CC BY
20
длительностей зубцов, интервалов, сегментов, а также амплитуд зубцов лучше проводить по второму стандартному отведению (рис. 4) с учетом выявленных изменений в первом и третьем отведениях. Использование в эксперименте указанных методических подходов и приемов позволяет получить более объективные данные, необходимые для установления 1нтас, Ытсь. сравнения результатов исследований разных авторов и токсикологической оценки кардиотоксического действия ряда химических соединений.
Накопленные данные могут послужить материалом для составления атласа, ЭКГ, отражающих патологию миокарда при поступлении в организм экспериментальных животных соедине-
УДК 613.6 + 613.11-07:
Иммунитет является тонким индикатором влияния окружающей среды на организм независимо от характера воздействующего начала (А. Ф. Стояновский и Т. В. Рассказова; Ап1а1 и соавт.).
О состоянии неспецифнческой резистентности обычно судят по нескольким показателям, к которым относят гормональную активность клеток соединительной ткани и ретикулоэндотелиальной системы (РЭС), фагоцитарную активность макрофагов и лейкоцитов периферической крови, гуморальные факторы защитных реакций, включая иммуноглобулины сыворотки крови, а также уровень низкомолекулярных биологически активных веществ, например кининов (А. И. Пасхи-на). Разработаны более или менее сложные методы изучения этих систем.
Большое значение при этом приобретают контрольные исследования, без которых получаемая информация лишена надежности. Исходными данными могут служить уровни исследуемых показателей в норме у животных или человека. Однако нередко эти уровни колеблются в сравнительно широких пределах под влиянием разнообразных экзогенных и эндогенных факторов. В подобных случаях статистическая обработка материала способствует увеличению надежности сделанных выводов. Тем не менее важно подчеркнуть, что наиболее надежные данные о влиянии отдельных внешних факторов можно получить, сравнивая показатели иммунобиологической ре-
ний, относящихся к определенным химическим классам, что облегчит работу исследователей и будет способствовать более эффективной разработке профилактических мероприятий, необходимых для снижения уровня сердечно-сосудистых заболеваний.
Литература. Принципы и методы экспериментальной оценки действия вредных веществ на сердечно-сосудистую систему с целью гигиенического нормирования. / Трахтен-берг И. М., Тычннин В. А., Верич Г. Е. и др. (Метод, указания). М., 1979. Рощин А. В., Сакоцкий И. В.— В кн.: Принципы и методы установления предельно допустимых концентраций вредных веществ в воздухе производственных помещений. М„ 1970, с. 137—142.
Поступила 17.06.81
активности одного и того же организма в динамике до и после какого-либо воздействия.
Определение фагоцитарной активности лейкоцитов. Фагоцитоз относится к важнейшим факторам защиты организма. Эту функцию выполняют многочисленные клетки РЭС, макро- и микрофаги. Оценить активность макрофагов практически возможно лишь в эксперименте на животных, у которых сравнительно легко получить жизнеспособные макрофаги, например, из брюшно-поло-стного экссудата.
У человека вынести суждение об уровне фагоцитоза возможно на -основании исследования фагоцитарной активности лейкоцитов крови. С помощью фагоцитоза организм освобождается от возбудителей инфекции, многих токсических веществ, продуктов некротического распада тканей. Фагоцитоз играет определенную роль и в процессе выработки специфических антител.
Изменение фагоцитарной активности лейкоцитов под влиянием не только профессиональных вредностей, но и климатических и суточных колебаний выявлено рядом авторов (А. Ф. Стояновский и Т. В. Рассказова; М. Т. Рахимова; М. Л. Красовицкая и соавт.).
Существуют различные модификации определения фагоцитарной активности лейкоцитов и даже различная терминология (О. Г. Алексеева и А. П. Волкова; ВоидЬп и Воиуеп1ге; 51гоззе1). Однако суть всех методов состоит в том, что в
Обзоры
612.017.1
В. Я. Голиков, Л. А. Тараненко
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ГИГИЕНЕ
ЦОЛИУВ, Москва
пробирку с цитратной кровью добавляют взвесь микробов, выдерживают определенное время в термостате, затем готовят из этой взвеси мазки, фиксируют их и окрашивают. После этого подсчитывают фагоцитарное число — среднее число микробов, поглощенных одним нейтрофилом. ^ Вычисляют фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на общее число подсчитанных нейтрофилов. Абсолютный фагоцитарный показатель отражает общее количество микробов, фагоцитируемых нейтрофилами, содержащихся в 1 мм3 крови.
