CC BY
35
УДК: 616.36-008-091 : 599.323.4.
Холодкова О. J1., Перепелюк М. М., Горчаг Д. М., Роман О. I.
МОРФО-ФУНКЦЮНАЛЬНИЙ СТАН ПЕЧ1НКИ ЩУР1В В ДИНАМ1Ц1 МОДЕЛЮВАННЯ ТОКСИЧНОГО ГЕПАТИТУ
Одеський нацюнальний медичний ушверситет МОЗ Укра'Гни
(м. Одеса)
Робота виконана в рамках НДР кафедри анато-ми людини Одеського нацюнального медичного унг верситету МОЗ Укра'ши «Розробити та обфунтувати способи корекци ф1брозних змш печшки при хронмч-ному гепатит! та цироз1 печшки» (№ державно! рее-страцм 01161Ю08927).
Вступ. Хроычний токсичний гепатит (ТГ) проявляется ф1брозним перетворенням тканини печшки - патолопчним станом, що характеризуется виникненням надпишково! ктькост1 колагену вна-слщок формування нових ф1брил, при чому клш1ч-на симптоматика досить обмежена, а порушення функци гепатоцттв - мш1мальне [5]. Ф1броз може стати причиною портально! ппертензи, супроводжу-ватись некрозами, виникненням «хибних» часточок [10]. Причини виникнення ТГ р1зноман1тн1, переб1г
- тривалий, прогноз за вщсутност1 л1кування - пе-симютичний [6,9]. Незважаючи на певы етюлопчн1 та кл¡н1чн1 вщмшност1, в бшыиосгп хроычних ф1броз-них розлад1в е постмний подразник, який пщтримуе продукц1ю фактор1в росту, протеол1тичних фермен-т1в, фактор1в анпогенезу та ф1брогенних циток1н1в, що разом стимулюють вщкпадення елемент1в спо-лучно! тканини з наступною перебудовою йзнищен-ням нормально! архггектонки органу [6,8].
Переривання послщовност1 патогенетичних подм може призвести до часткового або навггь по-вного зцтення [7]. З'ясування особливостей мор-фо-функцюнального стану печ1нки на етапах роз-витку ТГ сприятиме вдосконаленню д1агностики та л1кування ц1е! соц1ально значущо! патолог11.
Мета досл1дження: з'ясувати морфо-функцю-нальний стан печ1нки щур1в в динамМ формування ТГ.
Об'ект I методи досл1дження. Досл1дження проведене на 40 статевозртих самцях щур1в Вютар, вагою 220-240 г, що знаходилися у стандартних умовах бюлопчно! клшки (в1вар1ю). Моделюван-ня ТГ здмснювали шляхом внутр1шньошлункового введения розчину СС14, концентрац1ею 50%, протя-гом 8 тижыв. Тварин розподтили на 2 групи: I група
- тварини з модельованим токсичним гепатитом; II група - ¡нтактний контроль. Початком експеримен-ту вважали перший день пюля припинення ведения чотирихпористого вуглецю. Проводили патомор-фолопчне досл1дження печшки з забарвленням за стандартними методиками [1]; загальний анал1з кровг юлькють еритроцит1в, тромбоцит1в, лейкоци-т1в, л1мфоцит1в вираховували за допомогою автоматичного л1чильника, визначення вмюту гемоглобшу проводили за допомогою фотоелектроколориме-
тра уыфкованим гемоглобшо-ц1анщним методом за допомогою набор1в реактив1в «Лахема», Чех1я [2]; визначення активност1 АлАТ та АсАТ проводили фотометричним методом за допомогою стандар-тизованого набору реактив1в (Human GMbH); вмют загального бтка визначали б1уретовим методом (Human GMbH); вмют загального 6Lnipy6iHy виявля-ли колориметричним методом «Лабсистемс» з до-даванням додецил-сульфату натрю для полтшен-ня розчинност1 загального 6mipy6iHy; вим1рювання вмюту циток1н1в здмснювали шляхом ¡мунофер-ментного анал1зу (1ФА) з застосуванням стандартних набор1в для ктькюного виявлення ¡нтерлей-кшу-2 (Ш-2), ¡нтерлейк1ну-4 (Ш-4), ¡нтерлейк1ну-6 (IЛ-6) та ¡нтерлейкшу-10 (1Л-10) ELISA (виробник Bender MedSystems). Виведення тварин з експери-менту вщбувалося на 14-у, 28-у та 56-у добу пюля заюнчення моделювання ХГ.
