МЕХАНИЗМЫ УЧАСТИЯ УРОКИНАЗНОГО РЕЦЕПТОРА В РЕПРОГРАММИРОВАНИИ КЛЕТОК ОПУХОЛЕВОЙ СТРОМЫ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

32

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

подобной технологии состоит в выборе метода модификации клеточной культуры [3]. В работе проведено сравнение эффективности применения принципиально различных невирусных методов модификации первичной культуры мезенхимных стромальных клеток (МСК) крысы по их влиянию на дифференцировку МСК в хондро-генном направлении.

В качестве агентов для модификации МСК использовали: рекомбинантный белок TGF-ß3, фотобиости-муляцию низкоинтенсивным лазерным излучением 632,8 нм, а также экспрессионную плазмиду с геном tgfß3. Трансфекцию проводили при помощи препарата Lipofectamin3000. При помощи проточной цитометрии на приборе BD FACS Aria III определяли: эффективность трансфекции и % жизнеспособных клеток, из чего делали вывод о цитотоксичности различных методов. Анализ эффективности модификации клеточной культуры проводили: по изменению экспрессии генов, ассоциированных с дифференцировкой в хондрогенном направлении — sox9, tgfß3, acan, coi2a1.

Эффективность трансфекции МСК плазмидой была <5%, а цитотоксичность высокой >75%. Не наблюдали цитостатического при использовании фотобиостимуля-ции или добавлении к культуре рекомбинантного белка. При этом, модификация этими методами оказывала выраженное действие на хондрогенную дифференцировку МСК, значительно увеличивая экспрессию основных генов хондрогенеза (col2a1>60х, sox9>80x, tgfß3>1000x).

Таким образом, использование белка TGF-ß3 или фо-тобиостимуляции являются наиболее перспективными методами для модификации МСК при клеточной инженерии гиалинового хряща ввиду своей эффективности и отсутствия цитотоксичности.

Литература:

1. Carballo C.B., Nakagawa Y., Sekiya I., Rodeo S.A. Clin. Sports Med. 2017, 36, p.413-425.

2. Roseti L., Desando G., Cavallo C., et al. Cells, 2019, 8, p.1305.

3. Shestovskaya M.V., Bozhkova S.A., Sopova J.V. et al. Biomedi-cines, 2021, 9, p 1666.

МЕХАНИЗМЫ УЧАСТИЯ УРОКИНАЗНОГО РЕЦЕПТОРА В РЕПРОГРАММИРОВАНИИ КЛЕТОК ОПУХОЛЕВОЙ СТРОМЫ

В.С. Бойченко1, П.С. Климович1, 2, А.А. Щипова1, К.А. Рубина1, Е.В. Семина1

1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

2 Институт экспериментальной кардиологии, НМИЦК им. Е.И. Чазова, Москва, Россия

e-mail: beroniko99@gmail.com

Ключевые слова: урокиназный рецептор, урокиназная система, система активаторов плазминогена, опухолевая строма, внеклеточные везикулы, экзосомы, нейробластома

Высокий уровень экспрессии урокиназы и ее рецептора (uPAR) связан c опухолевой прогрессией и риском развития метастаз, что позволяет рассматривать уро-киназную систему как перспективную мишень для подавления роста опухоли [1]. Клетки опухоли способны изменять свое микроокружение за счёт образования внеклеточных везикул, содержащих сигнальные белки, микроРНК и транскрипционные факторы, вызывающие ее химиорезистентность и метастазирование. Высокие уровни экспрессии белков урокиназной системы

в экзосомах опухолевых клеток позволяют предполагать их роль в перерождении окружающей стромы и активации метастазирования, опосредованной внеклеточными везикулами [2].

В работе изучали влияние везикул опухолевых клеток на изменение транскрипционной активности фибробла-стов. Собирали везикулы с клеток мышиной нейробла-стомы Neuro 2A дикого типа (N2A WT) и N2A с подавленной экспрессией uPAR (N2A-Plaur-/-), сокультивировали с фибробластами 48 часов, после чего проводили оценку уровня экспрессии мРНК маркеров активированной стромы (MMP2, MMP9, IL6, MCP1, mTOR, p53).

Было обнаружено, что добавление везикул от N2A WT достоверно повышает экспрессию мРНК mTOR, MMP2 и p53 в мышиных фибробластах по сравнению с контрольной средой (р<0,05), тогда как сокультиви-рование с везикулами от N2A-Plaur-/- такого эффекта не вызывает. В тоже время везикулы от N2A-Plaur-/-подавляли экспрессию MMP9 по сравнению с контрольной средой (р<0,05), везикулы же дикого типа не оказывали такого влияния. Оба типа везикул повышали экспрессию генов IL6 и MCP1 и достоверно не отличались.

Таким образом, можно предположить, что нокаут гена Plaur приводит к изменению состава везикул, что влияет на транскрипционную программу фибробластов и понижает проопухолевое действие везикул. Это открытие привлекает внимание к дальнейшему изучению механизмов участия урокиназной системы в перепрограммировании клеток стромы опухоли. Работа выполнена за счет средств гранта РФФИ No 20-015-00186\20.

Литература:

1. Montuori N., Pesapane A., Rossi F. et al. Translational Medicine at UniSa. 2016. № 15. P. 15-21.

2. Porcelli R., Guida M., De Summa S., Fonte R. et al. Immunother Cancer. 2021. № 9. Art. № e002372

УСТРОЙСТВО ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ

ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА

В.В. Болтовская1, В.А. Болтовский2,

А.В. Болтовский3

1 Биотехнологический центр «БиоТех» СамГМУ, Самара, Россия

2 Кафедра педиатрии ИПО СамГМУ, Самара, Россия

3 Самарский областной клинический онкологический диспансер, Самара, Россия

e-mail: violetta.boltovskaya@vandex.ru

Ключевые слова: термический ожог, лабораторные животные, полезная модель, моделирование термического ожога.

Целью создания полезной модели является моделирование стандартизированного термического ожога необходимой глубины с заранее заданной площадью, с точным ее вычислением, а также возможностью дозирования повреждающего фактора по времени и по температуре.

Эта цель достигается тем, что корпус выполнен в виде цилиндрической емкости, заполняемой водой, плоское дно которой выполняет функции контактного ожогового элемента, а нагреватель выполнен в виде трубчатого электронагревательного элемента, причем корпус выполнен из термостойкого светопрозрачного материала, корпус снабжен рукояткой. Контроль за температурой осуществляется при помощи термометра, а время

Гены & Клетки XVII, №3, 2022