CC BY
27
Vвсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
категории «профессиональных» доноров. Статистически значимо (р < 0,01) снизилось количество отведенных лиц (на 55,6 %) в связи с имеющейся соматической патологией, не позволяющей выполнить донацию, с 1221 человека в 2008 г. до 679 в 2017 г., что подтверждает сведения о повышении уровня информированности населения о донорстве, в том числе о противопоказаниях к нему.
Ведение базы данных ЕДЦ, которая ежедневно пополняется информацией из социально значимых учреждений Новосибирской области, способствует повышению безопасности крови на этапе отбора доноров. Так, электронная база данных ЕДЦ НКЦК на 01.10.2018 г. содержала информацию на 491~ < 575 человек, из которых 232~ < 336 человек — носители инфекций, в том числе 44~ < 874 человека, имеющие донорский опыт. Динамика медицинских отводов по причине перенесенных гемотрансмиссивных инфекций (парентеральные вирусные гепатиты в анамнезе, сифилис, туберкулез и прочее) в НКЦК характеризовалась положительным ростом (на 18,6 %) с 750 случаев в 2008 г. до 890 случаев в 2017 г. Также статистически достоверный рост (р < 0,01) — в 3,7 раза — отмечался при оценке количества медицинских отводов по результатам анализа информации, полученной в ходе анкетирования и беседы с врачом-трансфузиологом, свидетельствующей о возможности потенциального заражения гемотрансмиссивными инфекциями (незащищенные половые контакты с лицами с неизвестным ВИЧ-статусом, частая и/или не-
Санкт-Петербург 29-30 ноября 2018 г.
давняя смена полового партнера и т.д.), со 147 случаев в 2008 г. до 540 в 2017 г. Количество медицинских отводов по прочим причинам статистически значимым колебаниям не подвергалось и составляло 327 и 331 случай в 2008 г. и 2017 г., соответственно.
Выявленная сильная обратная корреляционная связь (коэффициент корреляции -0,84) между снижением имеющейся соматической патологии у потенциальных доноров и ростом медицинских отводов по причинам, свидетельствующим о риске передачи гемотрансмиссивных инфекций через донорскую кровь, а также положительная динамика последних в структуре медицинских отводов подтверждают актуальность вопросов обеспечения инфекционной безопасности донорской крови и свидетельствуют о необходимости разработки и внедрения единой системы и подхода к комплектованию доноров с целью минимизации риска передачи инфекций через гемокомпоненты.
Выводы. Обеспечение безопасности донорской крови и ее компонентов для клинического или производственного использования включает целый ряд процессов, начинаясь с процедуры отбора доноров. Реальное существование инфекционных рисков, связанных с переливанием компонентов крови, диктует необходимость решения вопросов их профилактики путем внедрения единой политики в вопросах отбора доноров, а также формирования донорских кадров из группы добровольных безвозмездных регулярных с низким риском передачи инфекций.
Останкова Ю. В., Семенов А. В.
Федеральное бюджетное учреждение науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Санкт-Петербург
МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА ГЕПАТИТА В ПРИ НИЗКОЙ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКЕ В ОБЕСПЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ГЕМОТРАНСФУЗИЙ
Введение. Оккультное течение вирусного гепатита В (окГВ) описывается как стадия хронического вирусного гепатита В (ХВГВ), при которой при неопределяемом уровне ИВ$Л§ в сыворотке крови ДНК ВГВ обнаруживается в ткани печени, но крайне низкий уровень вирусной нагрузки как правило не позволяет обнаружить ее в крови стандартными методами. То есть диагностика, ограниченная ис-
следованием HBsAg, неэффективна, инфицированные лица не только пополнят группу пациентов с криптогенным гепатитом или получат осложнения при коинфекции, например, с вирусом иммунодефицита человека или вирусом гепатита С, но могут стать источником распространения ВГВ, будучи донорами крови. Для скрининга на окГВ возможно использование и трактовка выявления в периферической
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XIV, № 4, 2018
крови антител НВсог IgG, но высокий уровень ложноположительных результатов, в том числе среди больных, у которых после лечения не определялась ДНК ВГВ в ткани печени, но обнаруживали антитела, свидетельствует о гипердиагностике при скрининге по НВсог ^ G. Выявление ДНК ВГВ в ткани печени остается «золотым стандартом» и практически единственным достоверным методом лабораторной диагностики окГВ. Идентификация и количественная оценка кольцевой ковалент-но-замкнутой ДНК ВГВ в ткани печени позволяет с высокой точностью идентифицировать ВГВ в оккультной фазе течения заболевания, а также предварительно оценить уровень репликации вируса в гепатоцитах. Однако необходимость инвазивного вмешательства позволяет предложить метод только в качестве дополнительной диагностики в случаях, когда пункционная биопсия печени осуществляется по клиническим показаниям, но не дает возможности использовать его для скрининга доноров крови.
Цель. Разработка метода, позволяющего выявлять ВГВ при низкой вирусной нагрузке в плазме крови.
Материалы и методы. Были использованы образцы биопсийного материала и плазмы крови от пациентов с верифицированным ХВГВ, условно здоровых людей, а также HBsAg-позитивных и HBsAg-негативных доноров крови.
Результаты. Согласно разработанному нами методу, на первом этапе проводилась амплификация ДНК методом асимметричной ПЦР с использованием протяженных олигонукле-отидных праймеров с разной температурой плавления, комплементарных области наибольшего сходства геномов различных изолятов вируса гепатита В. Для повышения чувствительности проводилась вторая полимеразная цепная реакция с использованием продукта амплификации первой реакции и внутренних праймеров, соответствующих одному из че-
тырех, рекомендованных при диагностике ГВ регионов генома ВГВ. При этом в составе амплификационной смеси на каждом этапе было предложено неравномерное соотношение дезоксинуклеозидтрифосфатов и высокая концентрация MgCl2, на разных этапах в экспериментально подобранных количествах используются формамид, глицерин и DMSO.
Аналитическую чувствительность метода проверяли методом поэтапного разведения образцов с известной вирусной нагрузкой, относительно «референсных» коммерческих тест-систем с предварительной экстракцией анализируемой ДНК из различного объема биологического материала. Чувствительность предложенного метода при использовании 100 мкл плазмы при стандартном методе экстракции ДНК с помощью коммерческого набора реагентов «АмплиПрайм Рибо-преп» (ФБУН ЦНИИЭ, Москва) составила 5 МЕ/мл. Для определения специфичности разработанного метода в соответствии с отработанными условиями проведения ПЦР были исследованы предварительно охарактеризованные серологически и молекулярно-генетически негативные по ВГВ образцы плазмы. Полученные результаты свидетельствуют о высокой специфичности разработанного метода при исследовании биологического материала, а также о возможности использования его при идентификации ВГВ нехарактерных для России генотипов. Разработанный метод позволил выявить высокую распространенность оккультного ГВ у HBsAg-негативных ВИЧ- и ВГС-инфицированных лиц, пациентов с гепатитом неясной этиологии, а также доноров крови.
Выводы. Разработанный нами метод выявления ДНК ВГВ в плазме крови на основе технологии ПЦР при низкой вирусной нагрузке позволяет своевременно выявлять вирус гепатита В, в том числе малораспространенные в РФ геноварианты ВГВ, у доноров крови, позволяя совершенствовать инфекционную безопасность гемотрансфузий.