Но поскольку только захват микробов лейкоцитами еще не отражает полностью иммунного состояния лейкоцитов, важно определить и завершенность фагоцитоза. Метод исследования завершенности фагоцитоза предложили Б. М. Бер-ман и Е. М. Славская, которые использовали в качестве критерия жизнеспособности микробов, захваченных лейкоцитами, наличие или отсутствие у них способности к росту. Степень завершенности фагоцитоза оценивается по так называемому показателю завершенного фагоцитоза — количеству клеток с завершенным фагоцитозом на 100 * фагоцитирующих сегментоядерных нейтрофилов. Как и захватывающая способность, степень завершенности фагоцитоза заметно понижается под влиянием неблагоприятных факторов (А. Б. Жеб-рун и А. И. Пюрецкий).
Было замечено, что иногда угнетение одной фазы фагоцитоза компенсируется активацией его другой фазы, как это наблюдалось у рабочих цеха стекловолокна, у которых переваривающая функция нейтрофилов ослаблялась при увеличении их поглотительной способности (А. Т. Си-денко и В. П. Жигалко).
Определение титра опсонинов в сыворотке крови. Фагоцитоз зависит не только от активности фагоцитов, но и от особых белков сыворотки крови, называемых опсонинами. Бактериальные клетки при контакте с опсонинами легче захватываются и интенсивнее перевариваются фагоцитами. Поэтому исследование титра опсонинов представляет значительный интерес.
Для определения опсонинов в исследуемой сыворотке ею обрабатывают взвесь суточной культуры микробов, например Е. coli, в течение 20 мин при температуре 37°С. Затем микробные клетки отделяют от сыворотки и ставят с ними реакцию фагоцитоза, добавляя их в кровь здорового животного. Подсчет результатов проводится по традиционному методу.
Определяя опсоническую активность сыворотки крови, можно отдифференцировать состояние фагоцитарной активности клеток от состояния гуморальных факторов фагоцитоза (Twith). Этот метод имеет и то преимущество, что не обязательно определять фагоцитарную активность непосредственно после взятия крови у человека или животного, так как сыворотку крови можно хранить в холодильнике 1—2 сут, при этом ее опсо-
ническая активность не снижается. Данный метод позволяет транспортировать сыворотку крови, а также одновременно исследовать пробы, взятые до, во время и после какого-либо воздействия, что уменьшает погрешность определения.
Фагоцитарная активность РЭС. Функцию фагоцитоза выполняют и клетки РЭС. Для ее изучения предложен ряд методов. Одним из доступных методов функционального исследования фагоцитарной активности клеток РЭС является проба с конго красным (конгорот) или другим индифферентным красителем. Она основана на определении скорости захвата краски клетками РЭС, т. е. уменьшения концентрации в крови краски, введенной внутривенно. Процентное отношение исходной величины конго красного в крови к его концентрации через 1 ч после введения называется конгорот-индексом. О фагоцитарной активности клеток РЭС можно судить и по снижению количества микробных клеток, введенных животным внутривенно. Однако этот метод не свободен от погрешностей, связанных с возможностью антимикробного действия и других факторов. При высоком уровне активности клеток РЭС индекс будет низким, а при пониженной активности — высоким. Следует отметить, что многократное применение конго красного с интервалом в 1 день вызывает стимуляцию фагоцитоза, а при промежутках в 3—5 дней фагоцитоз вначале активируется, а затем долгое время держится на повышенном уровне. Конгорот-индекс не меняется при соблюдении 7-дневного интервала. Его уровень в норме у кроликов в среднем равен 36—40 %.
