CC BY
13
УДК 616-006.3.04:616.9-092.9:615.227.3
МОДИФИЦИРОВАННАЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ТЕРАПИЯ САРКОМЫ 45 В УСЛОВИЯХ ИНФИЦИРОВАНИЯ CHLAMYDIA TRACTOMATIS
© 2013 г. Н.К. Гуськова, Е.М. Франциянц, Е. Ф. Комарова, Е.М. Непомнящая
Гуськова Наиля Катифовна - кандидат биологических наук, руководитель клинической лаборатории, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, 14 линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, e-mail: super.gormon@yandex.ru.
Франциянц Елена Михайловна - доктор биологических наук, профессор, руководитель гормональной лаборатории, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, 14 линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, e-mail: super.gormon@yandex.ru.
Комарова Екатерина Федоровна - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник, гормональная лаборатория, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, 14 линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, e-mail: super.gormon@yandex.ru.
Непомнящая Евгения Марковна - доктор медицинских наук, профессор, руководитель патолого-анатомического отделения, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, 14 линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, e-mail: rnioi-patology@yandex. ru.
Gus'kova Nailya Katifovna - Candidate of Biological Science, Head of Clinical Laboratory, Rostov Research Oncological Institute, 14 Line, 63, Rostov-on-Don, Russia, 344037, e-mail: super.gormon@yandex. ru.
Frantsiyants Elena Mikhailovna - Doctor of Biological Science, Professor, Head of Hormonal Laboratory, Rostov Research Oncological Institute, 14 Line, 63, Rostov-on-Don, Russia, 344037, e-mail: super.gormon@yandex.ru.
Komarova Ekaterina Fjodorovna - Doctor of Biological Science, Leading Researcher, Hormonal Laboratory, Rostov Research Oncological Institute, 14-line, 63, Rostov-on-Don, Russia, 344037, e-mail: super.gormon@yandex.ru.
Nepomnyaschaya Evgeniya Markovna - Doctor of Medical Science, Professor, Head of Pathomorphological Department, Rostov Research Oncological Institute, 14 Line, 63, Rostov-on-Don, Russia, 344037, e-mail: rnioi-patology@yandex.ru.
Изучено влияние включения в схему экспериментальной противоопухолевой терапии циклофосфаном саркомы 45, сочетанной с хлами-дийной инфекцией, препарата ровамицина. Эффективность экспериментальной противоопухолевой терапии повышается, что подтверждается более выраженной регрессией саркомы 45, увеличением процента торможения роста опухоли, снижением удельной скорости ее роста и увеличением продолжительности жизни животных.
Ключевые слова: саркома 45, хламидийная инфекция, противоопухолевая терапия, ровамицин.
We studied the effect of the inclusion rovamitcine in the scheme of the experimental anticancer therapy with cyclophosphan sarcoma 45, combined with chlamydial infection. Effectiveness of an experimental cancer therapy is increased, as evidenced by a marked regression of sarcoma 45, percent increase in the inhibition of tumor growth, decrease in the specific rate ofgrowth and the increase of animal longevity.
Keywords: sarcoma 45, Chlamydial infection, antitumor treatment, rovamycine.
До настоящего времени мало изучены особенности течения злокачественного процесса, сочетанного с хламидийной инфекцией, и главное - способы противоопухолевого воздействия при такой патологии. Ранее нами было проведено изучение влияния хла-мидийной инфекции на рост и развитие злокачественных опухолей в эксперименте [1]. На основе полученных результатов было показано, что «присутствие» инфекционного агента в организме, пораженном опухолевым процессом, опосредованно потенцирует рост злокачественной опухоли. Это проявляется более ранним «выходом» опухолей, ускорением темпов роста опухолей и увеличением их параметров и, как следствие, сокращением продолжительности жизни в сравнении с животными-опухоленосителями без инфекционного компонента. То есть сочетание поражения макроорганизма опухолевым процессом и возбудителем хламидиоза значительно осложняет
течение основного заболевания, влияя на его исход. Это может осложнить результат специального лечения и сделать непредсказуемым прогноз развития заболевания.
В этой связи представляется целесообразным изучить роль сопроводительной терапии ровамицином -препаратом, используемым для лечения хламидийной инфекции, в повышении эффективности противоопухолевой терапии саркомы 45, сочетанной с хламидий-ной инфекцией.
Материалы и методы исследования
В эксперименте использовано 120 белых нелинейных крыс с исходной массой тела 170-200 г. Крысы-опухоленосители саркомы 45, инфицированные CЫamуdia trachomatis, в зависимости от схемы планируемого лечения были разделены на 2 опытные группы:
1-я - животные с введением двух культур: опухолевой и хламидийной, экспериментальная терапия которым проводилась с использованием циклофосфа-на (Цф), - 35 крыс;
2-я - животные с введением двух культур, экспериментальная терапия которым проводилась с использованием циклофосфана и ровамицина - 35 крыс.
В контрольную группу включены животные только с введением двух культур - 50 крыс.
