CC BY
837
НАУЧНЫЕ ОБЗОРЫ
© КРАЕВА Л.А. - 2011 УДК 579.61
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ БАКТЕРИЙ РОДА СОЛУЫЕВАСТЕЛШМ
Людмила Александровна Краева (ФГУН Научно-исследовательский институт им. Пастера, Санкт-Петербург, директор - член-корр. РАМН, проф. А.Б. Жебрун, лаборатория бактериальных инфекций, руководитель - проф. Г.Я. Ценева)
Резюме. В обзоре представлены современные сведения о таксономии, биологических особенностях и роли ко-ринебактерий в патологии человека. Основное внимание уделяется фенотипической идентификации и дифференциальной диагностике представителей рода Corynebacterium. В статье обобщены современные данные литературы и собственный опыт работы по морфологической и биохимической идентификации микроорганизмов рода Corynebacterium.
Ключевые слова: коринебактерии, клиническое значение коринебактерий, биохимическая идентификация ко-ринебактерий.
THE MICROBIOLOGICAL FEATURE OF CLINICALLY SIGNIFICANT BACTERIA OF GENUS CORYNEBACTERIUM
L.A. Kraeva
(Scientific-Research Institute named after L. Pasteur, St.-Petersburg)
Summary. The modern data on taxonomy, biological features and a role of Corynebacterium in pathology of man are shown in the paper. The basic attention is given to the phenotypic identification and differential diagnostics of representatives of genus Corynebacterium. In the paper the modern literature data and personal experience on morphological and biochemical identification of microorganisms of genus Corynebacterium have been generalized.
Key words: Corynebacterium spp., clinical value of Corynebacterium spp., biochemical identification of Corynebacterium._______________________________________________________________________________________
К роду Corynebacterium относятся возбудитель дифтерии и другие родственные микроорганизмы 67 видов (и двух таксонных групп). Наибольшей клинической значимостью обладают Corynebacterium diphtheriae, у которых преимущественное значение имеет такой фактор патогенности, как токсигенность. Показано, что токсин синтезируют только те штаммы, которые несут в своей хромосоме гены умеренного фага. Утрата его клеткой или мутации в tox-опероне делают клетку атоксигенной. Напротив, лизогенизация умеренным коринефагом, содержащим ген tox+, превращает их в токсигенные бактерии. Этот же феномен наблюдается у C. ulcerans и C. pseudotuberculosis.
Поэтому при выделении штамма C.diphtheriae необходимо изучить его токсигенность. В настоящее время используют генетический метод детекции токсина (полимеразная цепная реакция - ПЦР) и фенотипические методы (иммуноферментный анализ - ИФА, иммунох-роматографический тест - ICS, реакция непрямой ге-магглютинации - РНГА, а также экспресс-диагностику дифтерийного токсина на основе микротехнологий).
Другие коринебактерии (Corynebacterium non diphtheriae) часто встречаются во внешней среде и обычно колонизируют кожу и слизистые оболочки человека, являясь представителями микроценозов. Роль этих микроорганизмов в развитии заболеваний человека и животных установлена недавно. В зависимости от биологических особенностей, разные виды коринебак-терий способны поражать кожу и внутренние органы, особенно у пожилых людей, пациентов с иммуносупрессией или мультиорганной патологией. В связи с этим в клинической практике необходима точная идентификация бактерий данной группы, что позволит правильно и своевременно выбрать этиотропную терапию.
В настоящее время род Corynebacterium насчитывает 40 медицински значимых видов (и две таксонные группы). Традиционно основой их идентификации и дифференциации является метаболический профиль. Выявление фенотипических особенностей коринебак-терий проводится на основе определения наличия или
отсутствия сахаролитических энзимов и других ферментных систем. Однако, вследствие морфологических и биохимических особенностей коринебактерий, их идентификация нередко затруднена. Для получения достоверных сведений о характеристике вида становится необходимым использование наиболее информативных биохимических тестов и качественных питательных сред, а также следование в работе следующим рекомендациям: соблюдать все правила отбора, доставки и посева исследуемого клинического материала, идентифицировать до вида выделенный микроорганизм, считать этиологически значимым для нестерильных полостей организма количество микроорганизмов ЫО4, если они выделяются в монокультуре, и ЫО5, если микроорганизмов несколько видов, и другие микроорганизмы обладают более низкой патогенностью, чем выделенные коринебактерии, если отмечается лейкоцитарная реакция организма. Клинические проявления заболеваний, вызванных недифтерийными коринебактериями, отличаются большим разнообразием. Приводим сведения о роли отдельных видов в патологии человека.
