CC BY
12
гепатитов;
- разработка, совершенствование и внедрение современной стратегии вакцинопрофи-лактики ГА;
- разработка лечебных вакцин против ГВ, а также вакцины против ГС, что является приоритетной задачей на ближайшие годы;
- выяснение особенностей распространения ГЕ в эндемичных и неэндемичных регионах мира и получение ответа на вопрос - является ли ГЕ зоонозом?;
- разработка эффективных программ по борьбе с ГС;
- выяснение роли вирусов гепатитов О, Т^ и SENV в развитии патологии человека и, наконец,
- направленный поиск новых вирусов, отвечающих за развитие гепатитов, относящихся к группе - гепатиты "ни А, ни О".
В заключение необходимо подчеркнуть, что и этот перечень не исчерпывает все проблемы изучения этих инфекций и часть вопросов, быть
Современная иммунология располагает весьма обширным методическим базисом, рационально используя который можно детально охарактеризовать иммунологический статус пациента в целом и его неспецифическую иммунологическую резистентность (НИР), с тем, чтобы своевременно выявить признаки ее депрессии (16). Подобная возможность открывает новые перспективы дальнейшего совершенствования лабораторной диагностики ряда инфекционных и онкологических заболеваний и повышения эффективности их профилактики применением средств стимуляции иммунологической реактивности (ИР) и НИР, что отвечает условиям приоритетного развития профилактического направления современной медицины (26).
Расширившиеся сегодня возможности фармакологической стимуляции НИР с помощью разнообразных модификаторов биологических реакций ставят вопросы о необходимости не только
может менее важных, но не менее интересных, осталась за его пределами. Вероятно, именно это, вместе с исключительно важным медико-социальным значением этих инфекций, делает ВГ весьма привлекательными в качестве объекта научного интереса для исследователей различных специальностей.
SUMMARY
Viral hepatitis - modern aspects of investigations M.Mikhailov
The article devoted to modern aspects of investigations in the fiels of viral hepatitis.
The author presented some new data concerning progress in stading of etiology, epidemiology and prevention of different types of enterally and parenterally transmitted viral hepatitis and discussed main most important aspects of their studing.
Поступила 25.10.2004
оценивать исходное состояние НИР пациентов, но и объективно мониторировать результаты применения этих средств (15). Все это в комплексе предопределило возрастание значения методов, позволяющих объективно оценивать состояние НИР.
Между тем, большинство современных иммунологических методов оценки состояния НИР достаточно сложны, трудоемки и, как правило, требуют применения современного оборудования, приборов и специальных реактивов и могут проводиться только в лабораториях, оснащенных сложной и нередко малодоступной измерительной аппаратурой и снабженных соответствующими реагентами. Это значительно ограничивает возможности использования этих методов в клинических исследованиях, в ходе которых нередко возникает необходимость оценки состояния НИР пациентов и выявления признаков ее депрессии.
Методические возможности выявления признаков депрессии неспецифической иммунологической резистентности в клинической практике и профилактической медицине
А. А. Кадырова
Азербайджанский медицинский университет, г.Баку
Ранее мы отмечали, что информацию, наиболее полно отражающую состояние НИР в целом, можно получить, используя лишь несколько адекватных методов (16). Как правило, исследователю приходится самому определять оптимальное число применяемых методов, исходя из имеющихся у него технических возможностей и зачастую будучи ограниченным стоимостью реагентов и трудоемкостью методик.
Расширению возможностей применения методов оценки НИР в клинических наблюдениях могло бы способствовать, во-первых, техническое упрощение (симплификация) этих методов без ощутимого снижения информативности получаемых с их помощью данных и, во-вторых, рациональное комплексирование нескольких методов в единый тестовый блок, позволяющий получать информацию, достаточно полно отражающую состояние НИР, в условиях неспециализированной лаборатории клинического профиля (18).
В этой связи мы рассмотрели возможность применения для оценки состояния НИР наиболее простых и доступных методов и путем максимальной симплификации адаптировать их к использованию в условиях типовой клинической лаборатории.
Приступая к оценке возможности симплифи-кации методов оценки клеточного звена НИР, мы приняли во внимание то, что основные технические сложности, с которыми сопряжено их использование, связаны с необходимостью: выделения и обогащения суспензий определенного типа иммуноцитов; использования сложной прецизионной измерительной аппаратуры и использования культивируемых in vitro клеточных систем.
При постановке большинства этих методов функциональная активность иммуноцитов определяется в выделенных из крови суспензиях клеток, обогащенных определенным видом иммуноци-тов. Процедура получения таких суспензий включает сепарацию определяемого вида клеток с помощью различных физико-химических методик, позволяющих более или менее полно выделить из пула клеток крови иммуноциты определенной популяции. Не останавливаясь на этих методах, лишь отметим, что их использование требует наличия соответствующего лабораторного оснащения и реагентов, что ограничивает возможности их применения в широкой клинической практике.