Определение щелочной и кислой фосфатазы в лейкоцитах. Поскольку фагоцитарная активность нейтрофилов и особенно завершенность фагоцитоза связаны с активностью их энзима-тических систем, об уровне активности лейкоцитов можно судить косвенно по состоянию их ферментов, в частности щелочной и кислой фосфатазы. Как известно, большинство поглощенных частиц распадается внутри фагоцита. Во время фагоцитоза увеличивается высвобождение гидролитических энзимов из гранул цитоплазмы поли-морфноядерных лейкоцитов. Сюда относятся фос-фомоноэстеразы — кислая и щелочная фосфата-за. Рост активности щелочной фосфатазы нейтрофилов не только указывает на изменение их функциональной способности, но и помогает судить об иммунологической реактивности организма.
Преобладание активности кислой фосфатазы в лейкоцитах расценивается как выражение участия клеток крови в аллергических процессах и является косвенным показателем сниженной реактивности организма при заболеваниях аллергической природы, вызванных как инфекционным агентом, так и рядом химических веществ. Наибольшее распространение получил метод Goldberg и Barka. Определение кислой и щелочной
фосфатазы очень удобно, так как требует совсем небольшого количества крови; готовятся фиксированные п окрашенные мазки, что позволяет сохранять препараты и облегчает учет результатов. Имея два мазка от одного индивида и окрасив один мазок для определения щелочной фосфатазы в нейтрофнлах, другой — кислой фосфатазы, можно получить информацию не только о состоянии неспецифической реактивности, но и о том, не связано ли снижение реактивности с аллергической перестройкой организма.
Установлено, что при бернллиозе активность щелочной фосфатазы понижалась, а кислой — повышалась (Л. А. Иванова и соавт.).
Определение лизоцима. Содержание лнзоцима в слюне и сыворотке крови рассматривается как один из важных показателей иммунологической реактивности организма.
Исследование содержания лизоцима в жидкостях организма основано на его способности лизи-ровать клетки (М. ^осЫкисиэ). Под влиянием лнзоцима мутная взвесь микробов в фосфатном буфере становится более прозрачной. Существует ряд методов изучения содержания лизоцима в жидкостях организма (К. А. Каграманова). Наименее трудоемким среди них является определение изменения мутности бактериальной взвеси с помощью фотоэлектроколориметра (В. Г. До-рофейчук). Содержание лизоцима выражают в мнкрограммах на 1 мм жидкости на основании сравнения с калибровочной кривой, а в некоторых случаях — в процентах по отношению к контрольной пробе (из нормального организма) или к пробе того же организма, взятой перед исследуемым воздействием.
Многие авторы отмечают зависимость титров лизоцима в биологических средах организма от воздействия неблагоприятных факторов производства (М. Т. Рахимова и В. И. Тихонова).
Бактерицидная активность сыворотки крови и кожных покровов. Одним из важных звеньев системы естественного иммунитета организма является бактерицидная активность сыворотки крови. Бактерицидное действие сыворотки связано с содержанием в ней комплемента, лизоцима, р-лизина и антител — бактериолизинов. Наиболее распространенный метод — определение суммарной бактерицидной активности по методу Уорд-лова — Пиллерова в модификации Каго1сек и ОсЛег. Бактерицидную активность сыворотки крови выражают индексом, который является логарифмом частного от деления числа колоний на контрольной чашке на число колоний, выросших на чашках с сывороткой крови обследуемых людей или животных.
По данным И. М. Трахтенберга, бактерицидные свойства сыворотки крови являются весьма чувствительным показателем влияния низких концентраций факторов внешней среды на организм.
Известно, что кожа и слизистые оболочки животных тоже могут оказывать бактерицидное дей-
ствие, которое используется для оценки иммунологической реактивности организма (Н. Н. Клем-парская и Г. Л. Шальнова). И хотя количество аутофлоры кожи может меняться в зависимости от времени суток, психоэмоционального состояния, степени подвижности человека и изменения состава загрязнений воздуха, в здоровом организ- + ме она отличается постоянством качественного (видового) и количественного состава микробов (М. Э. Мнкельсаар и др.). Внешние факторы, не изменяя суммарного количества аутофлоры, вызывают сдвиги в ее составе. Патогенные кокки чаще высевались со слизистых оболочек верхних дыхательных путей и носа у рабочих, подверженных воздействию различных неблагоприятных факторов (А. С. Крылов).
