CC BY
21
Таблица 1
Результаты серологического обследования больных с лимфаденитами на природно-очаговые
и зоонозные бактериальные инфекции
Всего исследовано Выявлены антитела к возбудителям инфекций в диагностических титрах /в реакции/:
туляремия РА/РНГА бартонеллез РНИФ бруцеллез РА псевдотуберкулез РНГА иерсиниоз РНГА листериоз РНГА
абс. %+т абс. %+т абс. %+т абс. %+т абс. %+т абс. %+т
388 32 8,2 + 1,4 9 2,3+0,8 4 1,0+0,5 4 1,0+0,5 14 3,6+0,9 12 3,1+0,8
Второй искомой инфекцией была болезнь кошачьей царапины. Сыворотки исследовали, начиная с разведения 1:10. Положительный результат получен в 51 случае: в титре 1:10 - 30, 1:20 - 10, 1:40 - 7, 1:80 -3, 1:160 - 1. Антитела к бартонеллам в «рекомендованном» для РНИФ диагностическом титре 1:64 и выше (О. Ю. Медянников и др., 2005) выявлены у 4 больных, в пяти случаях имело место нарастание титра антител в парных сыворотках до титра 1:40. Диагноз БКЦ был поставлен четырем больным детям в возрасте от 3 до 6 лет, обследовавшимся на данную инфекцию. Царапины детям были нанесены домашними кошками (частный сектор), локализовались в области лица или рук. У всех детей отмечено увеличение регионарных лимфатических узлов (шейных, затылочных, подмышечных). У двух больных наблюдалась лихорадка до 39 градусов. В трех случаях было получено нарастание титра антител в парных сыворотках: у двух больных с отрицательного результата при первом исследовании до положительного в титре 1:40 при повторном, у одного больного - с 1:10 до 1:160. В четвертом случае - титр 1:80 (однократно). С целью дифференциальной диагностики сыворотки больных детей были исследованы на антитела к возбудителям туляремии, листериоза, бруцеллеза, псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза - все с отрицательным результатом.
Сыворотки крови больных, направленные для исследования на туляремию, изучались на антитела к возбудителям других инфекций. Помимо указанных в таблице положительных результатов в диагностических титрах были выявлены антитела в титре 1:50 к возбудителям кишечного иерсиниоза в 23 (5,9 %) и листе-риоза в 5 (1,3 %) сыворотках. Учитывая, что исследования проводились в основном ретроспективно и однократно, не всегда была возможность сопоставить полученные положительные результаты серологических реакций с другими клиническими проявлениями (кроме лимфаденитов) и эпидемиологическим анамнезом. Поэтому можно предполагать, что при повторном исследовании у части больных в динамике инфекционного процесса было бы выявлено нарастание титра антител. В то же время нельзя исключить вероятность анамнестического характера выявленных антител в низких титрах вследствие перенесенного ранее заболевания.
Выводы. Полученные результаты служат поводом рекомендовать более широкий спектр искомых патогенов для обследования при лимфаденитах с подозрением на природно-очаговую или зоонозную инфекции, а больных с царапинами или укусом кошки обследовать на бартонеллы. Для получения более достоверных результатов серологических реакций необходимо исследовать парные сыворотки.
