CC BY
15
юна и санитария 5/2010
3. Артемова Т. 3., Киселева Б. С., Гегечкори Н. И. и яр. // Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды: Материалы IX Всесоюзной конф. — М., 1983. - С. 12-14.
4. Головина С. В., Журавлев П. В., Але шил В. В., Панасовеи О. П. // Социально-региональный мониторинг: методология, региональные особенности, управленческие решения: Материалы пленума. — М., 2003. — С. 77—79.
5. Головина С. В., Панасовеи, О. П., Алешня В. В. и др. // Гиг. и сан. - 2008. - № 2. - С. 77-79.
6. Мазаев В. Т., Илышцкий А. П., Шлепнина Т. Г. Руководство по гигиене питьевой воды и питьевого водоснабжения. — М., 2008.
7. Методические указания по эпидемиологической оценке санитарно-гигиенических условий в целях профилактики кишечных инфекций. — М., 1986.
8. Методические указания 4.2.1884—04. Санитарно-микробио-логический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов. — М., 2004.
9. Недачин А. £., Артемова Т. 3., Доскина Т. В. и др. // Вода: Экология и технология: Сборник материалов 5-го Международного конгресса "Экватек-2002". - М., 2002. - С. 701-702.
10. Недачин А. Е., Артемова Т. 3., Дмитриева Р. А. и др. // Гиг. и сан. - 2005. - № 6. - С. 14-18.
11. Онищенко Г. Г. П Гиг. и сан. - 2003. - № 1. — С. 3—10.
12. Онищенко Г. Г. // Гиг. и сан. - 2003. - № 2. - С. 3-16.
13. Рахманин Ю. А., Недачин А. В., Артемова Т. 3. и др. // Материалы IX Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей. - M., 2001. — Т. 1. - С. 576-580.
14. СанПиН 2.1.5.980—00. Гигиенические требования к охране поверхностных вод. — М., 2000.
15. СанПиН 2.1.4.1074—01. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. — М., 2002.
16. Dawson D. J.. Sartory D. P. // Br. Med. Bull. - 2000. - Vol. 56, N I. — P. 74-83.
17. Puyment P.. Berte A., Prévost M. et al. // Can. J. Microbiol. — 2000. - Vol. 46, N 6. - P. 565-576.
Полупила 14.02.10
Гигиеническое нормирование и методы контроля биологического загрязнения
С Л. Г. ПАНТЕЛЕЕВА, 2010
УДК 614. 48:61!. 28
Л. Г. Пантелеева
НОВЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ И ОЦЕНКЕ ВИРУЛИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
ФГУН НИИ дезинфектологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва
Многообразие вирусов — возбудителей инфекционных болезней человека, сложности культивирования некоторых из них (вирусы гепатитов А, В, С, ВИЧ) определяют необходимость поиска тест-вирусов, близких к ним по устойчивости к дезинфицирующим средствам. В действовавших ранее и в новом методическом документе ("Методические указания по изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств" МУ 3.5.2431—08) в качестве одного из тест-вирусов включен полиовирус (вакцинный штамм). В целях гармонизации с EN 14476 в документ вошли дополнительно аденовирус и термоустойчивый парвовирус. Критерием вирулицидной активности принято снижение титра тест-вируса не менее чем на 4 logw Для исследований вирулицидной активности рекомендован суспензионный метод. Институтом полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова для выбора дезинфектантов, эффективных в целях дезинфекции при гепатите А, предложен вирус гепатита А человека; для определения активности дезинфектантов в отношении вируса гепатита В человека рекомендован суррогатный вирус — гепатита В уток (согласно требованиям ЕРА, США). В перечень тест-вирусов воше/i вирус гепатита С человека, рекомендованный НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского. Наряду с ним включен также вирус бычьей диареи — суррогатный для вируса гепатита С человека (согласно требованиям DVV и RK1, Германия). Конкретизировано оптимальное время обеззараживания разных объектов при исследованиях эффективности дезинфицирующих средств.