Многие современные методы требуют использования регистрирующих и измерительных приборов, а также вспомогательной аппаратуры. В частности, большинство современных иммунологических методов основано на применении проточных хемолюминесцентных цитометров, иммунологических анализаторов, люминесцентных микроскопов, лабораторных счетчиков радио-
активности и др. И если значительная часть вспомогательной аппаратуры (световой микроскоп, термостат, центрифуга, холодильник и др.) имеется во многих лабораториях, то прецизионными измерительными приборами оборудованы лишь крупные научно-исследовательские учреждения. В равной степени это относится к части биологических реагентов, например, к препаратам моноклональных антител (МАТ), отличающимся немалой стоимостью.
Кроме того, при постановке некоторых методов оценки цитотоксической активности (ЦА) иммуноцитов используются стандартные клеточные культуры, поддерживание которых сопряжено с немалыми техническими сложностями и требует соответствующего оборудования (ламинарного бокса, инвертированного микроскопа и др.), что также резко ограничивает круг потенциальных пользователей этих методов.
И наконец, необходимо особо отметить, что до сих пор не разработана унифицированная система критериев оценки состояния НИР, позволившая бы обеспечить достаточную степень сопоставимости результатов, полученных с помощью различных методов. Это же обстоятельство затрудняет оценку с единых позиций состояния противоинфекционной и противоопухолевой резистентности (ПИР и ПОР) по результатам обследования индивидуумов с различной патологией. К примеру, снижение функциональной активности естественных киллерных клеток (ЕКК) одновременно указывает как на снижение противовирусного компонента ПИР, так и на депрессию ПОР. Между тем, морфоонтогенети-ческая близость клеточных элементов, обеспечивающих ПИР и ПОР, и большое сходство механизмов их обеспечения открывают перспективы применения одних и тех же методов для оценки состояния обеих форм резистентности как у лиц с инфекционной патологией, так и у онкологических больных.
Приняв во внимание изложенные соображения и планируя проведение скрининга группы здоровых лиц и нескольких групп больных разного профиля, необходимо было определить оптимальный набор методов, способный в клинических наблюдениях обеспечить получение информации, достаточной для объективного суждения о состоянии НИР и позволяющей выявлять признаки ее депрессии (18).
Анализ литературы показал, что наибольшее клиническое значение имеют результаты определения в крови количества и функциональной активности макрофагов (Мф), нейтрофилов (НФ) и естественных киллерных клеток (ЕКК) (10, 46). Из гуморальных факторов НИР наибольшее значение имеют интерфероны (ИфН) - важнейшие факторы противовирусной и противоопухолевой защиты организма (9, 14). Комплемент (принима-
ющий участие лишь в антиген-зависимых реакциях) и другие факторы (лизоцим, лизины, нормальные антитела и др.), не будучи универсальными факторами, играют защитную роль лишь в определенных ситуациях (11, 12). Исходя из этого, мы полагали, что, оценив количество и/или функциональную активность Мф, НФ и ЕКК и определив концентрацию в крови (или биологическую активность) ИФН, можно составить достаточно полное представление о состоянии клеточного и гуморального звеньев НИР (18).
С учетом стоявшей перед нами задачи было ясно, что для этих целей пригодными могут быть лишь методы, с одной стороны - обладающие достаточной степенью чувствительности и воспроизводимости, а с другой стороны - отличающиеся технической простотой и воспроизводимые без наличия в лаборатории особых условий, специального приборного оснащения и малодоступных реагентов. То есть основным критерием выбора таких методик становилась возможность их использования в условиях типовой клинической лаборатории, в которой проводятся традиционные общеклинические, биохимические и серологические исследования.
Поэтому мы остановили свой выбор на четырех наиболее простых в исполнении и не требующих специального приборного оснащения методах: определения фагоцитарной активности Мф, фагоцитарно-метаболической активности НФ, относительного содержания ЕКК в крови и определения ЦА ЕКК.
Далее мы рассмотрели каждый из них с точки зрения возможности его технического упрощения (симплификации) путем замены используемых в них реагентов, измерительных приборов и подходов к регистрации результатов, а также изменения самих методик, что позволит адаптировать их к условиям типовой лаборатории, оснащенной лишь термостатом, холодильником, лабораторной центрифугой, микроскопом и фото-электроколориметром.