С.accolens. Эти коринебактерии выделяются из глаз, ушей, верхних дыхательных путей у больных с патологией указанных органов. Описаны случаи, при которых С. аееокт вызывали эндокардиты аортального и митрального клапанов. Маленькие палочки, образующие при росте на агаре с кровью гладкие выпуклые колонии диаметром менее 0,5 мм.
C.afermentans subsp. Afermentans. Эти микроорганизмы составляют часть нормальной микрофлоры человека, однако они выделяются в ряде случаев из отделяемого ушей и из крови больных. При росте на среде с кровью образуют беловатые негемолитические колонии 1-2 мм в диаметре.
С afermentans subsp. Lipophilum. Впервые они были выделены из крови больных с инфекцией центрального венозного катетера, эндокардитом искусственного клапана с периклапанным абсцессом. Позднее выделялись от людей с раневой инфекцией. Колонии выпуклые гладкие диаметром менее 0,5 мм на среде с кровью.
C. amycolatum. В основном, это представители нормальной флоры кожи и дыхательных путей человека. В настоящее время известны случаи эндокардитов как госпитальных, связанных с внутрисосудистыми катетерами, так и у больных с заболеваниями сердца и у больных с иммунной депрессией, вызванных штаммами C. amycolatum, устойчивыми ко многим антибиотикам. При росте на среде с кровью образуют серые плотные колонии с неровным краем диаметром 1-2 мм.
C.appendicis. Этот микроорганизм был выделен от больного с аппендицитом, осложненным абсцессом. Этот вид отличается от представителей CDC coryneform groups F-1 позитивной алкалин-фосфатазной активностью и негативними реакциями нитрат-редуктазы и ферментации сахарозы.
C. argentoratense. Есть сообщения о выделении этих бактерий из глотки и носа у больных с заболеваниями верхних дыхательных путей, а также из крови. Колонии микроорганизмов кремового цвета, без гемолиза, шершавые, диаметром 2 мм через 48 часов роста.
C.atypicum. Хотя этот вид и принадлежит к роду Corynebacterium, он не содержит коринемиколовых кислот. На среде с кровью образует очень мелкие колонии через 48 часов инкубации.
C.aurimucosum. Микроорганизмы в основном выделяются из урогенитального тракта женщин при воспалительных процессах. На среде с кровью образуют желтые липкие колонии. Иногда могут давать темно-серый пигмент.
C. auris. В большинстве случав C.auris вызывают заболевания верхних дыхательных путей, ушей. Образуют негемолитические, сухие и слегка прилипшие, но не пенетрирующие в агар колонии, которые со временем желтеют.
C. bovis. Обычно обнаруживаются в коровьем молоке, комменсалы вымени коров. Распространяются человеком при доении. Морфологически C. bovis
- неправильной формы палочки и кокко-бациллы. Липофильные. Единственные в группе коринебактерий положительные по оксидазе. Могут расти на средах, содержащих 9% NaCl. Колонии кремоватые, серые или белые, непрозрачные, сухие, крошащиеся, мелкие, около 1 мм в диаметре. Через 24 ч инкубации рост отсутствует или скудный, в 48 ч культурах хорошо заметен. Гемолитической активностью не обладают.
C.confusum. Впервые микроорганизмы были выделены от больного с инфекционным процессом на ступне, затем их выделяли из крови, различных абсцессов. Колонии микроорганизмов светлые ровные блестящие диаметром до 1,5 мм через 48 часов инкубации. Обладают замедленной ферментативной активностью, поэтому биохимические тесты лучше учитывать через 48 часов инкубации.
C.coyleae. Микроорганизмы выделяются из крови и других стерильных жидкостей организма человека, а также из урогенитального тракта. Колонии гладкие блестящие с небольшой адгезией к поверхности кровяного агара. Диаметр колоний около 1 мм.