Пщготування тварин до експерименту, Bei ¡нва-зивн1 втручання, знеболювання та виведення з експерименту проводили згщно Закону Укра'ши «Про захист тварин вщ жорсткого поводження» N° 27, ст. 230 вщ 2006 р., ¡з змшами, внесеними вщповщ-но Закону № 1759-VI (1759-17) вщ 15.12.2009, ВВР, 2010, № 9, ст. 76.
Результати дослщження та Тх обговорення. На початку формування патологи спостер1гаеться лейкоцитоз, л1мфо- та еритроцитопеыя (табл. 1), суттеве пщвищення активност1 фермент1в цитол1зу та вмюту загального 6Lnipy6iHy, зниження вмюту загального бтку (табл. 2). Вщм1чаеться значне зрос-тання вмюту прозапальних цитоюыв Ш-2 та IЛ-6 (84 та 67%, р<0,05), та протизапального 1Л-4 (51%, р<0,05) вщносно контролю, тод1 як вмют 1Л-10 до-стов1рно не вщр1зняеться вщ показника контролю. В тканин1 печшки виявляються дтянки некрозу, мо-нолобулярн1 вузлики. Морфометричне досл1джен-ня показало, що вщносна площа гепатоцит1в була майже в 12 раз1в бтьшою, н1ж площа сполучно! тканини.
Враховуючи те, що Ш-4 продукуються Т2-хелперами, а синтез 1Л-10 опосередковуеться як активованими Т-хелперами, так i моноцитами й макрофагами [3,4], можна припустити, що розви-ток токсичного СС14-шдукованого гепатиту супро-воджуеться порушенням балансу прозапальних/ протизапальних цитоюыв з ¡нг1буванням симетрич-но-гомеокшетично! вщповщ1, тобто зростання Ш-4 та Ш-10, переважно на piBHi моноцитарно- макрофа-гально! ланки, можпиво, безпосередньо на кгмтини 1то.
Через 4 тижы пюля припинення токсичного впливу збер1гаються явища лейкоцитозу, л1мфо- та еритроцитопени (табл. 1). Актив-нють фермент^ цитагнзу також залишаеться суттево пщвищеною, при чому активнють АлАТ незначно зростае, тод1 як АсАТ - дещо змен-шуеться; вмют загального бтфубЫу та загаль-ного бтку залишаеться на р!вн1 попереднього термну (табл. 2). Вмют 1Л-2 та 1/1-6 суттево знижувався пороняно з попередым терм1ном, але для 1Л-2 цей показник залишався на 44,2% вищим за контрольн1 показники (р<0,05), 1Л-6 - майже не вщрЬнявся вщ контрольно! групи тварин; вмют 1Л-4 зростае на 74%, 1Л-10 -також зростае майже на 20% вщносно контролю (р<0,05). Виявляеться порушення балково! будови органу, набряк та повнокров'я строми, вогнищев1 некрози гепатоцит1в, виразна л1м-фопстюцитарна ¡нфтьтращя (рис. 1). Стввщ-ношення гепатоцити/сполучна тканина знижу-еться до 5,4.
Значний рют спювщношення протизапальы/прозапалы-н цито-юни вщображае, насамперед, ста-бтЬацю запально-цитол1тичного процесу у печЫков1й паренх1м1 за рахунок прол1фераци строми.
Кр1м того, розглядати цитою-нову регуляцю як лЫйний про-цес, нерацюнально. Про, - I про-тизапалы-н цитоюни е не лише антагонютами на р1вы ефектор-них кл1тин, насамперед Т-, та В-л1мфоцит1в, виконуючи мультимодальт функци. Наприклад, прозапальний 1/1-6 здатен ¡нпбувати синтез ¡нших прозапальних цитоюыв (ИЛ-1 та фактор некрозу пухпин), може пщтримувати гомеостаз глюкози [4], забезпечуе зв'язок ¡мунноТ, нервово! та ендокринноУ систем [3].
