CC BY
13Мир вирусных гепатитов 3 (¿009}
8S. О профилактике профессионального заряжения медицинских работников инфекциями с гемоконтактным механизмом передачи
Л. В.Рубис
Управление здравоохранения администрации Петрозаводского городского округа
Вопросы профилактики профессионального заражения мепидинских работников инфекциями с гемоконтактным механизмом передачи занимаю^ значительное место в рабове госпитального эдащемиолога. Вместе с тем, при реализации требований нормативных документов, регламентирующих профилактические меоопр~1ятия, в частности, использование так называемых «аварийных аптечек» практический специалист сталкивается с рядом проблем.
Перечень действии в случае аварийной ситуации при работе с кровью, указан в санитарных правилах «Гигиенические требования к размещению, устройству, оборудованию и эксплуатации больниц, родильных домов и других лечебных стационаров» (СапПиН 2.1.3.1375-03) и «Безопасноегь работы с микроорганизмами III -JV групп патогенности и возбудителями паразит?рных болезней» (СП 1.3.23Z2-08), причем состав аварийной аптечки указан лишь в документе для лабораторий. В соответствии с последним аптечка должна содержать 2-3 навески перманганата калил и стерилыпто дистиллированную веду для приготовлен! и 0,05% раствора, причем ниже указано, что в случае аварии используется раствор 1:100 000 то;1ько для закапывания в нос СанПиН 2.1.3.1375-03 предусматривает использование 0,05% раствора перманганата калия для полоскания рта и горла и промывания глаз раствором в воде перманганата калия в соотношении 1:10 000. Естественно у практических специалистов возникают вопросы, в каких случаях и в какой концентрации необходимо применять г?астрор перманганата калим; насколько оправдано использование стерильной дистиллированной, а не питьевой воды для приготовления раствора для наружного применения. Соблюдение требований санитарно-эпидемиологических правил контролируется Роспотребнадзорим. Однако так как пермангганат калия и стерильная вода являются лекарственными средствами, вопросы их хранения регламентируются и контролируются органами Росздравнадзора В своей практике мы столкнулись с тем, что при проведении надзорных мероприятий специалисты этой службы к формированию и условиям хранения аварийных аптечек в медицинских учреждениях применяли требования приказов Министерства здравоохранения России от 16.07.97. Na 214 аО контроле качества лекарственных средств, изготовляемых в аптечных организациях (лгнеках)» и от 0511.97 №318 «Об утвержден™ инструкции о порядке хранения и обращения в фармацевтических (аптечных) организациях с лекарственными средствами и изделиями, обладающими oiнеопасными и взрывоопасными свойствами». Приказом Nfc318 не^опускается совместное хранение легковоспламеняющихся (спирт) и взрывоопасных (перманганат калия) веществ, спирт должен хранится в несгораемом ткафе, а перманганата калия - в шттнглассах с притертыми пробками. В соответствии с приказом № 214 в отделениях ЛПУ не допускается изготовление и расфасовка лекарственных средств, к которым относится раствор перманганата калия, последние должны храниться только в заводской или аптечной упаковке. Срок годности раствора составляет 30 дней. Следовательно ЛПу обязаны ежемесячно заменять навески перманганата калия и стерильную воду. Аварийные аптечки имеются в большинстве подразделений ЛПУ и соблюдение этого требования влечет рост экономических и оргализацио:шых затрат, связанных с их комплектованием. Увеличивается и объем образуклЦ*хся отходов - взрывоопасных фармацевтических средств, а соответственно увеличиваются расходы на их сбор и утилизацию, плата за негативное воздействие на окружающую среду. При этом на этикетке упаковки перманганата калия, реализуемой населению, отсутствуют ограничения ж) срокам хранения, а в отношении условий хранения указано лишь, что хранить его нужно в сухом прохладном месте. Вернемся к санитарно-эпидемиологическим правилам. При аварии, связанной с нарушением целостности кожных покроьов {уколах, порезах), СапПиН 2.1 3.1375-03 требует вымыть руки, не снимая перчаток под проточной водой с мылом, снять перчатки, выдавить из раяки кровь, вымыть руки с мылом и обработать ранку 5% спиртогой настойкой йода; согласно же СП 1.3.2322-08 руки необходимо обработать дезинфицирующим раствором, снять перчатку и выдавить из ранки кровь в дезинфицирующий раствор; ка место ранения поставить на 4-5 мин. коъшресс из дезинфицирующего раствора или 7П% этилового спирта. Учитывая, что мероприятия должны быть направлены на как можно более быстрое удаление из раны биологической жидкости, в которой не исюпочено присутствие возбудителей инфекционных заболеваний, не оченьиюнятно, зачем нужно тратить время и увеличивать поверхность загрязнения перчатки, моя ее водой или обрабатывая дезинфицирующим раствором (который не всегда есть под рукой). Смысл последнего требования вообще мало понятен, ведь для обеззараживания необходимо соблюдение времени экспозиции, к тому же в соответствии с санитарными
Мир вирусных гепатитов 3 (2009)
правилами ^Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» СанПиН 2.1.7.728-99 использованные перчатки должны быть помещены в дезинфицирующий раствор. На наш взгляд несогласованность и не достаточная обоснованность требований нормативных документов существенно затрудняет организацию экстренной профилактики профессионального заражения медицинских работников инфекциями с гемоконт.1ктным механизмом передачи.
