CC BY
53
3. Г. ВАСИЛЬКОВА (Москва)
Методы гельминтологического исследования
воды и почвы
Из Центрального института малярии и медицинской паразитологии (дир.— проф. П. Г. Сергиев)
В настоящее время во многих институтах коммунальной санитарии и гигиены, санигарно-бактериологических институтах, на кафедрах гигиены при медицинских институтах изучается загрязнение и самоочищение почвы и водоемов, но планы этих работ не предусматривают гельминтологических исследований почвы и воды, что было констатировано на научно-методической сессии Центрального научно-исследовательского института коммунальной санитарии в Москве 22.III.1940 г. Между тем наличие яиц гельминтов в почве и воде свидетельствует не только о загрязнении последних фекалиями, но и о возможности заражения некоторыми гельминтозами: при контакте с загрязненной почвой, при употреблении в пищу сырой неводопроводной воды, сырых немытых и нечищенных овощей и ягод, политых водой, содержащей яйца гельминтов, при купании в водоемах, загрязненных этими яйцами,— человек может заразиться аскаридозом, трихоцефалезом, а также гименолепидозом, энтеробиозом, эхи-нококкозом, цистицеркозом.
Загрязнение почвы личинками гельминтов имеет особенно большое значение в эпидемиологии анкилостомидозов и трихостронги-лоидозов. В эпидемиологии биогельминтозов необходимо учитывать возможность заражения почвы и воды яйцами гельминтов, так как яйца некоторых глистов (например, свиного и бычьего цепеней) могут попасть с загрязненной пищей в промежуточных хозяев ' и вызвать их заражение личинками гельминтов. Отсюда ясно, что как для санитарной оценки почвы и воды, так и для проведения соответствующих профилактических мероприятий необходимо, чтобы наравне с физико-химическими и бактериологическими анализами проводилось и гельминтологическое исследование почвы и воды.
В некоторых случаях нахождение яиц гельминтов служит более верным показателем загрязнения почвы и воды фекалиями, чем ко-ли-титр; дело в том, что В. coli менее устойчивы к воздействию различных химических и физических факторов, чем яйца гельминтов, которые поэтому дольше сохраняются в почве и воде. Кроме того, яйца глистов являются прямым показателем загрязнения почвы и воды фекалиями человека,. чего нельзя сказать про В. coli. Поэтому надо широко ознакомить санитарных работников с методами гельминтологического исследования почвы и воды.
Исследование воды. Порция воды пропускается через предварительные фильтры в воронке Зейтца или Гольдмана с вакуумом. При отсутствии мембранных и планктонных фильтров и водоструйного насоса вода фильтруется через фильтровальную бумагу в воронке Гольдмана или в обычной стеклянной воронке. Если получается большой осадок, то для ускорения фильтрации надо возможно чаще менять фильтры.
Фильтры с осадком помещаются на стекло и подвергаются микроскопическому исследованию во влажном состоянии или после высу-
1 Промежуточными хозяевами являются животные, в организме которых живут личинки глистов.
шивания на воздухе и просветления в кедроле, касторовом масле или глицерине. Для большего просветления кусочки разрезанных предварительно фильтров оставляют в масле (под покровным стеклом) на сутки. Если образовался большой осадок ила, его надо соскоблить с расправленново влажного фильтра ребром покровного стекла и исследовать отдельно в виде негустых мазков в капле 50% раствора глицерина. После соскабливания осадка фильтры высушиваются, просветляются и подвергаются микроскопированию.
При исследовании воды в больших водоемах (например, реки, пруды) рекомендуется фильтровать воду через двойной слой белого (или цветного, но светлого) сатина, вставленного в планктонную сетку. В дно планктонной сетки (приготовленной тоже из сатина) вставляется широкая стеклянная трубка, на отогнутые наружные края которой прикрепляется резиновым кольцом двойной сатиновый фильтр. При движении сетки в поверхностных слоях водоема (за лодкой) вода фильтруется через сатиновый фильтр.
Вода из мелких стоячих водоемов (канавы, пруды), удаленных от лаборатории, должна фильтроваться на месте через двойной сатиновый фильтр, укрепленный резиновым кольцом на наружном крае металлической воронки, вставленной в штатив.
Исследование осадка на сатиновом фильтре производится таким образом:
1. Если осадок негустой, то влажный фильтр (целиком или предварительно разрезанный на кусочки) расправляется на предметном стекле и исследуется под микроскопом либо высушивается, просветляется и просматривается, как указано выше. Исследовать надо обязательно оба слоя сатинового фильтра.
