CC BY
89
УДК 616.9:616.9.002.71+579.842
Т.В. Каримова 2, В.Т. Климов М.В. Чеснокова 1
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS И YERSINIA ENTEROCOLITICA, ВЫДЕЛЕННЫХ В СИБИРИ
И НА ДАЛЬНЕМ ВОСТОКЕ
1ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
Роспотребнадзора, Иркутск, Россия 2 ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области», Новосибирск, Россия
Доминирующий в регионе генотип Y. pseudotuberculosis представлен 0:1b серотипом первой геногруппы (pYV+, ympA+, HPI), содержит плазмиды 47:82 MDa или только 47 MDa, отличается спектром риботипов и фингерпринтов. Y. enterocolitica 2-4 биотипов характеризуется наличием плазмиды pYV, генов ail, ystA, установлен уникальный только для России фаготип Xz (3/0:3). Подтверждена роль в качестве этиологического агента Y. enterocolitica 1A биотипа, содержащего ген термостабильного токсина ystB.
Ключевые слова: Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, факторы патогенности, генотипирова-ние штаммов
BIOMOLECULAR CHARACTERISTICS OF YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS AND YERSINIA ENTEROCOLITICA ISOLATED IN SIBERIA AND IN THE FAR EAST
T.V. Karimova 1 2, V.T. Klimov 1, M.V. Chesnokova 1
11rkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Rospotrebnadzor, Irkutsk, Russia 2 Center of Hygiene and Epidemiology in Novosibirsk Region, Novosibirsk, Russia
A special feature of Y. pseudotuberculosis strains is its biochemical uniformity irrespective of the time and location of the causative agent isolation and the existence of 21 serological variants. Y. enterocolitica is a quite a heterogeneous species and is classified into 6 biochemical types associated with 29 serological variants. 221 Y. pseudotuberculosis and 447 Y. enterocolitica strains in total isolated in Siberia and in the Far East were characterized. Y. pseudotuberculosis genotype dominating in the Siberian and Far Eastern regions is presented by 0:1b serotype of the first genogroup (pYV+, ympA+, HPI-) in two- (47:82 МDa) or single-plasmid (47 МDа) variants. Ribotyping and fingerprinting revealed 8 and 10 Y. pseudotuberculosis genotypes, respectively, that indicated relative heterogeneity of the circulated strains. Regional difference of ribotypes and fingerprints was noted. 401 of447 Y. enterocolitica strains were classified as biotype A1 including 11 serotypes (0:4,32; O:4,44; 0:5; 0:6,30; 0:6,31; O;7,8; 0:12,25; 0:13,7; 0:19,8; 0:41,43) and 46 strains belonged to biotypes 2-4 of 0:3 and 0:9 serotypes. Y. enterocolitica strains of biotypes 1A were isolated both from the environments, animals and patient samples as like the representatives of biotypes 2-4. The differentiating tests of fucose and sorbose made it possible to identify two species new for the Russian Federation - Y. mollaretii and Y. bercovierii. Y. enterocolitica biotypes 2-4 carried pYVplasmid and chromosomal ail, ystA virulence genes. These strains were referred to phagotypesХ3 (2/0:9) and VIII (4/0:3) and also to phagotype Xz (3/0:3), unique for Russia. Y. enterocolitica biotype 1A containing ystB thermostable toxin gene was confirmed tooe an infectious etiological agent.
Key words: Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, pathogenicity factor, strains genotyping
Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica относятся к числу основных энтеропатогенных бактерий, вызывающих пищевые инфекции в развитых странах, том числе и в Российской Федерации. В Сибири и на Дальнем Востоке псевдотуберкулез регистрируется наиболее часто, составляя в настоящее время 75 % от федерального уровня с тенденцией к снижению. Основным проявлением этой инфекционной болезни является эпидемическая заболеваемость с разнообразием клинических форм псевдотуберкулеза, а ведущим фактором передачи - овощная продукция. В отличие от псевдотуберкулеза, при кишечном иерсиниозе превалирует спорадическая заболеваемость, уровень которой в последние годы увеличивается и связан с потреблением продуктов животного происхождения. Такие клинико-эпидеми-ологические особенности иерсиниозов могут быть обусловлены биологическими свойствами штаммов [2]. Для повышения эффективности эпидемиологического надзора важная роль отводится выявлению
характерных для возбудителя маркерных признаков, отражающих его патогенные свойства.
