CC BY
83
УДК 612.172 : 611.127-018 Загоруйко Г. Е., Загоруйко Ю. В.
МОРФОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРЕНАТАЛЬНОГО И ПОСТНАТАЛЬНОГО
СОЗРЕВАНИЯ КАРДИОМИОЦИТОВ КРЫС
Харьковский национальный медицинский университет (г. Харьков)
olgaseosmm@gmail.com
Данное исследование проведено в соответствии с тематикой НИР «Структурные перестройки компонентов сердечно-сосудистой системы в условиях ее нормального и аномального гистогенеза у человека и экспериментальных животных», № государственной регистрации 011111006621.
Вступление. Одним из распространенных объектов исследований биологии развития, возрастной морфологии, экспериментальной медицины являются лабораторные мыши и крысы линии Вистар. Органы этих животных достаточно подробно исследованы эмбриологическими, гистологическими, физиологическими, биохимическими, морфоме-трическими методами [6,12]. Установлено, что закономерности онтогенеза лабораторных животных и человека обладают определенными сходствами. Результаты этих исследований позволили разработать периодизацию постнатальной жизни белых крыс и установить эквивалентны возраста крысы и человека [2,9]. Оказалось, что «физиологические часы» постнатальной жизни крысы «движутся» примерно в тридцать раз быстрее часов человека. Развитие сердца млекопитающих тесно коррелирует с процессами онтогенеза целостного организма. Мышечные клетки сердца - кардиомиоциты (КМЦ) в течение всей жизни индивида непрерывно выполняют специфическую для них функцию «сокращение — расслабление». На ранних этапах онтогенеза, в левом желудочке (ЛЖ) сердца млекопитающих происходят процессы дифференциации, пролиферации, регенерации и созревания КМЦ [6,11]. Доминирующими структурно-функциональными компонентами КМЦ являются миофибриллы (МФ) и митохондрии (МХ). В ранние сроки онтогенеза животных, в КМЦ ЛЖ наблюдается одновременный рост количества МФ и МХ, что характерно для природного процесса созревания мышечных клеток сердца [4,6-8].
Цель работы — исследовать закономерности кинетики развития КМЦ ЛЖ сердца в процессе пре-натального и раннего постнатального онтогенеза крыс линии Вистар. Полученные данные использовать для характеристики фазы созревания мышечных клеток сердца.
Объект и методы исследования. В исследовании использованы нормотензивные крысы — самцы линии Вистар из вивария ХГУ им. В.Н. Каразина (г. Харьков). Возраст животных: 15, 20 суток прена-тального развития и 8-12 час, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 и 45 суток постнатального онтогенеза. В каждой возрастной группе было не менее 5 особей. Забой крыс и экстирпацию сердца проводили в соответствии с «Положенням про використання
тварин у бюлопчних доогмдженнях», которые согласованы с «Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей». Кусочки миокарда ЛЖ крыс обрабатывали по общепринятым методикам [5]. С помощью ультрамикротома УМТП-5 из кусочков миокарда ЛЖ готовили ультратонкие срезы, которые исследовали и фотографировали в электронном микроскопе ЭМВ-100Л при постоянном увеличении 2000х. Для каждой возрастной группы крыс фотографировали 45-50 изображений миокарда на фотопленку ФТ-41 размером (6 х 9) см. Морфометрический анализ серии негативных изображений миокарда проводили на основе рекомендаций [1] с помощью установки УМА-1 [3]. Использовали прозрачную точечную тест-систему (Ы0=384 точек). В каждом негативе миокарда подсчитывали число тест-точек (N1) расположенных над изображениями: всех органелл и включений — структурный компонент КМЦ (Ы ск), миофибриллами (Ы мф), митохондриями (Ы мх), клеточным матриксом (Ы км), паренхимой миокарда (Ы п). С помощью вариационной статистики и графико-аналитического метода определяли стабилизированные значения V, мф, V, мх, Ч, ск, V км (в %). Объемная доля паренхимы миокарда ЛЖ принята за 100%. Погрешность измерений показателей V, мф, V, мх, V, ск, V, км составила (±0,30%).
