CC BY
9
УДК 614.777:547.495.9]-074
И. С. Духовная МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛИЛБИГУАНИДА В ВОДЕ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
о-Толилбигуанид (димотол) применяется в промышленности полимерных материалов как отвердитель эпоксидных смол и покрытий, а также как ускоритель вулканизации резин [7]. В литературе имеются ограниченные сведения о методах определения о-толилбигуанида в вулка-низатах резин и искусственных смесях с использованием УФ-спектрофотометрии и жидкостной хроматографии [5]. Некоторые другие производные бигуанида (фенилэтил-, диметил- и диэтил-бигуанид), применяемые в качестве фармацевтических препаратов, определяют с помощью тонкослойной [2], газожидкостной [4] и высокоэффективной жидкостной [6] хроматографии.
Нами при разработке метода определения о-толилбигуанида в воде для санитарно-химических исследований полимерных материалов использована хроматография в тонком слое сорбента.
Для обнаружения о-толилбигуанида на пластинках с тонким слоем силикагеля КСК и «силуфол» исследовали реагенты, применяемые для обнаружения производных гуанидина — реактив Сакагути [1, 3] и нитропруссидный реагент [1, 2], а также реактивы, используемые для выявления азотсодержащих соединений — нингидрин, реактив Драгендорфа и 1,2-нафтохинон-4-сульфо-нат натрия. Двумя последними о-толилбигуанид на пластинках не обнаруживается. С помощью реактива Сакагути и нингидрина не удается обнаружить менее 10—20 мкг вещества, что не позволяет достичь удовлетворительной чувствительности определения. При использовании нитро-пруссидного реагента возможно выявление 1 мкг о-толилбигуанида. Однако образующаяся розовая окраска нестабильна и исчезает в течение 1 — 2 мин. После повторного опрыскивания пластинки окраска восстанавливается, но на столь же короткий срок.
Значительно большей устойчивостью обладает окраска, образующаяся при обнаружении о-толилбигуанида реактивом, состоящим из смеси 10 % растворов хлорного железа, железосинеро-дистого калия и воды, взятых в соотношении 1:1:2. Образующиеся синие пятна на голубом фоне стабильны в течение 1 ч. При этом на пластинках «силуфол» возможно обнаружение 0,2 мкг вещества. На пластинках с тонким слоем силикагеля КСК минимально детектируемое количество 5 мкг. Большая разница в чувствительности определения объясняется, вероятно, как различными марками силикагелей и типами связующих, так и неодинаковыми толщиной слоя и размером частиц.
В результате изучения хроматографического поведения о-толилбигуанида на пластинках «си-
луфол» с использованием различных подвижных фаз получены следующие значения Иг; эфир ди-этиловый — 0, метанол — 0,02, ацетон — 0, метанол — вода (5:1) — 0,08, ацетон — вода — ледяная уксусная кислота (50:3,5:0,5) — 0,15, метанол — вода — ледяная уксусная кислота (50: 3,5:0,5) —0,20, метанол — 25 % аммиак (30:1) — 0,10, ацетон — 25% аммиак (30:1) — 0,09, метанол — ацетон — 25 % аммиак (5:1:1) —
0,21, метанол — ацетон — 25 % аммиак (3:1:1) — 0,40, ацетон — 25 % аммиак (9:1)—0,58, ацетон — 25 % аммиак (7:3)—0,73. Оптимальные Иг и форма пятен получены в системе ацетон — 25 % аммиак (9:1).
о-Толилбигуанид хорошо растворим в полярных органических растворителях и в воде, а в неполярных растворителях практически нерастворим. Попытки концентрировать его из воды с помощью экстракции хлороформом или этилаце-татом не дали положительных результатов. В связи с этим для концентрирования о-толилбигуани-да было применено упаривание водных проб в вакууме. Установлено, что при упаривании нейтральных проб при температуре не выше 50 °С внесенное вещество обнаруживается практически полностью. При более высокой температуре, а также в кислой среде происходит деструкция о-толилбигуанида, о чем свидетельствует появление дополнительных пятен на хроматограммах.
Таким образом, определение о-толилбигуанида в воде производится по следующей методике.
Водную пробу (100 мл) упаривают в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани не выше 50 °С до 0,1—0,2 мл (но не досуха). Остаток наносят на пластинку «силуфол» и хроматографируют в системе подвижных растворителей ацетон — 25 % раствор аммиака (9:1). После полного исчезновения запаха аммиака пластинку опрыскивают смесью 10 % растворов хлорного железа, железосинеродистого калия и воды в соотношении 1:1:2. Реактив пригоден к употреблению в течение 1 дня. Исходные растворы могут храниться на протяжении 3—4 нед в темноте. о-Толилбигуанид обнаруживается в виде темно-синих пятен на светлом фоне. Окраска стабильна в течение 40—60 мин. Нижний предел обнаружения о-толилбигуанида в описанных условиях 0,005 мг/л.