Особенностями штаммов Y. pseudotuberculosis являются их биохимическое однообразие вне зависимости от времени и места выделения возбудителя и наличие 21 серологического варианта [10]. Y. enterocolitica - весьма гетерогенный вид, который классифицируется на шесть биохимических типов, связанных с 29 серологическими вариантами [14]. Y. pseudotuberculosis обладает следующими хромосомными генами: inv - ген инвазивности, детерминирующий белок м.м. 108 КБа, который связывается с рецептором на поверхности эукариотической клетки и способствует проникновению возбудителя внутрь клетки [13];ypm - ген токсина суперантигена м.м. 14,6 ^а, известный в трех вариантах (A, B и C), каждый из которого активирует специфический клон T-лимфоцитов [4]. Важной детерминантой патогенности также является кластер генов, составляющих остров высокой патогенности (high
pathogenicity island), детектированный по девяти генам - irp 1, irp 2,ybt P-ybt Q,ybtX-ybtS,ybtE, psn, int, IS 100, asntRNA [10]. Y. enterocoliticaхарактеризуется следующими генами: ail - специфичные только для патогенных штаммов и определяющие функцию адгезии-инвазии в кишечнике макроорганизмов; yst A - детерминирующий термостабильный токсин; yst B - также термостабильный токсин, но характерный только для Y. enterocolitica 1A биотипа [8, 9]. Дополнительно для изучения популяционной структуры возбудителей и внутривидового типиро-вания практическое значение приобретают методы молекулярно-генетического типирования: плазмид-ный спектр, О-серогенотипирование [3], фаготипи-рование, риботипирование [11], IS-фингерпринтинг [12], MLVA [1] и др. Полученная информация о фенотипических и молекулярно-генетических свойствах штаммов энтеропатогенных иерсиний, циркулирующих на определенных территориях, может служить основой динамического микробиологического мониторинга популяций Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика фенотипических и генотипи-ческих (хромосомных и плазмидных) маркеров Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Всего были изучены 221 штамм Y. pseudotuberculosis и 447 штаммов Y. enterocolitica. Все манипуляции с ДНК Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica для определения генов суперантигена YPM, ail, ystA, ystB, островов патогенности HPI и YAPI, инвазивности, плазмиды вирулентности pYV (выделение, структура праймеров, программы амплификации, состав реакционной смеси) были аналогичны, использованным в работе H. Fukushima [5] и W.J.B. Wannet et al. и A. Ibrahim et al. [6, 13].
Все штаммы изучали на наличие плазмид: pVM 82MDa и pYV 47MDa у Y. pseudotuberculosis, pYV 47MDa в Y. enterocolitica, - по методу T. Kiesser [7]. У 154 штаммов Y. pseudotuberculosis был определен риботип (Eco R^ Eco RV) и фингерпринт (IS 285и IS 1541) в лаборатории зоонозных и бактериальных инфекций НИИЭМ им. Пастера (заведующая лабораторией - профессор Г.Я. Ценева). У 47 штаммов Y. en-terocolitica проведено фаготипирование по методу Грация в лаборатории иерсиниозов (руководитель лаборатории - профессор Элизабет Карниэль) института им. Л. Пастера (г. Париж, Франция). Серо-типирование Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica осуществляли на стекле типовыми антисыворотками производства НИИ вакцин и сывороток (г. Санкт-Петербург), для Y. pseudotuberculosis было проведено серогенотипирование [3].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Фенотипически Y. pseudotuberculosis не имели каких-либо отличий по биохимическим свойствам и характеризовались однотипными свойствами:
ферментировали мальтозу, маннит, рамнозу, мочевину, ксилозу, трегалозу, не ферментировали сахарозу, сорбит, салицин, раффинозу, не образовывали индол.
