CC BY
15
Влияние тимозина-альфа1 на показатели иммунологически обусловленной резистентности в экспериментах и клинических наблюдениях
М. К. Мамедов, А. А. Кадырова
Онкологический научный центр; Азербайджанский медицинский университет, г.Баку
Иммунологически обусловленная резистентность к возбудителям инфекционных заболевания (ИЗ) и опухолевому росту, реализуемая посредством как антиген-независимых (неспецифическая резистентность), так и антиген-зависимых (приобретенный иммунитет) механизмов, играет решающую роль в защите организма от ИЗ и важную роль в способности организма противостоять действию канцерогенных факторов, а в последующем - и пролиферации и распространению возникших в организме клеток злокачественных опухолей (ЗО) (2). Это позволяет полагать, что совершенствование методов стимуляции неспецифической иммунологически обусловленной резистентности (НИР) может открыть перспективы повышения эффективности профилактики и лечения больных ИЗ и ЗО (1).
Между тем, если в области стимуляции антиген-зависимого механизма резистентности достигнуты немалые успехи, и с этой целью в практической медицине уже используется ряд эффективных препаратов, то возможности лекарственной стимуляции неспецифической иммунологической резистентности (НИР) существенно ограничены отсутствием препаратов, селективно действующих на ее факторы.
Исключение в этом смысле могут составить лишь препараты альфа-интерферона (а-ИфН), индукторов интерфероногенеза и некоторых стимуляторов лейкоцитопоеза (3, 4). Однако, эти препараты, уже успешно используемые в клинической практике, мало пригодны для профилактической стимуляции НИР у здоровых, главным образом, из-за частого развития тягостных проявлений побочного действия (4). В последние годы в литературе появились сведения о тимозине-альфа1 (Та1) и созданном на его основе лекарственном препарате "задаксин", который, обладая высокой иммунотропной активностью, практически, свободен от каких-либо побочных действий (8, 9). Данный препарат уже занял определенное место в качестве средства для лечения больных хроническими гепатитом В (ХГВ) и гепатитом С (ХГС) и некоторыми ЗО (10). Однако, в доступной литературе мы не нашли сведе-
ний об исследовании упомянутого препарата в качестве стимулятора НИР. Это и побудило нас провести ряд экспериментальных исследований и клинико-лабораторных наблюдений, специально посвященных данному вопросу.
Поскольку часть полученных нами данных была опубликована ранее [11, 12, 16], в настоящем сообщении мы лишь кратко охарактеризуем те их них, которые продемонстрировали наличие у Та1 способности стимулировать НИР и подтвердили существование реальной возможности его использования в этом качестве в профилактических целях.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Основным объектом экспериментальных исследований служили мыши, на которых были воспроизведены модели инфекционного процесса, вызванного St. aureus, и модель опухолевого роста. В качестве последней служил рост внутрибрюшинно перевитой животным карциномы Эрлиха (асцитный вариант).
Мониторинг показателей НИР в процессе развития инфекции и роста ЗО осуществляли путем исследования материалов (гомогенат селен-зенки, кровь), полученных от забитых в определенные сроки мышей. С этой целью использовали комплекс лабораторных методов: определение фагоцитарно-метаболической активности нейт-рофилов с помощью спонтанного варианта НСТ-теста, позволяющего установить в крови процент НСТ-позитивных нейтрофилов (НСТ+Н) (17), определение индекса цитотоксической активности (ИЦА) спленоцитов с помощью модифицированного нами теста (14), активности аде-нозиндезаминазы (АДА) в спленоцитах (15) и уровня а-ИФН в сыворотке крови с помощью иммуно-ферментного метода (ИФМ) на основе коммерческих наборов реагентов "Biosource"(C0A).
Интегральную оценку характера изменения противоинфекционной и противоопухолевой резистентности осуществляли in vivo путем постановки на мышах титрационно-инокуляционного теста (ТИТ) и трансплантационного теста (ТТ), соответственно (6, 18). По результатам ТИТ и ТТ методом Рида-Менча расчитывали величины lg LD50% и lg TrD50%, отражающие эффективность указанных компонентов НИР (7).
