CC BY
23
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
но-зависимую опухоль, которая развивается в результате трансформации клеток миометрия и состоит из гладко-мышечных клеток и большого количества внеклеточного матрикса. Основную роль в механизмах развития и роста миоматозных узлов в настоящее время отводят половым стероидным гормонам, действие которых на клетки опухоли происходит опосредованно через аутокринную/ паракринную индукцию выработки факторов роста, что сопровождается активацией различных внутриклеточных сигнальных путей. Проведение активирующих сигналов от половых стероидных гормонов и факторов роста в клетке происходит преимущественно через PI3K/Akt-mTOR и MAPK/ERK киназы. Однако особенности активации этих киназ в ткани миоматозных узлов различных размеров и с различной интенсивностью клеточной пролиферации не изучены. Особый интерес представляет уточнение характера регуляции активности TGF-ß в ткани опухоли, поскольку этому фактору роста отводят ведущую роль в патогенезе лейомиомы матки.
Цель и задачи. Установить роль внутриклеточных PI3K/AKT и MAPK/ERK сигнальных путей в регуляции пролиферативной активности клеток лейомиомы матки и в синтезе в ткани опухоли трансформирующего фактора роста.
Материалы и методы. Был проведен анализ биоптатов ткани неизмененного миометрия (n = 14) и миоматозных узлов (n = 18), полученных в ходе проведения операции по удалению лейомиомы матки лапароскопическим доступом. Уровень экспрессии мРНК маркера клеточной пролиферации Ki67, Akt, ERK и двух изоформ TGF-ß — TGF-ß1 и TGF-ß2 в ткани миометрия и миоматозных узлов оценивали методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Результаты. Было установлено, что в миоматозных узлах усиливался синтез как Akt, так и ERK по сравнению с неизменённым миометрием. Однако при дифференцированном анализе данных в зависимости от размера опухоли и от уровня экспрессии Ki-67 мы не выявили достоверных различий в синтезе Akt. При этом экспрессия мРНК ERK была значительно повышена в миоматозных узлах больших размеров (6см и более) и достигала самых высоких значений в пролиферирующих Ю67-положительных узлах большого размера. Анализ данных, характеризующих синтез TGF-ß в ткани опухоли показал, что в мио-матозных узлах отмечалась лишь выраженная тенденция к усилению экспрессии мРНК как TGF-beta-1, так и TGF-beta-2 изоформ. Причем в узлах больших размеров синтез TGF-beta2 был достоверно повышен по сравнению с таковым в узлах меньших размеров. В тех же случаях, когда лей-омиома характеризовалась усилением пролиферативной активности, мы отмечали повышение экспрессии в ткани опухоли мРНК обеих изученных изоформ TGF-beta. Известно, что трансформирующий фактор роста не только является стимулятором клеточной пролиферации и васку-ляризации в ткани опухоли, но и обладает выраженным иммуносупрессорным действием. Усиление его выработки способствует формированию специфического микроокружения, благоприятного для роста опухолевых клеток. Следует отметить, что направленность синтеза ERK практически всегда совпадала с особенностями синтеза в опухоли TGF-ß. Так, в узлах больших размеров мы наблюдали одновременное усиление экспрессии мРНКERK и TGF-ß2, а в Ki67+ лейомиомах — повышение экспрессии мРНКERK, TGF-ß1 и TGF-ß2. По-видимому, ауто-кринная петля TGF-ß, реализующаяся через активацию MAPK/ERK сигнального пути, делает пролиферирующие
миоматозные узлы менее зависимыми от половых стероидных гормонов.
Заключение. Таким образом, усиление пролиферации клеток лейомиомы матки ассоциировано с активацией внутриклеточного MAPK/ERK сигнального пути и повышением синтеза TGF-P1 и TGF-P2 в ткани опухоли.
Работа поддержана грантом РФФИ 15-04-05042.
НАСТУПЛЕНИЕ БЕРЕМЕННОСТИ ПОСЛЕ ПРЕДГЕСТАЦИОННОЙ АЛЛОИММУНИЗАЦИИ У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ ВЫКИДЫШЕМ И ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
Степанова Е.О., Николаева М.А., Голубева Е.Л., Тетруашвили Н.К., Кречетова Л.В.
