CC BY
4
10. Польченко В. И.. Ткач Л. Н., Гуменный В. С. // Врач, дело. — 1975. — № 2. — С. 106—108.
П. Сидоренко Г. И., Гончарук Е. И., Ховака В. В.Ц Гиг. и сан,— 1980,—№ П. —С. 4—7.
12. Спыну Е. //.//Актуальные вопросы гигиены применения пестицидов в различных климатогсографических зонах. — Ереван, 1976. — С. 8—11.
УДК 614.777:547.«»
До настоящего времени принят единый методический подход к санитарно-микробиологиче-скому изучению антропогенного загрязнения воды пресных и морских водоемов. В то же время при проведении многолетних исследований по микробиологическому контролю прибрежных вод морей нами было отмечено снижение результативности ряда методик под влиянием физико-химического состава морской воды и гало-толерантной аутофлоры моря.
Как известно, неблагоприятные условия среды обитания могут вызывать у микроорганизмов состояние стресса, в частности в водной среде [3, 4]. Стресс можно охарактеризовать как сублетальное физиологическое состояние микроорганизмов, при котором происходит потеря способности нормально расти в условиях, являющихся удовлетворительными для роста неповрежденных клеток [4, 6].
Микроорганизмы, попадая в воду или подвергаясь воздействию любых неблагоприятных физико-химических факторов, претерпевают 3 основных типа влияния, в результате чего клетки погибают, остаются неповрежденными или переходят в состояние сублетального стресса. Последний имеет несколько стадий, ибо часть поврежденных клеток через определенный промежуток времени восстанавливает способность к росту на дифференциальных средах (явление реактивации), а часть требует для своего роста более богатых питательных сред без ингибиторов. Это четкое разделение наблюдали при изучении выживаемости патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов в морской воде, выполняя параллельные посевы на дифференциальные среды и сахарный мясопептонный агар.
В последние годы все чаще стали появляться работы о повреждающем действии воды на микроогранизмы [3—6]. Разрабатывают специ-
13. Campunini G., Maggi Е„ Arfioti D. // Human Nutrition and Nutrition and Pesticides in Cattle. — Basel, 1980.— P. 129—171.
14. h'rawley J. P.. Duggan R. E. // Advances in Pesticide Science. — Oxford, 1979. —Vol. 3. — P. 696—700.
Поступила 19.01.87
альные методы и питательные среды для учета сублетального стресса [8, 9]. Проблема подсчета поврежденных эшерихий нашла отражение в ряде методических документов [5, 7]. Выполняя натурные и экспериментальные исследования, мы также часто сталкивались с явлением стресса, который проявлялся в следующем. При контроле морской воды на наличие эшерихий пересевали со среды ЛПС на среду Эндо все посевы с наличием роста без учета газообразования, так как предполагали ингибирующее действие морской воды на ферментативную активность микроорганизмов. В среднем на каждые 100 пробирок со средой ЛПС, в которых наблюдался рост микроорганизмов, но без газообразования, в 30 при последующей идентификации было установлено наличие лактозоположительных эшерихий, т. е. клетки восстанавливали способность разлагать лактозу с образованием газа как при 37°С, так и при 44,5°С. При изучении выживаемости эшерихий в морской воде выявлено, что часть особей на второй день переставала разлагать лактозу, а часть из них не росла * на среде Эндо. Более выраженным был этот процесс в морской воде Ялтинской бухты (соленость воды 18%о) по сравнению с морской водой Бердянского залива (соленость 11%о).
Следовательно, учет эшерихий в морской воде по ферментации лактозы с образованием газа на первом этапе исследований методом наиболее вероятного числа (НВЧ) может привести к заведомо ложным результатам. Не исключено это также при работе с применением метода мембранных фильтров, так как часть эшерихий, подверженных сублетальному стрессу, не растет на среде Эндо. ^
Потерю способности к росту на дифференциальных средах наблюдали также у других микроорганизмов после их пребывания в стерильной морской воде. В опытах использовали вы-
Методы исследования
Г. И. Корчак
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ ИЗУЧЕНИЮ МОРСКИХ ВОД
Киевский НИИ общей н коммунальной гигиены им. А. Н. Марзеева
деленные из морской воды штаммы Е. coli, S. faccalis, С. albicans и выделенные от людей штаммы S. typhimurium, S. flexneri, S. aureus. Вносили 2,7—3,3 lg микроорганизмов на 0,1 см3 воды. Через 8 ч контакта с морской водой 46— 63 % Е. coli, S. typhimurium, С. albicans восстанавливали способность к росту на дифференци-« альных средах, т. е. происходила реактивация микроорганизмов. У S. flexneri, S. faecalis и S. aureus восстановления такой способности не наблюдали. Однако они также испытывали состояние сублеталыюго стресса, о чем свидетельствовало количественное различие роста на сахарном мясопептонном агаре и дифференциальных средах.
