CC BY
3
Стандартная шкала для определения аэрозолей едких щелочей
№ пробирок 1 2 3 4 5 6 7
Стандартный раствор 1 мл — 10 мкг
аниона ОН........... 0,0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Смесь (в мл)............ 5,0 4,9 4,8 4,6 4,4 4,2 4,0
Содержание аниона ОН (в мкг) 0,0 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0
и проб. Чувствительность определения составляет 1 мкг по аниону ОН или 2,35 мкг по 1МаОН в определяемом объеме, равном 5 мл.
Калибровочный график строят в координатах: концентрация — оптическая плотность.
Пары и газы определению не мешают, так как не задерживаются фильтром. Определению едких щелочей могут мешать кислые аэрозоли, например туман серной кислоты.
Поступила 1971 г.
УДК 614.7-078:576.8*5.1.083.38
МЕТОДИКА ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ ПРИ ОЦЕНКЕ САНИТАРНОГО СОСТОЯНИЯ
ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ
Н. А. Романенко, Н. И. Хижняк
Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского Министерства здравоохранения СССР, Москва и Бориспольская районная санэпидстанция
В литературе существуют различные мнения о длительности выживания яиц геогельминтов во внешней среде. Разноречивость этих данных во многом зависит от почвенно-климатических условий места проведения исследований, а также методов закладки проб, которыми пользовались исследователи в своих опытах. До настоящего времени отсутствовала единая методика закладки проб, и каждый исследователь ставил опыты по-разному, что затрудняло сравнение полученных результатов. На основании изучения большого литературного материала нами была унифицирована и проверена на практике методика закладки проб на выживаемость яиц аскарид в почве.
В настоящей работе мы и предлагаем эту методику и, кроме того, приводим наиболее простые методики закладки проб яиц гельминтов на фрукты, овощи и в воду (по литературным данным), по которым следует проводить исследования с целью выявления сроков выживаемости яиц гельминтов во внешней среде во всех климато-географических зонах СССР.
Опыты должны проводиться в условиях, наиболее приближающихся к естественным. Это могут быть участки почвы — грядки площадью 1—2 м2, искусственно загрязненные нечистотами, содержащие не менее 1000 яиц в 1 г почвы, с проведением на них всех агротехнических приемов — перепашки, засеивания сельскохозяйственных культур, прополки и снятия урожая. При отсутствии такой возможности наблюдения можно проводить на участках с искусственно заложенными пробами. Почва таких участков должна быть чистой в отношении яиц гельминтов, не загрязняться сточными водами и нечистотами. После закладки проб участки следует огородить, чтоб туда не могли попасть посторонние лица и животные. В опытах применяются культуры тех видов гельминтов, которые представляют наибольшую эпидемическую опасность в данной местности.
Чтобы установить максимальные сроки выживаемости яиц гельминтов, целесообразно ставить опыты с яйцами аскарид. При этом могут быть ис-
пользованы яйца Ase. lumbricoides и Ase. suum, полученные из ветвей матки аскариды, не далее чем на 1—1,5 см от соединения их с вагиной, а также из фекалий с большим количеством яиц гельминтов (не менее 2—3 в поле зрения).
Порцию фекалий объемом в 1 столовую ложку помещают в центрифужную пробирку объемом 50—250 мл (лучше 250 мл) и заливают водопроводной водой (30—120 мл). Затем смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют 2—3 мин. при скорости 800 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают в раковину или ведро, а к осадку добавляют такую же порцию чистой воды, смесь вновь размешивают и центрифугируют. Промывание повторяют не менее 2—3 раз. После промывания к осадку добавляют насыщенный раствор поваренной соли (удельный вес 1,2) или , еще лучше, насыщенный раствор азотнокислого натрия, так как его удельный вес выше (1,38—1,4), чем у поваренной соли, и яйца гельминтов быстрее всплывают на поверхность. Смесь размешивают, всплывшие крупные частицы снимают деревянным шпаделем и выбрасывают в ведро, а смесь центрифугируют 2—3 мин.; затем петлей с поверхности раствора снимают пленку и переносят в сосуд с водой. Эти операции повторяют до тех пор, пока в контрольной капле, взятой на предметное стекло, будут попадаться лишь единичные яйца гельминтов.
