N-БЕНЗИЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ТЕТРАЕНОВОГО МАКРОЛИДНОГО АНТИБИОТИКА ПИМАРИЦИНА: СИНТЕЗ И МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

УДК 557.123:547.241].012.1

В.В.Белахов1, Ю.Д.Шенин2, В.А.Колодязная3

Посвящается памяти заслуженного деятеля науки РФ, профессора, д-ра хим. наук Б.И. Ионина

Введение

Тетраеновый макролидный антибиотик пимари-цин (натамицин) широко применяется для лечения многих клинических форм кандидозов, вызываемых дрожжепо-добными грибами рода Candida [1-3]. Однако терапевтическая эффективность этого противогрибкового антибиотика, как и других полиеновых макролидных антибиотиков, существенно ограничена из-за высокой токсичности, нерастворимости в воде, а также в связи со снижением чувствительности патогенных грибковых микроорганизмов к его действию [4-6]. Ввиду этого поиск новых производных пимарицина с улучшенными медико-биологическими свойствами продолжается. В литературе описан целый ряд полусинтетических производных пимарицина и его водорастворимые соли и комплексы [7-9]. В последние годы внимание многих исследователей привлекает разработка липосомальных производных пимарицина [10, 11], а также наночастиц этого противогрибкового антибиотика [12, 13]. Ранее нами получены гидрофосфорильные [14], N-арил-замещенные [15] производные пимарицина и фосфорили-рованное альдокетениминовое производное антибиотика [16]. Продолжая исследования по получению полусинтетических производных пимарицина, мы изучили реакции этого тетраенового макролидного антибиотика с л-заме-щенными бензальдегидами и цианоборогидридом и медико-биологические свойства полученных производных.

Экспериментальная химическая часть

Использовали пимарицин производства "Sigma" (США), полученный микробиологическим синтезом с по-

N-БЕНЗИЛЬНЫЕ

ПРОИЗВОДНЫЕ

ТЕТРАЕНОВОГО

МАКРОЛИДНОГО

АНТИБИОТИКА

ПИМАРИЦИНА: СИНТЕЗ И

МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ

СВОЙСТВА

Технион - Израильский институт технологии (химический факультет), Хайфа, Израиль Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург, шоссе Подбельского, д. 3, Россия Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, Россия

Реакции тетраенового макролидного антибиотика пимарицина с п-замещенными бензальдегидами и цианоборогидридом в условиях реакции восстановительного аминирования приводят к образованию его N-бензильных производных, обладающих высокой антифунгальной активностью в отношении широкого набора тест-культур и пониженной острой токсичностью по сравнению с исходным антибиотиком.

Ключевые слова: тетраеновый макролидный антибиотик, пимарицин, химическая модификация, восстановительное ами-нирование, токсичность, антифунгальная активность.

мощью продуцента Streptomyces chattanoogensis. па-ра-Замещенные ароматические альдегиды производства «Sigma-Aldrich» (США) или «Fluka» (Швейцария) применяли без предварительной очистки. Органические растворители перед использованием очищали по методикам, описанным в [17].

Спектры 1Н и 13С ЯМР записаны на приборе "Bruker Avance™" (Германия) с рабочей частотой 500 МГц. Исследовали 15%-ные растворы в МеОН-d^ внутренний эталон - ТМС. ИК-спектры регистрировали на приборе "Bruker vector 22" (Германия) в таблетках КВг. УФ-спек-тры сняты на спектрофотометре "Ultrospec 2100pro" ("Biochrom", Великобритания) в метаноле с добавлением уксусной кислоты (0,1%) при концентрации 5 мг/мл. Индивидуальность производных пимарицина (1-7) контролировали с помощью ТСХ на пластинах Silica Gel 60 F254 (0,25 мм, "Merck", Германия) в системе растворителей: метанол-ацетон-уксусная кислота, 8 : 1 : 1. Вещества проявляли на хроматограммах с помощью УФ-света. В качестве сорбента использовали Silica Gel 60 (63-200 мм, "Merck", Германия).

N^n-окси-, метокси-, нитро-, диметиламино-, фтор-, хлор-, бром-бензил) пимарицин (1-7) (общая методика). К 0,5 г (0,75 ммоля) пимарицина, растворенного в 2 мл безводного ДМФА, приливали 15 мл безводного метанола, а затем при интенсивном перемешивании при комнатной температуре добавляли 1,12 ммоля соответствующего п-бензальдегида в присутствии каталитического количества триэтиламина. Реакцию проводили в течение 3 часов при комнатной температуре. Контроль за

1 Белахов Валерий Владимирович, канд. хим. наук, вед. науч. сотр., хим. фак., Технион-Израильский институт технологии, e-mail: chvalery@techumx.techmon.ac.il

2 Шенин Юрий Дмитриевич, д-р. хим. наук, вед. науч. сотр., лаб. микробиологической защиты растений, Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, e-mail: yushenin@mail.ru

3 Колодязная Вера Анатольевна, канд. биол. наук, доцент, зав. каф. биотехнологии, СПбГХФА, e-mail: veank@mail.ru

Дата поступления - 13 января 2014 года

ходом реакции осуществляли с помощью ТСХ. По окончании взаимодействия реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток сушили в вакууме в течение 4 часов. Затем подсушенный остаток растворили в 5 мл безводного ДМФА, добавили 15 мл безводного те-трагидрофурана, полученный раствор охладили до -10°С и добавили 0,90 ммоля цианоборогидрида натрия. Реакцию проводили в течение 2 часов в интервале температур от -10°С до -5°С. По окончании взаимодействия к реакционной среде добавили 50 мл безводного метанола, реакционный раствор фильтровали, приливали к фильтрату избыточное количество (400 мл) диэтилового эфира. К выпавшей маслянистой жидкости добавляли метанол (30 мл), полученную суспензию фильтровали, фильтрат пропускали через колонку, заполненную Silica gel. В качестве элюента использовали систему растворителей CH-а3-МеОН-Н20^Н40Н, 10 : 15 : 0,3 : 0,07. Элюаты, содержащие целевой продукт, объединяли, концентрировали при пониженном давлении, а остаток сушили в вакууме при 20°С в течение 4 часов. Получали соединения (1-7) в виде мелких кристаллов белого, кремового или светло-желтого цвета.

