CC BY
14
подобной технологии состоит в выборе метода модификации клеточной культуры [3]. В работе проведено сравнение эффективности применения принципиально различных невирусных методов модификации первичной культуры мезенхимных стромальных клеток (МСК) крысы по их влиянию на дифференцировку МСК в хондро-генном направлении.
В качестве агентов для модификации МСК использовали: рекомбинантный белок TGF-ß3, фотобиости-муляцию низкоинтенсивным лазерным излучением 632,8 нм, а также экспрессионную плазмиду с геном tgfß3. Трансфекцию проводили при помощи препарата Lipofectamin3000. При помощи проточной цитометрии на приборе BD FACS Aria III определяли: эффективность трансфекции и % жизнеспособных клеток, из чего делали вывод о цитотоксичности различных методов. Анализ эффективности модификации клеточной культуры проводили: по изменению экспрессии генов, ассоциированных с дифференцировкой в хондрогенном направлении — sox9, tgfß3, acan, coi2a1.
Эффективность трансфекции МСК плазмидой была <5%, а цитотоксичность высокой >75%. Не наблюдали цитостатического при использовании фотобиостимуля-ции или добавлении к культуре рекомбинантного белка. При этом, модификация этими методами оказывала выраженное действие на хондрогенную дифференцировку МСК, значительно увеличивая экспрессию основных генов хондрогенеза (col2a1>60х, sox9>80x, tgfß3>1000x).
Таким образом, использование белка TGF-ß3 или фо-тобиостимуляции являются наиболее перспективными методами для модификации МСК при клеточной инженерии гиалинового хряща ввиду своей эффективности и отсутствия цитотоксичности.
Литература:
1. Carballo C.B., Nakagawa Y., Sekiya I., Rodeo S.A. Clin. Sports Med. 2017, 36, p.413-425.
2. Roseti L., Desando G., Cavallo C., et al. Cells, 2019, 8, p.1305.
3. Shestovskaya M.V., Bozhkova S.A., Sopova J.V. et al. Biomedi-cines, 2021, 9, p 1666.
МЕХАНИЗМЫ УЧАСТИЯ УРОКИНАЗНОГО РЕЦЕПТОРА В РЕПРОГРАММИРОВАНИИ КЛЕТОК ОПУХОЛЕВОЙ СТРОМЫ
В.С. Бойченко1, П.С. Климович1, 2, А.А. Щипова1, К.А. Рубина1, Е.В. Семина1
1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт экспериментальной кардиологии, НМИЦК им. Е.И. Чазова, Москва, Россия
e-mail: beroniko99@gmail.com
Ключевые слова: урокиназный рецептор, урокиназная система, система активаторов плазминогена, опухолевая строма, внеклеточные везикулы, экзосомы, нейробластома
Высокий уровень экспрессии урокиназы и ее рецептора (uPAR) связан c опухолевой прогрессией и риском развития метастаз, что позволяет рассматривать уро-киназную систему как перспективную мишень для подавления роста опухоли [1]. Клетки опухоли способны изменять свое микроокружение за счёт образования внеклеточных везикул, содержащих сигнальные белки, микроРНК и транскрипционные факторы, вызывающие ее химиорезистентность и метастазирование. Высокие уровни экспрессии белков урокиназной системы
в экзосомах опухолевых клеток позволяют предполагать их роль в перерождении окружающей стромы и активации метастазирования, опосредованной внеклеточными везикулами [2].
В работе изучали влияние везикул опухолевых клеток на изменение транскрипционной активности фибробла-стов. Собирали везикулы с клеток мышиной нейробла-стомы Neuro 2A дикого типа (N2A WT) и N2A с подавленной экспрессией uPAR (N2A-Plaur-/-), сокультивировали с фибробластами 48 часов, после чего проводили оценку уровня экспрессии мРНК маркеров активированной стромы (MMP2, MMP9, IL6, MCP1, mTOR, p53).
Было обнаружено, что добавление везикул от N2A WT достоверно повышает экспрессию мРНК mTOR, MMP2 и p53 в мышиных фибробластах по сравнению с контрольной средой (р<0,05), тогда как сокультиви-рование с везикулами от N2A-Plaur-/- такого эффекта не вызывает. В тоже время везикулы от N2A-Plaur-/-подавляли экспрессию MMP9 по сравнению с контрольной средой (р<0,05), везикулы же дикого типа не оказывали такого влияния. Оба типа везикул повышали экспрессию генов IL6 и MCP1 и достоверно не отличались.
Таким образом, можно предположить, что нокаут гена Plaur приводит к изменению состава везикул, что влияет на транскрипционную программу фибробластов и понижает проопухолевое действие везикул. Это открытие привлекает внимание к дальнейшему изучению механизмов участия урокиназной системы в перепрограммировании клеток стромы опухоли. Работа выполнена за счет средств гранта РФФИ No 20-015-00186\20.