Затем начинается второй этап — выделение яиц гельминтов из слабого раствора соли. Содержимому сосуда дают отстояться в течение 2—3 часов, после чего надосадочную жидкость сливают в ведро, а осадок фильтруют через 4—5 слоев марли или мелкоячеистую сетку в часовые стекла диаметром 10—15 см. Легкими круговыми движениями производят закручивание осадка к центру часового стекла, а оставшуюся по периферии светлую жидкость отсасывают пастеровской пипеткой с резиновой грушей. В часовые стекла добавляют небольшое количество чистой воды, смесь размешивают и закручивают к центру стекла; такую операцию повторяют до тех пор, пока на стекле не будет чистая культура яиц гельминтов. Наблюдение за чистотой культуры яиц гельминтов ведут под микроскопом. Полученную чистую культуру яиц гельминтов помещают в стеклянные бюксы с крышкой, этикетируют и помещают на хранение в холодильник.
При изучении сроков выживаемости яиц гельминтов на поверхности почвы закладку их культуры можно проводить одним из следующих способов. Первый способ: на мембранный фильтр № 6 наносят не менее 1000 яиц гельминтов и покрывают другим таким же фильтром. Края фильтров загибают конвертиком, после чего их укладывают на полосы мягкой металлической сетки или плотного капронового материала и прошивают. Расстояние между соседними фильтрами должно быть не менее 10 см. Это необходимо для того, чтобы при извлечении конца ленты и забора для исследования 1—2 фильтров не аэрировать другие. Второй способ: на поверхности участка в почву на глубину 2—3 см вдавливают кюветы из металлической сетки так, чтобы их края были на 2—3 мм выше поверхности почвы. Кюветы доверху заполняют почвой, загрязненной яйцами гельминтов (из расчета не менее 200—300 на 1 г почвы).
При изучении сроков выживаемости яиц гельминтов в почве на разных глубинах (10, 20, 40 и 60 см) закладку культуры яиц гельминтов целесообразно проводить в специальных пробах.
Приготовление проб: из алюминия или другого мягкого металла толщиной 1—2 мм вырезают прямоугольную пластинку размером 6x6 см\ по всей ее поверхности делают отверстия диаметром 2—3 мм на расстоянии 4—5 мм друг от друга; пластинку сворачивают трубкой диаметром 2 см. Для этого могут быть использованы алюминиевые бигуди. Такой каркас удобен тем, что он со всех сторон доступен для почвенного воздуха, влаги и, кроме того, может долго пролежать в земле, а при выкапывании предохранит пробу от разрушения. Каркас взвешивают, плотно набивают почвой и вновь взвешивают; по разнице веса до и после набивки почвой определяют вес
почвы. Через отверстия в каркасе делают несколько углублений в почве (в разных местах), куда и вносят с помощью пипетки нужное количество капель взвеси культуры яиц гельминтов так, чтобы на 1 г почвы в пробе приходилось не менее 1000 яиц.
Среднее количество яиц гельминтов в одной капле взвеси определяется следующим образом. На предметное стекло наносят 5—10 капель хорошо перемешанной взвеси культуры яиц гельминтов, под микроскопом подсчитывают количество яиц в каждой капле, суммируют и делят на число капель. Среднее количество яиц гельминтов в 1 мл можно установить путем определения числа капель в 1 мл раствора с последующим умножением их на число яиц гельминтов в 1 капле.
После внесения культуры яиц гельминтов в почву пробы углубления в каркасе закрывают той же почвой. К пробе прикрепляют проволоку длиной, равной глубине закладки, на конце которой устанавливают опознавательный знак. Лучше всего готовить пробы в лаборатории и хранить их в холодильнике.
Для закладки проб в почву выкапывают ямы шириной 1—1,2 м; длину их рассчитывают в каждом конкретном случае отдельно (в зависимости от количества закладываемых проб). На дно ям пробы укладывают на расстоянии 20—30 см друг от друга, ямы засыпают сначала той почвой, которая выбрасывалась последней при копке ям, а затем остальной.
Количество проб должно быть рассчитано на длительный период наблюдения (7—10 лет). Выемку их для исследования производят в зависимости от климата, характера почвы и глубины закладки не реже 1 раза в месяц при исследовании проб с глубины до 20 см и не реже 1 раза в квартал при более глубоких закладках. Ввиду того что пробы для исследования можно забирать (для средней полосы СССР) только с апреля по октябрь, т. е. 7 раз в год, легко подсчитать число проб, необходимое для закладки на ту или иную глубину (на глубину 10 и 20 ел по 49—70, на глубину 40 и 60 см по 21—30 проб).
По опознавательным знакам определяют места закладок проб, выкапывают ямы размером 30x30 см так, чтобы между стенкой ямы и ближайшей пробой был оставлен слой толщиной не менее 10 см.
Изъятые из почвы пробы помещают в пакеты из бумаги или целлофана и доставляют в лабораторию на исследование.