Таблиця 1.
Динамйка загальних та бюх1м1чних показниюв кров1 щурйв за умов ¡ндукованого токсичного гепатиту (М±т, р<0,05)
Показник/ № тварини Контроль 14-а доба 28-адоба 56-а доба
Лейкоцити х109/л 8,0±0,4 28,2±1,6* 32,0+1,2*» 31,0+1,1*
Л ¡мфоцити х10э/л 4,7±0,1 2,3±0,2* 2,7±0,08*» 2,5±0,7*
Еритро-цити х1012 / п 6,6+0,4 5,3+0,7* 5,2+0,7* 4,7±0,4*»
Гемоглобш г/л 117±6,9 108+8,1 102±6,2 89±4,3
Тромбо-цити хЮ9 /п 201,3±7,6 206±3,9 196,2±4,9 173±3,1*»
Приг/птка: *- рюниця е достов1рною вщносно контролю.
Таблиця 2.
Динамка бюх1м1чного складу кров1 щур1в шсля моделювання ТГ (М±т, р<0,05)
Показник/термш Контроль 14-а доба 28-а доба 56-а доба
АлАТ (Од/л) 62+1,4 107+2,7* 117,6+4,7* 105,7+5,1*
АсАТ (Од/л) 204±5,6 520±10,6* 487+12,7* 410 ±4,4*»
Загальний бЫрубш (мкмоль/л) 1,4±0,01 5,1±0,3* 5,2±0,3* 4,7±0,2*»
Загальний б1лок (г/л) 98±2,8 29,6±3,3* 28,3±2,6* 37,8±2,1*»
Примптка: * — р!зниця е достов1рною вщносно контролю.
Рис. 1. Печшка щура з модельованим ТГ на 28-у добу експерименту: виразна л1мфопстюцитарна ¡нфшьтращя, зменшення гепатоцитт з наявшстю «тшей» кл1тин, виразна жирова та бшкова дистрофт. повнокров'я судин з явищами склерозу. Забарвлення: гематоксилш-еозин, зб.: х 100.
Рис. 2. Печшка тварин на 56-у добу шсля закшчення введения чотирихлористого вуглецю - активне розростання сполучно'Гтканини, склероз судин.
Забарвлення гематоксилин-еозином.
Збшьшення х 100. Тому оцЫка балансу про, - \ протизапальних ци-тоюыв, як1 оцЫювались у нашому досл1джены, хоч I е дещо умовною з точки зору цтюного оргаызму та ¡мунно'| системи, однак здатна вщображати стадм-нють процесу гепатит —* ф1броз.
Через 8 тижыв експерименту в кров1 щур1в зберн гаються явища лейкоцитозу, л1мфо- та еритропешя, повтьно знижуеться вмют тромбоцит^ (табл. 1), тод1 як активнють ферменлв цитолюу дещо пригы-чуеться, але залишаеться значно вищою контроль-них показник1в: для АлАТ - на 72%, для АсАТ - вдвм1;
вмют загального 61л¡руб1ну знижуеться, але все ще майже втрич1 перевищуе показник контролю (табл. 2). Виявляеться зменшення об'ему гепатоцттв, центролобуляры некрози та атроф1я трабекул, гщ-рогмчна дистроф1я гепатоцтчв, пом1ж широких спо-лучнотканинних дтянок утворюються монолобуляр-ы вузлики (рис. 2). Сгмввщношення гепатоцити/ сполучна тканина становить 2,8.
Висновки. За умов моделювання ТГ в динамг ц1 експериментального ураження спостер1гаеться поступове руйнування тканини печшки, зростання об'ему сполучно! тканини. Гостре запалення печшки на початку формування патологи поступово сягае п1ку в середны термшу спостереження \ тримаеться на стабтьному р1вн1 до 8- го тижня. Вмют прозапаль-них цитоюыв коливаеться вщ значного пщвищення на початку процесу, без адекватно-стримуючого
зростання протизапальних цитоюыв, до поступо-вого зниження, хоча й не до р1вня контрольних по-казниюв. Вщсутнють балансу про/протизапальы цитокши на початковм стади патолопчного процесу, модельованого у нашому експеримент1, свщчить про вщсутнють регуляци за типом "негативного зво-ротнього зв'язку", тобто про односпрямованють патолопчного процесу без можпиво! саморегуляци та гальмування пошкоджено! паренх1ми печшки. Пюля припинення патолопчного впливу СС14 на печш-ку регуляторно-гомеокшетичы процеси оргаызму щур1в переводять запальний процес у хроычний пе-реб1гз гальмуванням ¡мунно! вщповщг
Перспективи подальших дослщжень. Доцть-ним буде продовження термшу спостереження до 5-6 мюяц1в пюля припинення впливу негативного чинника.