Ключевые слова: тест-вирусы, дезинфицирующие средства, вирулицидная активность, суспензионный метод, методические указания
L. G. Panteleyeva. - NEW GUIDELINES FOR INVESTIGATING AND EVALUATING THE VIRUCIDAL ACTIVITY OF DISINFECTANTS
The diversity of viruses that cause human infectious diseases and problems in culturing some of them, such as hepatitis A, B, and С viruses and HIV, necessitate a search for test viruses that are closely resistant to disinfectants. The early methodical documents and the new one "Guidelines for Investigating and Evaluating the Virucidal Activity of Disinfectants" (МУ3.5.2431-08) include poliovirus (vaccine strain) as one of the test viruses. Adenovirus and thermoresistant parvovirus are additionally incorporated in order to harmonize with EN 14476. At least a 4-loglO reduction in test virus titers is taken as a criterion for virucidal activity. The suspension method is recommended for investigations of virucidal activity. The M. P. Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides has proposed human hepatitis A virus to choose disinfectants that are effective for decontamination in hepatitis A and recommended a surrogate virus, namely duck hepatitis В virus, to determine the activity of disinfectants against human hepatitis В (according to the U. S. Environmental Protection Agency's guidelines). The list of test viruses contains human hepatitis С virus recommended by the D. 1. Ivanovsky Research Institute of Virology. Along with the virus, the list also includes bovine viral diarrhea virus that is surrogate for human hepatitis С virus (according to the guidelines of the Society for Control of Viral Diseases and the Robert Koch-Institute, Germany). The optimal time for various objects to be decontaminated is specified when the efficacy of disinfectants is studied.
Key words: test viruses, disinfectants, virucidal activity, suspension method, guidelines
Огромный спектр вирусов, патогенных для человека, различия в устойчивости к действию физических и химических дезинфицирующих агентов не позволяют проводить исследования их вирули-цидной активности на каждом конкретном вирусе. Сложности культивирования некоторых из них, например вирусов гепатитов А, В, С, ВИЧ, необходимость подтверждения утраты вирусом инфекционной активности в результате воздействия дезинфицирующего средства определяют актуальность поиска тест-вирусов. К тест-вирусам предъявляются определенные требования, главное из которых — устойчивость к дезинфицирующим средствам, находящаяся на одном уровне с вирусом (или вирусами), против которого направлено исследуемое средство, или несколько превышающая ее. Кроме того, они не должны представлять опасность при работе с ними для персонала лабораторий, но должны сравнительно легко культивироваться на чувствительных биологических объектах.
Согласно обобщенным данным, вирусы обладают различной устойчивостью к дезинфектантам [10, 18]. В порядке снижения устойчивости они располагаются следующим образом:
— вирусы полиомиелита, Коксаки, ECHO, вирус гепатита А, риновирусы, парвовирусы (и другие безоболочечные вирусы);
— ротавирусы, реовирусы;
— аденовирусы;
— вирусы гепатитов В и С, ВИЧ, вирусы гриппа, парагриппа, герпеса, осповакцины, коронавирусы (и другие вирусы, имеющие супракапсидную оболочку).
Наиболее устойчивыми из них являются пикор-навирусы, втом числе вирус полиомиелита, вакцинные штаммы которого сравнительно легко культивируются в клеточных культурах. Если исследуемое средство проявляет вирулицидную активность в отношении полиовируса, то оно, безусловно, будет активно в отношении менее резистентных вирусов. Основываясь на этом утверждении, вирус полиомиелита 2-го типа (вакцинный штамм) включен в качестве одного из тест-вирусов для исследований вирулицидной активности дезинфицирующих средств в Методические рекомендации по определению вирулицидной активности препаратов [4]. Еще одним тест-вирусом, вошедшим в эти рекомендации, был вирус фиппа типа А (вакцинный штамм PR-8). Останавливаться подробно на характеристиках двух других тест-вирусов, включенных в перечень для определения вирулицидной активности де-зинфектантов, нет необходимости в связи с тем, что один из них — вирус гепатита собак — был чрезвычайно устойчив к дезинфицирующим средствам, а вирус осповакцины вскоре был исключен из перечня вирусов для работы в обычных лабораториях.
В целях гармонизации с методиками, используемыми в других странах, в частности в Германии, в следующий методический документ [6] включен полиовирус 1-го типа (вакцинный штамм Sabin LSc-2ab) взамен полиовируса 2-го типа. Наряду с полиовирусом в этот методический документ снова
Пантелеева Л. Г. — ст. науч. сотр., канд. мед. наук, зам. дир. по научной работе (сНвтАг^таП. ги).
вошел вирус фиппа типа А (вакцинный штамм PR-8) в качестве второго тест-вируса.