М-(4-Оксибензил) пимарицин (1). Выход 42%, мелкие кристаллы белого цвета, т. пл. 163-168°С (разл.), R, 0.47.

М-(4-метоксибензил) пимарицин (2). Выход 44%, мелкие кристаллы белого цвета, т. пл. 170-175оС (разл.), Ri 0.49.

М-(4-нитробензил) пимарицин (3). Выход 47%, мелкие кристаллы кремового цвета, т. пл. 174-179оС (разл.), R, 0.53.

^-(4-М-диметиламинобензил) пимарицин (4). Выход 41%, мелкие кристаллы белого цвета, т. пл. 162-167оС (разл.), R, 0.56.

М-(4-фторбензил) пимарицин (5). Выход 49 %, мелкие кристаллы кремового цвета, т. пл. 181-186 оС (разл.), Ri 0.44.

H,Q

М-(4-хлорбензил) пимарицин (6). Выход 46%, мелкие кристаллы белого цвета, т. пл. 175-181оС (разл.), Rí 0.46.

М-(4-бромбензил) пимарицин (7). Выход 48%, мелкие кристаллы светло-желтого цвета, т. пл. 187-192оС (разл.), Rí 0.41.

Спектры ЯМР ХН и 13С в МеОН^4) соединений (17) приведены в таблице 1.

Экспериментальная биологическая

часть

В качестве препарата сравнения при проведении всех медико-биологических исследований использовали пимарицин.

Острую токсичность ^бензильных производных пимарицина (1-7) изучали на беспородных белых мышах-самцах массой 18-20 г. Соединения разбавляли 0,5% водным раствором карбоксиметилцеллюлозы и в виде суспензии испытывали при внутрибрюшинном введении. По результатам испытаний рассчитывали LD50 полученных производных пимарицина методом Кербера [18, 19].

Определение противогрибковой активности N-бензильных производных пимарицина (1-7) в отношении возбудителей различных микотических инфекций проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Минимальная фунгистатическая концентрация (МФсК) устанавливалась по результатам визуальной оценки интенсивности роста тест-культуры в опытных и контрольных пробирках на основании 3-кратных повтор-ностей.

Результаты и обсуждение

Нами показано, что в результате взаимодействия пимарицина с п-замещенными бензальдегида-ми и цианоборогидридом в условиях реакции восстановительного аминирования образуются соответствующие ^бензильные производные этого антибиотика (1-7):

ДМфА/МеОН Et3N (кат.)

Н,С,

СООН

(АИ)

4-R-C6H4-СН

NaBH3CN ДМфА/THF'

СООН

4-R-CeH4—СН2

R = ОН (1), МеО (2), N02 (3), Me2N (4), F (5), CI (6), Br (7).

Взаимодействие пимарицина с указанными реагентами протекает в две стадии. Так, на первой стадии конденсация бензальдегида с первичной аминогруппой углеводного фрагмента молекулы пимарицина приводит к образованию азометинового интермедианта (ароматического имина - АИ). На второй стадии в результате ре-

акции восстановительного аминирования полученного азометинового интермедианта с цианоборогидридом натрия образуются N-бензильные производные пимарицина. Аналогичный азометиновый интермедиант образовался на первой стадии получения гидрофосфорильных производных пимарицина [14], однако в отличие от насто-

ящего исследования на второй стадии было проведено пользовались на стадии восстановления без выделения и

взаимодействие промежуточного ароматического имина предварительной очистки. В качестве п-замещенных бен-

с фосфорноватистой кислотой в условиях реакции Ка- зальдегидов использовали 4-оксибензальдегид, 4-меток-

бачника-Филдса [20, 21]. Промежуточные азометины ис- сибензальдегид, 4-нитробензальдегид, 4-(диметиламино)

Таблица 1. Спектры 1Н и 13С ЯМР Nбензильных производных пимарицина (1-7)

№ Соед. Спектр 1Н ЯМР 5, м.д. (Р, Гц) Спектр 13С ЯМР 5, м.д.

1 1.16 д (1Н, рбея,7 11.0, Н-6ея), 1.23 дд (1Н, ршахД1 11.2, ршехдсея 12.4, Н-10ах), 1.24 с (3Н, Н-6'-СНз), 1,28 с (3Н, 26-СНэ), 1.55 д (1Н, рвах вея 14.2, Н-8ах), 1.57 дд (1Н, риахме, 14.0, рИе,15 2.0, Н-14ах), 1.66 с (1Н, Н-8ея), 1.95 д (д, рше, 11 4.8, Н-Юе,), 1.97 t (1Н, р^ц 10.5, Н-12), 2.05 дд (1Н, р6ах6е, 14.4, р6ах7 0.9, Н-6ах), 2.20 дд (1Н, р24ах 24е, 13.5, р24ах 25 11.0, Н-24ах), 2.28 д (1Н, р14е, 15 3.5, Н-14ея), 2.36 д (1Н, р24е, 25 5.6, Н-24ея), 2.79 дд (1Н, р5 6ах 1.8, р5 6е, 8.3, Н-5), 3.12 д (1Н, 1.5, Н-4), 3.16 д (1Н, 9.0, Н-3'), 3.28 д (1Н, 6'Ме 6.5, Н-5'), 3.35 д (1Н, 9.0, Н-4'), 3.71 (д, 2Н, Р 13.4 Гц, РЬъсн), 3.98 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.25 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.28 дд (1Н, ру8ах 1.3, рт8е, 10.2, Н-7), 4.34 дд (1Н, рцмах 8.4, риме, 1.2, Н-13), 4.38 д (1Н, 8.3, Н-15), 4.53 д (1Н, рг2 1.0, Н-1'), 4.68 д (1Н, р25,26-Ме 6.5, Н-25), 5.56 дд (1Н, р23,24ах 8.8, р23, 24е, 2.5, Н-23), 5.95 д (1Н, р16,17 15.2, Н-16), 6.05 дд (1Н, р23 15.8, р24 0.6, Н-2), 6.09 д (1Н, р22 23 15.4, Н-22), 6.11 д (1Н, рпм 10, Н-17), 6.15 с (1Н, Н-20), 6.17 с (1Н, Н-21), 6.20 с (1Н, Н-19), 6.38 д (1Н, 7.5, Н-3), 6.43 с (1Н, Н-18), 6.68 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.16 д (2Н, Р 8.2, фенил.). 18.25 (С-6'), 20.63 (С-26), 41.16 (С-6), 42.61 (С-10), 43.10 (С-14), 44.54 (С-24), 47.83 (С-8), 56.48 (С-4), 56.65 (Ph-ch2), 57.16 (С-3'), 60.24 (с-5), 61.14 (С-12), 65.93 (С-5'), 68.22 (С-13), 68.64 (С-11), 69.53 (С-7), 71.92 (С-25), 73.08 (С-2'), 74.76 (С-4'), 75.39 (С-5), 81.58 (С-15), 99.73 (С-9), 100.84 (С-1'), 126.32 (С-2), 115.75 (фенил.), 128.37 (фенил.), 130.70 (С-16), 133.02 (С-17), 133.43 (С-18), 133.89 (С-19), 134.35 (С-20), 134.59 (С-21), 135.12 (С-22), 136.16 (фенил.), 137.51 (С-23), 145.56 (С-3), 156.51 (фенил.), 167.94 (С-1), 178.25 (С-27).