S6. Разработка метода иммупоферментного анализа для диагностики вирусного гепатита С, основанного на выявлении вирусных антигенов
core и Е2 в сыворотке крови
Е.А. Рыжиков Закрытое акционерное общество «Эпитек», г. Новосибирск
Возможность детектировать антигены вируса гепатита С (ВГО в пробах печепи, сыворотки тяммм была продемонстрирована более 10 лет назад. Для детекции использовали только антиген core ВГС, поскольку иммунодоминантный эпитоп этого белка консервативен ;щя большинства известных штаммов. Было показано, ч'до core антиген ВГС удается выявлять в более чем 80% слз'чаев на следующий-день посЯе первого обнаружения РНК ВГС, часто core антител ВГС
обнаруживается в сыворотках кропи при наличие анти-ВГС антител и ГНК ВГС. Чувствительность лучших иммуноферментных тост-систем по ьыявлению core антигена ВГС соответствует примерно 500 копий/мя^РНК ВГС в анализе методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Исследователи наблюдали высокую корреляцию межлу содержанием РНК ВГС, измеренною ПЦР, и детекцией антигена core ВГС методом иммуноферментного анализа (ИФА), которая для разных модификаций ИФА варьитюзала от 94% до 96%, однако, зсе эти параметры достигались в образцах, которые были взяты задолго до появления акти-core ВГС антител. При наличии вирусспецифических антител в исследуемых пробах, приходится вводить процедуру деза1регации иммунных комплексов, при этом удается обнаружить не менее 1,5-2 пк/мл антигена.
Целью работы являлась разработка ИФА метода диагностики антигенов ВГС в обрззиах сыворотик крови, положительных по антиВГС антителам, получение диагностических пар антител для выявления антигенов ВГС, сравнительная характеризация эффективности ИФА диагностики антигенов с помощью разработанных антител и выявления вирусной РНК методом ПТ {Р.
Методами теоретической биологии были спроектированы структуры антигенных пептидов, несущих эпитопы консервативных и вариабельных районов структурных белков ВГС
Результаты. В рамках настоящей работы с целью создания диагностических антител, способных взаимодействовать с большим ко,тичеством вариантов HYR1, был спроектирован набор последовательностей, которые были изготовлены с применением методики библиотечного твердофазного пептидного синтеза. Разработанная схема синтеза библиотеки пептидов позво,хяет синтезировать смеси пептидов с содержанием целевых последовательностей не менее 80%. Предложенная концепция предполагает возможность выявления множества зарнантов вариабельных поверхностных антигенов ВГС, что практически не реализуемо при использовании технологии моноклональных антител. Выбор пары диагностических антител проводился на основании анализа пространственной структуры белков core и Е2, с учетом взаимной пространствашой ориентации белков Е2 на поверхности внриона Спроектированные пептиды были синтезированы и введены в состав иммуногенных конструкции, с помощью которых была проведена игямунизация животчых-донорсв. Из сыворотки крови иммунных животных методом аффинной хроматографии выделено четыре моноэпитопных антитела, которые представляют собой две пары диагностических антител. Одна Пара диагностических антите;. нредназначена для выявления по консервативным эпитопам антигена core вируса гепатита С, вторая пара диагностических антител предназначена для выявления антигена Е2 по вариабельным эпитопам. Массив из 37 образцов плазмы крови положительных по антиВГС антителам и с концентрацией РНК ВГС от 1С3 до 10s МЕ/мл использовали для изучения возможности количественного определения антигенов ВГС в сыворотке крови в присутствии ВГС специфичных антител. Методом ИФА антигенов ВГС наб; додали ;Гипсшт}то зависимость оптической плотности, нормированной по ОПкрит, от концентрации РНК ВГС с коэффициентом корреляции 0,8. В массиве сывороток пара ^диагностических антител к эпитопам антигена core выявляла 89% образцов, а пара диагностических антител к эпитопам антигена Е2 выявляла 95% образцов. Предел чувствительности ИФА тест-системы по определению антигенов core соответствовал 2149 'HtHjÊtm РНК ВГС.
Заключение. Разработанные пары диагностических антител позволяют выявлять антигены ВГС без предварительной обработки образцов с целью разрушения иммунных комплексов. 30
