CC BY
4
УДК 615.9.015.4:616.36-008.931:577.152.1
О.[Б. Леоненко
НЕКОТОРЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ СОСТОЯНИЯ МОНООКСИГЕНАЗНОЙ ГИДРОКСИЛИРУЮЩЕЙ СИСТЕМЫ ПЕЧЕНИ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
В токсикологических исследованиях часто используется оценка активности монооксигеназной гидроксилирующей системы печени для выявления вредного действия чужеродных веществ. Наиболее распространенными методами оценки активности этой системы является определение деметилирова-ния, гидроксилирования субстратов в постмнто-хондриальной и микросомальной фракциях гомоге-натов печени. Однако решение таких актуальных вопросов современной гигиены, токсикологии и профпатологии, как выяснение механизма интоксикации и основных закономерностей формирования адаптационных перестроек организма к действию химических веществ, прогнозирования характера комбинированного действия пестицидов, диагностика, профилактика и лечение заболеваний химической этиологии, во многом связано со знанием активности моноксигеназной гидроксилирующей системы в целостном организме.
В литературе имеются данные о возможности определения активности монооксигеназной системы печени в целостном организме (М. В. Комендан-това и Е. А. Горбатова; Г. И. Парамонова; Рагге1 и соавт.; РгепсЙ). Однако в основе предлагаемых методов оценки лежит либо использование косвенных показателей (продолжительности гексеналово-го сна, концентрации глюкаровой, глюкуроновой, аскорбиновой кислот в моче), либо определение элиминации нагрузочных веществ (амидопирина, антипирина). Следует подчеркнуть, что эти методы недостаточно достоверны и трудоемки.
Нами использован метод оценки активности монооксигеназной гидроксилирующей системы печени в целостном организме по динамике выведения метаболитов амидопирина (4-ААП и 1Ч-ац-4-ААП) с мочой после нагрузки этим веществом (Т. А. Попов и О. Б. Леоненко). Метаболиты амидопирина определяли непосредственно в моче без экстрагирования. При нагрузке амидопирином животные сохраняются и могут быть использованы для других исследований или оценки активности гидроксилирующей системы в динамике через некоторое время.
После нагрузки (20 мг/кг) у крыс-самцов за 24 ч в виде 4-ААП выделялось от 1,8 до 2,8%, а в виде №ац-4-ААП — от 16,6 до 25% амидопирина. Большая часть изучавшихся метаболитов выводилась в первые 6 ч после нагрузки, что, вероятно, связано с периодом полураспада амидопирина, который составляет 2—9 ч (,1оп и соавт.). Характерно, что в течение первых 6 ч после нагрузки 4-ААП выделение происходило равномерно со скоростью 0,23—
0,33% в час. В дальнейшем (с 6-го до 24-го часа) скорость выделения 4-ААП уменьшалась. Скорость выведения Ы-ац-4-ААП не была равномерной в течение 6 ч после нагрузки. Максимальная экскреция этого метаболита отмечена во втором периоде исследования (с 3-го до 6-го часа).
Выделение метаболитов амидопирина у крыс-самцов массой 170—220 и 360—400 г существенно не различается. У крыс массой 80—100 г имелись тенденция к снижению выделения метаболитов амидопирина через 3 ч и статистически достоверное сокращение выделения 4-ААП за 24 ч, а выделения М-ац-4-ААП — за 6 и 24 ч после нагрузки по сравнению с двумя другими группами. «
Существенной разницы в выделении метаболитов амидопирина у крыс-самок массой 160—200 и 300—330 г не отмечено. У самок массой 80— 100 г выделение 4-ААП и Ы-ац-4-ААП статистически достоверно снижено через 6 и 24 ч после нагрузки по сравнению с животными 2 других весовых групп.
Метаболиты амидопирина у крыс-самок выделяются в значительно меньших количествах, чем у самцов соответствующих весовых групп. Выделение 4-ААП у самок в 5, 3 и 1,5 раза ниже через 3, 6 и 24 ч после нагрузки, чем у самцов, а экскреция Ы-ац-4-ААП у крыс разного пола различается в 1,3—1,8 раза.
В течение всех экспериментов изучено выделение метаболитов амидопирина у контрольных крыс-самцов 27 групп. В основном опыты проводили в * осенне-зимний период (21 группа и 6 лишь групп в весенне-летний). Масса тела крыс этих групп 120— 400 г. Существенная разница (на 40%) отмечена только в отношении первого метаболита. Если в осенне-зимний период в среднем выделялось 0,70 и 1,42% 4-ААП, то в весенне-летний — 0,98 и 2,01% соответственно через 3 и 6 ч после нагрузки. Несмотря на различие в количестве 4-ААП, метаболит выводился равномерно в течение 6 ч после нагрузки, а в дальнейшем (с 6-го до 24-го часа) скорость этого процесса обычно снижалась. Разницы в выделении Ы-ац-4-ААП в различное время года не отмечено.
По разработанному методу была оценена активность монооксигеназной гидроксилирующей системы печени в опытах с ТМДТ, у-ГХЦГ и фенобарбиталом — веществами известного, но противопо- 0 ложного действия на исследуемую систему. ТМТД — ингибитор гидроксилирующей системы, а у-ГХЦГ и фенобарбитал — индукторы (А. И. Ар-чаков; У. А. Кузьминская).
