CC BY
23
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
инфестин-4 (константа ингибирования Ki 0,1 нМ), ингибиторы трипсина из семян кукурузы (КТИ; 0,4 нМ), Luffa cylindrica (LCTI-III; 10 нМ) и Cucurbita maxima (CMTI-III; 23 нМ) - являются недостаточно селективными по отношению к другим протеазам свертывания (Ki между 1-50 мкМ) и приводят к изменению динамики образования фибринового сгустка.
Цель работы. Разработать более селективный ингибитор, обладающий пренебрежимо малым ФХП-независимым действием на динамику свертывания.
Материалы и методы. Ингибиторы ФХ11 были получены следующим путем: рекомбинантные инфестин-4 и его варианты с измененной последовательностью в позициях P2, P1', P2' относительно реактивного центра (PDB: 2ERW), а также CMTI-Ш были экспрессированы в E.coli; КТИ был очищен из кукурузы, LCTI-III был синтезирован. Ингибиторы характеризовали по удлинению АЧТВ в нормальной плазме; по значениям Ki, измеренным в хромогенных тестах; по селективности в плазме. Селективность в плазме оценивали по влиянию на динамику образования фибринового сгустка в тесте Тромбо-динамика, в котором свертывание инициируется от поверхности с иммобилизованным тканевым фактором (ТФ).
Результаты и обсуждение. Один из созданных мутантов инфестина-4, Inf4-MutB, имеет в позициях P2-P4 аминокис-
лотную последовательность TRNFVA и эффективно ингиби-рует ФХПа (К 0,9 нМ). Несмотря на минорную неспецифическую активность (Кл к тромбину 0,9 мкМ), Ш4-Ми1В не изменяет параметры образования фибринового сгустка, инициированного ТФ, в ФХП-деплетированной плазме. 20 мкМ М4-Ми1В вызывает 3-кратное увеличение АЧТВ, блокирует контактную активацию свертывания в тесте Тромбодинами-ка и увеличивает в 2 раза время свертывания цельной крови, забор которой производили без антикоагулянтов. Другие мутанты инфестина-4, полученные в виде слитных белков с тиоредоксином, ингибируют ФХПа в 5-10 раз менее эффективно и ингибируют Ф1Ха (К < 1 мкМ). КТИ, LCTI-Ш и СМТ1-Ш являются либо менее эффективными ингибиторами (Кл к ФХПа между 0,5-30 нМ), либо неспецифически ингибируют ФХ1а, ФХа (Кл между 1-30 мкМ), а также подавляют ТФ-инициированное свертывание в ФХП-деплетированной плазме.
Заключение. Ш4-Ми® - высокоселективный ингибитор ФХПа, который не влияет на ТФ-активированное свертывание в ФХП-дефицитной плазме, блокирует контактную активацию, в том числе в тесте Тромбодинамика, и удлиняет время хранения цельной крови. Ингибитор может применяться в глобальных тестах гемостаза.
Частота инфекционных осложнений при лечении множественной миеломы бортезомибсодержащими
режимами
Котова Н.А.1, Климович А.В.1, Потапенко В.Г.1, Самородова И.А.1, Дулаева Э.Н.1, Медведева Н.В.1, Бессмельцев С.С.2
'ГБУЗ Санкт-Петербургская городская клиническая больница №31; 2ФГБУ Российский НИИ институт гематологии и трансфузиологии ФМБА
России, Санкт-Петербург
Внедрение ингибиторов протеасом в терапию ММ привело к значимому повышению ее эффективности. Применение бортезомиба сопряжено с миелотоксичностью. Поведена оценка частоты инфекционных осложнений (бактериальных, вирусных, микотических).
Наблюдали 92 больных ММ в возрасте 30-75 лет (медиана возраста 60,5 года), в период 2008-2013 гг. получавших бортезомибсодержащие режимы ПХТ: в 1-й линии терапии -70%, во 2-й линии - 30% больных.
Вирусные инфекции диагностированы у 11 (18%) из 61 больного, из них чаще всего отмечены заболевания, вызванные Varicella zoster и Herpes simplex virus (80%). Бактериальные инфекции обнаружены у 11 (18%) из 61 больного. У 12%
больных отмечены респираторные бактериальные инфекции (пневмония, бронхит). У 4% больных выявлены инфекции мочевыделительной системы (циститы, пиелонефриты). Кандидоз слизистых наблюдался у 1 (<2%) больного. Развитие инфекционных осложнений сочеталось с гипогаммагло-булинемией в дебюте заболевания (у 100% обследованных больных; p < 0,01), миеломной нефропатией (МН) без ХПН (36%; p < 0,01), МН с терминальной ХПН (6%; p < 0,01), остеодеструктивным синдромом (64%; p < 0,01).
Полученные результаты могут быть использованы при разработке индивидуализированных протоколов профилактики, основанных на стратификации риска инфекционных осложнений перед началом проведения противоопухолевой терапии.
Нейтрализация сульфатом протамина антикоагулянтной активности сульфатов целлюлозы in vitro
Кужим А.А.1, Дрозд Н.Н.1, Торлопов М.А.2, Макаров В.А.1 1 ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва; 2 ФГБУ Институт химии Коми научного центра УрО РАН, Сыктывкар, Россия
Введение. Полипептид сульфат протамина (СПТ) применяют для нейтрализации антикоагулянтной активности суль-фатированных полисахаридов (гликозаминогликанов) не-фракционированных и низкомолекулярных гепаринов (НФГ, НМГ) (J.Maurer, 2011).
Цель работы. Оценка возможности связывания сульфатов целлюлозы (СЦ) с СПТ с помощью биоспецифического электрофореза и исследование нейтрализации антитромби-новой активности (alla) образцов СЦ.
Материалы и методы. В работе использовали два образца СЦ с мол. массой (ММ) < 50 кД, степенью сульфатиро-вания (СС) 1,5 и 2,4 и alla 87,9±24,5 и 122,7±2,4 ЕД/мг. Для определения возможности связывания СПТ с СЦ использовали ракетный биоспецифический электрофорез (N.Drozd, 2008). Нейтрализацию aIIa активности СЦ оценивали с помощью теста АЧТВ с плазмой человека. В качестве препарата сравнения применяли НФГ ("Bio-pharm Co Ltd.", Шанхай-Гонконг, Китай, alla 140 ЕД/мг).
Результаты и обсуждение. Исследуемые антикоагулянты полианионы СЦ, перемещаясь при электрофорезе, образовывали пики преципитации с добавленным в гель СПТ. Для всех исследованных соединений с увеличением концентрации в лунке наблюдали статистически значимое (р = 0,001-0,003) возрастание высоты и площади пиков преципитации с СПТ в форме "ракеток". При внесении в лунку геля, содержащего СПТ, НФГ или СЦ в концентрациях от 0,125 до 2 мг/мл, высота и площадь области преципитации увеличивались от 4,2 ± 1,3 до 329,6 ± 50,9 и от 28,1 ± 10,2 до 5080 ± 975,7 пкс соответственно. С увеличением СС и ММ СЦ размеры пиков преципитации возрастали, что соответствует данным, полученными ранее (N.Drozd, 2008). В тесте АЧТВ с увеличением концентрации АК (в пробах без СПТ) а11а активность увеличивалась, а при добавлении антидота а11а активность соединений уменьшалась. Мы отметили статистически значимое (p = 0,004) снижение а11а активности НФГ в концентрации 0,571 мкг/мл при гравиметрических соотношениях антидот/антикоагу-