2 1.17 д (1Н, р6е,,7 11.0, Н-6ея), 1.24 дд (1Н, ршахдх 11.2, р10ах,10е, 12.4, Н-10ах), 1.26 с (3Н, Н-6'-СН), 1,28 с (3Н, 26-СН3), 1.53 д (1Н, Р«ах„ 8е, 14.2, Н-8ах), 1.57 дд (1Н, риахме, 14.0, рИе,15 2.0, Н-14ах), 1.67 с (1Н, Н-8ея), 1.97 д (д, рше,, 11 4.8, Н-10е,), 1.99 t (1Н, р^ц 10.5, Н-12), 2.07 дд (1Н, р6ах,6е, 14.4, р6ах,7 0.9, Н-6ах), 2.18 дд (1н, р24ах, 24е, 13.5, р24ах, 25 11.0, Н-24ах), 2.26 д (1Н, р14ея, 15 3.5, Н-14ея), 2.37 д (1Н, р24е,, 25 5.6, Н-24е,), 2.77 дд (1Н, р5,6ах 1.8, р5,6е, 8.3, Н-5), 3.11 д (1Н, 1.5, Н-4), 3.16 д (1Н, 9.0, Н-3'), 3.26 д (1Н, Рз 6'Ме 6.5, Н-5'), 3.37 д (1Н, р« 9.0, Н-4'), 3.69 (д, 2Н, Р 13.4, РЬъсн), 3.75 с (3Н, Р1>0-сн3), 4.01 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.24 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.28 дд (1Н, р7,8ах 1.3, р7,8е, 10.2 Гц, Н-7), 4.36 дд (1Н, р13,14ах 8.4, рцие, 1.2, Н-13), 4.40 д (1Н, р15,16 8.3, Н-15), 4.55 д (1Н, рГ2' 1.0, Н-1'), 4.69 д (1Н, р25 26-Ме 6.5, Н-25), 5.54 дд (1Н, рИ24ах 8.8, р23 24е, 2.5, Н-23), 5.93 д (1Н, р1617 15.2, Н-16), 6.07 дд (1Н, 15.8, р24 0.6, Н-2), 6.11 д (1Н, р22 23 15.4, Н-22), 6.13 д (1Н, рии 10, Н-17), 6.16 с (1Н, Н-20), 6.19 с (1Н, Н-21), 6.23 с (1Н, Н-19), 6.40 д (1Н, р3 4 7.5, Н-3), 6.45 с (1Н, Н-18), 6.69 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.18 д (2Н, Р 8.2, фенил.). 18.29 (С-6'), 20.68 (С-26), 41.19 (С-6), 42.66 (С-10), 43.17 (С-14), 44.60 (С-24), 47.88 (С-8), 56.43 (С-4), 56.69 (РЬ1-сн2), 57.21 (С-3'), 60.29 (С-5), 61.10 (С-12), 65.89 (С-5'), 68.24 (С-13), 68.69 (С-11), 69.55 (С-7), 71.99 (С-25), 73.11 (С-2'), 74.80 (С-4'), 75.43 (С-5), 81.65 (С-15), 99.87 (С-9), 101.04 (С-1'), 126.39 (С-2), 115.80 (фенил.), 128.41 (фенил.), 130.79 (С-16), 133.12 (С-17), 133.50 (С-18), 133.95 (С-19), 134.41 (С-20), 134.66 (С-21), 135.19 (С-22), 136.21 (фенил.), 137.87 (С-23), 145.47 (С-3), 156.40 (фенил.), 168.07 (С-1), 178.45 (С-27)