Динамика выделения метаболитов амидопирина (в %) с мочой в условиях индукции и ингибирования монооксигеназной
гидроксилирующей системы (М±т)
Условия опыта 4-ААП N-au-4-ААП
1 — 3 ч 3 — 6 ч 6 — 24 ч 1 — 3 ч 3 — 6 ч 6 — 24 ч
Фенобарбитал, 80 мг/кг (3 раза) Р ТМТД, 120 мг/кг (3 раза) Р 1,16±0.11 <0,05 0,39±0.05 <0,05 1,12±0,11 <0,05 0,69±0,07 >0,05 0,03 0,99±0,10 >0,05 4,90±0,78 >0,05 2,38±0,28 <0,05 3,56± 1,05 <0,05 8,42±0,65 >0,05 0,94±0,11 <0,05 7,16±0,82 >0,05
Контроль 0,64±0,07 0,78±0.03 0,81±0,07 4,56±0,56 7,80±0,45 10,24±0,70
При действии индукторов усиленное выведение метаболитов амидопирина (особенно 4-ААП) происходило через 3—6 ч после нагрузки. Так, после троекратного введения фенобарбитала в дозе 80 мг/кг с мочой крыс за 3 ч после нагрузки 4-ААП выделялось в 1,8 раза больше, чем в контроле (см. таблицу). В последующем (с 3-го до 6-го часа) усиленное выделение метаболитов амидопирина сохранялось, а с 6-го до 24-го часа его скорость резко снижалась. Следует отметить, что подобная картина изменений иногда иной выраженности, наблюдалась в опытах с ■у-ГХЦГ на 2, 4 и 8-е сутки после однократного воздействия в дозе 85 мг/кг и со 2-х по 60-е сутки ежедневного воздействия препарата в дозе 8,5 мг/кг. Но в сумме за 24 ч после нагрузки амидопирином при воздействии индукторов лишь в отдельные сроки исследования с мочой выделялось незначительно больше 4-ААП, а общее количество выведенных метаболитов обычно находилось на уровне контроля.
При действии ингибитора ТМТД наблюдалась замедленная экскреция метаболитов амидопирина через 3—6 ч после нагрузки. Так, после троекратного введения ТМТД в дозе 120 мг/кг за первые 3 ч после нагрузки с мочой выделялось в среднем 61% 4-ААП и 52% М-ац-4-ААП по сравнению с контролем. В последующий срок исследования (с 3-го до 6-го часа) экскреция метаболитов амидопирина может быть как замедлена, так и на уровне контроля. А от 6-го до 24-го часа количество выделившихся метаболитов компенсируется и в сумме за 24 ч не отличается от контроля. Подобную ди-
намику мы наблюдали также при однократном воздействии ТМТД в дозе 270 мг/кг (на 2-е сутки) и при ежедневном воздействии в дозе 27 мг/кг (4—30-е сутки).
Таким образом, оптимальное условие для оценки монооксигеназной гидроксилирующей системы в условиях целостного организма по выделению метаболитов амидопирина с мочой — проведение нагрузки в опытах на половозрелых животных одного пола с параллельным исследованием контрольной группы. Наиболее показательными для определения индукции и ингибирования монооксигеназной гидроксилирующей системы по выделению метаболитов амидопирина с мочой являются первые 3—6 ч после нагрузки.
Литература. Арчаков А. И. Микросомальное окисление. М., 1975. Комендантова М. В., Горбатова Е. А. — Фармакол. и
токсикол., 1964, № 4, с. 409—413. Кузьминская У. А. Биохимическая характеристика субклеточных структур печени при воздействии пестицидов (К механизму действия хлорорганических и карба-матных пестицидов). Автореф. дис. докт. Киев, 1975. Парамонова Г. И. — Фармакол. и токсикол., 1981, № 1, с. 98—101.
Попов Т. А., Леоненко О. Б. — Гиг. и сан., 1977, № 9, с. 56—59.
Farrel G■ С., Cooksleu W. G. Е. et al. —Gastroenterology,
1978, v. 75, p. 580—588. Frendt К- J- — Int. J. chin. Pharmacol., 1979, v. 17, p. 104—106.
Jori A., Dt Salle E., Quadri A. — Pharmacology, 1972, v. 8, p. 273—379.
Поступила 08.06.82
УДК 6 13.73:616.632.791+546.799.41-07
И. Д. Заблоцкая, Г. В. Воробьев, М. М. Голутвина
ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРАНА, ПЛУТОНИЯ И ТРАНСПЛУТОНИЕВЫХ ЭЛЕМЕНТОВ В МОЧЕ
Институт биофизики Минздрава СССР, Москва
Важной задачей радиационной гигиены явля-• ется прижизненное определение содержания радиоактивных веществ в организме человека, контактирующего с ними в процессе производственной деятельности (Г. М. Пархоменко и соавт.). Для этой цели часто используют радиохимический ана-
лиз проб мочи. Во многих случаях он является наиболее чувствительным и точным, а нередко и единственно возможным методом (М. М. Голутвина и Н. М. Садикова). Содержание инкорпорированного нуклида можно оценить и сравнить с допустимым (НРБ — 76), если известен закон его выведе-
