CC BY
56
© ФРАНЦИЯНЦ Е.М., НЕПОМНЯЩАЯ Е.М., ГУСЬКОВА Н.К., СОРОКИН А.А.
УДК:001.5:615.7:612-002.91:616-006.04 ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ
ПЕРЕВИВНЫХ ОПУХОЛЕЙ У КРЫС НА ФОНЕ ХЛАМИДИЙНОЙ
ИНФЕКЦИИ
Е.М. Франциянц, Е.М. Непомнящая, Н.К. Гуськова, А.А. Сорокин
Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, директор -акад. РАН и РАМН Ю.С. Сидоренко, Ростов-на-Дону.
Резюме. Изучена эффективность различных способов экспериментальной терапии перевивной саркомы С-45 у крыс, полученной на фоне хламидийной инфекции, и степень выраженности морфологических изменений опухоли. У крыс с инфекционным компонентом введение циклофосфана без противохламидийной терапии приводит к наименьшим изменениям комплекса структурных показателей опухолей С-45, что является неблагоприятным фоном в прогнозе опухолевой прогрессии.
Ключевые слова: перевивная опухоль, хламидийная инфекция,
морфологическая характеристика опухоли, противоопухолевая терапия.
Франциянц Елена Михайловна - д.б.н., проф. руководитель гормональной лаборатории ФГУ «РНИОИ Росмедтехнологий»; e-mail: [email protected].
Непомнящая Евгения Марковна - руководитель патолого-анатомического отделения ФГУ «РНИОИ Росмедтехнологий», д.м.н., проф.; e-mail: [email protected].
Гуськова Наиля Катифовна - к.б.н., руководитель клинической лаборатории ФГУ «РНИОИ Росмедтехнологий», e-mail: [email protected].
Интерес к проблеме персистентной хламидийной инфекции приходится на последние 15-20 лет. На моделях хламидийной инфекции у животных [12, 14, 15], а также in vivo [2, 4, 10] установлены факторы, определяющие персистирование хламидийной инфекции. Приводятся данные о возможной связи между хламидийной инфекцией и злокачественным ростом [5, 9, 11]. Существует мнение о влиянии инфекционного агента хламидийной природы на ранних стадиях неоплазии и отсутствии такового на дальнейшем ее развитии. Однако глубокого изучения течения злокачественных новообразований на фоне хламидийной инфекции не проводилось. Отсутствуют экспериментальные данные о влиянии возбудителя на морфологическую характеристику злокачественных опухолей, степень их изменения под воздействием противоопухолевой терапии. Вместе с тем, можно предположить, что сочетанное поражение макроорганизма опухолевым процессом и хламидиями может привести к более глубоким нарушениям барьерных систем организма, что значительно осложняет течение основного заболевания, влияет на результаты лечения и прогноз.
Целью исследования явилась оценка эффективности экспериментальной противоопухолевой терапии перевивных опухолей, полученных на фоне экспериментальной хламидийной инфекции по степени выраженности морфологических изменений.
Материалы и методы
Исследования выполнены на самцах белых нелинейных крыс массой 179-200 г. Индукция опухолевого процесса воспроизводилась путем введения клеток саркомы-45 (С-45) под кожу спины дозированно стандартным методом. Инфицирование осуществляли штаммом Е Chlamydia trachomatis в клеточной линии МсСоу с титром 106 IFU/мл [2, 11]. Объем вводимой дозы инокулята определялся из расчета 1 мкл на 1 г массы тела [13]. Инфицирование проводили двукратно, чередуя способ введения: интраназально и в половой аппарат.
Развитие хламидиоза подтверждалось комплексом лабораторных исследований [13, 15]. На 6-8-е сутки после перевивки С-45 при достижении массы опухоли
0,9-1,2 г выполнялась экспериментальная терапия. С учетом поставленных задач сформировано пять групп крыс:
I - животные-опухоленосители С-45 без инфекционного компонента;
II - животные-опухоленосители С-45 с поэтапным введением двух культур;
III - животные-опухоленосители С-45, циклофосфан (ЦФ) в дозе 40 мг/кг х3 [3];
IV - животные-опухоленосители С-45 с поэтапным введением двух культур, ЦФ;
V - животные-опухоленосители С-45 с поэтапным введением двух культур; ЦФ, ровамицин в дозе 9мл МЕ х7 [6, 8].
Позитивным контролем служили животные с перевивной С-45 без инфекционного компонента. Для изучения строения развившихся опухолей всех крыс подвергали эвтаназии. Сравнительному морфологическому анализу подвергнуто 84 опухоли.
Была осуществлена оценка степени морфологических изменений перевивных опухолей, полученных на фоне экспериментальной хламидийной инфекции и без нее, при различных способах экспериментальной терапии. Изучена общая структура опухоли: площадь паренхимы, стромы, очаги некрозов с
последующим вычислением их процентного соотношения, индекс повреждения паренхимы, митотическую активность [1, 7]. Гистологическому исследованию подвергнуты срезы (продольный и поперечный), полученные со всего опухолевого узла и окружающих тканей. Срезы фиксировали в 10% нейтральном формалине с обычной проводкой и заливкой в парафин, окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали микроскопически (увеличение от 40 до 400 раз).
