CC BY
158
Методические положения
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ И ПРОФИЛАКТИКЕ ПАРАЗИТОЗОВ РЕДКИХ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ ЗООПАРКОВ И ЦИРКОВ
В.Е. ПАСЕЧНИК кандидат ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им.
К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б.Черёмушкинская, 28, e-mail: visis@,ncport. ru (одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии 22 марта 2012 г., протокол № 1)
Введение. В зоопарках и цирках Российской Федерации паразитарные болезни животных, в частности гельминтозы, имеют очень широкое распространение. По собственным и литературным данным среди болезней млекопитающих они занимают лидирующее положение. Паразиты оказывают патогенное действие на организм животных и могут вызвать падеж.
В связи с этим нами разработаны Методические положения по диагностике и профилактике паразитозов животных в условиях зоопарков и цирков.
Методы прижизненной и посмертной диагностики паразитозоонозов. Прижизненная диагностика паразитозов включает в себя следующие методы:
Гельминтоскопия. Метод основан на принципе выявления имагиналь-ных или юных гельминтов, их фрагментов, члеников цестод, фрагментов стробил в испражнениях, содержимом конъюнктивальных полостей.
Уриноскопия. Метод основан на исследовании мочи больных животных при подозрении на гельминтов, паразитирующих в органах мочевой и половой системы: диоктофимы, капиллярии, ориентобильхарции.
Рекомендуем следующий способ. Мочу разбавляют водой в соотношении 1:1 и центрифугируют 2-3 мин при частоте вращения 1000-1500 об ./минуту. Затем жидкость сливают, а осадок помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом под малым и большим увеличением с целью обнаружения яиц диоктофим и капиллярий.
Биопсия. Биопсию кожи проводят с целью обнаружения микроонхоцер-ков у крупных парнокопытных и однокопытных, при кожном габронемозе и драшейозе у однокопытных.
Метод М.П. Гнединой. Рекомендуем при онхоцеркозе зоопарковых и цирковых крупных парнокопытных. На небольшом участке кожи выстригают волосы, участок протирают дезинфицирующим раствором, захватывают его пинцетом и ножницами Купера срезают кусочек верхней части кожи размером с небольшую горошину. Место среза смазывают настойкой йода. Пробу кладут на предметное стекло в капли физиологического раствора, иголками расщепляют на мелкие волокна и оставляют на 5-10 мин. Волокна удаляют, капли микроскопируют. В свежеприготовленном препарате хорошо видны движущиеся микроонхоцерки.
Метод Р.С. Чеботарёва. Рекомендуем при онхоцеркозе зоопарковых и цирковых лошадей. В области холки, плеча или передней конечности выбривают шерсть, кожу дезинфицируют. Выбритый участок берут в складку и срезают бритвой или ножницами кусочек кожи толщиной 3-4 мм и площадью 15-30 мм2. Кусочек помещают в пробирку с 2-3 мл физиологического раствора или смеси физиологического раствора с сывороткой крови лошади в равных частях. Пробирку оставляют на несколько часов при комнатной температуре или ставят в термостат при 35-37 °С. Затем кусочки кожи удаляют, а жидкость наносят на предметное стекло и микроскопируют.
Г ематоскопия. Исследования крови проводят с целью обнаружения фи-ляриатозов (личинок гельминтов, паразитирующих в кровеносной системе) у
125
зоопарковых и цирковых: сетариоза у парнокопытных, однокопытных, дипе-талонемоза у верблюдов, дирофиляриоза у хищных. При исследовании на сетариоз кровь берут рано утром или ночью: концентрация микросетарий в это время выше.
Методы иммунодиагностики. Исследования методами иммунодиагностики тканевых гельминтов основаны на выявлении и определении количества циркулирующих в организме заражённых животных антител. Антитела выявляют методами иммунопреципитации (иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез), непрямой иммуноагглютинации (латекс- и гемагглютинация), преципитации с использованием меченых ингредиентов (иммунофлуоресценция, иммуноэнзимный, радиоиммунный тесты). Циркулирующие антигены выявляют радиоиммунным и иммуноэнзимным тестами. Следует заметить, что от качества используемых в иммунодиагностике антигенов (чистоты, активности, специфичности) во многом зависит эффективность (чувствительность и специфичность) иммунологических реакций. В настоящее время все эти методы используются как вспомогательные при диагностике паразитарных зоонозов сельскохозяйственных животных.