Экспериментальное заражение лабораторных крыс культурой Chlamуdia trachomatis, штамм Е проводили интраназально и в половой аппарат. Инфицирование осуществляли очищенной хламидийной взвесью СЫатуШа trachomatis с титром - 106IFU / мл. Хлами-дии были выращены роллерным культивированием в клеточных линиях McCoy. Объем вводимой дозы инокулята определялся из расчета 1 мкл на 1 г массы тела [2]. Число включений хламидий определяли методом прямой иммунофлюоресценции.
Перевивка животным опухолевого штамма саркомы С45 выполнялась после инфицирования животных Chlamуdia trachomatis. Экспериментальную опухоль перевивали в стерильных условиях дозированно по общепринятой методике [3] путем подкожного введения 0,5 мл гомогенной взвеси опухолевых клеток в физиологическом растворе (разбавление ткани 1:1). Экспериментальная противоопухолевая терапия проводилась внутрибрюшинно циклофосфаном в дозе 40 мг/кг х3, противохламидийная терапия - ровамици-ном в дозе 9 млн МЕ х7 [4, 5].
На этапах опухолевого роста (в контрольной группе через 4, 8 и 12 сут после выхода опухолей) и динамике противоопухолевой терапии (в опытных группах через 4, 8 и 12 сут после первого воздействия) проводилось определение объемов опухолей по формуле Шрека ^п = abcn/6, где ^п - объем опухоли; a, b, c -ее высота, длина и ширина и удельной скорости роста опухолей с вычислением процента торможения опухолевого роста и коэффициентов эффективности лечения, изучение показателей выживаемости животных и массы тела.
Средняя удельная скорость роста опухоли является интегральным показателем, характеризующим ее рост на определенном интервале времени [6], и рассчитывается по формуле Б (12)
(Ш = 1п-,
Р (11)
где Б (11) - объем опухоли в начале интервала; Б (12) -объем опухоли в конце интервала; 12 - 11 - продолжительность интервала наблюдений (временной интервал).
Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета Statistica 6.0 ^Ш^ой, 2001). Оценка достоверности произведена с использованием Ь критерия Стьюдента. Уровень р<0,05 принимали как значимый.
Результаты и обсуждение
Полученные нами в предыдущих исследованиях результаты по изучению влияния хламидийной инфекции на особенности роста и развития злокачественной опухоли в эксперименте показали, что опухоли животных, инфицированных хламидиями, характеризуются большими объемами в сравнении с животными-опухоленосителями без инфекции. Применение противоопухолевой терапии циклофосфа-ном в 1-й опытной группе привело к частичной регрессии опухолей, выражающейся в уменьшении их параметров (табл. 1). На первом этапе терапии цик-лофосфаном средний объем опухоли в процентах от исходного составил 132,6 %, однако эффект от лечения был более выраженным после второго введения: объем опухоли уменьшился, составил 115,5 % от исходного и продолжал уменьшаться - после третьего, составляя 82,7 % от первоначального объема. Эффект от примененного воздействия был более очевиден при сравнении объема опухоли с динамикой изменения этого показателя у животных контрольной группы.
Таблица 1
Динамика объема опухоли в процессе экспериментальной противоопухолевой терапии
Период Контрольная группа | 1-я опытная группа | 2-я опытная группа
До воздействия см3 0,99±0,12
% 100
Через 4 сут см3 3,71±0,30м 1,61±0,131'2 1,03±0,052'3
% 378,8±8,6М 132,7±1,91-2 94,05±1,82'3
Через 8 сут см3 5,93±0,42м 1,39±0,1112 0,92±0,022'3
% 596,0±6,7М 115,5±1,451'2 83,24±1,012'3
Через 12 сут см3 8,55±0,82м 1,0±0,082 0,75±0,181'2'3
% 862,3±10м 82,68±1,22 67,4±1,721-2'3
Примечание. Достоверно по сравнению: р1 - с исходным объемом опухоли; р2 - контрольной группой; р3 - показателями 1-й опытной группы.
Было показано, что средние объемы опухоли у животных с терапией (1 -я опытная группа) были значительно меньше, чем в контрольной группе: в 2,3, 4,3 и 8,6 раза соответственно на 4-е, 8-е и 12-е сут экспери-
мента (табл. 1). Процент торможения опухоли в указанные интервалы времени в сравнении с животными контрольной группы составил 61,0, 72,0 и 84,4 % соответственно.
Результаты терапии циклофосфаном значительно улучшaлись при включении в схему противоопухолевой терапии экспериментальных животных препарата противохламидийного действия - ровамицина (2-я опытная группа). Уже с первого введения и до конца терапии отмечалась выраженная регрессия, характеризующаяся снижением объема опухолей, увеличением процента торможения роста опухолей на 75,3, 81,6 и 88,4 % соответственно на 4-е, 8-е и 12-е сут в сравнении с показателями контрольной группы.
