CC BY
16
56
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
MMLV PT kit («Евроген») по методике производителя. Уровень экспрессии генов sod2, cat и txn определяли методом ПЦР в реальном времени с помощью qPCRmix-HS SYBR («Евроген») согласно методике производителя. Для инги-бирования функциир53 использовали -пифитрин.
Результаты. Установлено, что исследуемые соединения вызывают накопление белка р53 в ядрах клеток часов, при этом также повышается экспрессия гена р21 — прямой мишени белка р53. Это говорит о р53-зависимом механизме действия исследуемых комплексов. Установлено, что исследуемые соединения увеличивают экспрессию генов АОС sod2, cat, а также гена txn. Наиболее выраженный эффект наблюдается при действии комплекса ВС-131. Установлено, что а-пифитрин подавляет транслокацию белка р53 из цитоплазмы в ядро и тем самым может инги-бировать р53-зависимую транскрипцию генов. Использование а-пифитрина заметно снижало накопление белка р53 в ядрах клеток, а также подавляло экспрессию гена р21 до уровня контроля. Аналогичное снижение уровня экспрессии до контрольного уровня при использовании а-пифитрина наблюдали для изученных генов АОС.
Заключение. Установлено, что цисплатин и комплекс ВС-131, вызывая накопление белка р53 в ядрах, повышают экспрессию генов АОС, при этом а-пифитрин снижает как эффективность транслокации белка р53 в ядро, так и экспрессию генов p21, sod2, cat и txn. Полученные результаты говорят об участии опухолевого супрессора р53 в регуляции АОС на уровне экспрессии генов.
В.В. Мусияк, М.Г. Первова, Т.В. Матвеева, Г.Л. Левит, В.П. Краснов
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПРОДУКТОВ РАЗЛОЖЕНИЯ АЛКИЛНИТРОЗОМОЧЕВИН РАЗЛИЧНОГО СТРОЕНИЯ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург, Россия
Введение. Противоопухолевое действие алкилнитро-зомочевин (АНМ) обусловлено их способностью к гидролитическому разложению в условиях организма с образованием активных алкилирующих и карбамоилирующих частиц, вступающих во взаимодействие с фрагментами ДНК опухолевой клетки. В связи с этим важной задачей представляется установление механизма разложения АНМ, в частности применяющихся в клинической практике препаратов кармустин и лизомустин, а также нового препарата ормустин.
Цель исследования — идентификация летучих продуктов гидролитического разложения противоопухолевых препаратов кармустин, лизомустин, лрмустин, протекающего в условиях, близких к физиологическим.
Материалы и методы. Гидролитическое разложение активных фармацевтических субстанций противоопухолевых препаратов кармустин (1,3-бис (2-хлорэтил) — 1-ни-трозомочевина), лизомустин (смесь №-нитрозо-№-[(2-хлорэтил) — карбамоил] -L-лизина и Ne- [(2-хлорэ-тил) — N-нитрозокарбамоил] -L-лизина) и ормустин (смесь Nd-нитрозо-Nd- [(2-хлорэтил) карбамоил] -L-ор-нитина и Nd- [(2-хлорэтил) — N-нитрозокарбамоил] -L-
орнитина), а также индивидуальных изомеров положения нитрозогруппы, входящих в состав препаратов лизомустин и ормустин: №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) карбамоил] лизина и №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) — карбамоил] орнитина проводили в условиях, близких к физиологическим (температура 37 °С, трис-буфер, рН 7,1). Методом газожидкостной хроматографии проведен парофазный анализ состава реакционной смеси, а также исследован состав полученного на ее основе эфирного экстракта.
Результаты. Показано, что при разложении кармусти-на происходит образование винилхлорида, ацетальдегида,
1.2-дихлорэтана, 2-хлорэтанола, 2-хлорэтилизоцианата,
1.3-бис- (2-хлорэтил) мочевины, что согласуется с литературными данными. При разложении лизомустина и ормус-тина установлено образование винилхлорида, ацетальде-гида, 1,2-дихлорэтана, 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины. Также при разложении ормустина помимо указанных продуктов зафиксировано образование пропена. Следует отметить, что при разложении индивидуального №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) карбамоил] ^-лизина наблюдали образование только 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины и винилхлорида, а при разложении №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-орнитина — 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины и пропена.