Сложившаяся в стране неблагоприятная ситуация по заболеваемости парентеральными вирусными гепатитами [9], ВИЧ-инфекцией [7] требовала ответа на вопрос: какие дезинфицирующие средства эффективны при обеззараживании изделий медицинского назначения и других объектов, загрязненных кровью и другими биологическими субстратами, опасными в передаче этих инфекций, в лечебных учреждениях, в клинических и других лабораториях, на станциях переливания крови? С учетом устоявшегося в течение нескольких десятилетий [11] мнения о высокой устойчивости вируса гепатита В к дезинфицирующим средствам полиовирус в качестве тест-вируса был вполне приемлем для выбора дезинфектантов, эффективных также и в отношении вируса гепатита В. Однако проверить активность исследуемого средства на вирусе гепатита В не представлялось возможным ввиду отсутствия чувствительной биологической модели. Использование для этой цели обезьян-шимпан-зе [14] позволило подтвердить активность всего нескольких действующих веществ (глутаровый альдегид, изопропанол, два четвертичных аммониевых соединения, одно фенолсодержащее), входящих в состав некоторых дезинфицирующих средств. Широкое использование дорогостоящей биологической модели для исследований новых дезинфектантов было невозможным. В связи с этим поиск тест-вируса или суррогатного вируса, адекватного вирусу гепатита В, продолжался. Временно в качестве альтернативы в некоторых европейских странах, в частности в Германии, использовали 3 косвенных метода: 1) ПЦР для обнаружения ДНК вируса; 2) тест МАДТ — морфологической альтерации и дезинтеграции с использованием электронной микроскопии; 3) выявление HBsAg с использованием радиоиммунного, иммуноферментного или хемолюминесцентного метода.
Эти методы по сути дела должны подтвердить, что вирус потерял свои инфекционные свойства. Есть ряд мнений как за, так и против каждого из методов: тест на обнаружение ДНК-полимеразы не позволяет объективно оценить, потерял ли вирус инфекционные свойства, т. е. способность вызывать заболевание; тест МАДТ не гарантирует, что все вирусные частицы разрушены; отрицательный результат на HBsAg не гарантирует отсутствия инфекционных свойств.
В 2005 г. Европейским стандартом EN 14476 [13] для оценки вирулицидной активности дезинфектантов (см. таблицу) предложены 2 тест-вируса: полиовирус 1-го типа (вакцинный штамм Sabin LSc-2ab) и аденовирус 5-го типа (штамм Аденоид/75), а для исследований —суспензионный метод. Кроме того, при выборе средств для термохимической дезинфекции (например, белья) рекомендован бычий парво-вирус (штамм Хаден). Согласно этому документу, вирулицидным является средство, которое позволяет снизить количество вируса не менее, чем на 4 logl0 в сравнении с его исходным титром.
В Германии [16] в соответствии с действующими правилами (DW, RKI) для первичной оценки вирулицидной активности дезинфектантов предложено, кроме полиовируса и аденовируса, использование дополнительно двух тест-вирусов: вируса
]х[игиена и санитария 5/2010
Тест-вирусы для изучения активности дезинфицирующих средств
Россия [2]
Европейские страны [9]
Германия [13]
США (II)
Полиовирус (вакцинный штамм) Аденовирус
Для термохимической дезинфекции — парвовирус (бычий)
Вирус гепатита А человека
Для оценки активности в отношении вирусов гепатитов В, С:
— вирус гепатита В уток
— вирус гепатита С человека (или вирус бычьей диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота)
Полиовирус (вакцинный Полиовирус (вакцинный штамм) штамм)
Аденовирус Аденовирус
Для термохимической де- Вирус осповакцины 5У-40
зинфекции — парвовирус
(бычий)
Для термохимической дезинфекции — парвовирус(бычий) Для оценки активности в отношении вирусов гепатитов В, С (дсзинфсктанты с ограниченной
вирулицидной активностью): -
— вирус осповакцины
— вирус бычьей диареи
Для оценки активности в отношении вируса гепатита В человека:
— вирус гепатита В уток
Примечание. Приведены тест-вирусы определенных штаммов, указанных в тексте статьи.
осповакцины и вируса БУ40. Для дезинфектантов с ограниченным спектром вирулицидной активности, неспособных инактивировать полиовирус (некоторые четвертичные аммониевые соединения, изопропиловый спирт и др.), рекомендовано тестирование на трех слаборезистентных тест-вирусах: вирусе бычьей диареи, вирусе осповакцины, вирусе 5У40. Дезинфектанты, способные инактивировать эти 3 тест-вируса, относят к группе средств с ограниченной вирулицидной активностью. Такие средства могут быть использованы против вирусов гепатитов В, С (и менее резистентного ВИЧ).
Ряд публикаций [12, 14, 17] свидетельствует о близкой устойчивости к дезинфектантам вирусов гепатита В человека и гепатита В уток. В США вышел документ [15], регламентирующий возможность и методику определения вирулицидной активности дезинфицирующих средств на вирусе гепатита В уток — суррогатной модели для вируса гепатита В человека.
