CC BY
21
2016, Т. 6, № 3
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ОПТИМИЗИРОВАННОЙ СХЕМЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS И YERSINIA ENTEROCOLITICA ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА
М.В. Чеснокова1, В.Т. Климов1, Т.В. Каримова2
1ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Иркутск 2 ФБУЗ Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области, г. Новосибирск
Цель — апробация алгоритма лабораторного исследования на энтеропатогенные иерсинии с учетом ПЦР и масс-спектрометрии для увеличения частоты выделения иерсиний и сокращения времени анализа при проведении микробиологического мониторинга.
Оптимизированная нами схема включала: 1) хо-лодовое обогащение при +4...+6°С в течение 2 дней; 2) мультиплексную ПЦР (электрофоретический вариант) на Y. enterocolitica с праймерами на ген адгезии/инвазии (ail-16SrRNA) и на i. pseudotuberculosis с праймерами на ген инвазивности (inv) и/или использование метода real-time ПЦР с тест-системой «Y. enterocolitica/pseudotuberculosis—FL» («Ампли-Сенс») с гибридизационно-флуоресцентной детекцией; 3) посев, в случае положительной ПЦР, на среду с бромтимоловым синим (БТС) с инкубацией 48 ч при 37°С; 4) визуальный отбор характерных колоний с детекцией на MALDI-TOF MS с последующим высевом положительных колоний на щелочной агар (28°С 24 ч); 5) проведение общепринятых дифференциально-диагностические тестов и расширенной идентификации штаммов — ПЦР О-серогенотипирование Y. pseudotuberculosis; наличие генов, детерминирующих факторы патогенности энтеропатогенных иерсиний (inv, HPI, YAPI, pYV, ypm, ail, ystA, ystB); био- и серотипирование Y. enterocolitica; изучение плазмидного спектра штаммов; генотипирование (VNTR, PFGA, секвенирование). При наличии положительной ПЦР и отрицательных бактериологических высевов, проводили второй (на 2—3 сут) высев. При двукратной отрицательной ПЦР дальнейшее бактериологическое исследование прекращали.
Было исследовано бактериологическим методом 1980 экз. мелких млекопитающих, ПЦР — 2001 экз. Получено 125 (6,25%) положительных результатов на энтеропатогенные иерсинии, из них в 27 случаях обнаружена ДНК Y. pseudotuberculosis и 98 — ДНК Y. enterocolitica. Из положительных ПЦР проб изолированы 29 штаммов энтеропатогенных иерсиний, в т. ч. пять Y. pseudotuberculosis О:3 (4 штамма) и О:4а (1) и 24 штамма Y. enterocolitica, из которых девять были отнесены к патогенным О:3/3 (5 штаммов), О:3/4 (2) и О:9/2 (2) видам.
В материале от больных людей ДНК Y. pseudo-tuberculosis и Y. enterocolitica обнаружены соответственно в 35 и 6 из 173 исследованных проб. Изолированы три культуры Y. pseudotuberculosis О:1а и О:1Ь.
Y. pseudotuberculosis характеризовались наличием генов ypmA, inv, yapi и pYV, в одном случае pVM (О:1Ь) и HPI (О:1а). Патогенные Y. enterocolitica имели гены pYV, ystA и ail, Y. enterocolitica О:1А — ystB при отсутствии ail и ystA.
Материалы II Национального конгресса бактериологов