Наличие выраженного повреждающего действия морской воды на антропогенные микроорганизмы выдвигает ряд других вопросов методического плана, прежде всего об использовании ин-гибиторных сред накопления узконаправленного действия, в частности сред для выделения сальмонелл. На низкую эффективность магниевой среды при выделении сальмонелл из морской воды указывает В. И. Немыря [2], В. В. Владо-вец и соавт. [1]. Сравнительное изучение действия хлорида магния и сернокислого магния в морской и водопроводной воде на представителей 7 серотипов сальмонелл в наших исследова-» ниях показало более выраженный токсический эффект обоих соединений в морской воде. Последнее согласуется с положением о повышении активности химических соединений в морской воде. Поэтому ингибиторные среды накопления в прописи для воды пресноводных водоемов являются высокоингибиторными применительно к изучению морских вод. Нами модифицирована магниевая среда для выделения сальмонелл из морской воды: снижена концентрация хлорида магния до 1,5 % " изъят хлорид натрия.
Испытание среды в натурных условиях дало удовлетворительный результат (табл. 1). Из по-
t Та бл и ца 1
Сравнительная оценка сред накопления для выявления сальмонелл из морской воды зон рекреации
Иэ них положительных
Среда Число
проб абс. М±т количе-
ство
штаммов
Магниевая (модификация) 25 6 24±8,5 11
Селенитовая 25 « 32±9,3 12
Магниевая (официальная
пропись) 25 1 4±3,9 1
Всего . . . 25 10 40±9,8 19
32±9,3
Примечание. Числитель — общий процент выделения на селенитовой среде и магниевой в модификации; знаменатель — на селенитовой среде и магниевой в официальной прописи.
Таблица 2
Сравнительная оценка сред накопления для выделения сальмонелл из морской воды в местах выпуска сточных вод
Среда Число проб Из иих положительных
абс. М±т количество штаммов
Магниевая (модификация) Селенитовая 22 22 5 1 22,7±8,9 4,54±4,4 5 1
Всего . . . 22 5 22,7±8,9 6
лученных данных следует, что эффективность разработанной модификации магниевой среды несколько ниже селенитовой среды. Однако ряд отрицательных проб при использовании селенитовой среды были положительными при использовании магниевой среды, что повысило общий процент положительных проб с 32 до 40. Количество выделенных штаммов было практически одинаковым (12 и 11). Наряду с этим отмечено явное преимущество модификации магниевой среды при исследовании морской воды в местах выпуска сточных вод (табл. 2).
Разработана также модификация селенитовой среды накопления для выделения сальмонелл из морской воды. Исследования проведены в модельных морских водоемах (соленость воды 18 %о) с 5 сероварами выделенных из моря сальмонелл. Изучена динамика размножения в среде с 0,2, 0,3 и 0,4 % селенита натрия. Контролем служило размножение сальмонелл в среде без селенита натрия. Для имитации натурных условий во всех вариантах опытов в морскую воду вносили сточную. Полученные результаты представлены в табл. 3. Статистически значимый максимум размножения по сравнению с контролем для S. paratyphi наблюдали в среде с 0,2 % селенита натрия, S. london и S. java — 0,3%; S. typhimurium размножались с одинаковой интенсивностью при 0,2 и 0,3%, S. menden — при 0,4 %.
Следовательно, рекомендуемая официальной прописью 0,4 % концентрация селенита натрия не снижала скорость размножения только одного из пяти сероваров сальмонелл — S. menden. Сравнение различий численности сальмонелл при 0,2 и 0,3 % селенита натрия по критерию Стьюдента позволило заключить, что оптимальные условия для размножения изученной группы сальмонелл создаются при концентрации селенита натрия 0,3%-
При исследовании морской воды необходимо также учитывать наличие аутохтонной микрофлоры моря, устойчивой к ряду химических веществ, которые используются в санитарной микробиологии для повышения элективности питательных сред.
