CC BY
18
Иванов Сергей Петрович, доктор медицинских наук, доцент кафедры факультетской хирургии с курсом постдипломного образования, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: astcardio@mail.ru.
Мустафин Дамер Гибатович, доктор медицинских наук, профессор кафедры факультетской хирургии с курсом постдипломного образования, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: agma@astranet.ru.
Иванов Александр Сергеевич, врач, торакальный хирург хирургического торакального отделения ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, д. 2, тел.: (8512) 25-32-61, e-mail: lazer@astranet.ru.
УДК 611.31:616.995.122.21:616.22-008:87
© Л.А. Иванова, А.Н. Уляков, А.О. Плотников, И.В. Иванов, Т.Х. Тимохина, С.В. Куликова, М.И. Беляева, А.О. Ступников, Е.Д. Хадиева, В.Г. Бычков, 2012
Л.А. Иванова1,2, А.Н. Уляков1,2, А.О. Плотников3,4, И.В. Иванов1,2, Т.Х. Тимохина1, С.В. Куликова1, М.И. Беляева5, А.О. Ступников1, Е.Д. Хадиева67, В.Г. Бычков1
МИКРОБИОЦЕНОЗ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ У БОЛЬНЫХ СУПЕРИНВАЗИОННЫМ ОПИСТОРХОЗОМ
:ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России 2ЗАО «Стоматологическая поликлиника № 3», г. Тюмень 3ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России 4Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН 5ФБГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора по Тюменской области 6ГБОУ ВПО «Ханты-Мансийская государственная медицинская академия» Минздрава России 7Бюджетное учреждение Ханты-Мансийского автономного округа - Югры «Окружная клиническая больница», г. Ханты-Мансийск
В ротовой полости больных суперинвазионным описторхозом (СО) выявлена многочленная ассоциация микроорганизмов, представленная резидентной микрофлорой, Helicobacter pylori и симбионтами личинок опи-сторхисов и марит. На фоне иммунодефицита при СО оппортунистические микроорганизмы, в т.ч. симбионты, могут индуцировать патологию зубов и мягких тканей ротовой полости.
Ключевые слова: ротовая полость, микрофлора, описторхоз.
L.A. Ivanova, A.N. Ulyakov, A.O. Plotnikov, I.V. Ivanov, T.H. Timokhina,
S.V. Kulikova, M.I. Belyaeva, A.O. Stupnikov, E.D. Khadieva, V.G. Bychkov
THE MICROBIOCENOSIS OF ORAL CAVITY OF PATIENTS WITH SUPERINVASIVE OPISTHORCHIASIS
The numerous associations of microorganisms presented by resident microflora, Helicobacter pylori and symbio-tes of larvas opisthorchis and digenea, were found in the oral cavity of patients with superinvasive opisthorchiasis (SO). On the background of immunodeficiency with SO, opportunistic microorganisms, including symbiotes, can induce pathologies of teeth and soft tissues of the oral cavity.
Key words: oral cavity, microflora, opisthorchiasis.
Введение. Профессиональная деятельность стоматологов сопряжена с проблемой выявления этиологии и патогенеза болезней полости рта, при этом отмечается различный уровень патологии ротовой полости населения и зависит от влияния абиотических и биотических факторов регионов нашей страны [1, 7, 8, 15, 16]. Установлено, что на поражение зубов и пародонта влияет состояние внутренних органов, прежде всего, желудочно-кишечного тракта [9, 19]. Особую роль в развитии стоматологических заболеваний играют болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [21], причем этиологические факторы поражений оральных отделов пищеварительной трубки являются нередко идентичными [9, 17, 18].
На территории Тюменской области (Среднее Приобье) расположен гиперэндемичный очаг опи-сторхоза, системного заболевания с преимущественным поражением печени, поджелудочной железы, желудка и кишечника [11]. Особенностью болезни в данном регионе является ее суперинвазионная форма, характеризующаяся многочисленными повторными заражениями, что проявляется более выраженными структурно-функциональными нарушениями [5, 14, 20]. У пациентов с суперинвазионным описторхозом наблюдается нарушение резидентной микрофлоры кишечника, а инвазированные лица относятся к группе иммунокомпрометированных больных [5, 10, 11, 13].
Цель: выявить микрофлору ротовой полости у больных суперинвазионным описторхозом (СО) и неинвазированных лиц, проживающих в гиперэндемичном очаге (Среднее Приобье).