Внеся определенные изменения в методики, мы использовали их для проведения модельных исследований по определению соответствующих показателей НИР сначала у лабораторных животных с экспериментальной бактериальной инфекцией (17) и перевитой злокачественной опухолью (19), а затем и у людей. В последнем случае с их помощью были обследованы образцы крови как у лиц с предположительно нормальными показателями НИР (группа здоровых лиц), так и у лиц, у которых можно было ожидать наличия депрессии НИР (больные хроническим туберкулезом и генерализованными формами лимфом, имевшие косвенные признаки депрессии иммунологической реактивности в виде лейкопении, клинических симптомов интоксикации и др.).
Для сравнения информативности полученных результатов образцы крови параллельно были исследованы соответствующими методами, воспроизводимыми по оригинальным методикам. Ниже приведены основные результаты этих исследований.
МАКРОФАГИ. Для оценки функциональной активности МФ (точнее, моноцитов) мы использовали тест по определению их поглотительной способности в отношении двух типов микроскопических частиц: полистиролового латекса и инак-тивированных нагреванием клеток Staphylococcus aureus. Используя обе модификации теста, воспроизводимые по известным методикам (40), мы исследовали одни и те же образцы цельной крови (без предварительного выделения популяции клеток), взятые у исследованных лиц.
Полученные результаты показали, что при постановке теста с латексом интенсивность фагоцитоза оказалась несколько ниже таковой в случае использования суспензии бактерий. Возможно, что это связано с наличием на поверхности бактерий рецепторов, стимулирующих фагоцитоз, хотя не исключено также и то, что латекс труднее поддавался эндоцитозу. При использовании латекса разброс результатов от их средней величины (вычисленной по итогам постановки тестов с кровью лиц из всех трех групп обследованных) оказался меньше, чем при фагоцитозе бактерий, т.е. воспроизводимость результатов теста с латексом была заметно выше, чем теста с бактериями. Кроме того, тест с латексом не требовал предварительной подготовки бактериальной суспензии, что упрощало методику.
НЕЙТРОФИЛЫ. Учитывая, что более информативным и одновременно довольно простым считается НСТ-тест, позволяющий оценивать как поглотительную, так и метаболическую активность НФ (5, 8), мы исследовали возможность выявления снижения активности НФ (как признака депрессии НИР) с помощью упрощенного варианта. Были исследованы диагностические возможности двух вариантов постановки НСТ-теста: более простого, но менее точного теста с цельной кровью (4), полученной из пальца или вены, и теста с суспензией НФ, выделенной из крови (26). Первый из них был поставлен с кровью из вены (тест в пробирке) и с кровью из пальца (тест на предметном стекле). Второй вариант - с суспензией НФ, приготовленной путем центрифугирования гепаринизированной крови в "двойном" градиенте по известной методике (7). С их помощью были обследованы здоровые лица и больные туберкулезом и лимфомами. Сравнение полученных результатов показало, что различие между процентами НСТ-позитивных НФ, определенных в пробах крови, взятой из вены и взятой из пальца, не превышало 20%. Это озна-
чало, что результаты этих вариантов теста были вполне сопоставимы.
При сравнении результатов определения процента НСТ+Н в венозной крови и в выделенной из нее суспензии Нф у лиц из тех же групп выяснилось, что во всех случаях различия между этими показателями не имели значимого различия даже в интервале р<0,1. Это указывало на то, что постановка НСТ-теста с суспензией Нф не имела ощутимого диагностического преимущества по сравнению с тестом, воспроизведенным с цельной венозной кровью. Вместе с тем, учет результатов теста с цельной кровью оказался более трудоемким, поскольку в каждом из полей зрения выявлялись лишь единичные клетки, что вынуждало просматривать десятки полей зрения и было сопряжено с большой визуальной нагрузкой (49).
ПОДСЧЕТ ПРОЦЕНТА ЕКК В КРОВИ. Известны 3 подхода к подсчету относительного количества ЕКК в периферической крови.
В основе первого из них лежит отсутствие у ЕКК способности формировать розетки как с эритроцитами барана (типично для Т-лимфоци-тов), так и мыши (присуще В-лимфоцитам). Определив в крови процент 0-лимфоцитов, можно оценить и содержание в ней ЕКК. Однако к 0-лимфо-цитам относятся и некоторые другие иммуноци-ты, что снижает точность этого подхода (44).
Второй подход основан на морфо-тинк-ториальных особенностях ЕКК: большинство ЕКК представлено "большими гранулосодержащими лимфоцитами" (БГЛ), имеющими весьма характерный вид в мазках крови, окрашенных по РарепЬот. Этот методически простой подход использовался для подсчета БГЛ в мазках, приготовленных из суспензии лимфоцитов (50), а позднее был адаптирован для исследования и мазков крови, взятой из пальца (41).