Основные методы копроскопии: гельминтоово- и ларвоскопии. Ко-проскопия - совокупность методов взятия, обработки и исследования проб фекалий животных и человека с целью обнаружения в них яиц, личинок, гельминтов, их фрагментов (членики, отрезки), цист простейших и постановки диагноза. Из предложенных методов исследования заслуживает внимания метод флотации и его модификации. Метод основан на принципе флотации яиц и личинок гельминтов, цист простейших в поверхностный слой взвеси при обработке пробы растворами солей или других веществ, плотность которых выше, чем удельный вес яиц, личинок, ооцист паразита.
Приготовление флотационных растворов:
Раствор нитрата свинца (азотнокислого свинца). Готовят раствор с плотностью 1,5. 650 г соли растворяют в 1 л горячей воды в эмалированном ведре порциями при подогревании на плите и постоянном помешивании до полного растворения. Фильтровать раствор не обязательно. Раствор даёт со временем осадок. Поэтому его готовят в день исследования.
Р а с т в о р н и т р а т а а м м о н и я (гранулированной или обычной аммиачной селитры - плотность 1,3). Готовят раствор так же, как и предыдущий, но из расчёта 1500 г вещества на 1 л воды.
Раствор хлорида цинка (плотность 1,8). Готовят раствор в эмалированном ведре, растворяя в 1 л горячей воды 2000 г соли. Остывший раствор не кристаллизуется. Плотность уточняют денсиметром в стеклянном цилиндре с приготовленным раствором.
Стандартизированная методика флотации с раствором нитрата аммония (гранулированной или химически чистой аммиачной селитры плотностью 1,3) по Г.А. Котельникову. Пробу фекалий (3 г) кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством свежеприготовленного раствора нитрата аммония и тщательно размешивают палочкой. При помешивании добавляют раствор порциями до объема 50 мл. Затем взвесь фильтруют через ситечко в другой стаканчик. Профильтрованную взвесь оставляют для флотации на 10 мин. Затем металлической петлёй прикасаются к поверхности взвеси, снимают 3-4 капли с разных мест и переносят на предметное стекло для микроскопии при малом увеличении с целью обнаружения яиц гельминтов. Металлическую петлю перед исследованием каждой пробы фломбируют. Применяют при трихоцефалёзе, эзофагостомозе, мониезиозе, стронгилятозах пищеварительного тракта парнокопытных, параскаридозе и стронгилятозах однокопытных, токсоаскаридозе и токсокарозе хищных, стронгилоидозе животных разных видов.
Метод седиментации и его модификации. Основан на осаждении взвешенных в жидкости яиц гельминтов и ооцист простейших, промывки
осадка и его исследования. Метод седиментации более трудоёмок, чем флотации.
Метод комбинированный и его модификации. Основан на комбинации приёмов седиментации и флотации. Предложен американским паразитологом Дарлингом (1911). Рекомендуем использовать для диагностики паразитов зоопарковых и дрессированных свиней и хищных.
Методика для диагностики описторхоза плотоядных по Г.А. Котельникову и А.А. Вареничеву. Пробу фекалий (3 г) кладут в стаканчик в форме усечённого конуса с градацией 30 мл (полный объём его 50 мл). Для растворения жира и лучшего отделения яиц описторхов от фекалий вливают 5-7 мл денатурированного спирта и палочкой тщательно растирают пробу. Затем при постоянном помешивании малыми порциями добавляют воду до полного объёма стаканчика. Взвесь фильтруют через сетку металлическую или из капроновой (чулочной) ткани в чистый стаканчик. Суспензию отстаивают 5 мин, затем верхний слой её сливают, оставляют над осадком небольшое количество воды и вновь добавляют воду до 50 мл и ещё раз отстаивают
5 мин. После этого надосадочную жидкость сливают, оставляют осадок с таким количеством воды, чтобы он поместился в центрифужную пробирку. Наполненные до одинакового уровня пробирки 1,5-2 мин центрифугируют со скоростью около 1000 об./мин. Затем жидкость сливают, а к осадку добавляют раствор хлорида цинка с плотностью 1,82. Осадок взбалтывают в растворе и вновь центрифугируют в том же режиме. После этого металлической петлёй с кольцом в диаметре 6 мм снимают с поверхности взвеси не менее трёх капель, переносят на предметное стекло и микроскопируют. Перед микроскопией к каждому препарату добавляют одну каплю глицерина, разбавленного водой в соотношении 1 : 1 , и покрывают покровным стеклом.