Клинико-лабораторные наблюдения были осуществлены на двух волонтерах, а также на 4 больных хроническими гепатитом В (ХГВ), 6 больных
хроническим гепатитом С (ХГС) и 4 больныхлимфо-мами, получавшими задаксин как компонент проводимого лечения. В крови этих лиц определяли процент HCT+H и естественных киллерных клеток (ЕКК), идентифицируемых как большие гранулярные лимфоциты (13) и ИЦА ЕКК, а в сыворотке с помощью ИФМ на основе коммерческих наборов реагентов "ProCon"(P0) определяли уровень а-ИФН.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Экспериментальные исследования были осуществлены в нескольких сериях опытов.
В первом опыте мышам 3 дня подряд однократно подкожно вводили Та1 (из расчета 0,02 мкг/кг массы тела) и, спустя 1, 3 и 5 суток после последней инъекции, забивали по 4 животных и исследовали полученные у них материалы. Сравнение полученных результатов показало, что спустя сутки процент НСТ+Н в крови, ИЦА спленоцитов, активность в них АДА и уровень а-ИФН в сыворотке крови значительно превышали средние значения этих показателей у животных контрольной группы (р<0,01), однако, в последующие сроки наблюдений отмечалось их постепенное снижение. Эти данные послужили основанием для заключения о том, что Та1 обладал способностью достаточно интенсивно стимулировать клеточные и гуморальные факторы НИР.
Далее был поставлен ряд опытов, посвященных изучению возможностей использования Та1 для коррекции ранее документированной нами депрессии НИР, развивающейся у животных, инфицированных St. aureus и инокулированных клетками ЗО. При этом, мы отказались от применения Та1 как "средства для лечения" (8) и воспользовались им в качестве "средства для профилактики", т.е. вводили его животным до заражения их бактериальным агентом и до перевивки им ЗО. Такой подход позволил нам, осуществляя после премедикации животных этим препаратом инфицирование их стафилококком и инокуляцию опухолевыми клетками, оценить характер влияния Та1 на чувствительность и, соответственно, на резистентность мышей к инфекции и ЗО.
Для этого в следующем опыте мышам вводили Та1 в том же режиме, как и в предыдущем эксперименте, но спустя сутки этих животных инфицировали 1 млн бактериальных клеток. На 3 сутки развития инфекции все животные были забиты, а полученные материалы были исследованы так же, как и в предыдущем опыте (не определяли лишь активность АДА в спленоцитах). Сравнение результатов данного опыта с результатами ранее поставленного опыта, в котором был выявлен факт развития депрессии НИР на фоне бактериальной инфекции, отчетливо показало, что премедикация мышей значительно ослабила депрессивное действие инфекции на все оцененные в опыте показатели НИР.
В другом опыте аналогичным образом было
продемонстрировано, что введение Tal в таком же режиме до перевивки опухоли ощутимо ослабило проявления депрессивного влияния на НИР со стороны опухолевого процесса.
Наиболее демонстративное экспериментальное доказательство способности Tal ослаблять депресивное влияние на НИР инфекционного и опухолевого процессов было получено при постановке ТИТ и TT. Полученные результаты показали, что премедикация животных Tal повысила величину lg LDöo% до 6,54 (в контроле - 4,46), а величину lgTrD50% до 7,09 (в контроле - 5,50). Это означало, что премедикация задаксином значительно снизила чувствительность (и, соответственно, повысила резистентность) мышей к инфекции и ЗО. Это позволило сделать вывод о том, что Tal, действительно, обладает выраженной способностью стимулировать НИР, в частности, противоинфекционную и противоопухолевую резистентность.
Подтверждения способности Tal стимулировать НИР были получены в ходе упомянутых выше наблюдений за лицами, получавшими инъекции задаксина. Во всех случаях уже спустя сутки после одного введения отмечалось отчетливое повышение, по сравнению с исходными показателями, процентов НСТ+Н и ЕКК в крови, ИЦА ЕКК и уровня a-ИфН в сыворотке крови.
Несмотря на ограниченное число больных, вовлеченных в эти наблюдения, полученные в них результаты позволили сделать вывод о том, что задаксин обладал выраженной способностью стимулировать НИР, оказывая такое действие на все определенные нами показатели. К этому надо добавить, что клиницисты, проводившие эти наблюдения, единодушно отмечали отсутствие каких-либо побочных эффектов препарата [11, 16].