Лп-ература
1. Artishevskiy A.A. Gistologia s tekhnikoy gistologicheskih issledovaniy / A.A. Artishevskiy, A.S. Leontiuk, B.A. Sluka. - Minsk.: Visheyshaya shkola, 1999. - 236 s.
2. Brandis T. Unifikovaniy metod viznachennya hemoglobin / T. Brandis // Novosti mediciny I farmatsii. - 2007. - № 19. - S. 26-28.
3. Immunologiya I allergologiya (tsvetnoi atlas): uchebnoye posobiye dlya studentov medicinskih vuzov / pod red. O.O. Vorobieva, O.C. Bikova, O.V. Karaulova. - M.: Prakticheskaya medicina, 2006. - S. 52-53.
4. Tsaregorodceva T.M. Tsitokiny v gastroenterologii / T.M. Tsaregorodceva, T.I. Serova. - M.: Anaharsis, 2013. - S. 28-35.
5. Determinants of progression to cirrhosis or fibrosis in pure alcoholic fatty liver / M.R. Teli, C.P. Day, A.D. Burt, M.K. Bennett, O.F. James//Lancet. - 1995. - Oct 14; 346 (8981). - P. 987-990.
6. Friedman S.L. Mechanisms of disease: mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications / S.L. Friedman // Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. - 2004. - № 1. - P. 98-105.
7. Hepatocyte growth factor promotes remodeling of murine liver fibrosis, accelerating recruitment of bone marrow-derived cells into the liver/Y Asano, Y limuro, G. Son, T. Hirano, J. Fujimoto // Hepatol Res. -2007. - № 37. - P. 1080-1094.
8. Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodeling /J.J. Tomasek, G. Gabbiani, B. Hinz, C. Chaponnier, R.A. Brown // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2002. - № 3. - P. 349-363.
9. Rosen H.R. Chronic hepatitis С infection / H.R. Rosen // The New England Journal of medicine. - 2011. - № 364 (25). -P. 2429-2438.
10. Underwood J.C.E. General and systematic pathology / J.C.E. Underwood, S.S. Cross. - Elsevier Limited, 2009. - 857 p. УДК616.36-008-091 : 599.323.4.
МОРФО-ФУНКЦЮНАЛЬНИЙ СТАН ПЕЧШКИ ЩУР1В В ДИНАМ1Ц1 МОДЕЛЮВАННЯ ТОКСИЧНОГО ГЕПАТИТУ
Холодкова О. Л., ПерепелюкМ. М., Горчаг Д. М., РомакО. I.
Резюме. В робот1 з'ясовано, що за умов моделювання токсичного гепатиту в динамщ1 експериментального ураження спостер1гаеться поступове руйнування тканини печшки, зростання об'ему сполучно1тканини. Гостре запалення печшки на початку формування патологи поступово сягае пку в середны термшу спостереження, i тримаеться на стабтьному piBHi до 8- го тижня. Вмют прозапальних цитоюыв коливаеться вщ значного пщвищення на початку процесу, без адекватно-стримуючого зростання протизапальних цитоюыв, до поступового зниження, хоча й не до р1вня контрольних показниюв. Пюля припинення патолопчного впливу CCI4 на печшку регуляторно- гомеокшетичы процеси оргаызму тварин переводять запальний процес у хро-ычний nepe6ir3 гальмуванням ¡мунно! вщповщг
Ключов1 слова: токсичний гепатит, експеримент, морфо-функцюнальний стан печшки, цитокши.
УДК616.36-008-091 : 599.323.4.
МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ КРЫС В ДИНАМИКЕ МОДЕЛИРОВАНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА
Холодкова Е. Л., ПерепелюкН. Н., Горчаг Д. М., РомакО. И.
