CC BY
28
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ, СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА, ПРОФИЛАКТИКА
Таблица 1
Рабочая коллекция штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки
№ п/п Наименование родовое (видовое) Количество Примечание
Эталонные штаммы
1 Rickettsia conorii 2 Штаммы получены из Всероссийского
2 Rickettsia akarii 2 музея риккетсиальных культур НИИЭМ
3 Rickettsia canada 1 им. Н.Ф. Гамалеи
4 Rickettsia sibirica 2
Штаммы риккетсий, выделенные сотрудниками лаборатории
1 Rickettsia sibirica 24
2 Rickettsia slovaca 1
3 Rickettsia heilongjiangensis 3
4 Rickettsia sibirica strain BJ-90 2
5 Rickettsia raoultii 9
6 Rickettsia tarasevichiae 10
7 Риккетсии группы КПЛ, 48
не идентифицированные молекулярно-
биологическими методами
турах клеток Vero в лаборатории НИИПИ Л.В. Кумпан (Л.В. Кумпан и др., 2004; 2006), 8 из них депонированы во Всероссийском музее риккетсиальных культур и хранятся в коллекции риккетсий Омского НИИПИ.
В настоящее время коллекция состоит из 104 штаммов риккетсий, в том числе эталонных штаммов - 7, авторских - 97.
Из 97 авторских штаммов риккетсий, хранящихся в коллекции, 39 депонировано во Всероссийском музее риккетсиальных культур НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, из них штаммов R.sibirica - 19, R.raoultii - 9, R.tarasevichiae - 8, R.slovaca - 1, R.heilongjiangensis - 1, штамм риккетсий группы КПЛ, не идентифициро-
ванный до вида, - 1. Видовой и количественный состав риккетсий, входящих в коллекцию, представлен в табл. 1.
Таким образом, в Омском НИИ природно-очаго-вых инфекций создана и продолжает пополняться уникальная коллекция оригинальных штаммов риккетсий, которые могут быть использованы в научно-исследовательской работе для идентификации риккетсий на основании генотипических и фенотипических признаков и разработки новых диагностических препаратов. Полученные новые знания могут применяться при изучении природных очагов КР на популяцион-ном уровне.
НОВЫЙ ОЧАГ КЛЕЩЕВОГО РИККЕТСИОЗА В НАЗЫВАЕВСКОМ РАЙОНЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ
И.Е. Самойленко, Т.А. Решетникова, Е.В. Шаламова**, Л.В. Кумпан*, М.А. Лебедева*, А.К. Танцев, Н.В. Рудаков* Омский НИИ природно-очаговых инфекций,
*Омская государственная медицинская академия, **МУЗ «Называевская ЦРБ»
В современный период продолжается формирование ареала R.sibirica, что проявляется наряду с уменьшением эпидемической активности и даже угасанием отдельных очагов процессом формирования новых эпидемически активных очагов клещевого риккетсиоза по границам нозоареала этой инфекции, например в Новосибирской, Тюменской, Курганской областях. Выявлены и изучены очаги клещевого риккетсиоза в Сузунском районе Новосибирской области (Н.В. Рудаков и др., 1990) и Сладковском районе Тюменской области (Н.В. Рудаков, А.С. Оберт, 2001), отмечается активизация очагов в ряде ландшафтных зон Алтайского края, на других эндемичных территориях (Н.В. Рудаков и др., 1988, 1989). Начиная с 2003 г., в Называевском районе Омской области стали отмечаться случаи заболеваний с характерными для клещевого риккетсиоза клинико -эпидемиологическими данными. Заболеваемость КР регистрируется на территориях, примыкающих к Назы-
ваевскому району в Сладковском районе Тюменской области и Северо-Казахстанской области с наиболее высоким уровнем заболеваемости данной инфекцией в Республике Казахстан.
В 2009 г. впервые серологически (РСК с антигеном R.sibirica) подтвержден случай клещевого риккетсиоза в Называевском районе Омской области. Иксодофауна этого района представлена двумя видами клещей -степной клещ (Dermacentor marginatus Shulz.) и луговой клещ (Dermacentor reticulatus Fabr.).
Целью данной работы являлось изучение нового очага клещевого риккетсиоза на территории Омской области.
Материалы и методы. Сбор иксодовых клещей осуществлялся на стандартную волокушу (флаг) по общепринятым методикам в период сезонного пика численности в августе 2009 г. и в начале мая 2010 и 2011 гг. в окрестностях населенных пунктов Князево и Дурбет,
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
откуда поступало наибольшее количество больных с клинической картиной, типичной для клещевого рик-кетсиоза. Всего было собрано 873 экземпляра иксодид. Идентификация клещей была проведена научным сотрудником ОмскНИИПОИ А.К. Танцевым при консультативной помощи д.б.н. М.Г. Мальковой. Инфицирован-ность переносчиков риккетсиями определялась с помощью стандартного гемоцитового теста, а также методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием праймеров RP877p и RP1258n, амплифицирующих фрагмент gltA гена (Roux V. et al., 1997), и праймеров 190.70, 190.180 и 190.701, амплифицирующих фрагмент ompA гена (Roux V. et al., 1996).
Изоляцию штаммов риккетсий проводили в биопробах на морских свинках-самцах (П.Ф. Здродовский, Е.М. Голиневич, 1972) с дальнейшим пассированием полученного материала на культуре клеток Vero. Выращивание монослоя клеток и их заражение выполняли, как описано ранее (Л.В. Кумпан и др., 2008).