Новый метод прижизненной дифференциальной диагностики три-хоцефал по ультраструктуре яиц от сельскохозяйственных и диких жвачных по В.Е. Пасечнику (2010). Растворы и реактивы: фиксатор Флемминга, спирты возрастающей концентрации: 60, 70, 80, 96, 100 и ацетон. Оптика: стереомикроскоп и сканирующий электронный микроскоп (СЭМ).
Взвесь каждой пробы, содержащей яйца паразита (небольшое количество отмытой суспензии яиц), помещают на очищенную поверхность предметного столика под стереомикроскоп, на который предварительно нанесли большую каплю 80%-ного спирта. При этом в капле возникают вихревые токи, увлекающие за собой яйца и при соприкосновении с поверхностью столика яйца прилипают к ней. Когда к столику прилипло достаточное количество яиц, тогда препарат вместе со столиком быстро (по 5 мин) проводим до ацетона, высушиваем в критической точке, напыляем тонким слоем тяжёлых металлов и исследуем под сканирующим электронным микроскопом. Яйца, попавшие в поле зрения микроскопа, подвергают исследованию с учётом ультраструк-турных видовых признаков и сопоставлением с фотографиями по микро- и ультраструктуре яиц. Метод обеспечивает 100%-ную точность постановки прижизненного дифференциального диагноза до вида.
Метод дифференциальной диагностики стронгилятозов по инвазионным личинкам (П.А. Поляков, 1953). 5 г фекалий кладут в чашку Петри, закрывают крышкой и ставят в термостат при температуре 25-30 °С. Ежедневно на короткое время чашки открывают для аэрации и слегка увлажняют водой из пипетки. Через 6-8 сут личинки достигают инвазионной стадии и при помощи метода Бермана-Орлова их вылавливают из фекалий и исследуют под микроскопом. Чтобы рассмотреть детали строения личинок их обездвиживают. Инвазионные личинки стронгилят отличаются друг от друга по числу и форме так называемых кишечных клеток, размеру самих личинок и их хвостового конца.
Методы посмертной диагностики. Для выяснения причины смерти зоопарковых и цирковых животных (особенно при подозрении на гельминто-зы) применяют методы гельминтологических вскрытий и исследований по
127
Скрябину, а при подозрении на трихинеллёз исследуют мышцы хищных с целью обнаружения личинок трихинелл методом компрессорной трихинел-лоскопии, методом переваривания проб мышц в искусственном желудочном соке.
Методы паразитологических исследований окружающей среды. Основная цель паразитологического исследования объектов окружающей зоо-парковых, цирковых животных и персонала среды - выявление загрязнения возбудителями инвазионных болезней почвы, воды, кормов, стоил, конюшен, навоза, сточных вод и т. д. При обнаружении по результатам исследований инвазионного начала во внешней среде проводят профилактические мероприятия.
Метод исследования проб почвы и соскобов с твёрдых покрытий животноводческих помещений с целью выявления яиц аскаридат и стронги-лят по А.И. Корчагину. Берут 15-25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл, добавляют 80-100 мл 3%-ного раствора едкого натрия или калия. Смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3-5 мин при частоте вращения 800-1000
об ./мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 150 мл воды, вновь тщательно перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют при тех же режимах. Надосадочную жидкость опять сливают, а к осадку добавляют 150 мл раствора нитрата аммония, смесь перемешивают палочкой и фильтруют через капроновое ситечко с размером ячеек 0,5 х 0,5 мм в другую пробирку и вновь центрифугируют при тех же параметрах. Затем пробирки со смесью ставят в штатив и доливают раствор нитрата аммония до уровня 2-
4 мм ниже края пробирки. Берут предметные стёкла размером 60 х 60 мм, протирают поливинилпиролидоном или глицерином (в этом случае обезжи-рование стёкол в спирт-эфире не требуется), накрывают ими пробирки так, чтобы между краем пробирки и предметным стеклом осталась щель шириной 5-7 мм, через которую пипеткой вносят раствор нитрата аммония до его соприкосновения с нижней поверхностью стекла. Через 20-25 мин стекла снимают и, не переворачивая, накладывают на другие стекла большего размера, на которых нанесена сетка, обеспечивающая точный и быстрый подсчет яиц гельминтов, и затем микроскопируют.
