CC BY
7
Последние имели незначительный жгучий привкус, что, очевидно, объясняется несколько повышенным содержанием соланина в клубнях контрольного картофеля, который к этому времени значительно пророс.
Таким образом, проведенные исследования показали, что метиловый эфир а -нафтилуксусной кислоты не проявил токсических свойств при введении его в течение года и больше животным в дозах, превышающих остаточное количество его веществ в обработанном картофеле, а также не проявил способности вызывать новообразования у раково-устойчивой линии мышей (СХС57).
Применение метилового эфира а-нафтилуксусной кислоты не влияет на органолептические свойства кулинарных изделий, приготовленных из картофеля, обработанного этим веществом. Содержание витамина С в сыром обработанном картофеле хотя и снижается по мере хранения, однако все же является более высоким по сравнению с контрольными, необработанными клубнями.
* # Ъ
Ю. Г. Ледер
Об упрощенном методе определения каротина проф. Г. М. Натадзе
Опубликованный в 1947 г. в журнале «Гигиена и санитария» № 4 метод проф. Натадзе (из научно-исследовательской лаборатории питания Министерства здравоохранения Грузинской ССР), применявшийся им для исследования зеленых частей растений, до последнего времени не подвергался проверке.
По данным автора, предложенный им метод «е уступает по точности стандартному методу Мурри, является экспрессным и выполним не только в любой лаборатории, но даже в полевых условиях. Все исследование заканчивается в течение 15—20 минут вместо 3 часов и более, затрачиваемых при пользовании методом Мурри. При испытании ряда упрощенных методов, пригодных для определения каротина в различных зеленых кормах, нами был проверен также метод Натадзе.
Прежде чем перейти к нашим исследованиям, считаем необходимым изложить принцип этого метода.
Как и метод Мурри, он основан на использовании реакции Крауса, заключающейся в диференциальном растворении пигментов, сопутствующих каротину. Для извлечения всех пигментов зеленого растения Краус применял этиловый спирт, а для разделения их •— двуфазную систему из водного раствора спирта и бензина. При этом большая часть ксантофилла переходит в водно-спиртовой раствор, а каротин, хлоро-филлины и часть ксантофилла остаются в бензине.
Представляя собой модификацию ускоренного метода Мурри, метод проф. Натадзе отличается некоторыми особенностями. В качестве адсорбента автор применяет обычную гигроскопическую вату, используя классический опыт М. .С. Цвета, открывшего свойство целлюлозы (измельченной массы фильтровальной бумаги) адсорбировать из растворов зеленый пигмент растений. Гигроскопическая вата одновременно заменяет и прокаленную сернонатриевую соль, которая обычно служит для высушивания бензиновых растворов пигментов, увлажняемых при отмывании их от спирта.
Проверка метода производилась на свежих листьях топинамбура с густозеленой окраской. Для извлечения пигментов из исследуемого материала различные авторы предлагают разные количества растворителей: ацетона, спирта и бензина, причем точки кипения последнего не
всегда указываются. Так, по М. С. Цвету, для экстракции смеси пигментов из свежих зеленых листьев достаточно примеси '/ю части абсолютного спирта к общему количеству взятого бензина. С той же целью Мурри применяет равные объемы ацетона (или этилового спирта) и бензина с точкой кипения 70—80°.
В описаний метода проф. Натадзе не указано ни количество спирта, ни точка кипения бензина. Поэтому мы в своих опытах с извлечением пигментов придерживались указанной прописи Мурри, но пользовались авиационным бензином с точкой кипения не выше 100—110°. После отмывания от спирта и удаления водно-спиртового слоя бензиновый раствор пигментов из делительной воронки сливался в мерную колбочку на 100 мл и разбавлялся до метки бензином. Полученный зеленый раствор, мутный от примеси воды, фильтровался через ватную колонку.
Для наполнения колонок мы пользовались как химически чистой, так и обычной гигроскопической ватой. При фильтровании через химически чистую вату отмечены три зоны адсорбции: верхняя — зеленая широкая, средняя — более узкая интенсивно желтого цвета и нижняя — относительно слабо окрашенная. Нижние желтые зоны не имеют резкой границы.
По мере фильтрования все зоны довольно быстро передвигались вниз, так что к моменту спуска средней зоны набиралось не более 10—15 мл слабо окрашенной первой фракции фильтрата. К моменту спуска зеленого пигмента к низу колонки собиралась вторая более интенсивно окрашенная фракция в количестве 20—28 мл.
Таким образом, при отфильтровывании через одну колонку приблизительно половины всего объема раствора (около 40—50 мл) в фильтрат начинал переходить и зеленый пигмент.
Обычная гигроскопическая вата при одинаковой плотности набивки обладает еще меньшей адсорбционной способностью. При фильтровании полученных тем же способом вытяжек пигментов зеленый пигмент передвигался с большей скоростью, так что к моменту спускания его к концу ватного столба собиралось не более 5—10 мл первой и 10—15 мл второй фракции фильтрата, причем граница между средней и нижней желто окрашенной зоной еще менее заметна.
Результаты колориметрирования различных фракций фильтрата в пересчете на каротин приводятся в табл. 1.