Результаты исследований и их обсуждение. Проведенные электронно-микроскопические исследования позволили установить, что паренхима трабекулярного и компактного миокарда ЛЖ эмбрионов крыс состоит из умеренно обезвоженных темных т-КМЦ, находящихся в состоянии относительного физиологического покоя и светлых с-КМЦ, которые участвуют в процессах пролиферации, роста и способны к сокращению. Исходя из динамики изменений ультраструктуры КМЦ, можно предположить, что в процессе эмбриогенеза, в паренхиме миокарда происходят периодические переходы т-КМЦ • с-КМЦ. К моменту рождения крыс, количество т-КМЦ в миокарде существенно убывает. В ЛЖ сердца 5-ти суточных крысят т-КМЦ не выявлены. Результаты морфометрического анализа (рис. 1) свидетельствуют, что наибольшая «насыщенность» КМЦ ЛЖ структурными компонентами наблюдается в сердце 15-ти суточных эмбрионов (V, ск = 94,6%).
В составе компактного и трабекулярного миокарда обнаруживаются, преимущественно, т-КМЦ с минимальным содержанием клеточного матрикса (V, км = 5,4%). Относительно небольшое количество с-КМЦ способны к пролиферации, росту и периодическому спонтанному сокращению. В КМЦ новорожденных крысят уменьшается объемная доля
структурных компонентов (V ск = 93,4%) и увеличивается относительный объем гиалоплазмы (V км = 6,6%). В процессе постнатального развития крысят, цифровые значения V" ск монотонно уменьшаются и график V" ск = 1 (t) при t ^ 45 суток приближается к прямой, с ординатой V ск = 90% (рис. 1а). В КМЦ увеличивается содержание клеточного матрикса. Цифровые значения V" км возрастают, график V км = 1 при t ^ 45 суток медленно и монотонно приближается к асимптоте с ординатой V" км = 10,0% (рис. 1б). В КМЦ ЛЖ 15-ти суточных эмбрионов соотношение (V ск / V" км) равно (17,5 : 1), у новорожденных — (14,1 : 1). В течение
45 суток после рождения животных, это соотношение приближается к (9 : 1). В период раннего онтогенеза эмбрионов крысят, в КМЦ ЛЖ наблюдается одноврем енный и интенсивный монотонный рост содержания МФ и МХ. Графики роста показателей V мф = 1 (рис. 2а) и V мх = "14 (рис. 2б), имеют по два участка монотонности и точки перегиба (В1 и В2), которые расположены на вертикальной штриховой линии — время рождения крысят.
Рис. 1. Изменение объемной доли структурных компонентов Ууск (а) и клеточного матрикса Vvкм (б) в КМЦ ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс. По оси абсцисс — сроки развития (сутки); по оси ординат — объемная доля, %. Вертикальная штриховая линия — время рождения крысят.
3 и V" мх = 1 имеют Б-образный
Рис. 2. Изменение объемной доли миофибрилл ^мф (а) и митохондрий Vvмх (б) в КМЦ ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс. Остальные обозначения те же, что и на рис. 1.
На первом участке графиков в интервале времени t е (15-20 суток эмбриогенеза), в КМЦ наблюдается активный монотонный рост содержания МФ и МХ. Цифровые значения показателя V" мф возрастают от 10% до 23%, а V мх - от 6% до 13%. После рождения крысят, на втором участке графиков наблюдается постепенное и монотонное уменьшение скорости роста в КМЦ содержания МФ и МХ. Цифровые значения V" мф возрастают от 33,5% (новорожденные) до 40%, "а V мх — от 21,3% до 40% на 45-е сутки после рождения животных. Эмпирические
графики V" мф = 1 И и V" мх = 1 вид, взаимно приближаются и сходятся в узловой точке «С» с координатами (45 суток, 40%). Комплекс (МФ + МХ) КМЦ определяет биомеханику миокарда и способствует ритмичному сокращению сердца на протяжении всей жизни организма. Нами исследована кинетика роста цифровых значений показателя
V <мф+мх) (рис. 3).