3 1.15 д (1Н, р6е,7 11.0, Н-6ея), 1.21 дд (1Н, ршахи. 11.2, р10ах10е, 12.4, Н-10ах), 1.25 с (3Н, Н-6'-СН), 1,29 с (3Н, 26-СН3), 1.53 д (1Н, р8ах, 8е, 14.2, Н-8ах), 1.59 дд (1Н, рИахД4е, 14.0, р14е,,15 2.0 Гц, Н-14ах), 1.67 с (1Н, Н-8е,), 1.92 д (д, рШе,, 11 4.8, Н-10е,), 1.99 t (1Н, р^ц 10.5, Н-12), 2.09 дд (1Н, р6ах,6е, 14.4, р6ах,7 0.9, Н-6ах), 2.16 дд (1Н, р24ах, 24е, 13.5, р24ах, 25 11.0, Н-24ах), 2.24 д (1Н, р14ея, 15 3.5, Н-14ея), 2.33 д (1Н, р24е, 25 5.6, Н-24е,), 2.74 дд (1Н, р5 6ах 1.8, р5 6е, 8.3, Н-5), 3.10 д (1Н, р4 5 1.5, Н-4), 3.18 д (1Н, р3'4' 9.0, Н-3'), 3.24 д (1Н, ™е 6.5, Н-5'), 3.39 д (1Н, РГ5 9.0, Н-4'), 3.64 (д, 2Н, р 13.4, РЬъсн), 4.06 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.22 д (1Н, рш2 10.5, Н-11), 4.29 дд (1Н, р7 8ах 1.3, р7 8е, 10.2, Н-7), 4.38 дд (1Н, рцмах 8.4, риме, 1.2, Н-13), 4.42 д (1Н, рида 8.3, Н-15), 4.53 д (1Н, рг,2 1.0, Н-1'), 4.71 д (1Н, р25 26-Ме 6.5, Н-25), 5.51 дд (1Н, р2324ах 8.8, р23 24е, 2.5, Н-23), 5.90 д (1Н, р1617 15.2, Н-16), 6.09 дд (1Н, р2 3 15.8, р2 4 0.6, Н-2), 6.14 д (1Н, р22 23 15 . 4, Н-22), 6.17 д (1Н, 10 Гц, Н-17), 6.19 с (1Н, Н-20), 6.23 с (1Н, Н-21), 6.29 с (1Н, Н-19), 6.43 д (1Н, р34 7.5, Н-3), 6.47 с (1Н, Н-18), 6.71 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.21 д (2Н, Р 8.2, фенил.) 18.32 (С-6'), 20.60 (С-26), 41.02 (С-6), 42.62 (С-10), 43.22 (С-14), 44.69 (С-24), 47.79 (С-8), 56.49 (С-4), 56.77 (РЬ1-сн2), 57.30 (С-3'), 60.35 (С-5), 61.19 (С-12), 65.95 (С-5'), 68.32 (С-13), 68.77 (С-11), 69.62 (С-7), 72.10 (С-25), 73.19 (С-2'), 74.88 (С-4'), 75.51 (С-5), 81.73 (С-15), 99.95 (С-9), 101.12 (с-1'), 126.44 (С-2), 115.92 (фенил.), 128.48 (фенил.), 130.83 (С-16), 133.19 (С-17), 133.40 (С-18), 134.08 (С-19), 134.47 (С-20), 134.79 (С-21), 135.29 (С-22), 136.36 (фенил.), 137.99 (С-23), 145.58 (С-3), 156.53 (фенил.), 168.13 (С-1), 178.30 (С-27)

4 1.12 д (1Н, р6е,,7 11.0, Н-6ея), 1.18 дд (1Н, рШахД1 11.2, ршахдсе, 12.4, Н-10ах), 1.22 с (3Н, Н-6'-СН), 1,27 с (3Н, 26-СН3), 1.47 д (1Н, р8ах, 8е, 14.2, Н-8ах), 1.53 дд (1Н, риа^ие, 14.0, р14е,,15 2.0, Н-14ах), 1.63 с (1Н, Н-8ея), 1.90 д (д, рше, 11 4.8, Н-10е,), 1.96 t (1Н, р^ц 10.5, Н-12), 2.06 дд (1Н, р6ах6е, 14.4, р6ах7 0.9, Н-6ах), 2.14 дд (1Н, р24ах 24е, 13.5, р24ах 25 11.0, Н-24ах), 2.20 д (1Н, р14е, 15 3.5, Н-14ея), 2.31 д (1Н, р24е, 25 5.6, Н-24е,), 2.70 дд (1Н, р5 6ах 1.8, р5 6е, 8.3, Н-5), 3.05 д (1Н, 1.5, Н-4), 2.80 с [6Н, РЬ]^(сн3)2], 3.15 д (1Н, Руг 9.0, Н-3'), 3.21 д (1Н, ™е 6.5, Н-5'), 3.34 д (1Н, 9.0, Н-4'), 3.67 (д, 2Н, Р 13.4, РГ1-сн2), 4.02 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.22 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.29 дд (1Н, р7,8ах 1.3, р7,8е, 10.2, Н-7), 4.34 дд (1Н, р13,14ах 8.4, рид*,, 1.2, Н-13), 4.39 д (1Н, р15,16 8.3, Н-15), 4.50 д (1Н, р1',2' 1.0, Н-1'), 4.68 д (1Н, р25,26-Ме 6.5, Н-25), 5.46 дд (1Н, р23,24ах 8.8, р23, 24е, 2.5, Н-23), 5.84 д (1Н, р16 17 15.2, Н-16), 6.01 дд (1Н, р23 15.8, Р-ц 0.6, Н-2), 6.11 д (1Н, р22 23 15.4, Н-22), 6.13 д (1Н, р17 18 10, Н-17), 6.18 с (1Н, Н-20), 6.24 с (1Н, Н-21), 6.31 с (1Н, Н-19), 6.45 д (1Н, 7.5, Н-3), 6.49 с (1Н, Н-18), 6.78 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.27 д (2Н, Р 8.2, фенил.) 18.37 (С-6'), 20.53 (С-26), 41.21 (С-6), 42.70 (С-10), 43.29 (С-14), 44.57 (С-24), 47.84 (С-8), 56.55 (С-4), 56.81 Р-СН), 57.42 (С-3'), 60.42 (с-5), 61.12 (С-12), 65.87 (С-5'), 68.44 (С-13), 68.81 (С-11), 69.71 (С-7), 72.19 (С-25), 73.23 (С-2'), 74.70 (С-4'), 75.59 (С-5), 81.79 (С-15), 100.07 (С-9), 101.20 (С-1'), 126.56 (С-2), 115.81 (фенил.), 128.53 (фенил.), 130.74 (С-16), 133.23 (С-17), 133.53 (С-18), 134.13 (С-19), 134.59 (С-20), 134.88 (С-21), 135.36 (С-22), 136.57 (фенил.), 137.78 (С-23), 145.65 (С-3), 156.53 (фенил.), 168.27 (С-1), 178.42 (С-27)