Анализ динамики объемов опухолей у крыс опытных групп после различных видов примененной терапии продемонстрировал, что у животных, получивших помимо ЦФ ровамицин (2-я опытная группа), регрессия опухолей была более выражена: уже на 4-е сут от начала лечения объемы опухолей были в 1,6 раза меньше, чем у крыс 1-й опытной группы (лечение только ЦФ). Тенденция к более интенсивной регрессии во 2-й группе крыс сохранялась на протяжении всего эксперимента. Процент торможения роста опухоли также значимо различался в сопоставляемых группах животных на 4-е сут экспериментально-
го лечения: в 1,2 раза был выше у животных, получивших наряду с ЦФ ровамицин.
Полученные результаты находят подтверждение в значениях коэффициента эффективности примененной терапии животных при различных экспериментальных воздействиях. В группе животных, получивших терапию циклофосфаном, этот показатель составил 7,34 против коэффициента эффективности в группе крыс, получивших экспериментальную терапию циклофосфаном и ровамицином - 8,97. В соответствии со значениями изученного коэффициента наиболее эффективными можно признать результаты, когда в терапии наряду с противоопухолевым препаратом был использован и препарат, обладающий про-тивохламидийным действием.
Для более полной характеристики изменения параметров опухоли под влиянием исследуемых воздействий нами была рассчитана удельная скорость роста опухоли в отдельные интервалы времени: через 4 - ф 14), 8 - ф 12 - ф ^2) после начала
экспериментальной терапии и от начала воздействия до конца эксперимента ф (1), ^2) (табл. 2).
Таблица 2
Удельная скорость роста опухолей в динамике экспериментальной противоопухолевой терапии
Группы животных ф (tö, t4) ф (t4, t8) ф (t8, t12) ф (t0, t12)
Контрольная 0,323 0,05 0,06 0,145
1-я опытная 0,132, р!<0,001 -0,035, р1<0,001 -0,083, р1<0,001 -0,016, р1<0,001
2-я опытная -0,016, Pi,2<0,001 -0,030, p1<0,001 -0,052, p1,2<0,001 -0,033, p1,2<0,001
Примечание. Достоверно по сравнению: р1 - с контрольной группой; р2 - показателями 1-й опытной группы.
Введение циклофосфана животным с инфекцией (1-я опытная группа) на 1 -м интервале воздействия оказалось эффективным, и удельная скорость роста опухолей снизилась относительно значений в аналогичной группе крыс без экспериментальной терапии. После второго и далее - после третьего введения цито-статика удельная скорость роста опухолей начала снижаться и составила -0,035 и -0,083 соответственно.
Экспериментальная терапия инфицированных животных ровамицином и циклофосфаном (2-я опытная группа) сопровождалась наступлением более выраженной регрессии опухолей, начиная уже с 1 -го этапа воздействия и до конца терапии с последовательным плавным снижением удельной скорости роста опухолей на 2-м и 3-м интервалах. Сопоставление значений удельной скорости роста опухолей практически на всех этапах с результатами, полученными в 1 -й опытной группе, показало статистически достоверную разницу (р<0,001).
Применение циклофосфана в обеих группах сопровождалось увеличением продолжительности жизни животных: у крыс 1-й группы разница в сравнении с животными контрольной группы составила 26 %, во 2-й аналогичной группе крыс, но получившей наряду с циклофосфаном ровамицин, отмечено увеличение показателей выживаемости на 65 % относительно контрольной группы (р<0,001).
В соответствии с данными по продолжительности жизни распределились и результаты определения
массы тела животных. Минимальная потеря веса в опытных группах наблюдалась у животных с двойным антигенным воздействием при сочетанном применении ровамицина и циклофосфана (2-я опытная группа).
Таким образом, полученные данные позволяют нам сделать выводы, что включение в схему экспериментальной противоопухолевой терапии саркомы 45, сочетанной с хламидийной инфекцией, препарата противохламидийного действия ровамицина повышает ее эффективность, о чем свидетельствуют более выраженная регрессия опухоли, увеличение процента торможения роста опухоли, снижение удельной скорости роста и увеличение продолжительности жизни животных.
Литература
1. Гуськова Н.К., Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф. Рост
экспериментальной саркомы 45 в условиях инфицирования Chlamydia trachomatis // Современные проблемы науки и образования: сетевой журн. 2013. № 3. URL: www.science-education.ru/109-8997 (дата обращения: 25.06.2013).
2. Pal S., Peterson E.M., de la Maza L.M. New murine model
for the study of Chlamydia trachomatis genitourinary tract infections in males // Infection and Immunity. 2004. Vol. 72, № 7. P. 4210-4216.
3. Софьина З.П. Методические рекомендации. М., 1980.
4. Машкиллейсон А.Л. Клиническое применение ровами-
цина в лечении хламидиоза. М., 1996. 40 с.
5. Косарев В.В., Баранов С.А. Макролиды в лечении ин-
фекций бактериальной природы // Трудный пациент. 2009. Т. 7, № 11. С. 23-25.
6. Тимошенко Я.Г., Петунии ЮИ, Чехун В.Ф., Кулик Г.И. Модификация определения количественных характеристик экспериментального опухолевого процесса // Экс-перим. онкология. 1986. Т. 8, № 2. С. 71-72.
Поступила в редакцию
3 июля 2013 г.