Резюме. В работе выявлено, что при моделировании токсического гепатита в динамике экспериментального поражения наблюдается постепенное разрушение ткани печени, рост объема соединительной ткани. Острое воспаление печени в начале формирования патологии постепенно достигает пика в середине срока наблюдения, и держится на стабильном уровне до 8-ой недели. Содержание провоспалительных цитокинов колеблется от значительного повышения в начале процесса, без адекватно-сдерживающего роста противовоспалительных цитокинов, до постепенного снижения, хотя и не до уровня контрольных показателей. После прекращения патологического воздействия СС14на печень регуляторно-
гомеокинетические процессы организма животных переводят воспалительный процесс в хроническое течение с торможением иммунного ответа.
Ключевые слова: токсический гепатит, эксперимент, морфо-функциональное состояние печени, цитокины.
UDC 616.36-008-091: 599.323.4.
MORPHO-FUNCTIONAL STATE OF THE LIVER OF RATS IN THE DYNAMICS OF TOXIC HEPATITIS MODELING
Kholodkova O. L., Perepeljuk M. M., Gorchag D. M., Romak О. I.
Abstract. Interrupting the sequence of pathogenetic events in the formation of toxic hepatitis (TH) can lead to the healing. Finding out the features of the liver at the stages of development of TH will contribute to the improvement of diagnosis and treatment of this socially significant pathology.
The purpose of the study: to find out the morpho-functional state of the liver of rats in the dynamics of formation ofTG.
Materials: the study was conducted on sexually mature male rats Wistar. TH was modeled by intragastric insertion of CCI4 solution for 8 weeks. There were 2 groups of animals: with simulated TH and intact. The beginning of the experiment was considered the 1st day after the CCI4 cancellation. Pathomorphological examination of the liver was carried out; general and biochemical blood tests, measurements of the content of IL-2, IL-4, IL-6, IL-10. The animals were removed from the experiment at the 14th, 28th and 56th day after the end of the TH modeling.
Results: On the 14th day of experiment leukocytosis, lympho- and erythrocytopenia, a significant increase in the activity of cytolytic enzymes and the content of total bilirubin, and a decrease in the total protein content were observed. Significant increase in the content of IL-2, IL-6 and IL-4 relative to control were found, while the content of IL-10 didn't differ significantly. In the liver tissue there are areas of necrosis, monolobular nodules. The ratio of hepatocytes /connective tissue was 12.
After 4 weeks, the phenomena of leukocytosis, lympho- and erythrocytopenia persist. The activity of the cytolytic enzymes also remains significantly elevated, with the slightly increased activity of AIAT, while the AsAT - decreases somewhat; the content of total bilirubin and total protein remains at the pre-term level. The content of IL-2 and IL-6 significantly decreased compared to the previous term, but for IL-2 this figure remained at 44.2% higher than the control values, IL-6 - almost didn't differ from the control group; IL-4 content increases by 74%, IL-10 -also increases by almost 20% relative to control. Violation of the hepar structure, edema and hypertrophy of the stroma, focal hepatocyte necrosis, expressive lymphohystiocytic infiltration were found. The ratio of hepatocytes / connective tissue is reduced to 5.4.
After 8 weeks, in the blood retains the phenomena of leukocytosis, lympho- and erythropenia, the activity of the cytolytic enzymes is somewhat suppressed, but remains significantly higher than the control: for AIAT - by 72%, for the AsAT - twice; the content of total bilirubin is reduced, but still almost triple higher than the control. The decrease in the volume of hepatocytes is revealed, centrolobular necrosis and trabecular atrophy, hydropic dystrophy of hepatocytes are detected, monolobular nodules are formed in the wide area of connective tissue. The ratio of hepatocytes / connective tissue is 2.8.
Conclusions. After the cessation of the pathological effects of CCI4 on the liver, the regulatory-homeokinetic processes of the rat reverse the inflammatory process into a chronic course with inhibition of the immune response.
Keywords: toxic hepatitis, experiment, morpho-functional state of the liver, cytokines.
Рецензент - проф. Пронша О. М.
Стаття надшш ла 17.08.2017 року