ИСТОРИЯ СОЗДАНИЯ
И ЭТАПЫ РАЗВИТИЯ РАБОЧЕЙ КОЛЛЕКЦИИ ШТАММОВ РИККЕТСИЙ ОМСКОГО НИИ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ
Т.А. Решетникова, В.К. Ястребов, Н.В. Рудаков, С.Н. Шпынов, И.Е. Самойленко, Л.В. Кумпан ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора, Омская государственная медицинская академия
В Омском НИИ природно-очаговых инфекций риккетсиологами (М.С. Шайманом, Н.В. Вощакиной,
B.К. Ястребовым, Н.В. Рудаковым, Т.А. Решетниковой,
C.Н. Шпыновым, И.Е. Самойленко, Л.В. Кумпан) создана и продолжает пополняться уникальная коллек-
ция штаммов риккетсий, не имеющая аналогов в мире. Начало созданию коллекции было положено в 1954 г., когда М.С. Шайманом из крови больного (штамм «Сид-ро») и из гамазовых клещей (штамм «Г-1/54») были выделены первые штаммы риккетсий. В 60-70-е годы
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
ХХ в. омскими риккетсиологами проводилось изучение природных очагов клещевого риккетсиоза (КР) на территориях Западной, Восточной Сибири и Алтайского края с изоляцией штаммов риккетсий. Так, М.С. Шай-маном, Н.В. Вощакиной, В.К. Ястребовым были выделены штаммы риккетсий из крови больных и 6 видов иксодовых клещей (Lpersulcatus, D.reticuIatus, D.nut-taIШ, D.silvarum, D.marginatus, Н.сопстпа), собранных на территориях Новосибирской, Тюменской, Кемеровской, Курганской, Читинской, Амурской областей, Красноярского и Алтайского краев и Тувинской АССР.
В 80-90-е годы изучение очагов КР продолжено М.С. Шайманом, Т.А. Решетниковой, Н.В. Рудаковым, С.Н. Шпыновым, И.Е. Самойленко на территориях Читинской, Иркутской областей, Бурятской АССР, Алтайского, Красноярского, Хабаровского, Приморского краев и Хакасской АО с изоляцией штаммов из 4 видов клещей рода Dermacentor и HaemaphysaIis сопаппа. В результате были выделены такие «известные» штаммы риккетсий, как «Сидро», «Г-1/54», «Кочубей», «Дол-женко», «Тогучин», «Казанцева», «Портунова», «130/66», «Карпунино-19/69», «Приморье-9/81, 25/81, 30/81, 32/84», «Баево-105/87, 107/87», «Горный-54/88», «Су-зун-11/89» и др., которые являются украшением и гордостью Омской коллекции риккетсий.
За период с 1954 по 1992 г. сотрудниками института было изолировано 74 штамма риккетсий из крови больных и различных видов иксодовых клещей, собранных в разных частях нозоареала КР. Все штаммы, за исключением одного, были выделены в биопробах на морских свинках-самцах и куриных эмбрионах. Штамм «Каратуз-59/92» изолирован из клещей D. пШ-taIIii в биопробах на сирийских хомячках. Изучение штаммов риккетсий проводилось в соответствии с общей схемой дифференциации (П.Ф. Здродовский, Е.М. Голиневич, 1972). Все штаммы, выделенные в этот период, по биологическим и антигенным свойствам были идентифицированы как Я^Ылса. Однако при сравнительном изучении биологических свойств штаммов риккетсий, выделенных в Забайкалье, Приморье и Республике Алтай из разных видов иксодовых клещей, установлены существенные отличия штаммов Я^Ляпса по патогенным и антигенным свойствам (Т.А. Решетникова, В.А. Макарова, 1989; Н.В. Рудаков с соавт., 1996).
В 90-е годы все чаще для изучения и идентификации риккетсий применяются методы генетического анализа. Первоначально генетическая идентификация штаммов R.sibirica из коллекции Омского НИИПИ, различающихся по региону, источнику и времени выделения, проводилась в лаборатории молекулярной биологии и генетики риккетсий НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Сравнительное изучение ДНК 6 штаммов риккетсий проведено методами анализа полиморфизма длин ре-стрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ) и ДНК-зондирования с использованием зонда из ДНК R.prowazekii. Генотипический анализ еще 15 штаммов R.sibirica из коллекции проведен на основе изучения ПДРФ ампли-фицированной ДНК (аДНК) в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием праймеров области гена цитратсинтазы R.prowazekii и области гена специфического поверхностного белкового антигена 190 кДа R.rickettsii. Изучение штаммов R.sibirica проведено в сравнении с R.conorii и R.sIovaca. В результате гено-типического анализа 21 штамма с использованием
вышеуказанных методов они были идентифицированы как R.sibirica, показана идентичность изученного 21 штамма R.sibirica между собой при использовании праймеров гена 190 кДа и эндонуклеазы PstI и отличие их от R.slovaca и R.conorii. При использовании этих же праймеров и эндонуклеазы RsaI - также полная идентичность штаммов R.sibirica между собой, а также с R.slovaca и отличия их от R.conorii. Несмотря на высокую генетическую однородность штаммов R.sibirica, установлены выраженные отличия их по вирулентности (Н.М. Балаева с соавт., 1993; Balaeva N.M. et al., 1996; Т.А. Решетникова с соавт., 1996).