5 1.16 д (1Н, р6е,,7 11.0, Н-6ея), 1.23 дд (1Н, рШахД1 11.2, ршахдсе, 12.4, Н-10ах), 1.27 с (3Н, Н-6'-СН), 1,33 с (3Н, 26-СН3), 1.59 д (1Н, Р«ах„ 8е, 14.2, Н-8ах), 1.64 дд (1Н, риахме, 14.0, рИе,15 2.0, Н-14ах), 1.69 с (1Н, Н-8е,), 1.95 д (д, рШе,, 11 4.8, Н-10е,), 1.99 t (1Н, 10.5, Н-12), 2.06 дд (1Н, р6ах,6е, 14.4, р6ах,7 0.9, Н-6ах), 2.19 дд (1н, р24ах, 24е, 13.5, р24ах, 25 11.0, Н-24ах), 2.28 д (1Н, р14е,, 15 3.5, Н-14е,), 2.34 д (1Н, р24е,, 25 5.6, Н-24е,), 2.70 дд (1Н, р5,6ах 1.8, р5,6е, 8.3, Н-5), 3.13 д (1Н, 1.5, Н-4), 3.21 д (1Н, 9.0, Н-3'), 3.28 д (1Н, 6ме 6.5, Н-5'), 3.39 д (1Н, р45' 9.0, Н-4'), 3.69 (д, 2Н, Р 13.4, Р^СН2), 4.06 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.22 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.27 дд (1Н, р7 8ах 1.3, Рте, 10.2, Н-7), 4.39 дд (1Н, рцмах 8.4, риме, 1.2, Н-13), 4.46 д (1Н, р^к 8.3, Н-15), 4.55 д (1Н, Ру7 1.0, Н-1'), 4.74 д (1Н, р25 26-Ме 6.5, Н-25), 5.56 дд (1Н, р23 24ах 8.8, р23 24е, 2.5, Н-23), 5.93 д (1Н, р16 17 15.2, Н-16), 6.12 дд (1Н, р23 15.8, р24 0.6, Н-2), 6.17 д (1Н, р22 23 15.4, Н-22), 6.22 д (1Н, р^м 10, Н-17), 6.28 с (1Н, Н-20), 6.31 с (1Н, Н-21), 6.39 с (1Н, Н-19), 6.48 д (1Н, р34 7.5, Н-3), 6.53 с (1Н, Н-18), 6.75 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.26 д (2Н, Р 8.2, фенил.) 18.39 (С-6'), 20.50 (С-26), 41.13 (С-6), 42.56 (С-10), 43.31 (С-14), 44.61 (С-24), 47.82 (С-8), 56.55 (С-4), 56.85 (РЬ1-сн), 57.44 (С-3'), 60.43 (С-5), 61.24 (С-12), 65.88 (С-5'), 68.41 (С-13), 68.98 (С-11), 69.77 (С-7), 72.21 (С-25), 73.14 (С-2'), 74.72 (С-4'), 75.63 (С-5), 81.81 (С-15), 99.86 (С-9), 101.19 (С-1'), 126.53 (С-2), 115.79 (фенил.), 128.55 (фенил.), 130.89 (С-16), 133.24 (С-17), 133.51 (С-18), 134.12 (С-19), 134.52 (С-20), 134.82 (С-21), 135.34 (С-22), 136.45 (фенил.), 138.07 (С-23), 145.67 (С-3), 156.76 (фенил.), 168.25 (С-1), 178.47 (С-27)

6 1.15 д (1Н, р6е,,7 11.0, Н-6е,), 1.21 дд (1Н, рШахД1 11.2, р10ахД0е, 12.4, Н-10ах), 1.25 с (3Н, Н-6'-СН3), 1,29 с (3Н, 26-СН3), 1.53 д (1Н, р8ах, 8е, 14.2, Н-8ах), 1.59 дд (1Н, рИахД4е, 14.0, р14е,,15 2.0, Н-14ах), 1.67 с (1Н, Н^е,), 1.92 д (д, рШе,, 11 4.8, Н-Юе,), 1.99 t (1Н, 10.5, Н-12), 2.09 дд (1Н, р6ах,6е, 14.4, р6ах,7 0.9, Н-6ах), 2.16 дд (1н, р24ах, 24е, 13.5, р24ах, 25 11.0, Н-24ах), 2.24 д (1Н, р14е,, 15 3.5, Н-14е,), 2.33 д (1Н, р24е, 25 5.6, Н-24е,), 2.74 дд (1Н, р5 6ах 1.8, р5 6е, 8.3, Н-5), 3.10 д (1Н, 1.5, Н-4), 3.18 д (1Н, р3'4' 9.0, Н-3'), 3.24 д (1Н, 6Ме 6.5, Н-5'), 3.39 д (1Н, РГ5 9.0, Н-4'), 3.72 (д, 2Н, р 13.4, Р^СН), 4.06 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.22 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.29 дд (1Н, р7 8ах 1.3, р7 8е, 10.2, Н-7), 4.38 дд (1Н, рцмах 8.4, риме, 1.2, Н-13), 4.42 д (1Н, риде 8.3, Н-15), 4.53 д (1Н, рг,2 1.0, Н-1'), 4.71 д (1Н, р25 26-Ме 6.5, Н-25), 5.51 дд (1Н, р23 24ах 8.8, р23 24е, 2.5, Н-23), 5.90 д (1Н, р1617 15.2, Н-16), 6.09 дд (1Н, р2 3 15.8, р2 4 0.6, Н-2), 6.14 д (1Н, Р22 23 15.4, Н-22), 6.17 д (1Н, р^м 10, Н-17), 6.19 с (1Н, Н-20), 6.23 с (1Н, Н-21), 6.29 с (1Н, Н-19), 6.43 д (1Н, р34 7.5, Н-3), 6.47 с (1Н, Н-18), 6.71 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.21 д (2Н, Р 8.2, фенил.) 18.32 (С-6'), 20.60 (С-26), 41.02 (С-6), 42.62 (С-10), 43.22 (С-14), 44.69 (С-24), 47.79 (С-8), 56.49 (С-4), 56.72 (РЬ1-сн), 57.30 (С-3'), 60.35 (С-5), 61.19 (С-12), 65.95 (С-5'), 68.32 (С-13), 68.77 (С-11), 69.62 (С-7), 72.10 (С-25), 73.19 (С-2'), 74.88 (С-4'), 75.51 (С-5), 81.73 (С-15), 99.95 (С-9), 101.12 (С-1'), 126.44 (С-2), 115.92 (фенил.), 128.48 (фенил.), 130.83 (С-16), 133.19 (С-17), 133.40 (С-18), 134.08 (С-19), 134.47 (С-20), 134.79 (С-21), 135.29 (С-22), 136.36 (фенил.), 137.99 (С-23), 145.58 (С-3), 156.53 (фенил.), 168.13 (С-1), 178.30 (С-27)