Таблица 3
Размножение сальмонелл (статистические показатели количества сальмонелл в 0,1 см3) в питательной среде с различными
концентрациями селенита натрия
Серовар сальмонелл Ai m M я, M m M m
Концентрация селенита натрия. */„
0.2 0.3 0.4 0 (контроль)
S. paratyphi 877,7 43,3 44,9 598 32,4 12,9 574 12,5 27,3 168 8,1
S. typhimurium 142,7 9,1 4,4 129,7 6,2 4,0 106 1,7 1.6 96,7 5.4
S. mendeii 36 3,8 21,5 148,3 8,0 3,5 776,3 27,3 21,2 183 5.7
S. london 45,3 2,0 9.8 75 1.7 19,6 35 0,6 8,2 12,3 2,7
S. jave 4,0 1.2 3.4 48,3 2.3 9,9 31,6 1.8 5,7 13,7 2,6
Выраженные методические затруднения возникли у нас при выделении стафилококков из воды пляжей. В солевом бульоне и на молоч-но-желточно-солевом агаре (МЖСА) с поли-мекенном как при пересеве на него с солевого бульона, так и на фильтрах, помещенных на эту среду, активно размножалась обширная группа галотолерантной флоры моря, устойчивой к полимексину. Количество микроорганизмов в июле — августе достигало 10—100 тыс. и более в 1 дм3, что значительно превышало численность стафилококков. Многие из этих микроорганизмов обладали лецитовителлазной активностью. Из-за их бурного развития выделение и учет стафилококков становились практически невозможными.
Из изученных признаков группы галотоле-рантных микроорганизмов и S. aureus в сравнительном аспекте лишь рост в пептонной воде без хлорида натрия можно считать существенным дифференциальным тестом. Это свойство было положено в основу среды выделения стафилококков из морской воды. Результаты позволили заключить, что в случае развития га-лотолерантных микроорганизмов при исследовании морской воды на наличие стафилококков следует пользоваться методом НВЧ и при этом отказываться от традиционных солевых сред накопления. В качестве подтверждающей элективной среды рекомендуется использовать МЖСА не более чем с 6 % хлорида натрия.
Таким образом, при изучении аллохтонных микроорганизмов в морской воде необходимо
создавать оптимальные условия для их размножения, вносить в питательные среды селективные химические соединения с учетом повреждающего действия морской воды, максимально снижать скорость размножения галотолерантной аутофлоры моря.
Разработка и модификация методов анализа морских вод с учетом указанных особенностей методологического подхода повышают эффективность и качество санитарно-микробиоло-гнческого контроля воды прибрежных зон морей, что будет способствовать профилактике кишечных инфекции.
п •
Литература
1. Владовец В. В.. Мойсеенко И. И.. Сайфутдиков M. М. // Методы индикации бактерий и вирусов в объектах окружающей среды. — М., 1982. — С. 21—25.
2. Немыря В. И. // Гнг. и сан. — 1973. — № 12.—С. 82— 84.
3. Anderson J. С.. Rhodes M.. Kalor H. //Appl. environm. Microbiol.— 1979.— Vol. 38, N 6. — P. 1147—1152.
4. Camper A. K., McFeters G. A. // Ibid. — Vol. 37, N 3.-P. 633 -641.
5. Le Chevallier M. W.. McFeters G. A. Hi. Amer. Water Works Ass. — 1985. — Vol. 77. N 6. — P. 81—87.
6. McFeters G. A.. Cameron S. C„ Le Chevallier M. W. // Ibid.— 1982.— Vol. 43, N 1, —P. 97—103.
7. Standart Methods for the Examination od Water and Wastewater. — Washington. 1980. ^
8. Stuart D.. G.. McFeters G. A.. Schillinger J. K.// Appt. environm. Microbiol. — 1977. — Vol. 34. — P. 42—46.
9. Wilkins J. R„ Boykin E. H.J/J. Amer. Water Works Ass. - 1976. — Vol. 68. — P. 257—263.
Поступила 25.11.86
УДК в H. 7-07:616-056.43-02+ 616-056.43-02:614.71-07
С. В. Лебедев, В. П. Чехонин, А. В. Прыгун
ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕННОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
В настоящее время перспективы научных исследований в области охраны окружающей среды связывают с теорией интегрального регламентирования гигиенических факторов [7, 8]. Эта теория базируется на разработке трех ос-
новных понятий, таких, как максимально допустимая нагрузка на организм, реальная нагрузка на организм всей совокупности неблагоприятных воздействий и фактическое загрязнение окружающей среды. Научные работы в этих на-