Основные принципы профилактики паразитозов и паразитарных зоонозов в условиях зоопарков и цирков.
Общая профилактика. С целью профилактики и ликвидации паразито-зов и паразитарных зоонозов животных рекомендуем администрации в тесном взаимодействии с ветеринарной службой зоопарков и цирков осуществлять комплекс организационно-хозяйственных, общих зоогигиенических, ветеринарно-санитарных мероприятий с учётом технологии содержания зоо-парковых и дрессированных животных. Рекомендуем соблюдать основные принципы общей профилактики паразитарных болезней, направленные на повышение иммунитета к паразитарным и часто сопутствующим им инфекционным агентам, которые заключаются в обеспечении всех животных полноценными кормами: применять рационы, сбалансированные по белку, микроэлементам и витаминам; кормить зоопарковых и цирковых животных в помещениях только из кормушек; поить животных свежей и чистой водой из водопровода; обеспечивать чистоту помещений, клеток, кормушек, поилок, предметов ухода, инвентаря, оборудования и выгульных площадок; помещения должны быть хорошо вентилируемыми, сухими, светлыми; животных размещать в них следует в соответствии с ветеринарно-санитарными нормами; запрещается содержание собак и кошек совместно с другими животными цирков и зоопарков и в местах хранения кормов всех видов; навоз и помёт из клеток, помещений и выгульных площадок регулярно (ежедневно) убирать в специальные навозохранилища для обезвреживания; для уборки навоза выделяют специальный инвентарь и транспорт, которыми не разрешается пользо-
ваться при перевозке кормов после каждой дегельминтизации хищных и приматов.
Профилактика. Рекомендуем главным ветеринарным врачам зоопарков и стационарных и передвижных цирков: ежегодно составлять план профилактических мероприятий по основным паразитарным болезням животных; определять кратность и сроки обследования животных на паразитарные болезни (обращая внимание на паразитарные зоонозы: эхинококкоз хищных, криптоспоридиоз парнокопытных, хищных и обезьян, трихоцефалёз хищных и приматов и др., с учётом их содержания; обследовать всех животных индивидуально с учётом биоцикла и эпизоотологии: сезона, вида, возраста животного, срока взятия проб фекалий. Для зоопарков рекомендуем всех вновь поступивших животных карантинировать в течение 30 сут; проводить 4-кратное обследование на паразитозы и при обнаружении зараженных животных де-гельминтизировать их; через 14 сут проверяют эффективность, и при необходимости повторяют дегельминтизацию. Для стационарных цирков: возвратившимся с гастролей из субтропических и тропических зон: России (Сочи, Адлер) и стран Азии, Африки и вновь поступивших в цирк животных (особенно хищных и приматов) подвергать карантину в течение 30 сут и 3-кратным с интервалом в 7 сут лабораторным обследованиям (копроскопии, уриноскопии, гематоскопии) на паразитарные болезни; при выявлении заражённых паразитарными болезнями животных проводят дегельминтизацию и проверяют её эффективность через 12-14 сут (рекомендуем обследовать животных 3-кратно. В передвижных цирках необходимо ежемесячно 3-кратно обследовать животных на паразитозы до отъезда труппы на гастроли, в период нахождения во временных помещениях и после возвращения с гастролей и при выявлении заражённых животных проводят дегельминтизацию и проверяют её эффективность на 12-е сутки. Для стационарных, передвижных цирков и зоопарков: при выявлении зоонозов (эхинококкоза, токсокароза, токса-скаридоза, аскаридоза приматов, свиней, трихоцефалёза собак, лисиц, приматов) ветеринарной службе зоопарков и цирков рекомендуем сообщать местным органам здравоохранения и государственной ветеринарной службе для совместного проведения комплекса профилактических мероприятий в отношении обслуживающего персонала, дрессировщиков и др., и зоопарко-вых и цирковых животных; с профилактической целью животных. В стационарных цирках и зоопарках обследовать ежеквартально: если артистические труппы не выезжают на гастроли, а при выезде артистических трупп на гастроли: проводить обследования животных не менее чем за 30 сут отъезда на гастроли; с профилактической целью животных передвижных цирков обследовать ежемесячно. Для передвижных, стационарных цирков и зоопарков при выявлении паразитарных болезней проводить лечебные мероприятия.
