
