Изучение плазмидного профиля и геноспецифи-ческих ПЦР-тестов показало значительное разнообразие. Штаммы Y. pseudotuberculosis характеризовались шестью плазмидными вариантами с MDа: 82:47 (62,1 %); 47 (31,1 %); 82:47:17 (5,3 %); 110:82:47:17 (о,5 %); 82:47:17:2,7 (0,5 %) и 82:47:2,7 (0,5 %). Плазмидный профиль Y. pseudotuberculosis на Дальнем Востоке был представлен тремя вариантами: 82:47 MDа (50,0 %), 47 MDа (36,4 %) и 82:47:3,5:2,7 MDа (13,6 %).
Ген инвазивности inv, локализованный на хромосоме, в ПЦР обнаруживался во всех исследуемых штаммах Y. pseudotuberculosis. В 96,2 % случаев обнаруживался ген суперантигена ypmA при отсутствии генов ypm B/С. Известно, что штаммы Y. pseudotuberculosis, продуцирующие суперантиген, вызывают тяжелые системные клинические проявления у больных - сыпь, артралгии, нефрит, коронарный васкулит [10]. Однако наши исследования показали, что в Иркутской области все штаммы Y. pseudotuberculosis, выделенные от больных, имели суперантиген ypmA вне зависимости от степени тяжести течения псевдотуберкулеза. Не обнаружен ген ypm в одном штамме Y. pseudotuberculosis, выделенном от крысы в Иркутской области и пяти штаммах из Дальнего Востока.
Наличие полного «острова высокой патогенности», содержавшего гены irp2, irp1, psn, ybtE, ybtP-ybtQ, ybtX-ybtS, int, asnt-int и IS100, обнаружено только в 8 штаммах (3,90 %) Y. pseudotuberculosis, в том числе в 2 штаммах, выделенных от больных, и в 1 штамме, выделенном от грызунов в Восточной Сибири в период вспышек, а на Дальнем Востоке - в 5 штаммах, выделенных от грызунов в период проведения планового мониторинга.
Все штаммы Y. pseudotuberculosis по наличию плазмиды вирулентности, суперантигена и «острова высокой патогенности» разделены нами на четыре геногруппы (табл. 1). Доминирующей (98,4 %) в Сибири и на Дальнем Востоке является первая генетическая группа (pYV+, ypmA+, HPI-), в которую включено превалирующее число Y. pseudotuberculosis, изолированных от больных (98,8 %), все штаммы, изолированные из смывов, и 73,1 % штаммов, выделенных от мелких млекопитающих. Промежуточное положение занимает вторая геногруппа (pYV+, ypmA-, HPI+), к которой отнесены единичные штаммы от больных (0,6 %) и 23,0 % штаммов, выделенных от грызунов на Дальнем Востоке. Редко встречающиеся штаммы отнесены к третьей (pYV+, ypma+, HPI+) и четвертой (pYV+, ypmA-, HPI-) геногруппам, включающим единичные штаммы Y. pseudotuberculosis от больных и грызунов.
Проведенное О-серогенотипирование показало, что в сибирском регионе циркулируют 4 О-генотипа Y. pseudotuberculosis: О:1а (2,0 %), 0:1b (89,2 %), 0:3 (7,8 %) и О:4а (1,0 %); на Дальнем Востоке выявлено 6 генотипических вариантов микроба: О:1а (17,4 %),
Таблица 1
Геногруппы Y. pseudotuberculosis, изолированные из различных источников, на территории Сибири
и Дальнего Востока
Источник и регион выделения Число штаммов Геногруппы
I II III IV
pYV+, ypmA+, HPI-, абс. (%) pYV+, ypmA-, HPI+, абс. (%) pYV+, ypmA+, HPI+, абс. (%) pYV+, ypmA-, HPI-, абс. (%)
Сибирь 190 187 (98,4 ± 0,9) 2 (1,1 ± 0,2) 1 (0,5 ± 0,5) 0
Дальний Восток 22 16 (72,7 ± 9,5) 5 (22,7 ± 8,9) 0 1 (4,5 ± 4,4)
Итого 212 203 (95,8 ± 1,4) 7 (3,3 ± 1,2) 1 (0,5 ± 0,5) 1 (0,5 ± 0,5)
0:1b (56,5 %), О:1с (4,4 %), О:3 (8,7 %), О:4а (4,4 %) и 0:4b (8,7 %).