CDC Group F-1 and G Bacteria. Это относительно недавно выделенная (в 1981 г.) группа слабоферменти-рующих коринебактерий. Представители этой группы выделяются из клинического материала от больных с тяжелыми эндокардитами, септическими артритами, красной системной волчанкой, из урогенитального тракта и глаз.
C.durum. Впервые эти бактерии были выделены из респираторного тракта человека. В настоящее время C.durum выделяют из ротовой полости, крови, содержимого абсцессов. В то же время их выделяют и от здоровых лиц. Пока патогенетический потенциал C.durum до конца не выяснен. Они относятся к группе медленнорастущих коринебактерий с образованием мелких колоний (0,5-1 мм в диаметре) через 48-72 часа инкубации.
C.falsenii. Эти микроорганизмы до сих пор выделяли только из стерильных жидкостей организма челове-
ка. Колонии гладкие, блестящие слегка адгезированные к поверхности агара с кровью. Диаметр колоний 1-2 мм. Через 72 часа инкубации появляется желтый пигмент, который становится наиболее выраженным через 120 часов.
C. freneyi. Впервые эти микроорганизмы были выделены с поверхности кожи некоторых больных. Позднее их стали выделять также из урогенитального тракта. Колонии светлые сухие и шершавые, диаметр составляет 0,5-1 мм после 48 часов инкубации. С. /тепеуг похожи на C.xeтosгs, но в отличие от них ферментируют глюкозу при 420С и растут при температуре 200С.
С glucuronolyticum. Были выделены от людей с заболеваниями мочеполовой системы. Могут вызывать простатиты и уретриты. В то же время выделяются от здоровых людей (в основном мужчин). Колонии беловатожелтоватые, негемолитические, выпуклые, размером 1-1,5 мм в диаметре после 24 часов инкубации на агаре с кровью.
C.imitans. Микроорганизмы впервые выделены из назофарингеального секрета ребенка с локализованной формой дифтерии. У контактировавших с этим ребенком взрослых также были выделены СЛтШт, что позволило говорить о передаче от человека к человеку даже недифтерийных микроорганизмов. Внутрибольничное заражение в этом случае было исключено. Колонии микроорганизмов гладкие, бело-серые диаметром 1-2 мм на среде с кровью, на кровяно-теллуритовом агаре
- темно-серые.
С jeikeium. Плеоморфные, грамположительные палочки с характерным расположением, некислотоустойчивые, имеют метахроматические гранулы. Хорошо растут при 30°-42°С На среде с Твин-80 колонии круглые, гладкие, от белого до кремового оттенка, на других средах - серые, негемолитические. Входят в состав нормальной микрофлоры кожных покровов человека. Имеются сообщения о выделении их у 1-2% здоровых лиц, у 10-15% неонкологических и у 35-50% онкологических больных. Могут обнаруживаться в крови и в других биотопах, особенно у больных, получающих иммунодепрессанты при пересадке костного мозга. Сепсис обычно развивается на фоне основного заболевания при наличии катетеров, шунтов и трубок из биоматериалов. Вызывают кожные поражения, пневмонии, эндокардиты, перитониты, инфицируют ожоговые раны, часто являются причиной септического тромбофлебита. Большинство случаев заражения носят госпитальный характер, особенно у лиц с нарушениями иммунитета и у получавших антибиотики широкого спектра действия.
C.kroppenstedtii. Впервые выделены от больных с легочными заболеваниями. В настоящее время их выделяют из легких, бронхо-легочных смывов, из различных абсцессов. Колонии серого цвета, сухие, блестящие, очень маленькие - менее 1 мм в диаметре.
C.UpopMloflavum. Единственный штамм этого вида выделен из вагинального содержимого у больной с бактериальным вагинозом. Эти микроорганизмы похожи на С.итеа1уПсит, но в отличие от них не обладают мультирезистентностью к антибиотикам.
C.macginleyi. Эти микроорганизмы являлись причиной заболеваний глаз таких, как гематогенный эн-дофтальмит. В то же время их выделяли из конъюнктивы здоровых людей. На среде с Твином-80 колонии C.macgгnleyг дают розовый пигмент.