В пренатальный период онтогенеза крыс, монотонно и интенсивно возрастающий участок графика функции V <мф+мх) = 1^(1:) в точке перегиба (А) сменяется участком графика, в котором уменьшается скорость роста значений V" <мф+мх>. При t ^ 45 суток, график V" <мф+мх) асимптотически приближается к прямой, с ординатой равной 80%. Установлено [10], что у половозрелых представителей млекопитающих, независимо от их возраста, в КМЦ ЛЖ на долю комплекса (МФ + МХ) приходится 80%. Следовательно, в ранний период онтогенеза крыс, рост цифровых значений V" (мф+мх) характеризует процесс созревания КМЦ ЛЖ. Для характеристики процесса созревания КМЦ нами предложен показатель «й», значения которого определяют по формуле: й = (V" мф + V" мх) / 80%. В этой формуле значения показателей V" мф и V" мх приведены в (%). В процессе эмбриогенеза крыс, цифровые значения показателя «й» возрастают от 0,2 для КМЦ 15-ти суточных эмбрионов, до 0,66 в КМЦ новорожденных крысят и й = 1,0 для КМЦ 45-ти суточных животных. Данные литературы [6,11] свидетельствуют, что пролиферация КМЦ в ЛЖ сердца крыс Вистар прекращается после рождения животных. По нашим данным, это проис-
три последовательные фазы развития: созревание, зрелость и старение. При экстраполяции графиков V
мф
= ^ № и V
Г ТО (рис. 2)
Рис. 3. Рост объемной доли комплекса «МФ+МХ» в КМЦ ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс.
Остальные обозначения те же, что и на рис. 1.
ходит при значении й > 0,7. На рисунке 4 представлен график убыли цифровых значений показателя V" '. Его значения определяют исходя из формулы: V" 1 = Vv ск - (V мф + Vv мх). Для созревающих КМЦ 15-ти суточных эмбрионов V" ' = 78,6%.
Большое цифровое значение этого показателя объясняется небольшими размерами эмбриональных КМЦ ЛЖ, в которых ^ядра составляет 16-17%, а саркоплазма содержит большое количество элементов синтетического аппарата (рибосом, полирибосом, цистерн грЭПС, комплекс Гольджи) и гранул гликогена. В интервале 1 с (15-20) суток эмбриогенеза, цифровые значения показателя V" ' уменьшаются от 78,6% до "50%. Это обусловлено увеличением размеров КМЦ, активным биосинтезом в их саркоплазме МФ-х и МХ-х белков, что приводит к увеличению цифровых значений показателя V" (мф+мх) от 16% до 37%. После рождения крысят, участок графика V" ' = ^ (1) при 1 ^ 45 суток, монотонно убывает и асимптотически приближается к прямой, с ординатой V" ' = 10%. В работе [4] кинетики роста значений V мф и V мх были использованы для проведения возрастной периодизации жизненного цикла постмитотических КМЦ ЛЖ крыс линии Вистар. Установлено, что в возрастном интервале 1 с (новорожденные - 33-х месячные животные), постмитотические КМЦ ЛЖ крыс проходят
в сторону уменьшения возраста эмбрионов, кривые монотонно убывают, сходятся и пересекаются в точке «А», координаты которой (12 суток, 3%) определяют начало пренатального периода фазы созревания КМЦ ЛЖ. Выводы
1. Временными границами фазы созревания КМЦ ЛЖ крыс линии Вистар являются: 12 суток пренатально-го и 45 суток постнатального развития. Созревание КМЦ ЛЖ сопровождается одновременным и монотонным ростом объемных долей МФ и МХ. В интервале фазы созревания КМЦ, цифровые значения показателей V мф и V мх увеличиваются от 3% до 40%.
Рис. 4. Убыль объемной доли внутриклеточных структур Vv 1 в КМЦ ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс. Остальные обозначения те же, что и на рис. 1.
2. В процессе эмбриогенеза, в миокарде ЛЖ происходят периодические превращения т-КМЦ ^ с-КМЦ. Только светлые КМЦ ЛЖ способны к пролиферации, синтезу белков МФ и МХ, физиологической гипертрофии.
Перспективы дальнейших исследований. Перспективным направлением научных исследований является изучение кинетики роста объема ядросодержащего сегмента КМЦ, динамики ядер-но-цитоплазматического отношения, кинетики роста площадей сечений митохондрий и их количества в созревающих КМЦ крыс разного возраста.
Л1тература
Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов. — М.: Медицина, 1990. — 384 с.