Материал и методы исследования. Проведено комплексное исследование микробиоценоза полости рта (зубного налета, пародонта, слизи и слюны) у 89 больных СО и 52 лиц без инвазии. Возраст обследованных составил 42-60 лет (52,43 ± 4,13). Для выявления микроорганизмов применяли микробиологические, биохимические, гистологические, цитологические, иммуногистохимические и молекулярно-генетические методы [12]. Микрофлору в личинках описторхисов и маритах высевали по методу Дригальского на среду Эндо. Гемолитическую активность симбионтов учитывали на кровяном агаре, фосфолипазную и лецитиназную активность - на желточном агаре. Антилизоцимную активность бактерий выявляли по методу О.В. Бухарина с соавторами (2002) [2, 3, 4]. Величину анти-лизоцимной активности микроорганизмов выражали в мкг/мл. Количественный учет осуществлялся по наибольшей концентрации лизоцима, которая инактивировалась микроорганизмами.
Идентификацию до вида выделенных штаммов микроорганизмов проводили на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств с использованием тест-систем фирмы Lachema (Чехия): «ENTEROtest 24» и «NEFERMtest». В качестве руководства по идентификации бактерий использовали «Определитель бактерий Берджи» и «Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий». Молекулярно-генетические исследования проводили при помощи ПЦР: вирусы выявляли путем выделения ДНК из биоматериала, ДНК-экспресс метод проведен по инструкции фирмы-производителя «ДНК-технология» (Россия). Эпидермальный фактор роста (EGFR) определяли у 30 больных СО методом ИФА (ELISA).
Результаты и обсуждение. Качественные и количественные характеристики микробного обсеменения ротовой полости неинвазированных лиц Среднего Приобья не отличаются от таковых у населения других регионов [9, 17, 18]. В составе микробиоценоза полости рта у больных СО повторяются резидентные штаммы неинвазированных лиц, однако таксономическая характеристика и плотность обсеменения существенно отличаются. У больных СО в зубном налете, слизи и на поверхности пародонта преобладают стрептококки в том числе Streptococcus mutans, S. faеcalis sangius, причем плотность S. mutans и Lactobacillus у инвазированных описторхисами составила более 105 колоний в 1 мл слюны, а у лиц, свободных от инвазии, число колоний в 1 мл слюны этих бактерий менее 105, в группе инвазированных с гингивитами преобладают виды Actinomyces, в том числе A. naeslundii и другая микрофлора. В слизистом содержимом ротовой полости выявлена группа герпес-вирусов: ВПГ-1, ВПГ-2 и цитомегаловирус.
Изучение биоптатов (34) слизистой желудка больных СО (окраска гематоксилином и эозином) и десны (окраска гематоксилином и эозином, по Романовскому-Гимзе) выявило наличие Helicobacter pylori у всех пациентов с хеликобактериозом, диагностированным неинвазивным уреазным тестом.
Бактериологическое исследование метацеркариев описторхисов (личинки) и марит (половозрелые описторхисы) показало наличие в них 30 штаммов бактерий, относящихся к 9 подвидам, 8 видам и 7 родам, общая численность их составила 37,6 млн КОЕ/мл. Особое внимание уделялось биологическим свойствам микроорганизмов, которые могут иметь значение для выживания в ассоциации с эукариотическим макроорганизмом [3].
Наибольшая антилизоцимная активность (мкг/мл) отмечалась у симбионтов личинок: Alcaligenes xylosooxydans ssp. xylosooxydans (6), Alcaligenes xylosooxydans ssp. denititrificans (8), Escherichia coli (2), K. pneumonia (2), P. aeruginosa (2) и др. В содержимом ротовой полости выявили 23 штамма бактерий из 30, содержащихся в метацеркариях и описторхисах, причем преобладали виды бактерий, обладающие высокой антилизоцимной активностью (Alcaligenes xylosooxydans ssp. xy-losooxydans, Alcaligenes xylosooxydans ssp. denititrificans, Acinetobacter calcoaceticus var lwoffi, Escherichia coli, S. maltophilia, K. pneumonia, P. aeruginosa).
Микробиоценоз ротовой полости у больных суперинвазионным описторхозом характеризуется родовым многообразием, например, можно отметить преобладание кариесогенных микроорганизмов рода Streptococcus, прежде всего, S. mutans, Staphylococcus, лактобациллы, а также герпес-вирусы,
Helicobacter pylori и симбионты метацеркариев O. felineus, причем у всех обследованных пациентов отмечены только многочленные ассоциации с обильным (48,3 %) или умеренным (51,7 %) ростом микроорганизмов.
Ранее показано, что у больных описторхозом наблюдается иммунодефицитное состояние по гуморальному и клеточному типам [10], поэтому в иммунокомпроментированном организме оппортунистическая микрофлора может быть патогенной и высоко вирулентной, особенно это относится к симбионтам [22, 23, 24].