Третий подход основан на иммунофенотипи-ческой идентификации ЕКК с помощью меченных флюорохромами МАТ, маркирующих клетки, имеющие мембранные рецепторы CD16/56 -основной кластер, наиболее характерный практически для всех ЕКК (45). Данный подход наиболее точен, однако для его использования необходимы соответствующие МАТ и проточный лазерный иммуноцитометр или, как минимум, люминесцентный микроскоп (27).
Наиболее приемлемым для адаптации к условиям неспециализированной лаборатории нам представлялся метод подсчета в крови БГЛ, что и определило задачу оценить реальные диагностические возможности этого метода. В первую очередь мы исследовали возможность заменить процедуру двухэтапной окраски мазков по Папенгейму широко используемым в лабораторной практике методом Романовского-Гимзы. При подборе оптимальных режимов
окрашивания этим методом выяснилось, что после 45 минутной экспозиции мазков в краси-теле-визуальная идентификация в них БГЛ не представляла каких-либо трудностей, хотя в этом случае процент выявленных и подсчитанных БГЛ был примерно на 5% ниже, чем процент этих клеток, идентифицированных в мазках, окрашенных по Папенгейму. Данный факт послужил для нас основанием в дальнейшем при подсчете БГЛ в мазках крови окрашивать их по методу Ро-мановского-Гимзы, не прибегая к более трудоемкому методу Папенгейма.
Для выяснения степени соответствия результатов этого метода результатам более точного метода иммунофенотипической идентификации ЕКК, мы параллельно двумя методами определяли процент ЕКК и процент БГЛ в одних и тех же образцах крови, полученных у здоровых лиц, больных туберкулезом и больных лимфомами. Мазки для люминесцентной микроскопии готовились по известной методике (27), а для окраски по Романовскому-Гимзе - по ранее описанной нами методике (30). Результаты подсчета БГЛ и ЕКК в мазках крови в каждой из групп обследованных не имели устойчивого различия даже в достаточно широком вероятностном интервале (р < 0,1). Вместе с тем, средний процент ЕКК у здоровых лиц оказался несколько ниже среднего процента БГЛ. Однако в двух других группах результаты определения этих клеток почти полностью совпали, а различие между ними составляло менее 10% от их величины. Это означало, что в нашем наблюдении оба метода подсчета ЕКК в крови обладали почти равной воспроизводимостью. Иначе говоря, оба метода обладали примерно равными диагностическим возможностями, хотя метод подсчета БГЛ был существенно проще в исполнении: он не требовал предварительного выделения из крови лимфоцитов и мог быть вопроизведен без использования МАТ и приборов для учета результатов.
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЕКК. Функциональная активность ЕКК оценивается путем определения их ЦА по отношению к аллогенным клеткам, а методы оценки ЦА объединяются под названием "цитотоксических тестов" (ЦТ). Однако доступность наиболее точных вариантов ЦТ, основанных на радиометрической регистрации факта разрушения клеток-мишеней (КМ), для широкого круга исследователей ограничена. Во-первых, для его использования необходима прецизионная и весьма дорогостоящая лабораторно-радиометрическая аппаратура. Во-вторых, использование меченных радионуклидами биосубстратов сопряжено с определенным риском радиационного поражения персонала и загрязнения ими окружающей среды. В-третьих, в качестве КМ используются клетки стандартных штаммов (К562 - в клинических исследованиях и
YAC1 - в экспериментальных исследованиях), для поддержания которых нужны специальные условия, оборудование и определенный набор реагентов. Это побудило нас исследовать возможность постановки ЦТ, максимально адаптированного к условиям неспециализированной лаборатории клинического профиля.
Очевидно, что основой для такого варианта мог бы стать ЦТ с визуально-микроскопическим учетом результатов путем подсчета погибших и витально окрашенных КМ. Однако ранее проведенное сравнение результатов такого варианта ЦТ с одной из модификаций радиметрическо-го ЦТ, показало, что визуальный учет результатов не обеспечивал необходимых точности и воспроизводимости, что указывало на пригодность этого варианта ЦТ лишь для весьма ориентировочной оценки ЦА ЕКК. В этой связи наше внимание было привлечено имеющимися в литературе отдельными сообщениями о том, что при определении ЦА ЕКК мышей в качестве КМ могут использоваться эритроциты петуха, разрушение которых выявляется и количественно оценивается по выходу из них в культуральную среду гемоглобина (40, 43).