7 1.11 д (1Н, р6е,,7 11.0, Н-6е,), 1.18 дд (1Н, рюахд1 11.2, ршахдсе, 12.4, Н-10ах), 1.22 с (3Н, Н-6'-СН3), 1,27 с (3Н, 26-СН3), 1.50 д (1Н, р8ах 8е, 14.2, Н-8ах), 1.56 дд (1Н, риахМе, 14.0, р14е,15 2.0, Н-14ах), 1.62 с (1Н, Н^е,), 1.92 д (д, рше,, 11 4.8, Н-Юе,), 1.94 t (1Н, Ри.п 10.5, Н-12), 2.02 дд (1Н, р6ах,6е, 14.4, р6ах7 0.9, Н-6ах), 2.12 дд (1Н, р24ах 24е, 13.5, р24ах 25 11.0, Н-24ах), 2.19 д (1Н, р14е, 15 3.5, Н-14е,), 2.30 д (1Н, р24е, 25 5.6, Н^е,), 2.71 дд (1Н, р5 6ах 1.8, р5 6е, 8.3, Н-5), 3.07 д (1Н, 1.5, Н-4), 3.13 д (1Н, р3'4' 9.0, Н-3'), 3.20 д (1Н, 6Ме 6.5, Н-5'), 3.36 д (1Н, 9.0, Н-4'), 3.66 (д, 2Н, Р 13.4, Р^СН2), 4.02 д (1Н, 3.5, Н-2'), 4.19 д (1Н, рщ2 10.5, Н-11), 4.26 дд (1Н, р7 8ах 1.3, Рте, 10.2, Н-7), 4.33 дд (1Н, р1314ах 8.4, риме, 1.2, Н-13), 4.40 д (1Н, р^к 8.3, Н-15), 4.50 д (1Н, рг2 1.0, Н-1'), 4.68 д (1Н, р25,26-Ме 6.5, Н-25), 5.47 дд (1Н, ра24ах 8.8, р23, 24е, 2.5, Н-23), 5.87 д (1Н, р№17 15.2, Н-16), 6.00 дд (1Н, р23 15.8, р24 0.6, Н-2), 6.11 д (1Н, р22 23 15 . 4, Н-22), 6.15 д (1Н, рпм 10, Н-17), 6.18 с (1Н, Н-20), 6.21 с (1Н, Н-21), 6.26 с (1Н, Н-19), 6.40 д (1Н, 7.5, Н-3), 6.44 с (1Н, Н-18), 6.68 д (2Н, Р 8.2, фенил.), 7.16 д (2Н, Р 8.2, фенил.) 18.41 (С-6'), 20.67 (С-26), 41.15 (С-6), 42.77 (С-10), 43.35 (С-14), 44.78 (С-24), 47.64 (С-8), 56.55 (С-4), 56.75 (Р^СН2), 57.21 (С-3'), 60.27 (С-5), 61.25 (С-12), 65.87 (С-5'), 68.44 (С-13), 68.89 (С-11), 69.73 (С-7), 72.19 (С-25), 73.10 (С-2'), 74.76 (С-4'), 75.65 (С-5), 81.82 (С-15), 99.87 (С-9), 101.19 (С-1'), 126.53 (С-2), 116.05 (фенил.), 128.56 (фенил.), 130.93 (С-16), 133.27 (С-17), 133.49 (С-18), 134.19 (С-19), 134.54 (С-20), 134.89 (С-21), 135.34 (С-22), 136.48 (фенил.), 138.09 (С-23), 145.62 (С-3), 156.67 (фенил.), 168.25 (С-1), 178.49 (С-27)

бензальдегид, 4-фторбензальдегид, 4-хлорбензальдегид и 4-бромбензальдегид. Выбор п-замещенных бензаль-дегидов объясняется следующими причинами: 1) ароматические имины, образующиеся на первой стадии взаимодействия, отличаются большей устойчивостью, чем алифатические имины [22], что очень важно при проведении химической модификации такой сложной и лабильной органической молекулы, как пимарицин; 2) наличие фенильных колец с заместителем в п-положении, входящих в структуру полученных ^бензильных производных пимарицина, позволяет провести четкую идентификацию с помощью ЯМР (ХН и 13С) спектроскопии, а также УФ-спектроскопии; 3) представляло интерес изучить влияние заместителя, находящегося в п-положе-нии фенильного кольца, на противогрибковую активность ^бензильных производных пимарицина. Применение ци-аноборогидрида натрия обусловлено тем, что этот реагент является более мягким восстановительным реагентом [23], и поэтому более приемлем в химии природных биологически активных соединений, в отличие, например, от борогидрида натрия [24, 25].

Полученные ^бензильные производные (1-7) антибиотика пимарицина представляют собой твердые вещества, не имеющие четкой температуры плавления и разлагающееся при нагревании. Эти соединения легко растворяются в ДМСО и ДМФА, ограниченно растворяются в метаноле, этаноле, пиридине и ацетоне, не растворяются в воде, хлороформе, диэтиловом эфире, бензоле и гексане. Следует отметить, что выходы соединений (1-7) составляют только 41-49%, что обусловлено, очевидно, частичным восстановлением сопряженных двойных связей молекулы пимарицина в условиях проводимой реакции, а также лабильностью ^бензильных производных пимарицина (1-7) в процессе выделения и хроматогра-фической очистки. Структура ^бензильных производных пимарицина (1-7) подтверждена с помощью ЯМР (ХН и 13С), ИК- и УФ-спектроскопии. В спектрах ПМР соединения (1-7) отмечаются сигналы протонов, присущие пима-рицину [26, 27], сигналы протонов метиленовых групп, содержащихся в бензильных фрагментах, зафиксированы в области 5 3.64-3.71 м.д. Сигналы протонов фенильного кольца, имеющего заместители в п-положении, образуют систему двух пар химически эквивалентных, но магнитно неэквивалентных ядер АВА^1, что согласуется с литературными данными [28]. В спектрах ЯМР 13С ^бензильных производных пимарицина (1-7) присутствуют сигналы атомов углерода, присущие пимарицину [26, 29], а также наблюдаются сигналы атомов углерода метиленовой группы бензильного фрагмента (Р1|-СН2) в области 56,6557,85 м.д., сигналы фенильных протонов зафиксированы в широком диапазоне 115.75-156.76 м.д. Кроме того, наличие метиленовой группы бензильного фрагмента подтверждается спектроскопией ЯМР^ЕРТ. В ИК-спектрах соединений (1-7) кроме полос поглощения, присущих пимарицину [30, 31], обнаружены полосы поглощения в области 1575-1587 см-1, характерные для фенильных заместителей. В электронных спектрах поглощения соединений (1-7) зафиксированы удельные показатели поглощения (Е10/°1см) 712, 1105, 1020 при длинах волн 290, 303 и 318 нм соответственно, характерные для тетраено-вой сопряженной системы [30-32].