Заключение. Согласно полученным данным, разложение лизомустина и ормустина происходит, так же как и кар-мустина, через образование промежуточных алкилдиазо-гидроксидов и алкилизоцианатов. Образование пропена при разложении ормустина и №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-орнитина, по видимому, связано с протекающим в условиях реакции превращением 5- (2-амино-1-карбоксипентил) карбокатиона. Образование винилхлорида при разложении №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-лизина, вероятно, указывает на протекание в реакционной смеси процесса перенитрозирования.
Р.Д. Мустафаев, Г.В. Тихов, Р. Ч. Муршудли МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ БРЮШИНЫ ПРИ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ САНАЦИИ
ФГБУ«Государственный научный центр лазерной медицины ФМБА России», Москва, Россия
Введение. Одним из наиболее важных и ответственных этапов при оперативных вмешательствах, выполняемых в условиях перитонита, является адекватная санация брюшной полости. Развитие фотодинамической терапии (ФДТ) и успешное внедрение данной методики в клиническую практику позволяют осуществить попытку изучения возможности применения ФДТ для лечения распространенного перитонита.
Цель исследования — изучить и описать динамику морфологических изменений в брюшине у лабораторных животных с острым перитонитом после проведения сеансов ФДТ
Материалы и методы. В работе использованы 96 крыс-самцов линии Вистар массой тела 200—250 г. Для создания модели калового перитонита воспользовались модифицированной методикой В.А. Лазаренко и соавт., основанной на использовании профильтрованной 10 % каловой взвеси в дозе 0,5 мл на 100 г. На 3-и сутки животных во всех груп-
Спецвыпуск / том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 57
пах в условиях общей внутривенной анестезии подвергали В.М. Насек1, О.С. Вшивкова2, И. В Ребеко3, И.П. Локоть4, оперативному вмешательству — лапаротомии и санации С. Шведмарк4, Р.Д. Зильберман1 брюшной полости. Для оценки эффективности лечения ПОГЛОЩЕНИЕ МАКРОФАГАМИ ПЕЧЕНИ КРОЛИКА острого разлитого перитонита животные были поделены НОВОГО ДОКСОРУБИЦИНСОДЕРЖАЩЕГО на 2 группы. В основной группе санацию брюшной поло- СОЕДИНЕНИЯ SA-033 сти после лапаротомии проводили методом ФДТ, в контр- 1ИБОХНАНБеларуси, Минск, Республика Беларусь ольной — 2 % раствором хлоргексидина. В опытной груп- 2ГУ«Центр детской онкологии, гематологии и иммуноло-пе животным внутривенно вводили фотосенсибилизатор гии», Минск, Республика Беларусь «Фотодитазин» в дозе 0,8 мг/кг за 120—150 мин до лапаро- 3ГУ «РНПЦонкологии и медицинской радиологии им. томии. В качестве источника света для проведения сеанса Н.Н. Александрова», Минск, Республика Беларусь ФДТ использовали лазер «АТКУС-2» с выходной мощно- 4Double Bond Pharmaceutical AB, Virdings Alle 32B, 75450, стью от 1 до 2 Вт, длиной волны 670 нм в непрерывном Uppsala, Sweden режиме. Плотность энергии — 20—25 Дж/мс2, при мощно- Введение. Доксорубицин (DOX) является одним из насти 2 Вт/см2 и экспозиции 10—12 с. В контрольной группе иболее широко используемых цитостатических агентов санацию брюшины осуществляли 2 % раствором хлоргек- при лечении различных форм рака. Терапевтическая эф-сидина до «чистых» вод. Морфологические исследования фективность DOX зависит от дозы и ограничена его высо-брюшины проводили на 1, 3, 5, 7-е сутки после начала кой токсичностью. Основная задача при разработке новых лечения. доксорубицинсодержащих соединений для лечения гепа-Результаты. При гистологическом исследовании тоцеллюлярного рака (ГЦР) состоит в снижении побочных до санации брюшной полости мы