ФГБУ«Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Иммуноцитотерапия (ИЦТ) — процедура иммунизации женщин лейкоцитами их полового партнера с целью индукции толерантности иммунной системы матери к отцовским антигенам плода — широко применяется как обоснованный и эффективный подход предотвращения потерь беременности у пациенток с привычным выкидышем в анамнезе. Принципиальную роль в развитии иммунологической толерантности играет цитокиновый профиль им-мунокомпетентных клеток. В ряде исследований показано, что физиологическая беременность развивается на фоне противовоспалительных !Ъ2-реакций. Иммуномодули-рующий эффект ИЦТ также связан с !Ь2-поляризацией иммунного ответа. В то же время, согласно современным представлениям, имплантация и ранние стадии первого триместра физиологической беременности протекают на фоне провоспалительных Thl-реакций, а ТЪ2-фон формируется позднее. Поэтому нельзя исключить, что противовоспалительные реакции, формируемые при ИЦТ, могут препятствовать наступлению беременности. В связи с этим особую актуальность приобретает оценка влияния ТЫДЪ2-фона на вероятность наступления беременности при проведении предгестационной ИЦТ Для изучения воздействия различных факторов на имплантацию и ранние стадии беременности широко используется такой показатель, как длительность ожидания наступления планируемой беременности (TTP, time to pregnancy).
Целью настоящего исследования явилась оценка взаимосвязи между сформированным в результате предге-стационной ИЦТ балансом Thl- и ^2-цитокинов, про-дуцируемыхклетками периферической крови женщин, и длительностью ожидания наступления беременности после ИЦТ.
В исследование было включено 37 супружеских пар с диагнозом привычный выкидыш. Всем женщинам перед планируемой беременностью проводилась иммунизация лейкоцитами их полового партнера (ИЦТ). После лечения регистрировали наступление беременности в течение 12 менструальных циклов. Продукцию Thl (IFNy, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12, IL-18, TNFa, IL-1P) и Th2 (IL-4, IL-5, IL-10) цитокинов после митогенной активации клеток цельной крови женщин с использованием наборов «Цитокин-Стимул-Бест» («Вектор-Бест») оценивали методом проточной цитофлуорометрии с помощью мультиплексного анализа с применением стандартных наборов FlowCytomix™ (eBioscience). Параметр HP определяли
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
как количество менструальных циклов, прошедших с момента отмены негормональной контрацепции до наступления беременности.
Из 37 женщин у 27 (73,0%) беременность завершилась своевременным рождением живых детей. Из 27 женщин у 23 (85,2%) беременность наступила в течение 6 циклов после проведения ИЦТ (ТТР < 6). У 10 (27,0%) женщин после ИЦТ беременность не наступила.
Наступление желаемой беременности в течение 6 менструальных циклов (ТТР < 6) является одной из характеристик фертильности женщин. Отсутствие наступления беременности в течение 12 менструальных циклов рассматривается в качестве критерия бесплодия. Дизайн проведенного исследования обеспечил уникальную возможность оценки предымплантационного иммунологического фона в группе женщин с наступившей беременностью (ТТР < 6) и в группе с ненаступившей беременностью. По результатам ретроспективного анализа показатели цитокинового профиля в исследуемых группах до начала ИЦТ не различались. Однако в группе женщин с наступившей беременностью проведение ИЦТ привело к увеличению соотношений IFNy/ IL-4 в 2,1 раза (p < 0,05) и TNFa/IL-4 в 2,4 раза (р < 0,05). В группе женщин, у которых беременность не наступила, баланс Th1/Th2 цитокинов при проведении ИЦТ не менялся. После проведения ИЦТ соотношение IFNy/IL-4 в группе женщин с ТТР < 6 было в 2,1 раза выше, чем в группе с ненаступившей беременностью (р = 0,006). Соотношение TNFa/IL-4 было также в 3,1 раза выше у пациенток с наступившей беременностью (р = 0,007).
Полученные данные свидетельствуют о том, что соотношение провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, продуцируемых клетками периферической крови женщин, сформированное в результате предгеста-ционной ИЦТ, может определять длительность ожидания наступления беременности после терапии привычного выкидыша. Терапевтический эффект двукратной пред-гестационной ИЦТ может наблюдаться лишь при достижении оптимального баланса ТЫ/1Ъ2-цитокинов после ИЦТ с преобладанием провоспалительного фона при имплантации и на ранних стадиях беременности.