2. Если осадок густой, то фильтр помещается в кювету, тщательно расправляется в ней и заливается насыщенным раствором азотнокислого натрия (селитры). Затем осадок тщательно соскабливается предметным стеклом или металлическим шпателем, смесь осадка с раствором селитры переливается в чайные стаканы, оставляется в покое на час, после чего исследуются препараты с поверхности смеси и со дна ее. Влажный фильтр после соскабливания с него осадка исследуется под микроскопом.
Исследование почвы. Гельминтологическому исследованию подвергается почва, собранная с мест, наиболее подозрительных на загрязнение яйцами и личинками гельминтов: вокруг уборных, скотных дворов, жилых помещений, с огородов, удобренных фекалиями, с полей ассенизации и орошения (особенно с участков, на которых культивируются овощи, употребляемые в пищу в сыром виде), а также около колодцев и других источников водоснабжения.
Пробы почвы берут из разных мест обследуемого участка (как с поверхности, так и на глубине 1—3 см) в количестве не менее 200 г с 1 м2, с каждого участка отдельным шпателем в отдельную посуду. Если пробу земли нельзя исследовать в тот день, когда она была взята, ее фиксируют прибавлением равного объема 1°/о раствора формалина в физиологическом растворе поваренной соли. Для обнаружения в почве личинок гельминтов применяется аппарат Бермана.
Качественный гельминтологический анализ почвы производится модифицированным Васильковой и Гнединой методом Спиндлера. Собранная земля растирается в ступке пестиком и небольшими порциями по 5—10 г обрабатывается в чайном стакане равным количеством 30°/о раствора антиформина в течение часа при частом помешивании. Затем добавляется 100 см3 насыщенного раствора азотнокислого натрия — селитры (удельный вес 1,4), жидкость тщательно смешивается стеклянной палочкой и тотчас же фильтруется в чистый стакан через металлическое сито при частом помешивании. Диаметр
ячеек сита 0,6 X 0,6 мм. Смесь оставляется в покое на 1 час, после чего с поверхности ее снимается металлической петлей (диаметром не больше 1 см) пленка, переносится на предметное стекло, покрывается покровным и подвергается микроскопическому исследованию. Из каждого стакана надо снять не менее 10 петель из разных мест. Смесь снова перемешивают и через час опять снимают пленку. Так повторяют три раза. После последнего снятия пленки раствор сливают с осадка, а 2—3 капли его исследуют под микроскопом.
Исследование почвы на личинки гельминтов по методу Бермана. 200—400 г размельченной почвы размещают равномерно на одном слое марли, положенном на металлическое сито. Затем берут стеклянную воронку, на узкий конец которой надета резиновая трубка с зажимом, и наполняют ее водой, подогретой до 45°. Сито с землей вставляют в воронку так, чтобы нижняя поверхность его не доходила до воды на 3—4 см. В таком виде аппарат оставляют на полчаса, после чего дополняют воронку подогретой водой настолько, чтобы уровень жидкости был выше почвы, помещенной на сите. Заряженный таким образом аппарат оставляют на 4—20 часов. Личинки в силу своей термотропности мигрируют через сито в воду. Для обнаружения личинок выпускают из воронки 50 см3 воды. Личинки отыскиваются под микроскопом в препаратах из осадка, полученного после центрифугирования этой воды.
Помимо определения степени загрязнения почвы и воды яйцами глистов, необходимо также определять стадии развития яиц и жизнеспособность их, ибо очень часто яйца во внешней среде погибают и не могут заразить человека.
Жизнеспособность яиц определяется как по внешнему виду, так и по способности их к дальнейшему развитию. Погибшие яйца имеют разрушенную оболочку или резко измененную плазму (ввиду жировых вакуолей). Жизнеспособность внешне неизмененных яиц устанавливается по способности их развиваться в культурах. Препараты с яйцами, обнаруженными при микроскопическом исследовании, помещаются во влажную камеру с температурой в 24° для аскарид и анкилостоматид, в 30° — для яиц власоглавов и 37° — для яиц остриц; развитие яиц ежедневно контролируется под микроскопом. Яйца, собранные по методу Спиндлера, отмываются от раствора соли двукратным центрифугированием-их с водой, помещаются в 1°/о растворе соляной кислоты (для яиц власоглавов) или в растворе Бар-багалло (3 см3 формалина на 100 см3 физиологического раствора поваренной соли — для яиц других гельминтов) в часовых стеклах и ставятся во влажную камеру при указанной выше температуре.
Жизнеспособность яиц с уже развившимися в них личинками определяется подвижностью последних при легком подогревании препарата.