Впервые в России от больного человека в Иркутской области выделен Y. pseudotuberculosis 0:1а. При изучении факторов патогенности обнаружен кластер генов HPI, ответственный за ассимиляцию железа, хромосомные и плазмидные гены inv и yers соответственно. Вместе с тем отсутствовали гены суперантигена А, В и С и остров патогенности YAPI, формирующий пили IV типа, детерминирующие адгезивные свойства микроба.
Методом риботипирования обнаружено 8 ри-ботипов Y. pseudotuberculosis (3, 9, 12, 27, 29, 30, 31 и 32), что свидетельствовало об относительной гетерогенносити циркулирующих штаммов. К 27-му риботипу относились большинство изученных штаммов (71,2 % для Сибири и 22,2 % для Дальнего Востока). В то же время обнаружены риботипы, характерные для каждого региона: 30 - для Сибири; 3,
29 и 31 - для Дальнего Востока. Штаммы риботипов
30 и 29, а также убиквитарные риботипы 27 и 32 разнообразны по происхождению - это штаммы, выделенные от больных во время вспышек и при спорадических случаях от грызунов, растительных продуктов, объектов окружающей среды. В то же время штаммы риботипов 3, 9, 12, 31 были изолированы только от грызунов и не были связаны с заболеваниями человека. При типировании штаммов Y. pseudotuberculosis методом IS-фингерпринтинга определено 10 фингерпринтов: 71, 80, 81 ,82, 83, 84, 85, 86, 87 и 88. Большинство циркулирующих штаммов на Дальнем Востоке относится к 87 (44,4 %) и 83 (33,3 %) фингерпринту, в Сибири - к 88 (65,1 %) и 87 (29,5 %) фингерпринту. Остальные фингерпринты четко взаимосвязаны с регионами, а именно в Сибири
встречаются только 80, 81, 82, 85 и 86; на Дальнем Востоке - 71 и 84.
Из 447 штаммов Y. enterocolitica 401 классифицирован как биотип A1, который включал 11 серотипов (0:4,32; 0:4,44; 0:5; 0:6,30; 0:6,31; 0:7,8; 0:12,25; 0:13,7; 0:19,8; 0:41,43), и 46 штаммов относились ко 2-4 биотипам - серотипам 0:3 и 0:9. Штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А были изолированы не только из объектов окружающей среды, но так же, как и представители 2-4 биотипов, из материала от животных и больных людей. Использование дифференцирующих тестов фукозы и сорбозы позволило идентифицировать два новых для РФ вида - Y. mollaretii и Y. bercovierii.
У штаммов биотипа 1А, изолированных от больных, определены два фаготипа - Xz и Х0, у штаммов 2-4 биотипов определены фаготипы Х3 (2/0:9) и VIII (4/0:3), встречающиеся также в Европе, Бразилии, Японии, и фаготип Xz (3/0:3), который в других странах не обнаружен, тогда как фаготипы IXa, IXb и II, обнаруженные у штаммов, встречающихся в Канаде, Южной Африке и Японии, в России не выявлены.
На основании результатов исследования штаммов Y. enterocolitica на наличие хромосомных генов вирулентности ail,ystA, ystB и pYV установлено, что все Y. enterocolitica 2-4 биотипов имели гены ail и ystA. Большинство свежевыделенных штаммов содержали плазмиду pYV, однако в процессе хранения в некоторых случаях происходило её элиминирование. Ни один из 401 штамма Y. enterocolitica 1А не имел ail и ystA генов. Единственным геном патогенности, которым обладали 328 штаммов (82,0 %), являлся ген ystB (табл. 2).