Предыдущие исследования [6, 19] показали, что у пациентов с длительностью описторхозной инвазии более 10 лет и достоверно чаще (в 88,3 % случаев) выявляется Helicobacter pylori, что сопряжено с тяжелым течением поражений желудка и двенадцатиперстной кишки. Современное мультиплексное изучение системного влияния Helicobacter pylori позволило установить причастность этих бактерий к стоматологической патологии [17].
Заключение. Микробиоценоз полости рта больных суперинвазионным описторхозом представлен резидентной микрофлорой, Helicobacter pylori и симбионтами метацеркариев описторхисов. На фоне системного иммунодефицита хозяина (человек) микроорганизмы могут преобретать вирулентные свойства и послужить этиологическим фактором в развитии патологии зубов и мягких тканей ротовой полости.
Список литературы
1. Барер, Г. М. Состояние микробиоценоза слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите / Г. М. Барер // Cathedra. - 2008. - Т. 6, № 4. - С. 24-27.
2. Бухарин, О. В. Биология патогенных кокков / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов, О. Л. Карташо-ва. - М. : Медицина, 2002. - 283 с.
3. Бухарин, О. В. Механизмы выживания бактерий / О. В. Бухарин, А. Л. Гинзбург, Ю. М. Романова, Г. И. Эль-Регистан. - М. : Медицина, 2005. - 366 с.
4. Бухарин, О. В. Проблемы персистенции в инфектологии / О. В. Бухарин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2006. - № 4. - С. 4-8.
5. Бычков, В. Г. Морфогенез преобразований внутренних органов при суперинвазионном опи-сторхозе / В. Г. Бычков, О. Г. Соловьева, Е. Д. Хадиева и др. // Морфология. Эскулап. - 2011. - Т. 40, № 5.- С. 22-27.
6. Ворох, М. П. Особенности диагностики и терапии язвенной болезни с локализацией язвы в луковице двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori и описторхозом : дис. ... канд. мед. наук / М. П. Ворох. - М., 2005. - 116 с.
7. Данилов, Е. О. Изучение стоматологической заболеваемости детского населения Санкт-Петербурга по данным эпидемиологического обследования / Е. О. Данилов, Р. Н. Жапаков // Стоматология детского возраста и профилактика. - 2008. - Т. 7, № 4 (27). - С. 3-5.
8. Ефимович, О. И. Клинико-лабораторное обоснование терапии дисбактериоза слизистой оболочки полости рта : дис. ... канд. мед. наук / О. И. Ефимович. - М., 2002. - 159 с.
9. Захаров, А. А. Анализ микрофлоры ротовой полости обследованных людей с различными заболеваниями / А. А. Захаров, Н. А. Ильина // Успехи современного естествознания. - 2007. - № 12. - С. 353-355.
10. Кашуба, Э. А. Инфекционные болезни: национальное руководство / Э. А. Кашуба, Т. Г. Дроздова; под ред. Н. Д. Ющука, Ю. А. Венгерова. - М. : ГОЭТАР - Медиа, 2009. - 1056 с.
11. Крылов, Г. Г. Суперинвазионный описторхоз : пато- и морфогенез осложненных форм и микст-патологии : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Г. Г. Крылов. - М., 2005. - 45 с.
12. Кудрявцева, Л. В. Helicobacter pylori - инфекция : современные аспекты диагностики и терапии : пос. для врачей / Л. В. Кудрявцева, П. Л. Щербаков, И. О. Иваников, В. М. Говорун. - М., 2004. - 41 с.
13. Кузнецова, Л. К. Клинико-морфологические особенности гастро-дуоденальных изъязвлений у больных описторхозом : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Л. К. Кузнецова. - СПб., 1998. - 22 с.
14. Куликова, С. В. Структурно-функциональные изменения сердца и антропометрических показателей у больных суперинвазионным описторхозом : автореф. дис. ... канд. мед. наук / С. В. Куликова. - Тюмень, 2011. - 23 с.
15. Мажаренко В. А. Стоматология как профессия : опыт социологического анализа : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / В. А. Мажаренко. - Волгоград, 2012. - 47 с.
16. Мосеева, М. В. Helicobacter pylori в развитии кариеса зубов / М. В. Мосеева, Е. В. Белова, Я. М. Вахрушев // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2010. - № 2. - С. 19-21.
17. Мосеева, М. В. Обоснование патогенетических методов профилактики кариеса и воспалительных заболеваний парадонта у пациентов с язвенной болезнью, гастритами и дуоденитами : авто-реф. дис. ... д-ра мед. наук / М. В. Мосеева. - Казань, 2011. - 39 с.