Профилактические дегельминтизации стационарных, передвижных цирковых и зоопарковых животных рекомендуем проводить следующими препаратами: трематодозы приматов: дикроцелиоз - фенбендазол 33 мг/кг (по ДВ), индивидуально, 3 дня подряд в каше или другом корме; нематодозы приматов: аскаридоз - фенбендазол 15 мг/кг перорально, 2 раза в день в смеси с кормом; трихоцефалёз - фенбендазол 33 мг/кг индивидуально, перорально, 3 дня подряд в смеси с кормом; трематодозы хищных (применяют после 12-часового голодания) - политрем в дозе 150 мг/кг, перорально, индивидуально, однократно, в смеси с кормом (мясной или рыбный фарш); празикван-тел в дозе 100 мг/кг перорально, однократно, индивидуально, в смеси с небольшим количеством корма (мясной фарш); нематодозы хищных - пирантел в дозе 15 мг/кг (по ДВ), индивидуально, перорально, однократно с кормом (мясной фарш, каша); фебантел (ринтал) в дозе 10 мг/кг (по ДВ), перорально, 2 дня подряд, индивидуально с кормом (каша, мясной фарш); токсаскаридоз, унцинариоз, анкилостомоз, токсокароз, гонгилонемоз и томинксоз - крупным хищникам (тигры, львы, леопарды, гепарды, медведи) фенбендазол в дозе 50
129
мг/кг (по ДВ), 3 дня подряд, индивидуально с кормом (мясной фарш, каша); нематодозы однокопытных: фенбендазол однократно, перорально в дозах: от 6 мес до 4 лет -15 мг/кг (по ДВ), старше 4-х лет - 10 мг/кг (по ДВ); нематодозы слонов - фенбендазол 10 мг/кг (по ДВ), однократно, перорально, индивидуально в смеси с небольшим количеством корма; нематодозы парнокопытных: стронгилоидоз - фенбендазол в дозе 10 мг/кг (по ДВ), однократно в смеси с кормом; трихостронгилёз - фенбендазол в дозах 5-7,5 мг/кг, однократно, в смеси с концентрированными кормами; трихоцефалёз - фенбенда-зол в дозе 15 мг/кг по ДВ, перорально, 2 дня подряд в смеси с небольшим количеством концентрированных кормов. Для дегельминтизации зоопарковых и цирковых животных рекомендуем применять препараты, отвечающие требованиям соответствующих стандартов или техническим условиям и Инструкций по их применению, утвержденных Департаментом ветеринарии МСХиП РФ.
Дезинвазию помещений и других объектов в цирках и зоопарках проводят с целью уничтожения инвазионного начала: яиц и личинок гельминтов, ооцист эймерий, криптоспоридий, токсоплазм в окружающей среде. Текущую дезинвазию объектов окружающей среды рекомендуем проводить через
5 сут после дегельминтизации цирковых и зоопарковых животных.
Заключительную дезинвазию помещений зоопарков, цирков рекомендуем проводить после выздоровления или после отъезда цирковых групп на гастроли, то есть после освобождения помещений от животных. Дезинвазии должна предшествовать механическая очистка навоза. После дезинвазии помещения проветривают, а кормушки, поилки, инвентарь и предметы ухода за цирковыми и зоопарковыми животными промывают водой. Навоз от зоопар-ковых и цирковых животных подлежит дезинвазии биотермическим способом в порядке, предусмотренном действующей «Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации» (М., 19S9). Инструменты, мелкие предметы, халаты, использованные при работе с цирковыми и зоопарковыми животными, инвазированные зоонозами, кипятят 20 мин или автоклавируют 30 мин.