Как показывают опыты, вторая фракция и смесь обеих фракций фильтрата дают по сравнению с первой повышенные результаты.
Степень адсорбционной способности примененных сортов ваты определялась скоростью спускания зеленого пигмента книзу ватной колонки и измерялась количеством собранного к этому моменту фильтрата. Согласно данным опыта, адсорбционная способность химически чистой ваты почти в 2 раза выше, чем аптечной. Так как разные сорта ваты могут отличаться по адсорбционной способности, для получения сравнимых данных необходимо применять стандартные сорта.
Имея целью ускорить анализ, проф. Натадзе указывает, что нет необходимости отфильтровывать через ватную колонку весь раствор смеси пигментов, а можно ограничиться первыми несколькими миллилитрами фильтрата, колориметрирование которых дает результаты, совпадающие с данными, полученными по методу Мурри.
Наши опыты показали, что даже при пользовании химически чистой ватой как первая, так и вторая фракция фильтрата не являются чистыми растворами каротина и дают поэтому при колориметрирова-нии ошибку в сторону увеличения.
При последующей обработке оильными адсорбентами растворов каротина, полученных по методу проф. Натадзе, и повторном колориметр и ров а нии во всех случаях обнаружено пониженное содержание ка-
Таблица 1
№ опыта Параллельные навески Первая фракция фильтрата Вторая фракция фильтрата Смесь первой и второй фракции фильтрата Условия опыта
объем фильтрата в мг содержание каротина' в мг% объем фильтрата в мг содержание каротина в мг% общий объем фильтрата в мг содержание каротина в мг%
1 1 15 11,04 25 17.23 40 Колонки из хими-
2 15 11,04 25 17,23 40 — чески чистой
ваты
2 1 15 9,71 28 — 43 13,17
2 15 8,16 28 — 43 13,17
з 1 15 9,40 20 35 15,66
2 15 9,40 20 — 35 15,66
4 1 10 14,24 10 22,38 20 18,31 Колонки из гигро-
2 10 14,24 10 ' 22,38 20 18,31 скопической
аптечной ваты
ротина; при тех же условиях в растворах, полученных по способу Мур-рн, содержание каротина остается неизменным.
Чтобы убедиться в полноте отделения каротина от ксантофилла и пригодности ваты в качестве адсорбента, была проверена серия опытов, методика и результаты которых приводятся ниже.
В качестве адсорбента применялась приготовленная нами из продажной извести гидроокись кальция, адсорбционная способность которой проверялась с помощью других адсорбентов (А1203 и М.цО) на чистых растворах каротина.
Отделение каротина от сопутствующих пигментов с помощью адсорбента производилось двумя способами: 1) прямым настаиванием растворов с "определенной навеской адсорбента и 2) фильтрованием растворов через колонки с тем же адсорбентом при высоте столбика не менее 5—6 см.
Принимая во внимание большую устойчивость бензиновых растворов каротина при хранении их в темноте, настаивание производилось в течение 16—18 часов в хорошо закрытых склянках или колбах во. избежание испарения бензина. В склянки с исследуемыми растворами насыпалось по 3—5 г порошка Са(ОН)2; смесь несколько раз взбалтывалась и оставлялась в покое.
После осторожного сливания с осадка или быстрого пропускания через тонкую фильтровальную бумагу растворы колориметрировались в колориметре Дюбоска с основным раствором азобензола (145 мг азобензола в 1 л 96° спирта). 1 мл этого раствора соответствует 0,00235 мг каротина.
Сопоставлялись данные колориметрирования различных фракций фильтрата непосредственно после их получения и после настаивания с адсорбентами. Результаты опытов представлены в табл. 2.
В табл. 2 приведена только часть экспериментального материала, так как во всей серии опытов получены аналогичные результаты. Во всех случаях как первая, так и вторая фракция не являются чистыми растворами каротина, а содержат также и ксантофилл, слабо удерживающийся в ватной колонке и переходящий уже в первую фракцию фильтрата, а во второй — достигает количества, более чем в 2 раза превышающее содержание каротина.
Те же растворы, подвергавшиеся настаиванию с гидроокисью кальция, уже не содержали ксантофилла и результат колориметрирования соответствовал истинному содержанию каротина. Это доказывается тем,
3 С
О
2
Параллельные определения
Условия опыта
» яз
3 х
% я ^о а. н о^ щ О -
О га
и а °
7
8
9
10
11
12
13
14
Первая навеска средней пробы листьев топинамбура
Вторая навеска средней пробы листьев топинамбура
(Первая навеска средней пробы листьев топинамбура
I Вторая навеска средней пробы листьев топинамбура
Фильтрованная через ватную колонку первая фракция фильтрата ............
Тот же раствор после настаивания с 3 г Са(ОН)2
Фильтрованная через ватную колонку вторая фракция фильтрата . . ...........
Тот же фильтрат после настаивания с 3 г Са(ОН)2
Зеленая вытяжка смеси пигментов (перед фильтрованием через ватную колонку) после настаивания с 5 г Са(ОН)2 .........
Фильтрованная через ватную колонку первая фракция фильтрата ............