С matruchotii. Обнаруживаются в ротовой полости и зубном налете у человека и приматов. Морфологические особенности - палочки кнутовидной формы. В настоящее время выделяются также из урогенитального тракта человека. Колонии микроорганизмов мелкие, около 0,5 мм в диаметре, блестящие, выпуклые.
C.minutissimum. Возбудитель эритразмы - инфекционного поражения кожных покровов в виде красновато-коричневой сыпи, локализующейся преимущественно в паховой и подмышечной областях.
Они являются частью нормофлоры кожи человека, но способны вызывать абсцессы легких, эндокардиты и фатальные септикопиемии. Высеваются у больных простатитом, обсуждается их роль в патогенезе мужского бесплодия. На плотных питательных средах через 24 ч роста формирует гладкие блестящие колонии размером 1 мм. Если колонии выросли на сывороточном агаре, то под лампой Вуда (Х=365 нм) светятся розовым светом. В мазках - палочки (0,3-0,6 х 1-2 мкм) с перешейком на одном из сужающихся концов с метахроматическими гранулами.
C.mucifaciens. Эти микроорганизмы чаще высевали из крови и других стерильных жидкостей организма человека, однако их также выделяют из абсцессов пораженных участков кожи. Колонии маленькие 1-1,5 мм в диаметре, мукоидные. Биохимическая активность микроорганизмов низкая.
С. propinquum. Бактерии выделяют из отделяемого верхних дыхательных путей от больных с респираторными заболеваниями, а также от больного с врожденным клапанным эндокардитом. Их биологической нишей являются верхние дыхательные пути человека. Колонии светлые блестящие, иногда сухие, диаметром 1-2 мм через 24 часа инкубации.
C.pseudodiphtheriticum (С.Но^тат). Представители С.р$еийо(ИрЫкетШсит являются частью нормальной флоры верхних дыхательных путей. Однако могут вызывать заболевания в местах своего обитания: описаны случаи бронхопневмоний на фоне иммунодепрессивной терапии, проводимой по поводу хронических системных заболеваний. У ослабленных людей могут вызвать эндокардит, лимфадениты, кожные поражения, инфекцию мочевыводящих путей. Короткие прямые палочки, ме-тахроматические зерна отсутствуют или их мало, в мазках часто располагаются параллельно. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых питательных средах при 370С. На кровяном агаре образуют белые, с кремовым оттенком 8-колонии, на теллуритовых средах колонии сухие, мелкие, серые, с коричневым центром, на среде Бучина - голубоватые.
C.pseudotuberculosis (C.ovis). Вызывают гранулома-тозный язвенный лимфаденит у овец и лошадей, иногда у других животных. Описаны случаи казеозных лимфаденитов. Возбудитель может поражать людей, контактирующих с больными животными, составляющих группу риска. Являются причиной септических проявлений у человека, грануломатозного лимфаденита. При микроскопии - палочки, окрашиваются неравномерно, наблюдаются булавовидные формы, напоминающие
СарЫкепие, хотя в меньшей степени плеоморфные. Колонии мелкие, желтые, с неровным краем. На кровяном агаре образуют узкую зону гемолиза. В бульоне дают зернистый осадок. На средах с теллуритом калия колонии более однородно черные, чем колонии дифтерийной палочки. Образуют токсин, имеющий активность
фосфолипазы D, сфингомиелиназы и проникающего фактора. Имеют аналогичное C.diphtheriae строение липидов клеточной стенки, их ДНК подобны на 40%.
C.resistens. Выделение этих микроорганизмов наблюдалось при ряде бактериемий. Колонии светлосерые, отмечается фенотипическая схожесть C.resistens и C.jeikeium, даже в том, что оба микроорганизма медленно растут в анаэробных условиях.
C.reigelii. Первоначально эти микроорганизмы были выделены от женщин с инфекционными процессами урогенитального тракта, позднее - из крови, в том числе из полости сердца. Колонии светло-серые гладкие, блестящие, диаметром 1,5 мм после инкубации в течение 24 часов. Отличительной особенностью этих микроорганизмов является их высокая уреазная активность, проявляющаяся в тесте на уреазу уже через 5 минут после инокуляции в среду культуры, даже при комнатной температуре. Кроме того, среди всех коринебактерий очень замедленная ферментация мальтозы, но не глюкозы, присуща только C.reigelii.