Как показали результаты фармакологических испытаний, острая токсичность (LD50) ^бензильных производных пимарицина соединений (1-7) была в 3 раза меньше, чем у исходного антибиотика [32, 33]. Величина LD50 изученных соединений (1-7) варьировала от 380 до 395 мг/кг (мыши, внутрибрюшинно).

В связи с тем, что пимарицин широко используется для лечения многих клинических форм кандидоза, особое внимание при проведении биологических испытаний было уделено изучению антифунгального действия полученных ^бензильных производных пимарицина соединений (1-7) в отношении дрожжеподобных грибов рода

Candida. Биологическими исследованиями обнаружено, что производные пимарицина соединений (1-7) обладали выраженной противогрибковой активностью в отношении 6 тест-культур рода Candida. Было показано, что противогрибковая активность соединений (5) и (7) в отношении Candida albicans, Candida krusei и Candida para-psilosis превышала исходный антибиотик, а в отношении Candida utilis, Candida tropicalis и Candida guillermondii их антифунгальная активность была на уровне пимарицина (таблица 2). Противогрибковое действие производных (3) и (6) в отношении 6 тест-культур дрожжеподобных грибов рода Candida было на уровне исходного антибиотика, а производные (1), (2) и (4) уступали пимарицину по антифунгальной активности. N-Бензильные производные пимарицина (3) и (5-7), содержащие нитрогруппу или атомы галогенов в п-положении фенильного кольца соотвественно, проявили антифунгальную активность на уровне исходного антибиотика в отношении возбудителя бластомикоза (Blastomyces dermatitidis), в то время как производные (1), (2) и (4) уступали пимарицину. Из всех изученных соединений только производные (6) и (7) оказывало такое же антифунгальное действие, что и пимарицин в отношении возбудителей трихомикоза (Trichophyton tonsurans, Trichophyton violaceum) и гистоплазмоза (Histo-plasma capsulatum), остальные производные уступали исходному антибиотику. Обнаружено, что соединения (3), (5) и (6) проявили противогрибковую активность в отношении возбудителей аспергиллеза (Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus) и плесневого микоза (Penicillium granulatum) на уровне пимарицина, в то время как производные (7) (4) и (7) обладали невысокой активностью. Малочувствительными к производным пимарицина (1-7) оказались возбудители хромомикоза (Cladosporium carrionii), споротрихоза (Sporotrichum schenkii) и фикомикоза (Rhizopus nigricans, Mucor mucedo). Было показано, что наибольшая антифунгальная активность наблюдалась у N-бензильных производных пимарицина (3) и (5-7), содержащих нитрогруппу или атомы галогенов в фенильном кольце соответственно (таблица 2). Соединения (1) и (2), содержащие окси- и ме-токси-группы в фенильном кольце соответственно, проявили наименьшую активность в отношении всех тест-культур патогенных грибковых микроорганизмов.

Таблица 2. Минимальная фунгистатическая концентрация (МфсК) N-бензильных производных пимарицина (1-7) (мкг/мл)

Тест-культура Соединение Пима-

1 2 3 4 5 6 7 рицин

Candida albicans 6,25 6,25 1,56 3,12 0,78 1,56 0,78 1,56

Candida utilis 3,12 3,12 1,56 3,12 1,56 1,56 1,56 1,56

Candida tropicalis 6,25 6,25 3,12 6,25 3,12 3,12 3,12 3,12

Candida krusei 6,25 6,25 6,25 6,25 3,12 6,25 3,12 6,25,

Candida parapsilosis 6,25 6,25 6,25 6,25 3,12 6,25 3,12 6,25

Candida guillermondii 12,5 12,5 6,25 12,5 6,25 6,25 6,25 6,25

Blastomyces dermatitidis 12,5 12,5 3,12 6,25 3,12 3,12 3,12 3,12

Histoplasma capsulatum 6,25 6,25 6,25 3,12 3,12 3,12 3,12 3,12

Trichophyton tonsurans 25,0 12,5 12,5 12,5 12,5 6,25 6,25 6,25

Trichophyton violaceum 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 12,5 12,5 12,5

Cladosporium carrionii 50,0 50,0 25,0 50,0 25,0 25,0 25,0 12,5

Aspergillus fumiqatus 50,0 50,0 12,5 25,0 12,5 12,5 25,0 12,5

Aspergillus flavus 50,0 50,0 12,5 25,0 12,5 12,5 25,0 12,5

Penicillium granulatum 50,0 25,0 6,25 25,0 6,25 6,25 12,5 6,25

Sporotrichum schenkii 50,0 50,0 25,0 25,0 50,0 25,0 25,0 12,5

Rhizopus nigricans 100,0 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 25,0 12,5

Mucor mucedo 100,0 100,0 100,0 50,0 50,0 50,0 50,0 25,0

Вывод

В условиях реакции восстановительного амини-рования получены N-бензильные производные тетраено-вого макролидного антибиотика пимарицина, обладающие меньшей токсичностью и высокой противогрибковой активностью. Дальнейший поиск N-бензильных производных пимарицина, содержащих различные заместители в фенильном кольце, в условиях изученных реакций является перспективным направлением его химической модификации с целью получения малотоксичных антимико-тиков с выраженным антифунгальным действием против возбудителей кандидозов.

Авторы статьи хотели бы отметить, что теоретическая разработка метода химической модификации пимарицина в условиях восстановительного аминирова-ния была разработана при участии д-ра хим. наук, проф. Б.И. Ионина.

Литература

1. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М.: Триада-Х, 2001. С. 187-188.

2. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции. Руководство для врачей. М.: БИНОМ, 2008. С. 158-159.

3. Козлов С.Н., Страчунский Л.С. Современная антимикробная химиотерапия. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. С. 19-23.