Несмотря на то, что биотип 1A Y. enterocolitica считается непатогенным на основании отсут-
Таблица2
Генотипирование Y. enterocolitica различных биотипов
Биотип Количество штаммов Наличие хромосомных генов Плазмида pVM (47 MDa)
ystA ystB ail
1A 401 - (+)* - -
2 10 + - + +
3 19 + - + +
4 17 + - + +
Примечание. «+» - 82,0 % (328 штаммов из 401)
ствия плазмиды pYV и детерминант адгезии-инвазии, токсигенные штаммы могут вызывать патологический процесс в организме человека [8]. Нами были изучены выделенные в Новосибирской области и Республике Алтай от больных людей 14 штаммов Y. enterocolitica 1А биотипа. Все штаммы содержали генystB, при этом заболевания сопровождались выраженной клинической симптоматикой энтерита и энтероколита. Полученные результаты позволяют сделать предположение о потенциальной роли Y. enterocolitica 1А в качестве этиологического агента кишечного иерсиниоза, что должно учитываться при обследовании больных с диагнозом «острая кишечная инфекция неустановленной этиологии».
Таким образом, впервые проведено комплексное фенотипическое и молекулярно-генетическое изучение репрезентативной выборки штаммов Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, изолированных на территориях Сибири и Дальнего Востока. Установлено, что фенотипически гомогенная популяция Y. pseudotuberculosis характеризуется генетическим полиморфизмом по плазмидным и хромосомным факторам патогенности. Доминирующий в сибирском и дальневосточном регионах генотип Y. pseudotuberculosis представлен О:1Ь серотипом первой геногруппы (pYV+, ympA+, HPI), двухплазмидным (47:82 МШа) или одноплазмидным (47 МDа) вариантами и регионально отличается спектром риботипов и фингерпринтов, а именно для Сибири характерен 30 риботип и 88 фингерпринт, для Дальнего Востока - 3, 29 и 31 риботипы и 87 фингерпринт. Для патогенных Y.enterocolitica 2-4 биотипов установлено наличие плазмиды pYV и хромосомных генов вирулентности ail и ystA. Штаммы отнесены к фаготипам Х3 (2/0:9) и VIII (4/0:3), а также к уникальному только для России фаготипу Xz (3/О:3). Подтверждена роль в качестве этиологического агента Y. enterocolitica 1A биотипа, содержащего ген термостабильного токсина ystB. Типирование энтеропатогенных иерсиний по основным генным детерминантам обеспечивает унифицированный подход к системе микробиологического мониторинга псевдотуберкулеза и кишечного иер-синиоза, рекомендованного для Референс-центра по иерсиниозам и его опорных баз в федеральных округах.
ЛИТЕРАТУРА
REFERENCES
1. Евсеева В.В., Платонов М.Е., Дентовская С.В., Анисимов А.П. Типирование Yersinia pseudotuberculosis с помощью мультилокусного анализа вариабельного числа тандемных повторов // Проблемы особо опасных инфекций. - 2015. - Вып. 2. - С. 55-57.
Evseeva VV, Platonov ME, Dentovskaya SV, Anisi-mov AP (2015). Yersinia pseudotuberculosis typing by using multilocus analysis of variable number of tandem repeats. [Tipirovanie Yersinia pseudotuberculosis s po-moshch'yu mul'tilokusnogo analiza variabel'nogo chisla tandemnykh povtorov]. Problemy osobo opasnykh infektsiy, (2), 55-57.
2. Шурыгина И.А., Чеснокова М.В., Климов В.Т., Малов И.В., Марамович А.С. Псевдотуберкулез. - Новосибирск: Наука, 2003. - 320 с.
Shurygina IA, Chesnokova MV, Klimov VT, Malov IV, Maramovich AS (2003). Pseudotuberculosis [Psevdotu-berkulez], 320.
3. Bogdanovich T (2003). Use of O-antigen gene cluster-specific PCRs for the identification and O-geno-typing of Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia pestis. J. Clin. Microbiol., (41), 5103-5112.