18. Николаев, Д. И. Практическая терапевтическая стоматология / Д. И. Николаев, Л. М. Цепов. - М. : МЕДпресс-информ, 2008. - 960 с.
19. Сердюков, А. Е. Клинико-функциональная и морфологическая характеристика форм гаст-родуоденальной патологии у больных описторхозом и их связь с Helicobacter pylori : автореф. дис. ... канд. мед. наук / А. Е. Сердюков. - Новосибирск, 1999. - 19 с.
20. Соловьева, О. Г. Клинико-патогенетические особенности заболеваний легких при суперинвазионном описторхозе у населения Среднего Приобья : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / О. Г. Соловьева. - Тюмень, 2011. - 43 с.
21. Хитров, В. Ю. Состояние полости рта при эрозивно-язвенных поражениях гастродуоде-нальной зоны и его коррекция / В. Ю. Хитров, М. В. Мосеева, Е. В. Белова. - Ижевск : Удмуртия, 2010. - 126 с.
22. Glupczynski, Y. In vitro susceptibility of Alcaligenes denitrificans subsp. Xyloxidans to 24 antimicrobial agents / Y. Glupczynski, W. Hansen, J. Freney, E. Yourassowsky // Antimicrobial Chemothep. -1988. - Vol. 32 (2). - P. 276-278.
23. Hinnant, K. L. Cytomegalovirus infection of the alimentary tract: a clinicopathological correlation / K. L. Hinnant, H. Z. Rotterdam, E. T. Bell, M. L. Tapper // Am. J. Gastroenterol. - 1986. - Vol. 81. -P. 944-946.
24. Meade, M. J. Soil bacteria Pseudomonas putida and Alcaligenes xylooxidans susp. denitrificans inactivate tridosan in liquid and solid substrates / M. J. Meade, R. L. Wadell, T. M. Callahan // Microbiol. Letters, 2001. - Vol. 204 (1). - P. 45-48.
Иванова Любовь Александровна, кандидат медицинских наук, доцент, заслуженный врач РФ, заведующая кафедрой стоматологии, ФПК и ППС ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, главный врач ЗАО «Стоматологическая поликлиника № 3», г. Тюмень, Россия, 625007, г. Тюмень, ул. Широтная, д. 29, корп. 1, тел. (3452) 26-86-61, e-mail: gsp31@yandex.ru.
Уляков Андрей Николаевич, врач-стоматолог ЗАО «Стоматологическая поликлиника № 3», г. Тюмень, заочный аспирант, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 625007, г. Тюмень, ул. Широтная, д. 29, корп. 1, тел. 8 (3452) 26-86-61, e-mail: gsp31@yandex.ru.
Плотников Андрей Олегович, кандидат медицинских наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии, ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России, старший научный сотрудник, Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, тел. (3532) 77-54-14, e-mail: orgma@esoo.ru.
Иванов Иван Васильевич, врач-стоматолог ЗАО «Стоматологическая поликлиника № 3», г. Тюмень, заочный аспирант, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 625007, г. Тюмень, ул. Широтная, д. 29, корп. 1, тел. (3452) 26-86-61, e-mail: gsp31@yandex.ru.
Тимохина Татьяна Харитоновна, доктор медицинских наук, доцент, заведующая кафедрой микробиологии, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д. 54, тел.: (3452) 20-04-77, e-mail: pro-rector@tyumsma.ru.
Куликова Светлана Витальевна, кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры патологической анатомии, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д. 54, тел.: (3452) 20-05-34, е-mail: kulikova@tyumsma.ru.
Беляева Маргарита Ивановна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, заведующий лабораторией, ФБГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора по Тюменской области, Россия, 625000, г. Тюмень, ул. Холодильная, д. 57, тел.: (3452) 56-79-90, e-mail: belyaeva_mi@mail.ru.
Ступников Антон Олегович, ассистент кафедры патологической анатомии, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д. 54, тел.: (3452) 20-05-34, e-mail: kulikova@tyumsma.ru.
Хадиева Елена Дмитриевна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры патологической анатомии, ГБОУ ВПО «Ханты-Мансийская государственная медицинская академия» Минздрава России, заведующая па-тологоанатомическим отделением Бюджетного учреждения Ханты-Мансийского автономного округа - Югры «Окружная клиническая больница», Россия, 628012, г. Ханты-Мансийск, ул. Калинина, д. 40, тел.: (3467) 39-0335, e-mail: hadieva ed@okb hmao.ru.