Дальнейшее изучение культур риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ) из Омской коллекции методами генетического анализа проведено в лаборатории Средиземноморского университета в Марселе С.Н. Шпыновым. Проведена идентификация 31 штамма риккетсий из очагов КР с применением комплекса молекулярно-биологических методов (ПЦР+ секвенс-анализ).
Результаты генотипирования показали, что 25 из 31 изученного штамма риккетсий группы КПЛ представлены видом R. sibirica. 2 штамма: «Приморье 30/81» и «Приморье 32/84», изолированные от клещей D.sil-varum из Приморского края в 1981 и 1984 гг., были идентифицированы как R.sibirica subsp. BJ-90. Эти штаммы, являющиеся геновариантом R.sibirica, выделены Т.А. Решетниковой за 9 и 6 лет до изоляции первых китайских штаммов этой риккетсии (1990). Штамм «Карпунино 19/69», выделенный из клещей D.margi-natus в Курганской области М.С. Шайманом, показал 100 % гомологии с R.slovaca. Это единственный штамм R.slovaca, выделенный в России. Три штамма риккетсий, выделенные из клещей H.concinna в Алтайском и Приморском краях, были генотипированы как R.hei-longjiangensis. Первый штамм этого вида риккетсий -«130/66» - изолирован из клещей H.concinna в Красногорском районе Алтайского края В.К. Ястребовым. Еще два штамма R.heilongjiangensis - «Приморье-9/81» и «Приморье-25/81» - выделены Т.А. Решетниковой из клещей H.concinna, собранных в Приморском крае в 1981 г. Все три штамма R.heilongjiangensis были выделены в Омском НИИПИ до первых китайских штаммов (Shpynov S.N. et al.,2006).
В середине 90-х годов в Омском НИИПИ для культивирования и изоляции клещевых протеобактерий были применены методы с использованием живых биотехнологических систем (перевиваемые клеточные культуры, экспериментальные линии переносчиков), что позволило выделить ряд новых генотипов риккетсий с неустановленной патогенностью, которые не культивируются на традиционных риккетсио-логических моделях. 9 штаммов риккетсий новых генотипов, выделенные на клещевой экспериментальной модели (КЭМ) И.Е. Самойленко (Samoylenko I.E. et al., 2006), в последующем были описаны как новый вид риккетсий группы КПЛ - Rickettsia raoultii sp. nov. (Mediannikov O. et al., 2008). Впервые С.Н. Шпыновым описан новый генотип риккетсий - «Candidatus Rickettsia tarasevichiae», названный в честь российского риккет-сиолога академика Ирины Владимировны Тарасевич, который отнесен к риккетсиям предковой группы и широко распространен в клещах I.persulcatus на территории России (Shpynov et al., 2003). 10 штаммов риккетсий этого генотипа было изолировано на куль-
Таблица 1
Рабочая коллекция штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки
№ п/п Наименование родовое (видовое) Количество Примечание
Эталонные штаммы
1 Rickettsia conorii 2 Штаммы получены из Всероссийского
2 Rickettsia akarii 2 музея риккетсиальных культур НИИЭМ
3 Rickettsia canada 1 им. Н.Ф. Гамалеи
4 Rickettsia sibirica 2
Штаммы риккетсий, выделенные сотрудниками лаборатории
1 Rickettsia sibirica 24
2 Rickettsia slovaca 1
3 Rickettsia heilongjiangensis 3
4 Rickettsia sibirica strain BJ-90 2
5 Rickettsia raoultii 9
6 Rickettsia tarasevichiae 10
7 Риккетсии группы КПЛ, 48
не идентифицированные молекулярно-
биологическими методами
турах клеток Vero в лаборатории НИИПИ Л.В. Кумпан (Л.В. Кумпан и др., 2004; 2006), 8 из них депонированы во Всероссийском музее риккетсиальных культур и хранятся в коллекции риккетсий Омского НИИПИ.