Дыбан А.П. Эквивалентные стадии развития и кариология начального эмбриогенеза млекопитающих / А.П. Дыбан, В.С. Баранов // Цитогенетика развития млекопитающих. — М: Наука, 1978. — С. 7-14.
Загоруйко Г.Е. Механическое устройство для морфометрического и ориентационного анализа биологических структур / Г.Е. Загоруйко, В.Н. Офицеров // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1979. — № 11. — С. 625-626.
х
4. Загоруйко Г.Е. Постнатальный цитогенез кардиомиоцитов крыс и принципы его возрастной периодизации / Г.Е. Загоруй-ко // Бюл. экспер. биол. и мед. — 1985. — № 4. — С. 507.
5. Карупу В.Я. Электронная микроскопия / В.Я. Карупу. - К.: Вища школа, 1984. — 162 с.
6. Козлов В.А. Морфология развивающегося сердца. Структура, ультраструктура, метаболизм / В.А. Козлов, И.В. Твердох-леб, И.С. Шпонька, В.Д. Мишалов. — Днепропетровск, 1995. — 220 с.
7. Козлов С.В. Изменения митохондриома сократительных кардиомиоцитов крыс на этапах постнатального онтогенеза / С.В. Козлов, А.Е. Маевский, В.Д. Мишалов, О.Н. Сулаева // Морфолопя. — 2014. — Т. 8, № 4. — С. 37-42.
8. Марченко Д.Г. Онтогенетичш мехашзми формування скоротливого апарата кардюмюцит1в / Д.Г. Марченко, 1.С. Твердохл1б // Морфолопя. — 2012. — Т. 6, № 4. — С. 5-11.
9. Махинько В.И. Константы роста и функциональные периоды развития в постнатальной жизни белых крыс / В.И. Махинь-ко, В.Н. Никитин // Молекулярные и физиологические механизмы возрастного развития. - К.: Наукова думка, 1975. — С. 308-325.
10. Офицеров В.Н. Некоторые закономерности структурного гомеостаза кардиомиоцитов / В.Н. Офицеров, Г.Е. Загоруйко // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1977. — № 11. — С. 613-616.
11. Румянцев П.П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации / П.П. Румянцев. — Л.: Наука, 1982. — 288 с.
12. Яблучанский Н.И. Морфометрия сердца крысы / Н.И. Яблучанский, В.И. Шевченко, В.Г. Губенко. — Донецк, 1980. — 109 с.
УДК 612.172 : 611.127-018
МОРФОМЕТРИЧНИЙ АНАЛ1З ПРЕНАТАЛЬНОГО ТА ПОСТНАТАЛЬНОГО ДОЗР1ВАННЯ КАРД1ОМ1О-ЦИТ1В ЩУР1В
Загоруйко Г. 6., Загоруйко Ю. В.
Резюме. Проведено електронно^кроскотчне, морфометричне доотдження юнетики розвитку ультраструктур кардюмюцитв лiвого шлуночка (КМЦ ЛШ) серця на етапах пре- та постнатального розвитку щурiв лши Вютар. Установлено, що в iнтервалi t е (12 дiб ембрю- та 45 дiб постембрюгенеза) вщбуваеться процес дозрiвання КМЦ. На початку фази дозрiвання КМЦ ^мф = V^ = 3%. Наприюнщ фази дозрiвання КМЦ ^мф = V^ = 40%. Запропонована формула для визначення ступеня зртост КМЦ: G = (Vv мф + Vv мх) / 80%, де G - ступшь зртост КМЦ, (V мф+^мх) - об'емна частка МФ i МХ у дозрiваючих КМЦ (%), 80% - об'емна частка МФ i МХ у зртих КМЦ.
Ключовi слова: онтогенез, кардюмюцити, мiофiбрили, мiтохондрiI.
УДК 612.172 : 611.127-018
МОРФОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРЕНАТАЛЬНОГО И ПОСТНАТАЛЬНОГО СОЗРЕВАНИЯ КАРДИОМИОЦИТОВ КРЫС
Загоруйко Г. Е., Загоруйко Ю. В.
