CC BY
26
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
инфестин-4 (константа ингибирования Ki 0,1 нМ), ингибиторы трипсина из семян кукурузы (КТИ; 0,4 нМ), Luffa cylindrica (LCTI-III; 10 нМ) и Cucurbita maxima (CMTI-III; 23 нМ) - являются недостаточно селективными по отношению к другим протеазам свертывания (Ki между 1-50 мкМ) и приводят к изменению динамики образования фибринового сгустка.
Цель работы. Разработать более селективный ингибитор, обладающий пренебрежимо малым ФХП-независимым действием на динамику свертывания.
Материалы и методы. Ингибиторы ФХ11 были получены следующим путем: рекомбинантные инфестин-4 и его варианты с измененной последовательностью в позициях P2, P1', P2' относительно реактивного центра (PDB: 2ERW), а также CMTI-Ш были экспрессированы в E.coli; КТИ был очищен из кукурузы, LCTI-III был синтезирован. Ингибиторы характеризовали по удлинению АЧТВ в нормальной плазме; по значениям Ki, измеренным в хромогенных тестах; по селективности в плазме. Селективность в плазме оценивали по влиянию на динамику образования фибринового сгустка в тесте Тромбо-динамика, в котором свертывание инициируется от поверхности с иммобилизованным тканевым фактором (ТФ).
Результаты и обсуждение. Один из созданных мутантов инфестина-4, Inf4-MutB, имеет в позициях P2-P4 аминокис-
лотную последовательность TRNFVA и эффективно ингиби-рует ФХПа (К 0,9 нМ). Несмотря на минорную неспецифическую активность (Кл к тромбину 0,9 мкМ), Ш4-Ми1В не изменяет параметры образования фибринового сгустка, инициированного ТФ, в ФХП-деплетированной плазме. 20 мкМ М4-Ми1В вызывает 3-кратное увеличение АЧТВ, блокирует контактную активацию свертывания в тесте Тромбодинами-ка и увеличивает в 2 раза время свертывания цельной крови, забор которой производили без антикоагулянтов. Другие мутанты инфестина-4, полученные в виде слитных белков с тиоредоксином, ингибируют ФХПа в 5-10 раз менее эффективно и ингибируют Ф1Ха (К < 1 мкМ). КТИ, LCTI-Ш и СМТ1-Ш являются либо менее эффективными ингибиторами (Кл к ФХПа между 0,5-30 нМ), либо неспецифически ингибируют ФХ1а, ФХа (Кл между 1-30 мкМ), а также подавляют ТФ-инициированное свертывание в ФХП-деплетированной плазме.
Заключение. Ш4-Ми® - высокоселективный ингибитор ФХПа, который не влияет на ТФ-активированное свертывание в ФХП-дефицитной плазме, блокирует контактную активацию, в том числе в тесте Тромбодинамика, и удлиняет время хранения цельной крови. Ингибитор может применяться в глобальных тестах гемостаза.
Частота инфекционных осложнений при лечении множественной миеломы бортезомибсодержащими
режимами
Котова Н.А.1, Климович А.В.1, Потапенко В.Г.1, Самородова И.А.1, Дулаева Э.Н.1, Медведева Н.В.1, Бессмельцев С.С.2
'ГБУЗ Санкт-Петербургская городская клиническая больница №31; 2ФГБУ Российский НИИ институт гематологии и трансфузиологии ФМБА
России, Санкт-Петербург
Внедрение ингибиторов протеасом в терапию ММ привело к значимому повышению ее эффективности. Применение бортезомиба сопряжено с миелотоксичностью. Поведена оценка частоты инфекционных осложнений (бактериальных, вирусных, микотических).
Наблюдали 92 больных ММ в возрасте 30-75 лет (медиана возраста 60,5 года), в период 2008-2013 гг. получавших бортезомибсодержащие режимы ПХТ: в 1-й линии терапии -70%, во 2-й линии - 30% больных.
Вирусные инфекции диагностированы у 11 (18%) из 61 больного, из них чаще всего отмечены заболевания, вызванные Varicella zoster и Herpes simplex virus (80%). Бактериальные инфекции обнаружены у 11 (18%) из 61 больного. У 12%
больных отмечены респираторные бактериальные инфекции (пневмония, бронхит). У 4% больных выявлены инфекции мочевыделительной системы (циститы, пиелонефриты). Кандидоз слизистых наблюдался у 1 (<2%) больного. Развитие инфекционных осложнений сочеталось с гипогаммагло-булинемией в дебюте заболевания (у 100% обследованных больных; p < 0,01), миеломной нефропатией (МН) без ХПН (36%; p < 0,01), МН с терминальной ХПН (6%; p < 0,01), остеодеструктивным синдромом (64%; p < 0,01).