Данные морфометрического анализа обработаны статистически по общепринятым методам. Достоверность различий определялась с использованием критерия Стьюдента и считалась значимой при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Лечение циклофосфаном опухоли С-45 в контрольной группе крыс привело к повреждениям, соответствующим Ш степени по Г.А. Лавниковой [7]. При этом, основная масса паренхимы была сохранена, хотя отчетливо просматривалось увеличение количества деструктивно измененных клеток с эозинофильной цитоплазмой, атипическими митозами. В ядрах часто отмечались кариопикноз и кариорексис. Строма опухоли занимала большую площадь, чем в опухолях без лечения (р<0,05). Она более волокнистая, менее клеточная, с явлениями гиалиноза в капсуле при слабо выраженной лимфоидной и нейтрофильной инфильтрации, что свидетельствует об угнетении клеточного элемента иммунологической защиты организма. Размеры очагов некрозов, кровоизлияний и отека опухоли увеличены в сравнении с таковыми в опухолях без лечения (р<0,05) (табл. 1). Сохранены крупные поля с пролиферирующими мелкими веретеновидными клетками со скудной базофильной цитоплазмой. Ядра этих клеток характеризовались маргинально расположенным хроматином, четкими ядрышками, обилием правильных митозов, что является отражением интенсивности синтетических и пролиферативных процессов.
При изучении структуры опухоли С-45, развившейся на фоне хронической хламидийной инфекции, после воздействия циклофосфана обращало внимание расширение площади неповрежденных опухолевых клеток на фоне некоторого увеличения числа патологических митозов и снижения митотической активности: на 14% по сравнению с контрольной группой и на 37,5% - по сравнению с аналогичной группой, но без лечебного воздействия (р<0,05) (табл. 2). Строма опухоли более плотная, чем в опухолях крыс с инфекционным компонентом, но без ЦФ (р<0,05) и у животных с перевитой С-45 после лечения цитостатиком (р<0,05) вследствие фиброзирования и менее
выраженной отечности и полнокровия, а также за счет уменьшения количества лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов, что свидетельствует о некотором угнетении иммунологической активности организма животного. Величина и распространенность очагов некрозов не претерпевали существенных изменений. Общая структура опухоли напоминала таковую в контрольной группе животных-опухоленосителей С-45 без лечения, однако отмечалось уменьшение количества дистрофически измененных клеток опухоли и снижение на 5,6% индекса повреждения паренхимы.
При описании строения аналогичной опухоли у животных с инфекцией, подвергнутых сочетанной терапии противохламидийным и противоопухолевым препаратами, наблюдалось увеличение площади, занимаемой очагами некрозов, в отличие от опухолей в обеих сопоставляемых группах животных, не подвергавшихся терапии: с инфекцией - на 28,6%, без инфекционного компонента - на 66,1%, соответственно (р<0,05). При этом, сами очаги некрозов небольшие, но их много и они диффузно распределены в опухолевой ткани. Отмечено увеличение площади стромального компонента: на 20,5% по сравнению с аналогичной группой крыс, не получавших лекарственных препаратов (р<0,05), и на 72,5% превысившим значения показателя у животных, получивших только ЦФ (р<0,05). Строма и капсула опухоли С-45 -более волокнистые с участками гиалиноза. Межпучковые прослойки и соединительнотканные зоны вокруг очагов некрозов более выражены, лимфоцитарная инфильтрация незначительна. Поля дистрофически измененных клеток опухоли располагались, преимущественно, вокруг очагов некрозов и их больше, чем в сопоставляемых группах без терапии. Цитоплазма этих клеток резко оксифильна, ядра гиперхромны и сморщены. Площадь, занимаемая неизмененной саркоматозной тканью, уменьшена по сравнению с таковой в группе крыс с инфекций без ЦФ (р<0,05), в ней снижено число правильных митозов. При этом, степень снижения больше, чем во всех других группах. Разница в значениях показателя составила: 64,5% по сравнению с контрольной группой (р<0,05), 74,2% - по сравнению с аналогичной группой
крыс, не получавших лекарственных препаратов (р<0,05), и на 58,7% - при сопоставлении с данными у крыс с инфекцией, получивших ЦФ. Данные изменения свидетельствуют о выраженном угнетении опухолевой прогрессии.
Учитывая вышеизложенное, а также снижение митотической активности до 3,3%о и увеличение числа дистрофически измененных клеток, можно думать о наиболее неблагопрятных условиях для опухолевой ткани, созданных при экспериментальной терапии животных с «инфекцией» по расширенной схеме -противоопухолевая терапия в сочетании с противохламидийной.