Титр комплемента. Термолабильная система комплемента, согласно современным данным, представляет собой комплекс из 8 или 9 сывороточных глобулинов, продуцируемых макрофагами печени, селезенки, костного мозга, и стволовыми клетками тонкого кишечника.
Сочетание комплекса антиген — антитело с комплементом отличается способностью нарушать целостность оболочки клетки. Если дей- * ствие комплемента направлено на бактериальную клетку, то в комплексе с бактериальными антителами он вызывает ее гибель (лизис). Если же привести его в соприкосновение с эритроцитами барана, то он разрушает оболочку последних (гемолиз). Содержание комплемента в сыворотке крови можно определять различными метода- j ми, в частности по гемолизу эритроцитов, так ! как степень гемолиза пропорциональна содер- ! жанию комплемента. Поэтому удобно использовать хорошо разработанный гемолитический метод определения титра комплемента (А. Г. Ла-бинская; Anderson и McCarty).
Различные факторы окружающей среды оказывают значительное влияние на активность комплемента сыворотки крови, причем снижение титра комплемента связано не только с ослаблением защитных функций организма, но и с нарастанием степени его аллергизации (А. Н. Плакснна и А. И. Плаксин). Комплемент является одним из важных показателей неспецифическон резистентности организма (Painter и соавт.).
Так при обследовании 27 детей в возрасте 7— 8 лет мы использовали следующие показатели: бактерицидную активность сыворотки крови, содержание лизоцима в слюне, уровень щелочной фосфатазы в лейкоцитах. Обследование проводили в одно и то же время. По нашим наблюдениям, у детей, проживающих в зеленой зоне, эти показатели были выше, чем у детей, живущих в промышленной зоне. У первых индекс бактери-цидности был равен 4,2±0,4, количество лизоцима— 47,8±5,2 мкг/мл, активность щелочной фосфатазы — 80,9±17,7, в то время как у вторых эти показатели составили 1,5±1,0 и 25±6,2 мкг/мл, 49,35±6,2 соответственно. Таким образом, все
три реакции дали аналогичные результаты и указали на достоверную разницу в сопротивляемости организма у детей, проживающих в зеленой и промышленной зонах.
Уровень лизоцима в сыворотке крови, активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах, бактерицидной активности сыворотки крови, фагоци-V тоз были использованы нами в экспериментальной работе по выявлению влияния некоторых пищевых красителей на состояние реактивности организма. Отмечено угнетение показателей иммунитета у животных, получавших тартразин, причем метод определения активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах обладал более высокой «разрешающей способностью» по сравнению с другими использованными методами и позволил на более ранних стадиях выявить изменения в иммунологическом статусе в ответ на действие низких концентраций тартразина (И. А. Карп-люк и Л. А. Тараненко).
Щелочная фосфатаза не выявляется в лейкоцитах крови мышей. Поэтому в эксперименте на мышах, в котором изучалось комбинированное воздействие озона и облучения, т. е. химических * и радиационных факторов, в качестве показателей неспецифнческой резистентности мы определяли уровень лизоцима в сыворотке крови, р-ли-зннов и опсоническую активность. Было показано, что в группе животных, которых облучали через 1 ч после ингаляции озоном, показатели иммунитета были значительно ниже, чем у мышей, которых облучали через 24 ч, а также в группах животных, получавших ингаляции озона через 1 и 24 ч после облучения. Как и следовало ожидать, у тех животных, у которых показатели резистентности на протяжении всего эксперимента были выше, оказалась большей и выживаемость (Л. А. Тараненко и соавт.).
Таким образом, в настоящее время накоплено достаточно сведений, свидетельствующих о том, что показатели иммунологической реактивности являются весьма чувствительным критерием при оценке влияния на организм факторов окружающей среды. Это указывает на то, что иммунологические методы следует более широко применять в гигиенических исследованиях.
Литература. Алексеева О. Г.. Волкова А. П.— Гиг. и
сан., 1966, № 8, с. 70—74.