обнаруживали картину и сохранении противоопухолевых эффектов. фибринозно-гнойного перитонита. Через сутки в основной Цель исследования — оценить эффективность погло-группе гистологическая картина брюшины характеризовалась щения макрофагами печени доксорубицинсодержащего значительным уменьшением интенсивности экссудативного соединения SA-033 (разработан Double Bond Pharmaceutical воспаления, активацией клеточных элементов системы AB, Швеция) и описать характер его распределения в тка-мононуклеарных фагоцитов (макрофагов) с сохранением нях печени кролика относительно эталонной фармацевти-венозного полнокровия. Через 3 сут — интенсивность ческой субстанции DOX. дисциркуляторных изменений в виде венозного полнокровия Материалы и методы. Кроликам-самцам соединение SA-и отека стромы значительно снижается, нейтрофильная 033 и эталонный раствор DOX вводили внутривенно в экви-инфильтрация отсутствует, сохраняется активность валентных дозах 5 мг/кг. Через 15 мин и 4 ч после инъекции клеточных элементов макрофагального ряда, отмечается животных подвергали мгновенной эвтаназии, извлекали увеличение количества тучных клеток. Спустя 5 сут после сердце, печень и селезенку, готовили нативные срезы толщи-операции в строме выявляется очаговая метахромазия ной 10 мкм, в которых оценивали накопление SA-033 и DOX межуточного вещества, свидетельствующая об активном по аутофлуоресценции при длине волны возбуждения 488 нм синтезе гликозаминогликанов. Вид и морфологическая кар- (максимум эмиссии при длине волны 560—590 нм). тина брюшины на 7-е сутки не отличалась от вида брюшины Результаты. Различий в накоплении 2 соединений здоровых животных. В контрольной группе через 3 сут — вы- в тканях сердца и селезенки не обнаружено. Однако ма-раженная диффузная нейтрофильная инфильтрация, веноз- крофаги печени (клетки Купфера) поглощали SA-033 более ное полнокровие и отек стромы. На 5-е сутки — значительное активно по сравнению с фармакопейным DOX. Наиболее уменьшение фибринозного компонента воспаления интенсивная аутофлуоресценция наблюдалась через 4 ч с сохранением отека и венозного полнокровия стромы экспозиции. При системном введении SA-033 форма и раз-брюшины, уменьшением интенсивности нейтрофильной мер макрофагов печени изменялись с увеличением экспо-инфильтрации. К 7-м суткам сохраняется тенденция к умень- зиции, однако их количество и интенсивность флуорес-шению интенсивности нейтрофильной инфильтрации, отека ценции оставались неизменными в промежутке от 15 мин и полнокровия стромы. до 4 ч. Пик поглощения клетками Купфера обоих соедине-Заключение. Анализ результатов морфологических ис- ний наблюдался спустя 15 мин экспозиции и далее выхо-следований экспериментальных животных с острым пери- дил на плато. Только введение SA-033 через 4 ч экспозиции тонитом убедительно свидетельствует о высокой эффек- вызывало изменение морфологии макрофагов: инициация тивности проведения ФДТ для санации брюшной полости протрузии филоподий и ламеллоподий, вариабельность в сравнении с использованием 2 % антисептического рас- формы и склонность к агрегации. твора хлоргексидина, что является важным вкладом в со- Заключение. Соединение SA-033 по сравнению с фар-вершенствование методов лечения острого перитонита. макопейным DOX при внутривенном введении кроликам более интенсивно поглощается макрофагами печени. Таким образом, применение SA-033 при ГЦР потенциально может обеспечить высокий противоопухолевый эффект при сниженной дозировке, ограничивая тем самым системные побочные эффекты, включая доксорубицининду-цированное повреждение сердца.
Спецвыпуск/ том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