4. Климко Н.Н., Веселов А.В. Новые препараты для лечения инвазивных микозов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2003. Т. 5. № 4. С. 342-353.

5. Климко Н.Н., КолбинА.С. Перспективы использования новых системных противогрибковых препаратов в педиатрии // Проблемы медицинской микологии. 2005. Т. 7. № 3. С. 3-11.

6. Веселов А.В. Системные антимикотики: состояние и перспективы // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2007. Т. 9. № 1. C. 73-80.

7. Omura S., Tanaka H. Production, Structure, and Antifungal Activity of Polyene Macrolides. In Book: Macrolide Antibiotics: Chemistry, Biology and Practice. / Omura S. (Ed.). New York: Academic Press, 1984. P. 351-404.

8. Шенин Ю.Д., Белахов В.В. Химия полиеновых макролидных антибиотиков. // Обзорная информация. Серия "Лекарственные средства, экономика, технология и перспективы получения". М.: ВНИИСЭНТИ, 1989. Вып.

6. 44 с.

9. Zotchev S.B. Polyene Macrolide Antibiotics and Their Application in Human Therapy // Current Medicinal Chemistry. 2003. Vol. 10. No. 3. P. 211-223.

10. Drulis-Kawa Z., Dorotkiewicz-Jach A. Liposomes as Delivery Systems for Antibiotics // International Journal of Pharmaceutics. 2010. Vol. 387. No. 1-2. P. 187-198.

11. Naik S.R., Desai S.K., Shah P.D., Wala S.M. Liposomes as Potential Carrier System for Targeted Delivery of Polyene Antibiotics // Recent Patents on Inflammation & Allergy Drug Discovery. 2013. Vol. 7. No. 3. P. 202-214.

12. Kaur I.P., Kakkar S. Topical Delivery of Antifungal Agents // Expert Opinion on Drug Delivery. 2010. Vol. 7. No. 11. P. 1303-1327.

13. Fucinos C., Guerra N.P. Teijon J.M., Pastrana L.M., Rua M., Katime I. Use of Poly(N-isopropylacrylamide) Nanohydrogels for the Controlled Release of Pimaricin in Active Packaging // Journal of Food Science. 2012. Vol. 77. No.

7. P. 21-28.

14. Belakhov V.V., Shenin Yu.D., lonin B.I. // Synthesis of Hydrophosphoryl Derivatives of the Antifungal Antibiotic Pimaricin by the Kabachnik-Fields Reaction // Russian Journal of General Chemistry. 2008. Vol. 78. № 2. P. 305-312.

15. Белахов В.В., Шенин Ю.Д., Ионин Б.И. Синтез и противогрибковая активность N-арилзамещенных производных пимарицина // Химико-фармацевтический журнал. 2010. Т. 44. № 9. С. 19-25.

16. Белахов В.В., Догадина А.В., Ионин Б.И. Химическая модификация тетраенового макролидного антибиотика пимарицина диэтилхлорацетиленфосфонатом // Известия СПбГТИ(ТУ). 2013. № 19. С. 67-70.

17. Armarego W.L.F., Chai C.L.L. Purification of Laboratory Chemicals. Oxford: Butterworth-Heinemann Press, 2012. 1024 р.

18. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 с.

19. Беленький М.Л. Элементы количественнной оценки фармакологического эффекта. Л.: Медгиз, 1963. С. 81-106.

20. Нифантьев Э.Е. Химия гидрофосфорильных соединений. М.: Наука, 1983. С. 78-87.

21. Черкасов Р.А., Галкин В.И. Реакция Кабачни-ка-Филдса: синтетический потенциал и проблема механизма // Успехи химии. 1998. Т. 67. № 10. С. 940-968.

22. Сайкс П. Механизмы реакций в органической химии. М.: Химия. 1991. С. 244-245.

23. Wade L.G. Organic Chemistry. Upper Saddle River (New Jersey, USA): Prentice Hall, 1999. P. 886-888.

24. DavisA.P. Reduction of Carboxylic Acids to Aldehydes by Others Methods. In Book: Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy and Effiency in Modern Organic Chemistry. / Trost B.M., Fleming I. (Eds). Oxford: Per-gamon Press, 1991. Vol. 8. Chapter 1.12. P. 283-305.

25. Gribble G.W. Sodium Borohydride and Carboxylic Acids: A Novel Reagent Combination. In Book: Reduction in Organic Synthesis. ACS Symposium Series. Washington: Publisher American Chemical Society, 1996. Chapter 11. P. 167-200.

26. Ceder O., Hansson B., Rapp U. Pimaricin. VIII. Structural and Configurational Studies by Electron Impact and Field Desorption Mass Spectroscopy, Carbon-13 (25.2 MHz) and Proton (270 MHz)-NMR // Tetrahedron. 1977. Vol. 33. No. 20. P. 2703-2714.

27. Lancelin J.M., Beau J.M. Stereostructure of Glycosylated Polyene Macrolides: the Example of Pimaricin // Bulletin de la Societe Chimique de France. 1995. Vol. 132. No. 2. P. 215-223.

28. Ионин Б.И., Ершов Б.А., Кольцов А.М. ЯМР-спектроскопия в органической химии. Л.: Химия, 1983. С. 99-106.

29. Pandey R.C., Rinehart K.L. Polyene Antibiotics. VII. Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Evidence for Cyclic Hemiketals in the Polyene Antibiotics Amphotericin B, Nystatin A1, Tetrin A, Tetrin B, Lucensomycin, and Pimaricin // Journal of Antibiotics. 1976. Vol. 29. No. 10. P. 1035-1042.

30. Brik H. Natamycin. In Book: Analytical Profiles of Drug Substances. New York: Academic Press, Inc. 1981. Vol. 10. P. 513-561.

31. Brik H. Natamycin (Supplement). In Book: Analytical Profiles of Drug Substances and Excipients. New York: Academic Press, Inc. 1994. Vol. 23. P. 399-419.

32. Ветлугина Л.А., Никитина Е.Т. Противогрибковые полиеновые антибиотики. Алма-Ата: Наука, 1980. C. 18-19.

33. Barr F.S. Pimaricin. Toxicological Studies // Antibiotics and Chemotherapy. 1959. Vol. 9. P. 406-408.