Е. П. Разумова и А. С. Артамошин для изучения сроков развития и выживаемости яиц гельминтов в водоемах предложили следующую методику. Культуру яиц гельминтов наносят пипеткой на мембранный фильтр № 6 (не менее 1000), затем этот фильтр покрывают другим фильтром, оба фильтра сворачивают и вкладывают в стеклянную трубку, открытую с 2 сторон, диаметром 1,5—2 см. Трубку заворачивают в плотный мельничный газ; несколько таких проб заворачивают в железную сетку и на проволоке или капроновом шнуре спускают в водоем на нужную глубину. Если пробы намечено поставить в местах с быстрым течением воды, то к сетке подвешивают дополнительный груз для удержания проб на нужной глубине.
Для изучения сроков выживаемости яиц гельминтов на овощах и фруктах, выращиваемых на огородах и полях орошения, фильтры с культурой яиц гельминтов прикрепляются к ним. Можно наносить культуру яиц гельминтов непосредственно на поверхность овощей и фруктов. Тогда такие овощи и фрукты определенным образом помечают, а затем исследуют.
При определении сроков, стадии развития или признаков деформации в каждом опыте необходимо просматривать не менее 100—200 яиц гельминтов.
Исследования с целью установления сроков выживаемости яиц гельминтов следует ставить в разных климатических условиях (при разной структуре почвы, температуре и влажности, глубине), обеспечив проведение наблюдений до полной гибели всех яиц гельминтов.
Определяя наличие фекального загрязнения объектов внешней среды, целесообразно параллельно с коли-титром, коли-индексом устанавливать и ово-индекс (количество яиц гельминтов в 1 л или 1 кг почвы). Отсутствие яиц гельминтов в исследуемых объектах (при отсутствии кишечной палочки) укажет на их чистоту в отношении фекального загрязнения, обнаружение же их (опять же при отсутствии кишечной палочки), наоборот, на наличие его.
Таким образом, зная сроки выживаемости яиц гельминтов во внешней среде конкретно в каждой почвенно-климатической зоне СССР, можно судить о наличии и давности фекального загрязнения внешней среды и в соответствии с этим планировать мероприятия по ее оздоровлению.
ЛИТЕРАТУРА. Разумова Е. П. Артамошин А. С. Мед. пара-зитол., 1969, № 1, с. 84.
Поступила 30/УП 1971 г.
УДК 614.777 + 628.191:576.8]-07:543.39
ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗМОЖНОСТИ ИНДИКАЦИИ БАКТЕРИЙ
В ВОДЕ СПЕКТРО-УЛЬТРАМИКРОСКОПИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
В. Н. Артемова
Научно-исследовательский институт коммунального водоснабжения и очистки воды Академии коммунального хозяйства им. К. Д. Памфилова РСФСР, Москва, и кафедра коммунальной гигиены I Московского медицинского института
Применяемые в настоящее время в практике санитарной бактериологии методы количественного и качественного определения бактерий в неочищенной и питьевой воде требуют большой затраты времени, а получаемые при этом результаты в известной мере условны. Поэтому настоятельно необходима разработка новых, более эффективных методов установления бактериального загрязнения воды с учетом возможности их автоматизации. В настоящей статье излагаются результаты исследований нового спект-роультрамикроскопического метода определения бактерий в воде, разработанного в Научно-исследовательском институте коммунального водоснабжения и очистки воды Академии коммунального хозяйства им. К. Д. Памфилова, принципы которого позволяют рассчитывать на достижение указанных целей.
При боковом освещении частиц, взвешенных в жидкой среде, можно сосчитать в темном поле вспышки рассеянного и отраженного ими света и затем определить число их в единице объема. Такой метод подсчета числа частиц называется ультрамикроскопическим (51ес1епк)рГ и ^¡ртопёу). Существенно отметить, что подсчет этим методом производится непосредственно в воде без приготовления каких-либо сред и препаратов. Важным преимуществом ультрамикроскопического метода перед обычным микроскопическим наблюдением является возможность видеть более мелкие частицы. Метод позволяет также осуществить фракционный анализ исследуемых частиц по величинам энергии рассеянного и отраженного ими света (Б. В. Дерягин и Г. Я. Власенко).
Количество отражаемой и рассеиваемой частицей световой энергии определяется размерами частицы и показателем преломления ее вещества. Минеральные частицы и бактерии обладают как различными размерами, так и различными показателями преломления (Б. А. Фихман). Поэтому в одной и той же фракции с одним и тем же количеством отраженной и рассеянной световой энергии могут оказаться бактерии различных видов вместе с самыми разными частицами небиологического происхождения.
Можно сосчитать количество всех частиц в такой фракции, но определить, сколько и каких бактерий и прочих частиц в ней содержится, нельзя, поскольку такие бактерии и частицы ультрамикроскопически нараз-