Последнее побудило нас исследовать возможность использования этого более доступного подхода для оценки ЦА ЕКК у человека, тем более, что данных о его применении в клинических исследованиях в доступной нам литературе мы не нашли. В ходе предварительных опытов, в том числе - воспроизведенных на мышах, мы установили ряд условий, при соблюдении которых с помощью такого ЦТ удается получить достаточно четкие результаты ЦТ, позволяющие вычислять индекс ЦА (ИЦА) ЕКК. С учетом этих данных была разработана методика, детально описанная нами ранее (35).
Для оценки возможностей этой методики мы использовали ее для определения ИЦА лимфоцитов, содержащихся в суспензии иммуноцитов, выделенных центрифугированием крови, полученной у здоровых и больных лимфомами, в фи-колл-верографиновом градиенте. Параллельно в этих же суспензиях ИЦА лимфоцитов был определен с помощью ЦТ с радиометрическим учетом результатов с использованием в качестве КМ традиционной линии клеток К562, содержащих радионуклидную метку (Нз-уридин) (42). Оба варианта ЦТ воспроизводили в стекля-ных микропробирках, предварительно обработанных слабым неионным детергентом (твин-20).
Судя по полученным результатам, средние величины ИЦА ЕКК, определенные с помощью ЦТ с биохимическим учетом результатов, в обеих группах обследованных оказались заметно ниже, чем при радиометрическом учете результатов. При этом, если в группе здоровых лиц эта разница составляла менее 15%, то в группе
больных лимфомами она составляла более 20%. Трактуя причины такого расхождения, среди прочих факторов мы не исключали, что оно могло быть обусловлено тем, что у больных лимфо-мами ЕКК отличались сниженной способностью распознавать гетерологические клетки, и свидетельствовало о снижении у них эффективности НИР, и в частности - ПОР. Вместе с тем, сравнивая величины ИЦА ЕКК, определенные двумя методами, мы установили, что в обеих группах различия между средними значениями этих величин не носили статистически устойчивого характера даже в интервале р < 0,1. Это позволило заключить, что эти величины могут считаться вполне сопоставимыми между собой.
При этом обращал на себя внимание и тот факт, что при использовании биохимического метода разброс отдельных результатов от средней величины был более широким, нежели при использовании радиометрического учета результатов ЦТ. Однако, рассчитав коэффициент линейной корреляции между результатами, полученными в двух вариантах постановки ЦТ, мы убедились в том, что между ними имелась достаточно высокая положительная корреляция. В итоге мы пришли к заключению, что испытанный нами вариант ЦТ, несмотря на меньшую воспроизводимость, позволяет получать результаты, вполне сопоставимые с результатами, полученными при радиометрическом варианте ЦТ. К тому же предлагаемый вариант ЦТ отличается несравненно большей простотой и доступностью (за счет отсутствия необходимости поддерживания линии К562 и использования радиометрической аппаратуры). Здесь же отметим, что данный вариант ЦТ позволяет при надобности оценивать ЦА пула всех присутствующих в суспензии лим-фоидных клеток: в этом случае из методики исключается этап инкубации суспензии в стеклянной чашке Петри, предназначенный для удаления из нее Мф.
Итак, предлагаемый биохимический метод количественной оценки ЦА ЕКК позволяет обойтись без специальных клеточных линий, заменив их куриными эритроцитами, а результаты регистрировать простым фотометрическим прибором, предназначенным для определения гемоглобина в крови.
КОНЦЕНТРАЦИЯ АЛЬФА-ИФН. Определение концентрации а-ИфН сегодня повсеместно осуществляться твердофазным иммуноферментным методом (ТИФМ) на основе коммерческих наборов диагностических реагентов, а для учета рзультатов ТИФМ нужен лишь фотометрический прибор (концентрации ИФН расчитываются по калибровочной кривой).
Сравнив этот метод с разработанным нами ранее ускоренным методом титрования а-ИФН по угнетению включения радиоактивной метки в
вирусспецифические РНК (13), мы убедились, что последний является не только более технически сложным и трудоемким, но и сопряжен с несравненно большими затратами разнообразных биологических реагентов и химических реактивов. Кроме того, если на постановку этого метода затрачивается около 3 суток, то постановка ТИфМ осуществима менее, чем за сутки (20).
С целью оценки диагностических возможностей ТИфМ определения уровней а-ИфН в крови, как показателя состояния НИР, мы ограничились сопоставлением результатов ранее проведенного нами изучения особенностей элиминации а-ИфН из крови здоровых лиц, больных лим-фомами и хроническим гепатитом С после введения им препаратов рекомбинантного а-ИфН и его пегилированных производных (34, 39). Это позволило убедиться в том, что применение ТИфМ отчетливо выявляет снижение уровня а-ИфН в крови (вплоть до достижения физиологического уровня), отмечаемое после введения этих препаратов (33). Кроме того, ТИфМ позволил установить, что уровень а-ИфН у больных лимфомами был ощутимо ниже, чем аналогичный показатель у здоровых лиц (37). И наконец, сравнив стандартные ошибки средних значений концентраций а-ИфН, определенных по результатам четырех исследований в одних и тех же сыворотках, мы установили, что воспроизводимость результатов ТИфМ не выходила за пределы, допустимые для иммунологических методов (27).