Количественное определение о-толилбигуанида проводили по зависимости между количеством вещества и площадью хроматографической зоны. В интервале концентраций 0,4—10 мкг соблюдается линейная зависимость между логарифмом количества вещества и квадратным корнем из площади хроматографической зоны. Ошибка ко-
личественных определений 9,2±1,3%. Полуколичественное определение выполняется при визуальном сравнении размера и интенсивности окраски пятен пробы и «свидетелей»— стандартных растворов о-толилбигуанида.
Указанный метод позволяет определять 93,1± ±1,6 % о-толилбигуанида, находящегося в пробе.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. М., 1981, т. 1, с. 284.
2. Котляренко И. П., Кулиш К. Ф-, Шленсковая В. М. — Хим.-фзрм., 1977, № 6, с. 128—129.
3. Хайс И. М., Мацек К. Хроматография на бумаге. М., 1962 с 739
4. Brohon У., Noel M. — J. Chromatogr., 1978, v. 146, р. 148-151.
5. Gross D.. Slrauss К- — Kautsch. Gummi. Kunstst., 1977, Bd 30, S. 811-813.
6. Hill H. M„ Chamberlein J. — S. Chromatogr., 1978, v. 149, p. 349-358.
7. Lunak S„ Smrcka /., Jelinek K. et al. — Пат. 179623 (ЧССР). —Chem. Abstr., 1980, v. 92, p. 112379m.
Поступила 12.12.83
УДК 613.632:669.018.6741-07:616.681-099-091
Г. Н. Красовский, Т. И. Бонашевская, Т. Г. Ламентова, Ю. В. Иванов, Н. Н. Беляева
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИЗУЧЕНИЯ ГОНАДОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ
НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва; Московский НИИ гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Один из важнейших аспектов гигиенической оценки химических факторов окружающей среды — изучение их специфических эффектов. Параметры выявления эффектов определяются чувствительностью используемых методов. Иллюстрацией этого положения служит настоящая работа, в которой суммированы материалы, касающиеся морфологического анализа гонадо-токсического действия ряда тяжелых металлов, поступающих в организм с питьевой водой (алюминия, бария, кадмия, ртути, свинца, серебра, таллия, хрома, цинка). Эксперименты выполнены на беспородных половозрелых самцах белых крыс (табл. 1).
При изучении влияния тяжелых металлов на мужские половые железы использован комплексный качественный и количественный струк-
Таблица 1
Схема экспериментов
Вводимое вещество Дозы, мг/кг Экспозиция
Алюминий 0,025 0,25 2,5 20 дней, 6 мес
Свинец 0,0015 0,005 0,05 20 дней, 6 мес
Барий 0,0005 0,005 0,05 18 мес
Ртуть 0,1 1 10 18 мес
Серебро 0,0005 0,05 0,5 20 дней, 6 мес
Таллий 0,0005 0,006 0,05 20 дней
0,18 0,4 0,75 6 мес
Хром 0,0005 0,005 0,05 20 дней, 6 мес
Цинк 0,005 0,05 5 20 дней
Кадмий 3 9 27 20 дней
0.0005 6 мес
Примечание, ния не проводились.
Здесь и в табл. 2: — исследова-
турно-функциональный анализ. Он включал применение обзорных методов исследования ге-моциркуляторных процессов общей гистоархи-тектоники гонад, методы тканевой морфомет-рни, при которых единицей отсчета является каналец, подсчет из серийных гистологических срезах числа канальцев со слущенным эпителием и 12-й стадией мейоза, методы клеточной морфометрии, с помощью которых определяли индекс сперматогенеза, среднее количество спер* матогониев в 20 канальцах, среднее количество различных клеток сперматогенного эпителия на 1 каналец (метод Леблонда и Клермо на), количество различного типа клеток спер матогенного эпителия в семенных канальцах находящихся в четко идентифицируемой стадии сперматогенеза (метод Леблонда и Клермона) гистохимические методы, позволяющие опреде лить содержание биополимеров (РНК, БН-групп гликогена, гликопротеинов) и активность фер ментов: сукцинатдегидрогеназы (СДГ), лактат дегидрогеназы (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегид рогеназы (Г-6-ФДГ), НАД- и НАДФ-диафораз щелочной и кислой фосфатаз (ЩФ и КФ соот ветственно), аденозинтрифосфатазы (АТФазы) Обзорные методы исследования позволили выявить действие тяжелых металлов на уровне максимальных доз. Это выражалось в повышении частоты наличия измененных семенных канальцев (с десквамацией сперматогенного эпителия, его разрежением и дезорганизацией, изредка заиустеванием или явлениями тубулорек-сиса), отмечались также вакуолизация сперма-тогониев, изменение базальных мембран канальцев в виде их отслоения или утолщения. Несмотря на то что изменения носили неспецифический характер, для каждого из исследуе-