Результаты и обсуждение. Иксодовые клещи, собранные на волокушу (флаг), были представлены двумя видами D. marginatus и D.reticulatus. Весной в сборах преобладали клещи D.marginatus - 61,16 % в 2010 г. и 77,78 % в 2011 г. Осенью в сборе доминировал вид D.reticulatus - 69,1 %. По результатам изучения инфи-цированности переносчиков, собранных весной 2010 г., с помощью гемоцитового теста риккетсии группы КПЛ содержались в 49 + 0,7 % клещей.
Из клещей D. marginatus, собранных в мае 2010 года, в биопробе на морских свинках выделены 2 штамма, не идентифицированных до вида риккетсий группы КПЛ. При внутрибрюшинном заражении морских свинок-самцов весом 300-350 г 10 %-ный суспензией из иксодид (по 50 экземпляров на одну биопробу) на 4-5-й день отмечалось повышение температуры и наличие скротального феномена. При вскрытии наблюдалась типичная для клещевого риккетсиоза патолого-анато-мическая картина: увеличение и гиперемия паховых лимфоузлов и тестикул, увеличение и зернистость печени и селезенки. Накопление риккетсий в мазках-отпечатках различных органов (лимфоузлы, тестикулы, селезенка, печень, мозг) от единичных до 75 экземпляров в поле зрения, наибольшее количество риккет-сий отмечалось в тестикулах и селезенке. Исследование сывороток крови зараженных животных в РСК с коммерческим антигеном R.sibirica выявило серо-конверсию в титрах 1:20+ + +, в РСК с антигеном R.tarasevichiae (риккетсии предковой группы) серо-конверсия не выявлена.
В дальнейшем 20 %-ными суспензиями органов биопробных животных (селезенка и мозг) заражали культуру клеток Vero. Для определения уровня накопления риккетсий после каждого пассажа из зараженной культуры клеток готовили препарат-мазок с последующей окраской по методу Здродовского. При пассировании материала в течение 3-х недель накопление риккетсий составляло от 20 до 40 микробных тел в каждом поле зрения. В ПЦР с праймерами, амплифицирующи-ми фрагмент gltA гена, получены положительные результаты в изолятах обоих штаммов, накопленных на клеточных культурах. Кроме того, в органах морской свинки № 28, зараженной суспензией из клещей D. mar-
ginatus, собранных в окрестностях с. Дурбет, получены положительные результаты в ПЦР с праймерами, ам-плифицирующими фрагмент отрА гена.
133 экземпляра клещей D.marginatus и 39 экземпляров D.reticulatus из полевого сбора 2011 г. были исследованы на наличие ДНК риккетсий в ПЦР с прайме-рами, амплифицирующими фрагмент гена цитратсинта-зы. ДНК риккетсий выявлена в 25 экземплярах D.mar-ginatus (18,8+3,4 %) и в 2 экземплярах D.reticulatus. С праймерами, амплифицирующими фрагмент отрА гена, исследовано 69 экземпляров клещей D.marginatus и 2 экземпляра D.reticulatus. Положительными из них оказались 18 экземпляров D.marginatus (26,1+5,3%) и 1 экземпляр D.reticulatus (исследовались только образцы, положительные по gltA гену).
В Называевском районе впервые в 2003 г. выявлен единичный случай острого лихорадочного заболевания, возникшего после присасывания клеща. Пациент в возрасте 40 лет поступил на 5-й день заболевания с температурой до 39°С, обильной петехиальной сыпью на всем теле и первичным аффектом в месте присасывания клеща. Инкубационный период составил 4 дня, после чего через 3 дня появилась сыпь. С 2006 года случаи подобного заболевания регистрируются ежегодно. Всего за этот период из 13 населенных пунктов района в ЦРБ поступило 66 пациентов с характерной для КР клинической картиной, большинство заболевших проживало в селах Князево, Кизляки и Дурбет.
У взрослых пациентов преобладала среднетяже-лая форма заболевания, у детей и молодых людей - легкая, 5 пациентов из всех поступивших отрицали факт присасывания клеща. Инкубационный период составил в среднем от 2 до 5 дней, длительность лихорадки -до 10 дней, но при раннем обращении сокращалась до 5-7 дней. Розеолезные высыпания у 70 % больных появлялись на 3-й день болезни, в остальных случаях - через сутки, при позднем обращении (на 5-7-е сутки лихорадки) сыпь имела розеолезно-петехиальный характер. Практически у всех пациентов обнаружен первичный аффект (корочка с инфильтратом) с регионарным лимфаденитом, при локализации места присасывания на нижних конечностях нередко возникали флебит и отек голени или голеностопного сустава.
Основным клиническим симптомом у детей являлся регионарный лимфаденит (лимфоузлы умеренно-болезненные, плотные), сопровождавшийся субфебриль-ной или нормальной температурой, при своевременно начатой антибактериальной терапии высыпания не обнаруживались, лимфаденит сохранялся до 2 недель.
Таким образом, в результате проведенных исследований установлено существование в Называевском районе Омской области нового природного очага клещевого риккетсиоза, эпидемическое проявление которого отмечается с 2003 г. Места заражения людей находятся в ареале D. та^иШш и D.reticulatus, чем объясняется весенне-осенняя сезонность заболеваний. Положительные результаты лабораторного исследования клещей этих видов на инфицированность риккетсиями, а также выделение двух штаммов риккетсий группы КПЛ из клещей D.marginatus свидетельствуют, что они являются вероятным резервуаром и переносчиком риккетсий в выявленном очаге.