Помимо этого, мы рассмотрели возможность использования коммерческих наборов реагентов для определения а-ИфН в сыворотке крови для полуколичественного определения в них антител к а-ИфН (анти-ИфН), выявление которых может а рпоп свидетельствовать о вероятном снижение терапевтической эффективности препаратов а-ИфН (48). Для этого был использован известный принцип 50-ти процентного блокирования серологической активности антител. Результаты ряда проведенных нами модельных опытов позволили придти к выводу о том, что данный подход действительно позволяет выявлять в сыворотках анти-ИфН (23). Это указывало на существование принципиальной возможности использования указанных наборов реагентов и для полуколичественного определения уровня анти-ИфН в крови.
И наконец, убедившись в том, что описанные выше методы позволяют объективно оценивать соответствующие показатели состояния НИР и выявлять признаки ее депрессии, мы поставили перед собой заключительную задачу по выяснению возможностей использования этих методов в едином комплексе для выявления признаков депрессии НИР в ходе клинических исследований и при профилактическом обследо-
вании здоровых лиц.
Поэтому окончательная оценка диагностических возможностей минимизированного нами комплекса методов, предназначенных для выявления соответствующих признаков депрессии клеточного и гуморального звеньев НИР, была дана по результатам проведенного нами скринин-гового исследования нескольких представительных групп как здоровых лиц с предположительно нормальной НИР, так и больных с различной инфекционной и онкологической патологией, у которых с высокой вероятностью можно было ожидать депрессию НИР.
В частности, с помощью указанного комплекса иммунологических методов нами было осуществлено исследование группы здоровых жителей г.Баку (25), группы больных различными формами туберкулеза легких (28), группы больных с герпетической и хламидийной инфекциями (21, 22), группы больных острыми и хроническими вирусными гепатитами В и С и лиц с субклиническими инфекциями, вызванными этими вирусами (2), и группы больных солидными опухолями и лимфомами (1, 3, 24) и, в том числе, онкологических больных, инфицированных вирусами герпеса и гепатитов В и С (31).
Необходимо отметить, что в ходе выполнения части указанных исследований выяснилось, что результаты, полученные при исследовании здоровых лиц и онкологичских больных с помощью метода оценки интенсивности фагоцитоза Мф, не имели статистически устойчивого различия в интервале р<0,05. Между тем, такая разница была отмечена при сравнении результатов остальных четырех методов. Это побудило нас в дальнейших исследованиях отказаться от использования метода оценки фагоцитоза Мф.
Проанализировав результаты исследований, мы пришли к заключению о том, что указанный выше комплекс иммунологических методов в целом оказался вполне пригодным для выявления признаков депрессии как клеточного, так и гуморального звеньев НИР. Более того, применение этого комплекса методов позволило установить, что среди больных туберкулезом преобладала депрессия нейтрофильного звена НИР, в то время как у онкологических больных в основном отмечалась депрессия звена, связанного с ЕКК. В этом отношении лица с вирусными инфекциями занимали промежуточное положение.
Здесь же отметим, что данные, отражающие состояние НИР у здоровых жителей г.Баку, пока отсутствуют. Но можно надеяться, что до проведения широкомасштабных исследований определенные нами важнейшие показатели НИР, несмотря на сравнительно небольшое число исследований, могут использоваться в качестве средних нормальных величин этих показателей (25).
И наконец, приняв во внимание ранее упо-
минавшиеся исследования, а также результаты динамического исследования с помощью этого же комплекса методов небольших групп больных туберкулезом легких, больных хроническими гепатитами В и С и онкологических больных, получавших в качестве иммуностимуляторов различные модификаторы иммунного ответа (препараты а-ИФН, тимозин-альфа1, стимуляторы гемопое-за) (29, 32, 38, 47), мы пришли к выводу о том, что с помощью этого комплекса можно эффективно выявлять и признаки стимуляции НИР.
В заключение приведем данные, косвенно подтверждающие возможность использования указанных методов в клинических исследованиях. В частности, мы осуществили сравнение результатов, полученных при исследовании образцов крови у нескольких здоровых лиц и у части больных туберкулезом легких и лимфома-ми (и, в том числе, получивших иммуностимулирующую терапию) с помощью НСТ-теста и симплифицированного варианта ЦТ с результатами определения удельной активности адено-зиндезаминазы (АДА) в пуле соответствующих иммуноцитов: в суспензии обогащенной НФ и в суспензии иммуноцитов, в которой определялся их ИЦА.
