CC BY
116© ПЫШНОГРАЕВА К.Г.
НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУПП КРОВИ
К.Г. Пышнограева
ФГУЗ «Клиническая больница №51 Федерального медико-биологического агентства», клинико-биохимическая лаборатория, ЖЗАТО Железногорск Красноярского края
662990, Красноярский край, г. Железногорск, ул. Кирова, Е-таИ:кЬ-51@тес126.кга8поуаг8к.ги
Резюме. В статье дан современный подход к выполнению всего спектра иммуногематологических исследований на основе применения диагностической гелевой технологии ScANGEL.
Ключевые слова: иммуногематологические исследования, типирование антигенов, скрининг антител, гелевая технология.
Введение. Настоящую революцию в иммуногематологических исследованиях произвела микротипи-рующая гелевая технология, предложенная французским ученым Y. Lapierre в 1986 году. Эта технология использует комбинацию методов агглютинации и гель-фильтрации. Все тесты проводятся в пластиковых диагностических карточках, которые содержат микропробирки, заполненные полиакриломидным гелем.
Эта современная технология для определения антигенов эритроцитов, скрининга и идентификации антител. Гель в диагностических карточках может быть нейтральным, либо содержащим специфические мо-ноклональные антитела или антиглобулиновый реагент.
Оборудование и реагенты. Для использования данной технологии необходима центрифуга Scangel, инкубатор Scangel, диагностические карты. Необходимые реагенты: буферный раствор низкой ионной силы Sc.liss, стандартные эритроциты Reverscan, А1, В. Стандартные эритроциты Scanсell с определенно заданными фенотипами (ССДее, ссДЕЕ, ^dee).
Методика и материалы исследования. Исследуемые эритроциты или стандартные эритроциты и исследуемая сыворотка (плазма) помещаются в соответствующие микропробирки, где происходит реакция агглютинации, затем диагностические карточки центрифугируются для разделения результатов реакции. При этом неагглютинированные эритроциты свободно проходят между частицами геля и образуют осадок на дне микропробирки, в то время как агглютинированные располагаются на поверхности или в толще геля. Расположение агглютинатов в геле определяется силой агглютинации и положительный результат может быть оценен от 1+ до 4+. Размер частиц геля позволяет достичь наилучших результатов чувствительности и специфичности. А его прозрачность делает считывание результатов более надежным и позволяет интерпретировать самые сложные диагностические случаи.
Виды исследования. SCANGEL - это определение группы крови, резус-принадлежности, широкое
типирование антигенов эритроцитов всех известных систем, скрининг и идентификация аллоантиэритро-цитарных антител, диагностика аутосенсибилизации к антигенам эритроцитов, индивидуальный подбор ге-мокомпонентов для переливания и пробы на совместимость, диагностика посттрансфузионных осложнений и гемолитической болезни новорожденных, единственный метод выявления посттрансфузионных «химер» и незаменимая система при диагностике в сложных и сомнительных случаях (онкология, гематология). Обращает на себя внимание то обстоятельство, что диагностика трансфузионных химер в гелевой системе не представляет сложности. Если в исследуемом образце присутствуют две популяции эритроцитов, имеющие различный набор антигенов, то в микропробирке, предназначенной для диагностики антигена, по которому имеется несовпадение, произойдет разделение эритроцитов на два хорошо заметных слоя.
Преимущества технологии SСANGEL.
* отсутствие отмывания эритроцитов;
* сокращение времени на проведение полного иммуногематологического исследования в 5 раз;
* возможность использования небольшого количества крови;
* исследование крови, заготовленной на консервантах и стабилизаторах без искажения результатов;
* стабильность конечной картины результатов;
* объективный учет результатов и их стандартизация;
* возможность автоматизации исследований и компьютерной обработки результатов;
* высокая чувствительность и специфичность тестов.