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ IL-10 ПРИ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДАХ
Супрун С.В.1, Наговицына Е.Б.1, Кондрашова Е.А.2, Морозова О.Н.3
1 Хабаровский филиал ФГБНУ«Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» — Научно-исследовательский институт охраны материнства и детства, Хабаровск, Россия
2 Краевое государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Перинатальный центр» министерства здравоохранения Хабаровского края, Хабаровск, Россия
3 Краевое государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Родильный дом № 2» министерства здравоохранения Хабаровского края, Хабаровск, Россия
Одной из основных причин преждевременных родов считается преждевременный разрыв плодных оболочек (ПРПО). Особую значимость эта проблема приобрела с изменением критериев живорожденности. Преждевременные роды имеют множество причин как чисто медицинских, так и медико-социальных, однако основным патогенетическим механизмом через который они реа-
лизуются является иммунный конфликт матери и плода. В связи с этим особое значение в предотвращении таких осложнений беременности имеет изучение состояния иммунитета у потенциальных матерей.
Основными коммуникативными молекулами иммунной системы являются интерлейкины, но именно поэтому изучение, и главное — интерпретация их уровней в сыворотке крови представляют большие трудности. Отсутствуют общепринятые нормы этих уровней не только для беременных женщин, но и в популяции вообще. Более того, сама возможность установления этих норм вызывает сомнения, т.к. сывороточные уровни интерлейкинов даже у одного человека в течение нескольких дней могут различаться на порядки. И это вполне естественно, поскольку основным местом действия этих коммуникативных молекул являются органы иммунной системы, и в сыворотке мы видим лишь транзиторные уровни вещества. Исходя из выше сказанного, мы считаем более перспективным изучение не сиюминутных, по сути транзитор-ных уровней интерлейкинов в сыворотке крови, а определение полиморфизмов их генов, которые определяют количество и функциональную полноценность молекул в течении всей жизни. При изучении иммуно-патогенеза преждевременных родов особый интерес вызвали генетические полиморфизмы IL-10 (G1082 A, С592 А, С819 Т), который во многом определяет соотношение активностей Т-цитотоксической и В-клеточной системы иммунитета.
Нами обследовано 76 беременных женщин Приамурья: 1 группа (n = 32) — с ПРПО на сроке гестации 26-32 недели, 2 группа (n = 44) — закончившие беременность в срок. Использовался метод клинической молекулярной биологии и диагностической генетики — полимеразной цепной реакции (Real-time PCR).
Сравнительный анализ распространенности аллелей полиморфизмов гена IL-10 в 3-х видах мутаций (G 1082A, С 592 А, С 819 Т) показал достоверные отличия частотных характеристик нормальных и мутантных генотипов в наблюдаемых группах пациенток. Из полученных результатов следует, что у беременных с ПРПО в 1,5 раза чаще встречались мутации C 592A, в 3,3 раза — С 819 Т, как в ге-теро-, так и гомозиготных вариантах. Третий вид мутации IL-10 (G 1082A) при ПРПО отмечен на 17,9% больше, чем в сравниваемой группе беременных, преимущественно за счет увеличения числа гомозиготных вариантов. У женщин группы сравнения процент беременных с отсутствием всех изучаемых нами мутаций гена IL-10 в 4,7 раза больше, чем у пациенток с ПРПО (29,5% и 6,3% соответственно).
Таким образом, проведенное исследование показали, что полиморфизмы гена IL10 (G 1082 A, С592 А, С819 Т) можно считать предиктивным маркером ПРПО и фактором риска преждевременных родов. Его выявление позволит целенаправленно проводить профилактические мероприятия и минимизировать возможность рождения недоношенных детей.
РАЗЛИЧИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТНОГО СОСТАВА ВОЛОС У ЖЕНЩИН В РЕПРОДУКТИВНОМ И РАННЕМ ПОСТМЕНОПАУЗНОМ ПЕРИОДАХ
Тузанкина И.А., Санникова О.Ю.
ФГБУН «Институт иммунологии и физиологии» УрО РАН, Екатеринбург, Россия
Существуют достаточно разноречивые и разрозненные сведения о возможностях иммунной системы адап-