Целесообразность такого сравнения была обусловлена тем, что активность этого фермента в иммуноцитах рассматривается как весьма информативный и интегративный по характеру иммунобиохимический показатель функциональной активности иммуноцитов, отражающих их метаболическую "готовность" к пролиферации и дифференцировке, а значит и к формированию адекватной эффекторной реакции (6, 36). Такое сравнение, осуществленное методом четырехпольной альтернативной корреляции показало, что повышение процента НСТ-позитивных НФ в крови и величины ИЦА иммуноцитов, равно как и снижение этих двух показателей, в достаточно высокой степени позитивно коррелировали с повышением и, соответственно, с понижением удельной активности АДА в иммуноцитах. Этот факт мы восприняли как еще одно подтверждение способности использованных нами методов выявлять соответствующие признаки как депрессии, так и стимуляции НИР.
Таким образом, на основании результатов, полученных в ходе проведенных нами исследований, мы пришли к заключению о том, что используя оптимизированный комплекс, включающий лишь четыре достаточно простых и доступных иммунологических методов, воспроизводимых в условиях неспециализированной лаборатории клинического профиля, удается выявлять признаки не только депрессии, но и стимуляции основных звеньев НИР. Это позволяет полагать, что такой комплекс методов мог бы оказаться вполне пригодным для применения в
клиниках как инфекционного, так и онкологического профиля, а также при проведении массовых профилактических обследований здоровых лиц.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алиев Д.А., Аскеров H.M., Мамедов М.К., Кадырова A.A. -Здоровье (Баку), 2004, N.8, р.72-74; 2. Алиева H.A., Ахундова Д.М., Кадырова А.А. и др. - Здоровье, 2004, N.9, c.80-82; 3. Амирасланов А.Т., Мамедова Л.П., Кадырова А.А., Мамедов М.К.
- Азерб. мед. Ж., 2004, N.3, с.26-29; 4. Вагнер В.К., Насонкин О.С., Борискина Н.Д. - Лабор. дело, 1989, N.12, c.31-33; 5. Гришина Т.И., Пухальский А.Л. - В кн.: Клиническая иммунология. Под ред. Е.И.Соколова. М.: Медицина, 1998, с. 57-78; 6. Гудратов Н.О., Мамедов М.К. - Азрб. Ж. онкологии, 1996, N.1, с.31-33; 7. Дзержинская И.И. - Иммунология, 1983, N.6, с.44-47; 8. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. Екатеринбург: УрО РАН, 2001; 9. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. М.: Медицина, 1996; 10. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы общей патологии. С.-Пб.: Элби-СПб, т.1, 1999; 11. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможности управления, М.: Время, 2002; 12. Иммунология инфекционного процесса. Под ред. В.И.Покровского и др. М.: Медицина, 1994; 13. Кадырова А.А. Изучение интерфероногенной и противовирусной активности некоторых природных и синтетических индукторов интерферона. Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1977; 14. Кадырова А.А. - Биомедицина, 2003, N.3, с.12-16; 15. Кадырова А.А. - Здоровье, 2003, N.10, c.46-49; 16. Кадырова А.А. - Биомедицина, 2003, N.4, с.3 -10; 17. Кадырова А.А. - Здоровье, 2004, N.7, с.53-56; 18. Кадырова А.А. - В кн.: Мат-лы 2-го Национальн. конгресса по аллергологии, иммунологии и иммунореабилитации. Баку, 2004, с.127-131; 19. Кадырова А.А., Гудратов Н.О. - Биомедицина, 2004, N.2, c.35-38; 20. Кадырова А.А., Ершов Ф.И., Мамедов М.К. - В кн.: Акт. проблемы гематологии и трансфузиологии. Баку, 2002, с.179-181; 21. Кадырова А.А., Гулиева А.А., Магеррамова А.А., Магеррамов Ф.М. - Там же, 2004, с.164-168; 22. Кадырова А.А., Гулиева А.А., Магеррамова А., Магеррамов Ф. - Здоровье, 2005, N.1 (в печати); 23. Кадырова А.А., Ахундова Д.М., Дадашева А.Э. и др. - В кн.: Соврем. достижения мед. науки и практич. здравоохранения в Азербайджане, 2004, т.1, с.142-146; 24. Кадырова А.