Полученные данные свидетельствуют о том, что введение ЦФ животным с перевивными опухолями, развившимися на фоне хламидийной инфекции, не приводит к ожидаемому разрушению опухолевой ткани. При этом отмечено увеличение нормальной митотической активности почти в два раза, значительное уменьшение количества дистрофически измененных клеток паренхиматозного компонента и, соответственно, увеличение площади стромального. Отсутствие признаков активации иммунного статуса организма также является неблагоприятным фоном в прогнозе опухолевой прогрессии. Вместе с тем, проведение противохламидийной терапии в аналогичной группе животных значительно улучшает результаты терапии циклофосфаном, что подтверждается стромально-паренхиматозными взаимоотношениями.
Результаты исследования позволяют нам сделать следующие выводы:
- введение ЦФ приводит к деструктивным изменениям опухолей во всех экспериментальных группах крыс, но с разной степенью выраженности;
- у крыс с инфекционным компонентом введение ЦФ без противохламидийной терапии приводит к наименьшим изменениям комплекса структурных показателей С-45, что является неблагоприятным фоном в прогнозе опухолевой прогрессии;
- при терапии ЦФ структурные характеристики опухолей, полученных от крыс без инфекционного компонента, сопоставимы с таковыми опухолей от
инфицированных хламидийной инфекцией животных, которым наряду с ЦФ вводили ровамицин.
Полученные в эксперименте данные могут быть использованы в клинике с экстраполированием на больных с сочетанной патологией: опухолевой и хламидийной. Показана целесообразность проведения таким больным превентивного курса противохламидийной терапии при одновременном проведении противоопухолевого лечения.
POTENTIATING INFLUENCE OF CHLAMYDIA INFECTION TO TRANSPLANTED-TUMOR GROWTH IN RATS
E. M. Frantziyantz, E. M. Nepomnyashaya, N. K. Guskova, A. A. Sorokin
Federal State Institution “Rostov Cancer Research Institute of Russian Medical
Technologies”
Abstract. We studied the efficiency of different tested methods of C-45 tumor therapy in rats with chlamydia infections. Application of cyclophosphane with no antichamydia therapy leads to the least changes in the complex of structuralindicators of C-45 tumor that is unfavorable prognosis as for the tumor progression.
Key words: sarcoma C-45, Chlamydia infection, proliferation.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Морфология в патологии. - М.: Медицина, 1973. -
277 с.
2. Бартенева Н.С., Фуэнтес В., Деева А.В. и др. Индукция тумор-некротического фактора хламидиями // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. - М., 1990. - С. 30-32.
3. Бордюшков Ю.Н., Передреева Л.В., Златник Е.Ю. и др. Влияние
способа введения циклофосфана на рост и морфологические особенности
перевивной саркомы // Рос. онкологич. журн. - М. 1996. - № 2. - С.33-35.
4. БрагинаЕ.Е., Дмитриев Г.А., Кисина В.И. Структурнофункциональные особенности жизненного цикла хламидий in vivo // Вестн. дерматол. и венерологии. - 1995. - № 6. - С. 18-20.
5. КозловаВ.И., Пухнер А.Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий / Руководство для врачей. - СПб., 2000. - 571 с.
6. Косарев В.В., Баранов С.А. Макролиды в лечении инфекций бактериальной природы // Трудный пациент. - 2009. - Т. 7, №11. - С. 23-25.
7. Лавникова Г. А. Некоторые закономерности лучевого патоморфоза опухолей человека и их практическое использование // Вестн. АМН СССР. -1976. - №6. - С. 13-19.
8. Машкиллейсон А. Л. Клиническое применение ровамицина в лечении хламидиоза. - 1996. - 40 с.
9. Anttila T.I. Chlamydial antibodies and risk of prostate cancer // Cancer Epidemiology Biomarkers Prev. - 2005. - Vol. 14. - P. 385-389.
10. Butler C., Dewsnap C., Evangelou G. Are all genital Chlamydia trachomatis infections pathogenic? A study in men // Sexually Transmitted Infection. - 2003. - Vol. 79. - P. 349.
11. Lyons J.M., Itojl Jr., Morre S.A. Chlamydia trachomatis serovar E isolates frompattents, with different clinical manifistations have similar courses of infection in a murine model: host factors as major determinants of C.trachomatis mediated pathogenesis // J. Cein. Pathol. - 2004. - Vol. 57, №6. -P. 657-659.
12. Paavonen J. Сervical Cancer a Potential Long-Term Sequelae of Chlamydial Infection // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2003. - Vol. 189. - P. 12871292.
13. Pal S., Peterson E.M. de la Maza L.M. New murine model for the study of Chlamydia trachomatis genitourinary tract infections in males // Infection and Immunity. - 2004. - Vol. 72, № 7. - P. 4210-4216.
14. Ramsey K.H., Sigar L.M., Schripsema J.H. Expression of matrix mettalloproteinases subsequent to urogenital Chlamydia muridarum infection of mice // Infection and Immunity. - 2005. - Vol. 73, №10. - P. 6962-6973.
15. Vanrompay D., HoangT.Q., De Vos L. Specifi-pathogen-free pigs as an animal model for studying Chlamydia trachomatis genital infection // Infection and Immunity. - 2005. - Vol. 73, №12. - P. 8317 - 8321.