C.simulans. Микроорганизмы этого вида выделяют из абсцессов, лимфатических узлов, фурункулов, крови. Отделенные в свое время от C.striatum, они имеют большое сходство с ними, отличаясь лишь некоторыми биохимическими свойствами и неспособностью расти при 200С.
C.singulare. Бактерии, выделенные в отдельный вид, остаются фенотипически очень похожими на C.minutissimum и C.striatum. Колонии гладкие, блестящие, кремообразные.
C. striatum. Представители этого вида выделяются из носоглотки человека, часто являются нормальными обитателями кожи. Обнаруживаются при маститах коров. Они колонизируют вставные протезы, катетерные наконечники, дыхательные трубки, питательные зонды. Выделены также из урогенитального материала от женщин с преждевременным разрывом околоплодного пузыря, от больных с эндокардитами и бактериемией. На кровяном агаре через 48 часов формирует мелкие блестящие круглые колонии со слабой зоной гемолиза в глубине. Некоторые штаммы продуцируют зеленоватожелтый пигмент, диффундирующий в среду. В микроскопических препаратах - палочки кокковидной формы (0,25-0,5 х 2-3 мкм) с небольшим количеством волюти-на.
C.sundsvallense. Впервые эти микроорганизмы выделены из крови больного, затем их выделяли из влагалища, из промывных вод при дренаже синуса. Колонии светло-желтые, адгезированные к поверхности пита-
тельной среды, липкой консистенции. При микроскопии палочки имеют на концах выступы и закругления, отличающие их от всех других коринебактерий.
СЛИотззепп. Эти бактерии были выделены из плеврального выпота у больного с экссудативным плевритом. Они выделяются также из окружающей среды.
Таблица 1
Основные биохимические свойства возбудителя дифтерии и других патогенных и часто встречающихся коринебактерий
Тесты Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium
gravis mitis inter- medius belfanti ulcerans pseudotuber- culosis xerosis pseudodiph- theriticum
Ферментация:
глюкозы + + + + + + + -
мальтозы + + + + + + + -
сахарозы - - - - - - + --
крахмала + - - - +( - 5%) - -
Активность ферментов:
уреазы - - - - + + - +
цистиназы + + + + + + - -
нитратредуктазы + + + - - -(+1%) + +
пиразинамидазы - - - - - + +
Другие характеристики Точечн. колонии, ß-глюкуронидаза+ Многие штаммы продуцир. серочерн. пигмент + а з о т к у р © н и з о р Фруктоза +, анаэробный рост+ Крахмал + л а § X а р Крахмал - Прилипание к агару | т н е § иг n. >s ы т л е * а-глюкозидаза+, рост от 20 до 42оС + а з а д и н о р у к ю лг -ß Тирозин - Фруктоза -, анаэробный рост - Желтый пигмент Кнутовидные при микроскопии + н и з о р
САМР тест - > > ■ ci Н ■ d Н Ci Н + - - + ' - - - - - - ci Н + + - - - - - -
Продукция кислоты из кси- ло- зы - - ■ ■ ■ ■ - - - - - ' ' - - - - - - - > - - - - - - -
и- а нл ао § ^ > - ■ ■ ■ ■ - - - - - ' ' - - - - > - - - - - - - > - >
саха- розы > ' ■ > ■ ■ + + ' ' + > ■ ' ' + + + + ■ + • + + >
маль- тозы - - ■ > + ■ + + - - - ' + > + + + + > + > + > > - - + +
глю- козы + ' ■ + + + + + + + T + + + + + + Hh + + + + + • + + +
Алка- лин- фосфа- таза - + + + + > - + + + + + ' + - - - - + + > + + - + + - +
а а- - а s я с™ ^ > + + + + + - + + - + + + + - - - + Hh + + + + + - + +
Гидро- лизэс- кулина - ■ ■ ■ ■ ■ - > - - ' ' ' - - - - > - - > - - + - - > -
Уреаза - ■ ■ > + ■ - - - - ' ' + - - - - > Hh - > - - - - - - -
Нитрат- редук- таза + ■ ■ > ■ ■ - - - - + ' > > + + + + - > > - - - - + + -
0-û£ с + ■ + ■ + ■ - - - + ' ' + + - + - - - - - - + + + + - -
Фермен- тация/ окис- ление © О о © © © © © о © © © © © © © © © © © © © О © о © © ©