Берман Б. М., Славская Е. М. —Микробиология, 1958, № 3, с. 8—13.
Дорофейчук В. Г. — Лабор. дело, 1968, № 3, с. 28—30.
Жебрун А. Б.. Пюрецкий А. И. — В кн.: Проблемы аутоал-лергии в практической медицине. Таллин, 1975, с. 295—296.
Иванова Л. А., Никитина Л. С., Соколов В. В. — Гиг. труда, 1977, № 8, с. 31—34.
Каграманова К. А. — В кн.: Антибиотики, бактериальные полисахариды, интерферон. М., 1968, с. 197—202.
Карплюк И. А., Тараненко Л. А. — В кн.: Морфофункцио-нальные закономерности неспецнфнческнх защитных реакций организма. М., 1980, с. 64—67.
Коротько Г. Ф„ Веприцкая Э. А.. Курзанов А. Н. и др.— В кн.: Механизмы повреждения, резистентности, адаптации и компенсации. Ташкент, 1976, вып. 2, с. 38—39.
Клемпарская Н. Н„ ШальНова Г. Л. — Аутофлора, как индикатор радиационного поражения организма. М., 1966, с. 15—36.
Крылов А. С. — В кн.: Гигиена труда в химической промышленности. Волгоград, 1975, с. 45—46.
Красовицкая М. Л., Балинская А. А. и др. — В кн.: Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Омск, 1976, вып. 4, с. 21—22.
Лабинская А. Г. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., 1972, с. 192—197.
Микельсаар М. Э., Ленцнер А. А., Гольянова Л. А. — Лабор. дело, 1972, № 1, с. 41—45.
Плаксина А. Н„ Плаксин А. И. — Антибиотики, 1977, № 4, с. 340—344.
Рахимова М. Т. — Гиг. труда, 1977, № 10, с. 29—31.
Рахимова М. Т., Тихонова В. И. — В кн.: Биологическая роль лизоцима и его лечебное применение. Караганда, 1972, с. 171—173.
Сиденко А. Т., Жигалко В. П. — В кн.: Гигиена труда и охрана здоровья населения. Минск, 1974, с. 43—47.
Стояновский А. Ф., Рассказова Т. В. Влияние внешних условий на иммунобиологическую реактивность организма. Киев, 1966.
Тараненко Л. А., Буштуева К. А. — Гнг. и сан., 1977, № 2, с. 54—55.
Тараненко Л. А., Карклинская О. Н., Муратова Н. 3. — Мед. реф. ж. XI, 1980. № 10, с. 3048.
Трахтенбегр И. М. — В кн.: Конференция, посвящ. 80-летию со дня рождения А. А. Богомольца. Рефераты докладов. Киев, 1961, с. 232—235.
Anderson H. С., McCarty M. —Am. J. Med., 1950, v. 8, p. 445—448.
Antal A., Balasoin J. et al. — Rev. Hyg. Med. scol., 1974, v. 27, p. 46—47.
Boughn £., Bouventre F. — Infect, a. Immun., 1975, v. 12, p. 346—349.
Goldberg A., Barka T. — Nature, 1965, v. 195, p. 297—299.
Karoliek J., Odler J. —С si. Epidem., 1959. v. 8, p. 105— 106.
Painter R. H. et al. — Immunol. Commun., 1974, v. 3, p. 19—34.
Strossel T. — New Engl. J. Med., 1974, v. 290, p. 717—723.
Turth R. V,— Clin. Immunol. Immunopath., 1976, v. 6, p. 123—128.
Поступила 20 01.82
УДК 614.7-073:621.375.826
В. А. Кашуба, М. А. Матяшова
ПРИМЕНЕНИЕ ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЯХ
Московский медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко
В материалах XXVI съезда КПСС огромное внимание уделено охране окружающей среды. Для решения этой проблемы, по мнению акад. АМН СССР Г. И. Сидоренко, необходимо разра-
батывать и совершенствовать арсенал современных методов определения химических и биологических загрязнений атмосферы, водных объектов, почвы, пищевых продуктов.