Полученные результаты могут быть использованы при разработке индивидуализированных протоколов профилактики, основанных на стратификации риска инфекционных осложнений перед началом проведения противоопухолевой терапии.
Нейтрализация сульфатом протамина антикоагулянтной активности сульфатов целлюлозы in vitro
Кужим А.А.1, Дрозд Н.Н.1, Торлопов М.А.2, Макаров В.А.1 1 ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва; 2 ФГБУ Институт химии Коми научного центра УрО РАН, Сыктывкар, Россия
Введение. Полипептид сульфат протамина (СПТ) применяют для нейтрализации антикоагулянтной активности суль-фатированных полисахаридов (гликозаминогликанов) не-фракционированных и низкомолекулярных гепаринов (НФГ, НМГ) (J.Maurer, 2011).
Цель работы. Оценка возможности связывания сульфатов целлюлозы (СЦ) с СПТ с помощью биоспецифического электрофореза и исследование нейтрализации антитромби-новой активности (alla) образцов СЦ.
Материалы и методы. В работе использовали два образца СЦ с мол. массой (ММ) < 50 кД, степенью сульфатиро-вания (СС) 1,5 и 2,4 и alla 87,9±24,5 и 122,7±2,4 ЕД/мг. Для определения возможности связывания СПТ с СЦ использовали ракетный биоспецифический электрофорез (N.Drozd, 2008). Нейтрализацию aIIa активности СЦ оценивали с помощью теста АЧТВ с плазмой человека. В качестве препарата сравнения применяли НФГ ("Bio-pharm Co Ltd.", Шанхай-Гонконг, Китай, alla 140 ЕД/мг).
Результаты и обсуждение. Исследуемые антикоагулянты полианионы СЦ, перемещаясь при электрофорезе, образовывали пики преципитации с добавленным в гель СПТ. Для всех исследованных соединений с увеличением концентрации в лунке наблюдали статистически значимое (р = 0,001-0,003) возрастание высоты и площади пиков преципитации с СПТ в форме "ракеток". При внесении в лунку геля, содержащего СПТ, НФГ или СЦ в концентрациях от 0,125 до 2 мг/мл, высота и площадь области преципитации увеличивались от 4,2 ± 1,3 до 329,6 ± 50,9 и от 28,1 ± 10,2 до 5080 ± 975,7 пкс соответственно. С увеличением СС и ММ СЦ размеры пиков преципитации возрастали, что соответствует данным, полученными ранее (N.Drozd, 2008). В тесте АЧТВ с увеличением концентрации АК (в пробах без СПТ) а11а активность увеличивалась, а при добавлении антидота а11а активность соединений уменьшалась. Мы отметили статистически значимое (p = 0,004) снижение а11а активности НФГ в концентрации 0,571 мкг/мл при гравиметрических соотношениях антидот/антикоагу-
Приложение 1
лянт 1,25 и 1,43. СПТ в конечной концентрации 8,43 мкг/мл нейтрализовал alla активность СЦ1 в конечной концентрации 3,57 мкг/мл. В диапазоне концентраций СПТ от 7,14 до 8,43 мкг/мл отмечали статистически значимое снижение а11а активности СЦ2 до 0 ЕД/мл. В среднем гравиметрическое со-
отношение для нейтрализации II составляет 1,2, что совпадает с данными литературы для НФГ (А.Ситтг^, 1986).
Заключение. Сульфат протамина образует пики преципитации с сульфатами целлюлозы и нейтрализует полностью их антитромбиновую активность.
Трансплантация аллогенного костного мозга при хроническом миелолейкозе
Кузьмина Л.А., Паровичникова Е.Н., Менделеева Л.П., Покровская О.С., Дроков М.Ю., Васильева В.А., Сирида А.А., Савченко В.Г.
ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Цель работы. Представить результаты трансплантации аллогенного костного мозга (алло-ТКМ) при хроническом миелолейкозе (ХМЛ) у взрослых в ГНЦ (Москва).