Виды Corynebac- teriurn и с CD О о о о О и I ё ^ Й CD ~ Є . <и iS и С - F є g •! Є 3 S о £ <3 О ■6 с CD ex a о О g ■S с CD <3 С Ü £ Є 3 KJ t <з U є 3 и y u 3 .g 3 <3 о .¡¡о 3 <3 ü и s y ■O ü є 3 to 5 с y и <и 1 KJ и 1 CDC group F-1 | CDC group G C.diphtheniae biotipe gnavis e as ’С 3 с ? "S.o-Si US-S C.diphtheniae biotipe mitis and belfanti m з з .d C ni e ls a.f C & § C О n О * ц g ti и s n ta .imi C. m 3 Д! C. C.Croppens- iedtii о hi pm ° § Ü t§ inl gi о a .m C. ot h о з at .m C •р Є.Є C si
Колонии появляются на чашках через 48 часов и составляют менее 0,5 мм в диаметре. Через 96 часов колонии становятся липкими и адгезируются к поверхности питательной среды.
СЛиЬегси1о$1еапсит. Микроорганизмы отделены от вида С.pseudogenitalium. Имеют некоторые биохимические особенности, хотя в целом трудно дифференцируемы от других коринебактерий в рутинной практике.
СЛшсатае. Представители этого вида впервые выделены из крови больного с эндокардитом. СЛтсатае не могут расти в анаэробных условиях, что отличает их от фенотипически очень похожего вида С. ттиЫ$$Шит. Колонии круглые, ровные, диаметром 1-2 мм через 24 часа инкубации на агаре с кровью.
С. и1сегат. Эти бактерии, как и C.pseudotuberculosis,
имеют тесные филогенетические связи с C.diphtheriae. Они также могут иметь tox-ген. C.ulcerans - патоген крупного рогатого скота. Выделены при остром мастите коров и обезьян, из дыхательных путей лошадей, обезьян как здоровых, так и больных респираторными заболеваниями. У людей обычно вызывают респираторные поражения. Известны случаи, когда вид вызывал у человека фарингиты, при которых поражения глотки напоминали дифтеритическое воспаление. Связаны с ангинами, тонзиллитами, кожными поражениями. Контаминируют молочные продукты и тару для их перевозки. Имеются данные о заражении при употреблении сырого молока, а также от больного животного. На кровяно-теллуритовых средах через сутки вырастают в виде колоний, похожих на C.diphtheriae вариант gravis. В
» ■£= о а
^ OÙ
и -о
^OS
rfCLCÛ
ci£0
5j5^
^ïy
gg '§§ cl ш ^ s • i£ i£
M
CL S
^ Й С О С CL
«
К
«
s
sí
s
Si
к
s
Si
к
s
*
к
s
Si
1 Í A
т. О
микроскопических препаратах - мелкие овоиды и коккоподобные палочки.
С.игеа1уНсит. Вызывают преимущественно заболевания мочеполовой системы, в том числе - пиелонефриты и пиелоуретриты. Вместе с этим, они часто обусловливают развитие бактериемий, эндокардитов, остеомиелитов, раневых и кожных инфекций. Колонии выпуклые, гладкие, блестящие, светло-серого цвета,
диаметром 1-2 мм, растут только в аэробных условиях.
C.xerosis. Нормальный обитатель кожи и слизистых оболочек человека. Микроорганизм этого вида впервые изолирован из материала, взятого из слезного канала. У человека в редких случаях является причиной вялотекущего конъюнктивита, эндокардита и пневмонии, раневой инфекции, особенно у больных с сопутствующими заболеваниями или получавшими кортикостероиды. Микроорганизмы морфологически сходны с C.diphtheriae, но палочки несколько короче и толще, бочкообразной формы. Слабополихромны, при окрашивании наблюдается поперечная исчерченность. Метахроматические гранулы немногочисленны и выявляются не всегда отчетливо. Факультативные анаэробы. Хорошо растут при 220С и 370, образуя через 24 часа на агаре с кровью мелкие, круглые, гладкие или шероховатые колонии, на теллуритовых средах колонии выпуклые, влажные, серого или коричневого цвета, на среде Бучина - бесцветные. На коже человека обитают липофильные штаммы, которые для своего роста нуждаются в липидах (обычно в Твине-80).