В целях совершенствования методических подходов к изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств, гармонизации с зарубежными методиками авторским коллективом из представителей трех научно-исследовательских институтов (ФГУН НИИ дезинфектологии Рос-потребнадзора, Учреждение РАМН — Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова и НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН) во главе с акад. М. Г. Шандалой разработаны "Методические указания по изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств" МУ 3.5.2431—08, утвержденные Рос-потребнадзором в 2С08 г. При подготовке этого документа учтены рекомендации ЕЫ 14476 [13] относительно использования перечисленных выше 3 тест-вирусов для исследования вирулицидной активности дезинфектантов и включен суспензионный метод наряду с методом батистовых тест-объектов, существовавшим ранее [4, 6]. Принят также критерий оценки вирулицидной активности дезинфектантов — снижение не менее чем на 4 1о§10 титра тест-вирусов по сравнению с исходным (до контакта с исследуемым средством).
Кроме того, для изучения активности средства в отношении вируса гепатита В сотрудниками ИП-ВЭ им. М. П. Чумакова [8] предложен вирус гепатита В уток (штамм УФА-04), а в отношении вируса гепатита А [3] — вирус гепатита А человека (штамм HAS-15). Оба вируса включены в новый методический документ [5]. НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского для исследования активности дезинфектантов в отношении вируса гепатита С рекомендован [1, 2] вирус гепатита С человека (штамм D1). С этой же целью возможно использование вируса бычьей диареи — суррогатного для вируса гепатита С человека. Вирус бычьей диареи регламентирован DW, RKI [16].
Критерии эффективности исследуемых дезинфектантов при обеззараживании различных объектов (изделия медицинского назначения, поверхности приборов, оборудования и др.) остались прежними, но конкретизированы в отношении оптимального времени экспозиции для каждого объекта. Новые методические указания [5] дополнены рядом методик исследований вирулицидной активности дезинфектантов: для обеззараживания эндоскопов, включая дезинфекцию высокого уровня, стоматологических оттисков, стоматологических отсасывающих систем, контура циркуляции диали-зирующей жидкости гемодиализных аппаратов, других изделий медицинского назначения и объектов обеззараживания. Методические указания предназначены для специалистов лабораторий, аккредитованных на исследования и испытания дезинфицирующих средств в целях их государственной регистрации в России и подтверждения соответствия продукции нормативной документации.
Таким образом, новые методические подходы к изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств существенно отличаются от прежних [4, 6] по ряду перечисленных выше тест-вирусов и рекомендаций. При этом процесс совершенствования методических документов продолжается, что свидетельствует о значимости этой проблемы и постоянном внимании к ней специалистов разных стран.
Л итература
1. Дерябин П. Г., Львов Д. К. // Докл. АН Рос. Федерации. — 1998. - Т. 358. - 5. - С. 688-691.
2. Дерябин П. Г., Исаева Е. И., Гренкова Е. П и др. // Аллергия, астма и клин, иммунология. — 2001. — Т. 1. — С. 28—30.
3. Замятина И. А., Элбскян Р. М.. Полещук В. Ф. и др. // Труды Ин-та полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова. "Медицинская вирусология". — М., 2006. — Т. 23. — С. 137-141.
4. Методические рекомендации по определению вирулицид-ной активности препаратов: Утв. МЗ СССР 06.09.1973, № 1119-73. - М„ 1973.
5. Методические указания по изучению и оценке вирулицид-ной активности дезинфицирующих средств. МУ 3.5.2431 — 08. - М„ 2008.
6. Методы испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности / Шандала М. Г., Пантелеева Л. Г., Соколова Н. Ф. и др. - М„ 1998. - Ч. 2. - С. 25-32.
7. Покровский В. В. // Эпид. и инфекц. бол. — 2008. — № 3. — С. 4-7.
8. Тетерина Т. А., Кюрегян К. К., Исаева О. В. и др. // Труды Ин-та полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова "Медицинская вирусология". — М., 2006. — Т. 23. — С. 152-160.
9. Шахгильдян И. В., Михайлов М. И., Онищенко Г. Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика). — М., 2003.
10. Block S. Desinfection, Sterilization, and Preservation. 5th ed. // Philadelphia, 2001.
11. Bond W. W„ Favero M. S„ Petersen N. J., EbertJ. W. //J. Clin. Microbiol. - 1983. - Vol. 18. - P. 535-538.
12. Deva A. K., Vickery K„ Zou J. et al. // J. Hosp. Infect. - 1996.
- Vol. 33. - P. 119-130.