А., Гамидо-ва Н.А., Мамедов М.К. и др. - В кн.: Акт. проблемы гематологии и трансфузиологии. Баку, 2002, с.175-178; 25. Кадырова А.А., Ка-булов Г.Г., Мамедов М.К. и др. - Экоэнергетика, 2004, N.1, с.26-29; 26. Караулов А.В., Земсков А.М., Земсков В.М. и др. Клиническая иммунология и аллергология. М.: МИА, 2002, 650 с. 27. Лабораторные методы оценки иммунного статуса. - В кн.: Медицинские лабораторные технологии и диагностика. Справочник. Под ред. А.И.Карпищенко. С.-ПБ.: Интермедика, 1999, т.2, с.288-298; 28. Мамедбеков Э.Н., Шихалиев Я.Ш., Кадырова А.А. и др. -Здоровье, 2004, N.10, с.75-76; 29. Мамедбеков Э.Н., Шихалиев Я.Ш., А.А.Кадырова и др. - В кн.: Акт. проблемы гематологии и трансфузиологии. Баку, 2004, с.... ; 30. Мамедов М.К., Кадырова
A.А., Ахундова Д.М. - Здоровье, 2004, N.5, с.59-61; 31. Мамедов М.К., Фараджев О.Ф., Кадырова А.А. - Вирусные гепатиты (Москва), 2005, N.1, в печати; 32. Мамедов М.К., Ахмедбейли Х.Ф., Дадашева А.Э., Кадырова А.А. - Мир вирусных гепатитов (Москва), 2005, N.1, с.9-10; 33. Мамедов М.К., Кадырова А.А., Оруджли Р.Н., Алиев А.Ю. - В кн.: Акт. вопросы диагностики, лечения и профилактики трансфузионных вирусных инфекций. Волгоград, 2001, с.46-47; 34. Мамедов М.К., Алиев А.Ю., Кадырова А.А. и др.
- Здоровье, 2004, N.3, с.37-38; 35. Мамедов М.К., Гудратов Н.О., Кадырова А.А. и др. - Азерб. Ж. метаболизма, 2004, N.1, с.51-54; 36. Мамедов М.К., Гудратов Н.О., Кадырова А.А. и др. Активность аденозиндезаминазы в иммуноцитах как биохимический показатель состояния иммунологически обусловленной резистентности. -Азерб. Ж. метаболизма, 2004, N.2, с.51-53; 37. Мамедов М.К., Оруджли Р.Н., Кадырова А.А. и др. - В кн.: Акт. проблемы гематологии и трансфузиологии. Баку, 2002, с.103-106; 38. Оруджли Р.Н., Мамедов М.К., Кадырова А.А. и др. - В кн.: Мат-лы 3-го съезда онкологов и радиологов СНГ. Минск, 2004, ч.2, с. 296297; 39. Оруджли Р.Н., Мамедова С.М., Кадырова А.А. и др. -Азерб.Ж.онкологии, 2003, N.2, с. 115-117; 40. Пастер Е.У., Овод
B.В., Позур В.К. Иммунология. Практикум. Киев: Вища школа, 1989; 41. Подильчак М.Д., Терлецкая Л.М., Красивский Э.З. -
Вопросы онкологии, 1990, N.7, с.870-872; 42. Рыкова М.П., Спи-ранде И.В., Зедгенидзе М.С.и др. - Иммунология, 1981, N.3, с.88-90; 43. Семененко Т.А., Михайлов М.И., Мамедов М.К. и др. - В кн.: Акт. вопросы физиологии и патологии человека. Баку, 1999, с.463-465; 44. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000; 45. Яриллин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999; 46. Abbas A., Lichtman A. Pober J. Cellular and molecular immunology. N.Y.: Harcout Brese &.Co., 2002; 47. Farajev O., Mamedov M., Kadyrova A. et al. - Azerb. J. oncology, 2004, N.1, р.138-139; 48. Jenz V., Ditrich V. - Vita Med.J., 2000, v.1, р.67-68; 49. Kadyrova A. - Azerb. J. oncology, 2004, N.1, р.112; 50. Yoshinoril., Nobuyuki A., Osamu K. et al. - Amer. J. Clin. Pathol., 1988, v.90, р.674-678.
SUMMARY
Methodic opportunities of detection of depression's signs of the non-specific immunomediated resistance at clinic practice and preventive medicine A.Kadyrova
The author in the paper reviewed and summarized the main results of her own investigation dedicated to simplification of several immunologic methods for determination the functional condition of non-specific immunologically-mediated resistance and adaptation these methods for usage in low-equipped laboratories.
It was demonstrated that for this purpose at clinic practice and prophylactic examination methods of calculation of functionally active neutrophils, natural killer cells in the blood, measurement of cytotoxic activity of pooled immunocytes and quantitation of alpha-interferon in the blood serum.
nocTynHJia 01.12.2004