Материалом для микробиологического исследования могут служить: соскобы и слизь с пораженных участков кожи и слизистых оболочек, отделяемое раневой поверхности, кровь, молоко, сперма.
Подробное описание лабораторной диагностики при дифтерийной инфекции приведены в соответствующих руководствах: методических указаниях МУ 4.2.698-98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (1998 г.), руководстве по лабораторной диагностике ВОЗ «Дифтерия» (1994 г., 2009 г.), учебном пособии для врачей «Дифтерия. Лабораторная диагностика» (2009 г.) и др. В связи с этим приводим данные о ключевых моментах лабораторного исследования.
Стандартными средами для выделения кори-небактерий считаются: кровяной агар, кровяной теллуритовый агар, сывороточный агар, среда Тисдаля, среда Бучина. Посев материала производится на любую из указанных сред методом истощающего посева для оценки микробиологической обсемененности (метод Голда) или методом серийных разведений. Инкубировать посевы необходимо при 370С в течение 120 часов, просматривая посевы каждые 24 часа. Посев крови и другого клинического материала производят по Приказу МЗ № 535. Изучение морфологии колоний, микроскопию, отсев изолированных колоний под стереоскопическим микроскопом на сывороточный или кровяной агар для накопления чистой культуры проводят по общепринятым методикам.
Среды для идентификации коринебактерий готовят согласно перечней таблиц для биохимического типирования коринебактерий, а также используют различные тест-системы для внутри-родовой дифференциации коринебактерий: тест-система Api Coryne 20 тестов, учет результатов через 24 часа, производство Франции; тест-система Rosco 6 тестов, учет результатов через 4-24 часа, производство Дании; тест-система ДИФ-КОРИНЕ на 8 тестов, учет результатов через 24 часа, производство НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород, Россия; система индикаторных бумажек СИБ из 4 тестов, учет результатов через 24 часа, производство Нижнего Новгорода, Россия.
ЛИТЕРАТУРА
1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология. - СПб.: Специальная литература, 1998. - 580 с.
2. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. - Н. Новгород: Изд-во НГМА, 1999. - 393 с.
3. Медицинская микробиология / Под ред. В.И.
Покровского, О.К. Поздеева. - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. - 1200 с.
4. Нобл УК. Микробиология кожи человека. -М.: Медицина, 1986. - 302 с.
5. Определитель бактерий Берджи. - В 2-х т. - Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крита и др. - М.: Мир, 1997. - 800 с.
6. Строганов В.П. Нормальная микрофлора - как интерпретировать это понятие // Инфекции и антимикробная терапия. - 1999. - №1. - С.1-4.
7. Koneman E.W., Allen S.D., Janda W.M., et al. Color atlas
and textbook of diagnostic microbiology. - 5 th . ed. - New York: Lippincott, 1977. - 875 p.
8. Harley J., Harley J.P. Microbiology Laboratory Manual. 7-th Edition - U.S.A., 2007. - 2256 p.
Информация об авторах: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира 14, ФГУН НИИЭМ им. Пастера, лаборатория бактериальных инфекций, e-mail: [email protected], Краева Людмила Александровна - ст.н.с., к.м.н.
© САВЧЕНКОВ М.Ф., НИКОЛАЕВА Л.А. - 2011
ЗАГРЯЗНЕНИЕ ПОЧВЕННОГО ПОКРОВА ФТОРИСТЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ
Михаил Федосович Савченков1-2, Людмила Анатольевна Николаева1 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра общей гигиены, зав. - акад. РАМН, д.м.н., проф. М.Ф. Савченков; Центр лабораторной диагностики «Мечников» -зав. Г.Ю. Коган; 2Институт эпидемиологии и микробиологии Научного центра проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН, директор - к.м.н. Д.В. Кулеш)
Резюме. В обзоре обобщена отечественная и иностранная литература гигиенического профиля в сопоставлении с собственными данными по проблеме загрязнения почвы фтористыми соединениями, способности фтора накапливаться в почвах разного состава, содержания в растениях и возможности поступления в организм человека.