Результаты и обсуждение. Резус-лаборатория КБ-51 использует гелевую технологию ScanGel с ноября 2008 года. Особое внимание уделяется контролю качества иммуногематологических анализов. Наша лаборатория принимает участие в Федеральной системе внешнего контроля качества (ФСВОК) с применением гелевой технологии, что обеспечивает 100%
совпадение результатов. Кроме того, осуществляется ежедневный контроль внутрилабораторного контроля качества, путем использования образцов стандартных эритроцитов и антител известной специфичности. За истекший период с ноября 2008 года по октябрь 2009 года методом гелевой технологии Резус-лабораторией КБ-51 обследовано 1000 доноров. При этом получены некоторые расхождения в фенотипе крови доноров, т. к. у них дополнительно выявлены следующие антигены С, Е, с, Ди. В единичных случаях выявлены слабые аллоантитела (а-Д, а-Е). Такие расхождения вполне укладываются в статистику начального этапа применения гелевого теста.
У больных при различных патологических состояниях ( сепсис, цирроз печени, ожоговая болезнь) определение групп крови АВО и резус-принадлежности затруднено, т.к. в этих случаях агглютинабельность эритроцитов повышена. При лейкозах наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов. Во избежании ошибок при определении группы крови и резус-принадлежности в этих случаях необходимо пользоваться методом гелевой технологии.
Также, с помощью гелевого метода повышается частота выявления антител до 95% по сравнению с 57% при использовании желатина.
Это обусловлено тем, что в гелевом методе используется большее соотношение сыворотки и клеток. Кроме того, постановка непрямого антиглобулиново-го теста в геле не требует отмывания эритроцитов, что в свою очередь уменьшает возможность удаления с поверхности эритроцитов слабо фиксированных антител. Отсутствие этапа отмывания также способствует уменьшению количества слабоположительных и лож-ноотрицательных результатов, вызываемых нейтрализацией антиглобулинового реагента следами сыворотки. Также исчезает необходимость добавления сенсибилизированных эритроцитов в случае отрицательных результатов с целью проверить эффективность отмывания и активность антиглобулинового реагента.
Основной причиной гемолитических посттранс-фузионных реакций и осложнений, а также гемолитической болезни новорожденных являются антитела к антигенам эритроцитов.
Таким образом, диагностика антител - неотъемлемая часть иммуногематологического исследования крови доноров и реципиентов, от точности которой во многом зависит иммуногематологическая безопасность трансфузионной терапии. Точность исследования определяется возможностями метода выявления антител. Гелевый тест в настоящее время является самым чувствительным серологическим методом, который позволяет выявить до 99% клинически значимых антител.
Рис. 2. Определение группы крови методом микротипиру-ющей гелевой технологии проводит врач-лаборант ФГУЗ КБ №51ФМБА России К.Г. Пышнограева.
В целях профилактики трансфузионных осложнений и аллоиммунизации рекомендуется практика определения антиэритроцитарных антител у доноров и использование тестов повышенной чувствительности (гелевый тест) для выявления очень слабых аллоантител.
Выводы:
1. Гелевый тест является очень чувствительным методом, который сводит к минимуму ошибки, встречающиеся при использовании традиционных методик.
2. Особенно эта методика необходима для выявления трудноопределяемых слабых антигенов А2 и Ди.
3. Система ScanGel позволяет выявлять и идентифицировать весь спектр антител к антигенам эритроцитов, в том числе и очень слабых аллоантител (а-С, а-Е, а-с, а-е, а-Ке11).
4. Таким образом, применение гелевой методики значительно повышает качество выполнения имму-ногематологических исследований и тем самым способствует поддержанию трансфузионной и иммуноге-матологической безопасности на современном уровне.
Список литературы:
1. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногематоло-гии. Санкт-Петербург, 2004.
2. Волкова О.Я. Гелевая технология - новое направление в иммуногематологии // Журнал «Клинико-лабораторная диагностика». - 2007. №2.
3. Волкова О.Я. Руководство по внутренним болезням. // Глава «Группа крови», 2007.
4. Дедков Е.Д. Методические указания «Требования к проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ», - Российский научно-исследовательский институт, 2002.
ADVANCED TECHNOLOGIES AT THE BLOOD GROUPING K.G.Pyshnograeva
Clinical Hospital No. 51, Clinicodiagnostic Laboratory, Zheleznogorsk, RF
Abstract. The article describes a modern approach in immunohematologic investigations in the wide sense; SCANGEL has been taken as the basic diagnostic gel technology.
Key words: Immunihematology, antigen titration, antibodies screening, gel test, Zheleznogorsk city.
Статья поступила в редакцию 12.02.2010 г.