Материалы и методы. Проанализированы результаты трансплантации у 74 больных ХМЛ в возрасте от 14 лет до 51 года, пролеченных в ГНЦ в период с 1989 по 2013 г Донорами костного мозга у 70 больных были НЬА-идентичные сиблинги, у 4 - НЬА-идентичные неродственные доноры. До ТКМ в первой хронической фазе были 65 больных, в фазе акселерации/бласт-ного криза - 6, во 2-й хронической фазе - 3. До выполнения ТКМ у 17 больных проводили терапию ингибиторами тирозинкиназ. Режим кондиционирования - миелоаблативный у 73 больных, у 1 больного использован режим кондиционирования пониженной интенсивности. Анализ был выполнен в декабре 2013 г
Результаты. К моменту анализа живы 46 больных. Отмечено улучшение результатов трансплантации после
2002 г Ранняя летальность в период 1989-2001 гг. составляла 13,5%, летальность, связанная с трансплантацией, - 32%, с 2002 г. ранняя летальность - 0, летальность, связанная с трансплантацией, - 16%. Рецидивы заболевания развились у 10 (7,4%) больных, у большинства больных в первые 2 года после ТКМ, у 2 - через 4 и 7 лет после трансплантации. Острая или хроническая РТПХ диагностирована у 41 (55%) больного. Очень хорошие результаты были достигнуты в группе больных, которым до транплантации в течение 3-24 мес (медиана 6 мес) проводили терапию иматинибом, из них 46,7% были отнесены к группе высокого риска по Socal. Бессобытийная выживаемость у этих больных в течение 10 лет составила 83%.
Заключение. Трансплантация аллогенного костного мозга остается наиболее эффективным методом терапии больных ХМЛ, особенно из группы высокого риска.
Анализ транскриптома опухолевых клеток при хроническом миелоидном лейкозе
Лавров А.В.1, Смирнихина С.А. 1, Адильгереева Э.П. 1, Челышева Е.Ю. 2, Шухов О.А. 2, Туркина А.Г. 2, Куцев С.И. 1,3 'ФГБУ Медико-генетический научный центр РАМН; 2 ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; 3 ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва
Введение. Многолетние наблюдения подтвердили высокую эффективность терапии хронического миелоид-ного лейкоза (ХМЛ) препаратами группы ингибиторов тирозинкиназ. Тем не менее часть больных ХМЛ характеризуются первичной резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ (ИТК) первого или второго поколения, что, вероятно, связано с активацией альтернативных BCR-ABL-независимых сигнальных путей. Анализ транскрип-тома опухолевых клеток при ХМЛ представляется перспективным для выявления молекулярных механизмов резистентности к терапии ИТК и, возможно, оптимизации терапии ХМЛ.
Цель работы. Выявить различия профилей экспрессии генов опухолевых клеток у больных ХМЛ, устойчивых к терапии ИТК и высокочувствительных к данной терапии.
Материалы и методы. Профили экспрессии генов в образцах крови впервые выявленных больных ХМЛ проанализированы с помощью технологии Microarray на чипах Illumina HT-12 Expression Bead Chip, позволяющих количественно оценить экспрессию более 47 000 транскриптов. В соответствии с критериями ELN (2013) в группу устойчивых к терапии ИТК относили больных с молекулярным от-
ветом более 10% через 6 мес терапии ИТК, а в группу оптимально ответивших - менее 1% через 6 мес терапии.
Результаты. При сравнительном анализе транскриптома опухолевых клеток выявлено 2672 дифференциально экспрес-сированных гена, уровень экспрессии которых различался в опухолевых образцах больных, оптимально ответивших на терапию и резистентных к терапии ИТК. Статистический анализ с помощью поправок на множественные сравнения по методу контроля ожидаемой доли ложных отклонений (FDR) показал различия в экспрессии 75 генов. Анализ обогащения метаболических путей и процессов дифференциально экспрессиро-ванными генами выявил следующие пути (p < 0,05): HTLV-1 infection (FZD10, ADCY1, MYB); PPAR signaling pathway (SCD-1, OLR1); Transcriptional misregulation in cancer (MPO, CEBPE, ELANE); Salivary secretion (ADCY1, CAMP); Melanogenesis (ADCY1, FZD10). Анализ полученных результатов показал, что все выявленные дифференциально экспрессирующиеся гены характеризуются сниженным уровнем экспрессии в опухолевых клетках резистентных к терапии ИТК больных ХМЛ.
Заключение. Выявленные различия профилей экспрессии генов могут являться прогностическими маркерами ответа на терапию ИТК до начала терапии.
Анемия у пациентов с болезнью Гоше - противопоказание к лечению препаратами железа
Лукина К.А., Сысоева Е.П., Левина А.А., Егорова М.О., Лукина Е.А. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Введение. Гипо- или нормохромную анемию регистрируют у 35-45% нелеченых пациентов с болезнью Гоше типа I и, как правило, рассматривают как железодефицит-ную, что служит показанием для назначения препаратов железа.
Цель работы. Характеристика состояния метаболизма железа у пациентов с болезнью Гоше типа I.
Материалы и методы. Группу исследования составили 100 нелеченых пациентов с болезнью Гоше типа I (36 мужчин и 64 женщины в возрасте от 16 до 79 лет, медиана воз-