Резюме. Проведено электронно-микроскопическое и морфометрическое исследование ультраструктур кардиомиоцитов левого желудочка (КМЦ ЛЖ) на этапах пре- и постнатального развития крыс Вистар. В интервале t е (12 сут. эмбрио- и 45 сут. постэмбриогенеза), происходит процесс созревания КМЦ. В начале фазы пренатального созревания КМЦ Vv^ = V™ = 3%. В конце фазы созревания КМЦ Vм4, = V/" = 40%. Предложена формула для определения степени зрелости КМЦ: G = (Vv мф + Vv мх) / 80%, где G - степень зрелости
КМЦ, (Vv мф+^мх) объемная доля МФ и МХ в созревающих КМЦ (%), 80% — объемная доля МФ и МХ в зрелых КМЦ. v v
Ключевые слова: онтогенез, кардиомиоциты, миофибриллы, митохондрии.
UDC 612.172: 611.127-018
MORPHOMETRIC ANALYSIS OF PRENATAL AND POSTNATAL MATURATION OF RAT CARDIOMYOCYTES
Zahoruiko H. Ye., Zahoruiko Yu. V.
Abstract. One of the most common objects for research in developmental biology, age related morphology, experimental medicine are laboratory mice and Wistar rats. Laboratory animals are investigated sufficiently detailed applying embryological, histological, physiological, biochemical and morphometric methods. It was determined, that ontogenesis regularities in laboratory animals and humans had certain similar features. The results of these researches enabled to develop postnatal life periodization of white rats and determine the age equivalents of rat and human.
The aim of the study is to investigate kinetics of cardiomyocytes (CMC) development of the heart left ventricle in the process of prenatal and early postnatal ontogenesis of Wistar rats and use obtained data for specification of the cardiomyocytes maturation phase.
The normotensive rats - Wistar male rats from vivarium of VN. Karazin Kharkiv National University were used in research. The age of the animals was: 15, 20 days of prenatal development and 8-12 hours, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 and 45 days of postnatal ontogenesis. Each age group included 5 animals. Electron microscopic studies determined that the parenchyma of trabecular and compact myocardium of the left ventricle in rat embryos consisted of moderately dehydrated dark cardiomyocytes in functional rest state. Light cardiomyocytes are able to contract and involved in proliferation. Dynamics of cardiomyocytes ultrastructure stated that the processes of mutual transformation of d-CMC ^ l-CMC occurred in the myocardium parenchyma of embryos. Morphometric study of kinetics in cardiomyocytes ultrastructure development in the left ventricle of Wistar male rats at pre- and postnatal stages
of animals development was carried out. It was determined that in the time interval (12 days embryo and 45 days of postembryogenesis) the process of cardiomyocytes maturation in the left ventricle occured. In the early phase of prenatal maturation of cardiomyocytes Vvmf = V^11 = 3%. At the end of the cardiomyocytes maturation phase Vvmf = умен = 40%. The formula for determining of the cardiomyocytes maturity degree is: G = (Vvmf + V/^) / 80%, where G is the cardiomyocytes maturity degree (Vvmf + V^) - the sum of myofibrils and mitochondria volume fractions in mature cardiomyocytes (in %), 80% - the total volume of myofibrils and mitochondria in cardiomyocytes. The graphs of digital values Vvmf and V^ have «S»-shaped form, the points of inflection on these graphs correspond to the rats birth.
Conclusions
1. Time borders of the maturation phase in the left ventricle of Wistar rats are: 12 days of prenatal and 45 days of postnatal development. The maturation of cardiomyocytes in the left ventricle is accompanied by simultaneous and monotonous increase of myofibrils and mitochondria volume fractions. In the interval of maturation cardiomyocytes phase, digital values of Vvmf and V/^ increase from 3% to 40%.
2. In the process of embryogenesis, the periodic transformation d-CMC ^ l-CMC in the myocardium of the left ventricle occurs. Only light cardiomyocytes of the left ventricle are able to proliferate, synthetize protein of myofibrils and mitochondria, physiological hypertrophy.
Keywords: ontogenesis, cardiomyocytes, myofibrils, mitochondria.
Рецензент — проф. Врошенко Г. А.
Стаття надшшла 20.03.2017 року
УДК 616.441300008.64 - 056.716 - 02:[611.33 - 018:547.96] 1ванкевич Р. Я., Ященко А. М., Луцик О. Д.