13. EN 14476. Chemical Desinfectants and Antiseptics — Virucidal Quantitative Suspension Test for Chemical Desinfectants and Antiseptics Used in Human Medicine — Test Methods and Requirements (phase 2/step 1) ICS 11. 080. 20, april 2005+A1. - 2006.
14. Prince D. L., Prince H. N.. Thraenhart O. et al. //J. Clin. Microbiol. - 1993. - Vol. 31. N 12. - P. 3296-3304.
15. Protocol for Testing the Efficacy of Desinfectants Used to Inactivate Duck Hepatitis В Virus and to Support Corresponding Label Claims.: Developed by MicroBio Test. Inc. and Submitted to the EPA. - 2000. - P. 1-12.
16. Prüfung und Deklaration der Wirksamkeit von Desinfections-mitteln gegen Viren. Stellungnahme des Arbeitskreises Viruzidie beim Robert Koch-Institut (RKI) sowie des Fachausschusses "Virusdesinfektion" der Deutschen Gcselschaft zur Bekämpfung der Viruskrankheiten (DW) und der Desinfektionsmittel-kommis-sion der Deutschen Gesclschaft fur Hygiene und Mikrobiologie (DGHM) Bundcsgesundheitsblatt Gesundheitsforsch-Gesund-heitsschutz. - 2004. - Bd 47. - S. 62-66.
17. Pugh J. C., Jjaz M. K., Suchmann D. В. // Am. J. Infect. Cont.
- 1999. - Vol. 27. - P. 375-376.
18. von Rheinbaben F., Wolf M. H. // Handbuch der viruswirksamen Desinfektionen. — Berlin-Heidelberg, 2002.
Поступила 16.02.10
С КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2010 УДК 614. 777:579. 68
Н. И. Шеина, 3. И. Жолдакова, Н. Г. Иванов
ПРОБЛЕМА ГИГИЕНИЧЕСКОГО НОРМИРОВАНИЯ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ШТАММОВ В ВОДЕ ВОДОЕМОВ
Российский государственный медицинский университет, НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А. Н. Сысина, Москва
Проведено экспериментальное исследование характера неблагоприятного действия биотехнологических штаммов, принадлежащих к различным таксонам.
Показано, что влияние штаммов выражалось в дисбалансе иммунокомпетентных клеток, формировании гиперчувствительности немедленного и замедленного типов, а также изменении качественной и количественной характеристики аутохтонной микрофлоры кишечника. Для большинства изученных штаммов установлены минимально действующие (10s клеток на 1 л) и недействующие (10* клеток на 1 л) уровни энтерального воздействия.
Анализ данных литературы и собственных результатов позволил предложить программу исследований по гигиеническому нормированию промышленных микроорганизмов и микробиологических препаратов на их основе в воде водоемов.
Ключевые слова: биотехнологические штаммы, гигиеническое нормирование, вода водоемов хозяйственно-питьево-го и культурно-бытового назначения
N. /. Sheina, Z. I. Zholdakova, N. G. Ivanov. - PROBLEM IN THE HYGIENIC REGULATION AND STANDARDIZATION OF BIOTECHNOLOGICAL STRAINS IN RESERVOIR WATER
The pattern of the negative effect of biotechnological strains belonging to different taxons was experimentally studied. The effect of the strains manifested as imbalance of immunocompetent cells, development of immediate and delayed hypersensitivity, and altered qualitative and quantitative characteristics of the autochtonic microflora of the intestine. The minimum acting (10s cells/1') and non-acting (101 cells/1) enteral exposure levels were determined for the bulk of the test strains. Analysis of the authors 'findings and the data available in the literature made it possible to propose a study program on the hygienic regulation and standardization of industrial microorganisms and their based microbiological products in the reservoir water.
Key words: biotechnological strains, hygienic regulation and standardization, household and community water reservoir water
В настоящее время в России содержание биотехнологических штаммов микроорганизмов в во-
Шеина Н. И. — д-р биол. наук, гл. науч. сотр. отд. токсикологии (гп_5Нета@таН. ги); Жолдакова 3. И. — проф., д-р мед. наук, вед. науч. сотр. (1аЫох430@таП. ги); Иванов Н. Г. — проф., д-р мед. наук, зав. отд. токсикологии (1е1@гети. ги).
де водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения не лимитируется, хотя уже давно существует практика их гигиенического нормирования в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе [4, 11, 14, 15]. В этих средах гигиенические регламенты имеют более 120 штаммов-продуцентов различных таксономических групп.