Тот же фильтрат после настаивания с 3 г Са(ОН)2
Фильтрованная через ватную колонку вторая фракция фильтрата ............
Тот же фильтрат после настаивания с 3 г Са(ОН)2
Зеленая вытяжка смеси пигментов (перед фильтрованием через ватную колонку) после настаивания с 5 г Са(ОН)2 .........
Фильтрованная через ватную колонку смесь первой и второй фракции фильтрата . . . .
Тот же раствор после настаивания с 5гСа(ОН)2
Фильтрованная через ватную колонку смесь первой и второй фракции фильтрата . . . .
Тот же раствор после настаивания с 5 г Са(ОН)2
14,24 10,44
22,38 10,44
10,44
14,24 10,31
22,38 9,79
10,44
12,48 6,93
12,48 6,93
что при пропускании чистых растворов каротина через колонку с адсорбентом последний не окрашивался (отсутствие абсорбции) и результат колориметрирования не изменялся.
Повышенные результаты, получающиеся при колориметрировании первой и второй фракции фильтрата, зависят исключительно от ксантофилла, что доказывается следующим:
1) как первая, так и вторая фракция фильтрата, полученная при пропускании через ватные колонки, дает при последующем фильтровании через колонки с А120з и Са(ОН)2 желто окрашенную зону адсорбции;
2) чистые растворы каротина, полученные после обработки Са(ОН)2, так же, как и растворы, полученные по методу Мурри, этой реакции не дают.
Многократный хронометраж всех операций метода опровергает утверждение автора о возможности проведения анализа в течение 20 минут.
Тщательное растирание материала, полное извлечение пигментов смесью спирта и бензина и отмывание в делительной воронке от спирта требуют у опытного аналитика не менее часа; остальные процессы — набивание колонок, фильтрование и колориметрирование фильтрата •— занимают полчаса и более.
Выводы
1. Применение гигроскопической ваты в качестве адсорбента не обеспечивает получения чистых растворов каротина.
2. При наличии таких доступных и дешевых адсорбентов, как осаж денный СаСОз и Са(ОН)2, обладающих большой адсорбционной способностью, применение даже химически чистой ваты, являющейся по сравнению с ними весьма слабым адсорбентом, нецелесообразно.
3. Колориметрирование первых миллилитров фильтрата, получаемого при пропускании вытяжки пигментов через ватную колонку, дает повышенные результаты по сравнению со стандартным методом Мурри.
4. Применение колориметра Дюбоска вместо готовой шкалы, сравнительно большая продолжительность анализа (от 1'/2 до 2 часов) делают метод непригодным в полевых условиях.
Т. В. Гудкова
Бактерии-антагонисты кишечно-тифозной группы в подзолистых почвах
В почву вместе со сточной жидкостью, фекальными массами, навозом и прочими веществами попадает огромное количество микроорганизмов. Тем не менее лишь немногие болезнетворные бактерии (возбудители столбняка, газовой гангрены, сибирской язвы) могут сохраняться в почве годами. Большинство же попавших в нее патогенных микробов вскоре погибает. В почве происходит процесс самоочищения, факторами которого могут являться недостаток в почве питательных веществ, необходимых для развития попавших в нее микроорганизмов, пожирание болезне-1 творных микробов простейшими, действие бактериофагов, явление бактериального антагонизма и т. д
Быстрота самоочищения почвы зависит от ее типа и физического состояния, ибо разные почвы имеют свой, присущий им микробный ценоз. Замечено, например, что брюшнотифозные бактерии быстрее погибают в перегнойных почвах. Физическое состояние почвы также имеет значение для процесса самоочищения. Так, в более легких по механическому составу почвах этот процесс заканчивается быстрее, чем в тяжелых почвах.
Нас интересовал вопрос о роли микробного антагонизма в самоочищении почвы от бактерий кишечно-тифозной группы, нередко заносимой в почву с фекальными массами, компостами, сточными жидкостями и т. д.
При проведении исследования в, качестве тест-объекта была взята кишечная палочка, имеющая общих антагонистов с тифозным микробом, .( Систематических работ по изучению микробов, угнетающих развитие кишечной палочки, в литературе не имеется. Тем не менее список изученных антагонистов бактерий кишечно-тифозной группы достаточно велик.
В отношении кишечно-тифозной группы активны такие спорообра-зующие бактерии, как Вас. ап^гааэ, Вас. ЬгеУ1Э, Вас. зиЫШэ, Вас. аёгозрогиэ, Вас. ро1ушуха. Некоторые из этих микроорганизмов обладают высокой активностью, и из них получены лекарственные вещества.
Из неспорообразуюших бактерий подавляет рост палочки брюшного тифа В. руосуапеа (синегнойная палочка). В. Ииогегсепв также активен в отношении кишечной палочки.
Обширный материал о распространении актиномицетов, вырабатывающих антибиотики, был собран в лаборатории Гаузе, причем обнаружилось наличие географической закономерности в распространении антагонистических штаммов. Большее количество антагонистов было найдено в черноземных почвах, меньшее — в подзолистых. Некоторые из этих актиномицетов активно действуют на кишечную палочку. Культура