Г1ПОТИРОЗ МАТЕРИНСЬКОГО ОРГАН1ЗМУ 1НДУКУ6 П1ДВИЩЕНЕ ЕКСПОНУВАННЯ ВУГЛЕВОДНИХ ДЕТЕРМ1НАНТ DGal ТА DGalNAc У СКЛАД1 ГЛ1КОКОН'ЮГАТ1В ШЛУНКОВИХ ЗАЛОЗ ПОТОМСТВА ЩУР1В
Льв1вський нацюнальний медичний ушверситет !меш Данила Галицького (м. Льв1в)
roma.rodyk@gmail.com
Робота е фрагментом планово! науково-дослщ-но! теми кафедри пстологи, цитологи та ембрюлоги Льв1вського нацюнального медичного уыверситету 1мен1 Данила Галицького (№ державно! реестраци 0117и001076).
Вступ. В останн роки захворювання щитопо-д1бно! залози виходять на перше мюце серед ен-докринно! патолог!!, часто спричинюючи кл1н1чн1 розлади 1нших систем оргаызму [6]. Порушеннями функц1! щитопод1бно! залози страждае не менш як 3% населення свггу I швидк1сть зростання к1лькост1 цих хворих упродовж минулих 10 роюв залишаеться незм1нно високою [8]. Ппотироз уражае ж1нок пере-с1чно в 20 раз1в част1ше, н1ж чолов1к1в. Порушення функц1! щитопод1бно! залози у ж1нок безпосередньо впливае на стан здоров'я д1тей [2,5,9]. Зокрема, доведено, що навггь субкл1н1чн1 форми патолог1! щи-топод1бно! залози материнського орган1зму можуть мати несприятлив1 насл1дки для плода та новонаро-джено! дитини, серед яких висока смертнють, вро-джен1 вади розвитку, вроджений г1потироз, ендем1ч-ний невролопчний кретин1зм тощо [3,10,11].
Серед л1тературних джерел е значна ктькють пов1домлень про зм1ни морфо-функц1ональних характеристик структурних компонент1в слизово! обо-лонки шлунка з використанням 1мунопстох1мп, елек-тронно! I св1тлово! м1кроскопп, проте в1дсутн1 дан1 про вплив ппотирозу на процеси формування та диференц1аци слизово! оболонки шлунку потомства на тгм г1пофункц1! щитопод1бно! залози материнського оргаызму з використанням лектиново! г1стох1м1! [3,4,8,14,18]. Разом 1з тим, численн1 публ1кац1! свщ-
чать про важливу роль вуглевод1в та вуглеводовмю-них б1опол1мер1в, що е рецепторами лектиыв, у пс-тоф1зюлоп! як нормальних структур орган1зму, так I залучення гл1копол1мер1в до механ1зм1в розвитку р1з-номан1тних форм патологи [1,2,8,12,13,15,16,17,19].
Метою роботи було вивчення морфолопчних зм1н слизово! оболонки шлунку потомства на 1-й та 10-й дн1 постнатального розвитку за умов ппотирозу материнського оргаызму у поеднанн з досл1-дженням пстотопографп та перерозпод1лу рецепто-р1в лектиыв в структурних компонентах зазначеного органа.
Об'ект I методи досл1дження. Досл1д проводили на 25 самках лши Вютар, як1 були розд1лен1 на дв1 групи: перша - контрольна (10), друга - дослщна (15), масою 180-200 г, вщ яких отримали потомство у к1лькост1 40 та 35 вщповщно. Тварини утримува-лись у стандартних умовах в1вар1ю з дотриманням сан1тарно-г1г1ен1чних норм та рацюну харчування. Експериментальний г1потироз викликали додаван-ням у корм мерказолту з розрахунку 5 мг на 1 кг маси тта тварин. Мерказол1л (Харк1в, «Здоров'я») додавали у корм щоденно протягом двох тижн1в до покриття та вс1е! ваптност1. П1сля другого тижня експерименту самок в стади еструсу п1дсаджували до самц1в. З моменту датовано! ваптност1 забирали шлунки у потомства дослщних та контрольних самок на 1-й та 10-й дн1 постнатального розвитку.
Досл1дження на лабораторних тваринах прово-дилися при дотриманн1 принцип1в бюетики у в1дпо-в1дност1 з положенням Свропейсько! конвенц1! щодо захисту хребетних тварин, яких використовують в