Ключевые слова: почва, фтористые соединения, транслокация в растения, накопление фтора в организме человека.
POLLUTION OF THE SOIL COVER BY FLUORIC COMPOUNDS
M.F. Savchenkov1-2, L.A. Nikolaeva1 ('Irkutsk State Medical University; Center of Laboratory Diagnostics “Mechnikov”; 2Institute of Epidemiology and Microbiology of Scientific Center of Problems of Family Health and Human Reproduction SD RAMS)
Summary. In the review the domestic and foreign literature of a hygienic profile in comparison to own data on a problem of pollution of soil by fluoric compounds, ability of fluorine to accumulate in soils of different structure, content in plants and possibilities of getting into a human body have been generalized.
Key words: soil, fluoric compounds, translocation to plants, fluorine accumulation in human body.
Фтор и фториды все шире используются в хозяйственной деятельности человека и поэтому значение проблем охраны окружающей среды и, в частности, почвенного покрова, как депо фтористых соединений, значительно возрастает.
Решение вопроса о степени загрязнения фтором почвенного покрова, особенно в расположении предприятий промышленного получения алюминия, имеет свои особенности. В частности, смешивание почв разных типов и горизонтов для получения единой суммарной пробы может скрывать важную информацию и приводить к ошибочным выводам. Признается предпочтительным раздельный анализ почвы каждого типа и горизонта [28].
Часто определению фторидов в почве предшествуют операции по их превращению в легкорастворимые соединения, причем лабильная фракция имеет большее значение, чем общее содержание фторидов, поскольку эта фракция более доступна для поглощения растениями и животными [27,29]. Содержание фторидов в верхних слоях почвы может возрастать за счет промышленных загрязнений, фосфатных удобрений, отложения газообразных выбросов. Почвы обладают способностью фиксировать фториды, а их снижение происходит за счет выщелачивания и удаления сельскохозяйственными культурами.
Основным путем поступления фтора в организм является его поступление с пищей, таким образом, растения имеют важное значение как переносчики его во всех экосистемах. Фториды поглощаются из почвы путем пассивной диффузии, затем они переносятся в растения за счет транспирации или транслокации. В умеренном климате и большинстве почв количество фторидов, накапливающихся таким путем, зависит от уровня загрязнения фтористыми соединениями окружающей среды. В таких районах поглощение фторидов растениями может быть достаточным для того, чтобы
внести существенный вклад в долю загрязнения организма человека или животных.
Для контроля содержания фтора в почве предложен целый набор методов разной степени чувствительности, доступности и приборного оснащения. Эта работа постоянно совершенствуется, она продолжается до настоящего времени. Известно, что в почвах фтор представлен в основном неорганическими трудно летучими соединениями. Потерь фтора не обнаруживается как при высушивании почв при комнатной температуре, так и при доведении пробы до постоянного веса при температуре выше 1000С. Как объект санитарно-химического исследования почва отличается от других природных объектов сложным составом. Поэтому при анализе почв на содержание фтора на стадии подготовки пробы очень важно устранить мешающие факторы и перевести фтор в растворимое состояние. Выделенные растворимые фтористые соединения анализируются избранным с учетом возможностей химико-аналитической лаборатории методом (например, фотометрическим с использованием различных реагентов или потенциометрическим с помощью фторселективного электрода). Л.А. Хаземова и соавт. (1985) указывают, что проверка метода на стандартных образцах почв показала надежность выделения фторид-иона пирогидролизатом с чувствительным реагентом или фторселективным электродом. Полученный большой статистический массив позволяет рекомендовать этот метод в качестве унифицированного для анализа фтора в почве. В.И. Циприян и соавт. (1986) сообщают, что метод анализа с применением ион-селективных электродов позволяет провести измерение в течение 30 секунд. Для контроля содержания фтора в почве авторами предложена методика потенциометрического определения общего содержания фторидов и водорастворимых (подвижных) его форм с использованием фторселективных электродов. По данным А.Ф. Жукова и соавт. (1980), время установления равновес-