В настоящее время коллекция состоит из 104 штаммов риккетсий, в том числе эталонных штаммов - 7, авторских - 97.
Из 97 авторских штаммов риккетсий, хранящихся в коллекции, 39 депонировано во Всероссийском музее риккетсиальных культур НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, из них штаммов R.sibirica - 19, R.raoultii - 9, R.tarasevichiae - 8, R.slovaca - 1, R.heilongjiangensis - 1, штамм риккетсий группы КПЛ, не идентифициро-
ванный до вида, - 1. Видовой и количественный состав риккетсий, входящих в коллекцию, представлен в табл. 1.
Таким образом, в Омском НИИ природно-очаго-вых инфекций создана и продолжает пополняться уникальная коллекция оригинальных штаммов риккетсий, которые могут быть использованы в научно-исследовательской работе для идентификации риккетсий на основании генотипических и фенотипических признаков и разработки новых диагностических препаратов. Полученные новые знания могут применяться при изучении природных очагов КР на популяцион-ном уровне.
НОВЫЙ ОЧАГ КЛЕЩЕВОГО РИККЕТСИОЗА В НАЗЫВАЕВСКОМ РАЙОНЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ
И.Е. Самойленко, Т.А. Решетникова, Е.В. Шаламова**, Л.В. Кумпан*, М.А. Лебедева*, А.К. Танцев, Н.В. Рудаков* Омский НИИ природно-очаговых инфекций,
*Омская государственная медицинская академия, **МУЗ «Называевская ЦРБ»
В современный период продолжается формирование ареала R.sibirica, что проявляется наряду с уменьшением эпидемической активности и даже угасанием отдельных очагов процессом формирования новых эпидемически активных очагов клещевого риккетсиоза по границам нозоареала этой инфекции, например в Новосибирской, Тюменской, Курганской областях. Выявлены и изучены очаги клещевого риккетсиоза в Сузунском районе Новосибирской области (Н.В. Рудаков и др., 1990) и Сладковском районе Тюменской области (Н.В. Рудаков, А.С. Оберт, 2001), отмечается активизация очагов в ряде ландшафтных зон Алтайского края, на других эндемичных территориях (Н.В. Рудаков и др., 1988, 1989). Начиная с 2003 г., в Называевском районе Омской области стали отмечаться случаи заболеваний с характерными для клещевого риккетсиоза клинико -эпидемиологическими данными. Заболеваемость КР регистрируется на территориях, примыкающих к Назы-
ваевскому району в Сладковском районе Тюменской области и Северо-Казахстанской области с наиболее высоким уровнем заболеваемости данной инфекцией в Республике Казахстан.
В 2009 г. впервые серологически (РСК с антигеном R.sibirica) подтвержден случай клещевого риккетсиоза в Называевском районе Омской области. Иксодофауна этого района представлена двумя видами клещей -степной клещ (Dermacentor marginatus Shulz.) и луговой клещ (Dermacentor reticulatus Fabr.).
Целью данной работы являлось изучение нового очага клещевого риккетсиоза на территории Омской области.
Материалы и методы. Сбор иксодовых клещей осуществлялся на стандартную волокушу (флаг) по общепринятым методикам в период сезонного пика численности в августе 2009 г. и в начале мая 2010 и 2011 гг. в окрестностях населенных пунктов Князево и Дурбет,