4. Carniel E (1999). The Yersinia high-pathogenicity island. Int. Microbiol., 2 (3), 161-167.
5. Fukushima H, Matsuda Y, Seki R, Tsubokura M, Takeda N, Shubin FN, Paik IK, Zheng XB (2001). Geographical heterogeneity between Far Eastern and Western countries in prevalence of the virulence plasmid, the superantigen Yersinia pseudotuberculosis-derived mitogen, and the high-pathogenicity island among Yersinia pseudotuberculosis strains. J. Clin. Microbiol., 39 (10), 3541-3547.
6. Ibrahim A, Liesack W, Stackebrandt E (1992). Polymerase chain reaction-gene profe detection system specific for pathogenic strains of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol., 30 (8), 1942-1947.
7. Kieres T (1984). Factors affecting the isolation of CCC DNA from Streptomyces lividans and Escherichia coli. Plasmid., 12 (1), 19-36.
8. Sihvonen LM, Jalkanen K, Huovinen E, Toivonen S, Corander J, Kuusi M, Skurnik M, Siitonen A, Haukka K (2012). Clinical isolates of Yersinia enterocolitica biotype 1A represent two phylogenetic lineages with differing pathogenicity-related properties. BMC Microbiol., (12), 208-219.
9. Thoerner P, Bin Kingombe CI, Bögli-Stuber K, Bissig-Choisat B, Wassenaar TM, Frey J, Jemmi T (2003). PCR detection of virulence genes in Yesinia enterocolitica and Yesinia pseudotuberculosis and investigation of virulence gene distribution. Appl. Environ. Microbiol., 69 (3), 1810-1816.
10. Uchiyama T, Miyoshi-Akiyama T, Kato H, Fujima-ki W, Imanishi K, Yan XJ (1993). Superantigen properties of a novel mitogenic substance produced by Yersinia pseudotuberculosis isolated from patients manifesting acute and systemic symptoms. J. Immunol., 151 (8), 4407-4413.
11. Voskressenskaya E, Leclercq A, Tseneva G, Carniel E (2005). Evaluation of ribotyping as a tool for molecular typing of Yersinia pseudotuberculosis strains of worldwide origin. J. Clin. Microbiol., 43 (12), 6155-6160.
12. Voskresenskaya E, Savin C, Leclercq A, Tseneva G, Carniel E (2014). Typing and clustering of Yersinia pseudotuberculosis isolates by restriction fragment length polymorphism analysis using insertion sequences. J. Clin. Microbiol., 52 (6), 1978-1989.
13. Wannet WJ, Reessink M, Brunings H, Maas HM (2001). Detection of pathogenic Yersinia enterocolitica a rapid and sensitive duplex PCR assay. J. Clin. Microbiol., 39 (12), 4483-4486.
14. Wauters G, Kandolo K, Jansens M (1987). Revised biogrouping scheme of Yesinia enterocolitica. Contrib. Microbiol. Immunol., (9), 14-21.
Сведения об авторах Information about the authors
Каримова Татьяна Викторовна - заведующая лабораторией особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области», заочный аспирант ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора (664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78; тел.: 8 (3952) 22-01-43; e-mail: [email protected])
Karimova Tatiana Viktorovna - Head of the Laboratory of Highly Infectious Diseases of the Center of Hygiene and Epidemiology of the Novosibirsk region, Extramural Postgraduate of Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Rospotrebnadzor (664047, Irkutsk, Trilissera str., 7; tel.: +7 (3952) 22-01-43; e-mail: [email protected])
Климов Валерий Тимофеевич - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отдела эпидемиологии ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора Klimov Valery Timofeevich - Candidate of Medical Sciences, Senior Research Officer of the Department of Epidemiology of Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Rospotrebnadzor
Чеснокова Маргарита Валентиновна - профессор, доктор медицинских наук, заведующая отделом научного и учебно-методического обеспечения ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора
Chesnokova Margarita Valentinovna - Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Scientific and Curriculum & Instruction Department of Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Rospotrebnadzor