Несмотря на то, что представленные выше данные носят предварительный характер, а способность Tal воздействовать на НИР все еще нуждается в дальнейшем изучении, изложенные выше факты, на наш взгляд, не оставляло сомнений в том, что Tal представляет собой весьма перспективное средство для стимуляции НИР.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ершов Ф.И., Кадырова A.A. Интерфероны как стимуляторы им-мунологически обусловленной резистентности. - Биомедицина, 2004, N.1, с.17-22; 2. Кадырова A.A. Иммунологически обусловленная естественная резистентность и подходы к ее оценке. - Там же, 2003, N.4, с.3-10; 3. Кадырова A.A. Интерфероногены и их использование для стимуляции иммунологически обусловленной резистентности. - Здоровье, 2004, N.6, c.49-51; 4. Кадырова A.A. Рекомбинантные интерфероны - важное достижение биотехнологии. - Биомедицина, 2004, N.2, c.42-45 ; 5. Кадырова A.A. Оптимальный комплекс лабораторных тестов для оценки состояния им-мунологически обусловленной резистентности для клинических исследований.- В кн.: Мат-лы 2-го Национ., конгресса по аллергологии, иммунологии и иммунореабилитации. Баку, 2004, с.127-131; 6. Кадырова A.A. Подходы к оценке противоинфекционной резистентности мышей на фоне бактериальной инфекции и ее
стимуляция. - Здоровье (Баку), 2004, N.7, с.53-56; 7. Кадырова A.A., Гудратов H.O. Подходы к оценке противоопухолевой резистентности на фоне развития злокачественной опухоли у мышей и к ее стимуляции. - Биомедицина, 2004, N.2, c.35-38; 8. Кребс Р. Биология и иммунофармакология тимозина-альфа1.- Там же, 2003, N.2, c.9-13; 9. Мамедов М.К., Дадашева А.Э., Кадырова A.A. Ти-мозин-альфа1 - цитокин, открывший новые возможности иммуно-модулирующей терапии. - В кн.: Мат-лы 2-го Национальн, конгресса по аллергологии, иммунологии и иммунореабилитации. Баку, 2004, с.230-233; 10. Мамедов М.К., Кадырова A.A. Задаксин -новые перспективы применения в лечении инфекционных и онкологических заболеваний. - Биомедицина, 2004, N.2. c.3-10; 11. Мамедов М.К., Aхмедбейли Х.Ф., Дадашева A3., Кадырова A.A. Результаты комбинированного лечения больных хроническим гепатитом В тимозином-альфа1 и ламивудином. - Мир вирусных гепатитов, 2005, N.1, c.9-10; 12. Мамедов М.К., Aхмедбейли Х.Ф., Дадащева A3., Кадырова A.A. Результаты применения комбинации тимозина-альфа1 и пегасиса для лечения больных хроническим гепатитом С. - Российск. Ж. гастроэнтерологии, 2005, N.1, c.20; 13. Мамедов М.К., Кадырова A.A., Aхундова Д.М. Модификация метода подсчета естественных киллерных клеток в периферической крови. - Здоровье, 2004, N.5, c.59-61; 14. Мамедов М.К., Гудратов H.O., Кадырова A.A. и др. Биохимический метод количественной оценки цитотоксической активности эффекторных иммуноцитов естественной резистентности в клинических и экспериментальных исследованиях. - Aзеpб. Ж. метаболизма, 2004, N.1, c.51-54; 15. Мамедов М.К., Гудратов H.O., Кадырова A.A. и др. Aктивность аденозиндезаминазы в иммуноцитах как биохими-
ческий показатель состояния иммунологически обусловленной резистентности. - Там же, 2004, N.2, c.51-53; 16. Farajev O., Mamedov M., Aliyev A., Kadyrova A. Application of tymosin-alphal in treatment of patients with Hodgkin's lymphoma.- Azerb. J. oncology, 2004, N.1, p.138-139; 17. Kadyrova A. The application of simplified neutrophils activity quantitation test for detecting depression of non-specific immuno-mediated resistance. - Ibid., 2004, N.2, 222; 18. Kadyrova A., Gamidova N. Immunotropic drugs as a stimulators of the anti-infectious resistance at mice. - Ibid., 2004, N.1, p.161.
SUMMARY
Thymosin-alpha1 action to parameters of immunologically-mediated resistance at experiments and clinic observations M.Mamedov, A.Kadyrova
The authors summarized results obtained in experiments and clinical observation of volunteers and patients with chronic hepatitis B and C and lymphomas demonstrated ability of thymosinalpha1 and its drug form (zadaxin) to stimulate immuno-logically-mediated resistance to infection and tumour growth.
Поступила 23.03.2005