Литература:
1. Montuori N., Pesapane A., Rossi F. et al. Translational Medicine at UniSa. 2016. № 15. P. 15-21.
2. Porcelli R., Guida M., De Summa S., Fonte R. et al. Immunother Cancer. 2021. № 9. Art. № e002372
УСТРОЙСТВО ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ
ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА
В.В. Болтовская1, В.А. Болтовский2,
А.В. Болтовский3
1 Биотехнологический центр «БиоТех» СамГМУ, Самара, Россия
2 Кафедра педиатрии ИПО СамГМУ, Самара, Россия
3 Самарский областной клинический онкологический диспансер, Самара, Россия
e-mail: violetta.boltovskaya@vandex.ru
Ключевые слова: термический ожог, лабораторные животные, полезная модель, моделирование термического ожога.
Целью создания полезной модели является моделирование стандартизированного термического ожога необходимой глубины с заранее заданной площадью, с точным ее вычислением, а также возможностью дозирования повреждающего фактора по времени и по температуре.
Эта цель достигается тем, что корпус выполнен в виде цилиндрической емкости, заполняемой водой, плоское дно которой выполняет функции контактного ожогового элемента, а нагреватель выполнен в виде трубчатого электронагревательного элемента, причем корпус выполнен из термостойкого светопрозрачного материала, корпус снабжен рукояткой. Контроль за температурой осуществляется при помощи термометра, а время
воздействия-секундомером. Для фиксации лабораторного животного имеется приспособление. Устройство используют следующим образом:
Наркоз животному проводят при помощи рометара и золетила. С участка кожи, на котором будет проведено моделирование ожога, полностью удаляют шерсть. Лабораторное животное фиксируют за лапы при помощи ленточных фиксаторов.
Корпус заполняют водой, размещают в нагреватель и нагревают до заданной температуры. Контроль за температурой осуществляют термометром, время воздействия фиксируют секундомером. Температура 96° сохраняется в течение 1 мин.
Экспериментальным путем была выявлена зависимость степени ожога от времени действия температурного фактора [1].
Площадь ожога выражается в процентах ко всей поверхности тела. Для расчета площади поверхности тела у белых крыс Lee (1929) предложил модификацию формулы Мее-Рубнера [2].:
S=KW
Где S — поверхность тела в квадратных сантиметрах, К — коэффициент, равный 12,54, W — вес животного в граммах.
Литература:
1. Болтовская В.В. Патоморфология раневого процесса в зоне кожи в условиях применеия низкоинтенсивного электромагнитного излучения. Диссертация канд. мед. наук. Самара: Самарский гос.мед. ун-т, 2006. 133с.
2. Кочетыгов, Н.И. О способах воспроизведения термических ожогов в эксперименте / Н.И. Кочетыгов. JL: BMOJIA им. С.М. Кирова, 1964. — 46 с.
ФТОРПОЛИМЕРНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ИЗДЕЛИЯ ДЛЯ РЕКОНСТРУКТИВНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ ХИРУРГИИ
Е.Н. Больбасов1, В.М. Бузник2, Г.Ц. Дамбаев3, Д.Е. Кульбакин4, Е.Ю. Варакута3
1 Национальный исследовательский Томский политехнический университет, Томск, Россия
2 Национальный исследовательский Томский государственный университет, Томск, Россия
3 Сибирский государственный медицинский университет, Томск, Россия
4 НИИ онкологии Томского национального исследовательского медицинского центра РАН, Томск, Россия
e-mail: Ftoroplast@tpu.ru
Ключевые слова: Фторполимеры, Мембраны, Композиты, Электроформование.
Высокая биологическая совместимость фторполи-меров определяет их широкое применение в качестве имплантатов в реконструктивно-восстановительной хирургии. В настоящие время на основе фторполиме-ров изготавливают искусственные кровеносные сосуды; желчные протоки; искусственные клапаны сердца; имплантаты для пластической хирургии; мембраны для стоматологии; имплантаты для травматологии и ортопедии [1]. Особое место среди фторполимеров занимают материалы, обладающие сегнето- и пьезоэлектрическими свойствами в силу перспектив создания на их основе «умных» имплантатов способных стимулировать процессы регенерации поврежденных тканей, посредством
собственной электрической активности без использования батарей или электродов.
В работе представлены результаты исследований по изучению возможности использования отечественного электроактивного полимерного материала — сополимера винилиденфторида с тетрафторэтиленом (ВДФ-ТеФЭ) в качестве биологически активного полимера для изготовления мембран для регенерации слизистых оболочек ротовой полости, мембран для заживления гнойных ран, 3D имплантатов для восстановления твердых тканей в области головы и шеи, интрамедулляр-ных имплантатов для лечения врожденных патологий опорно-двигательного аппарата у детей и разработки искусственных сосудов. В сравнительном аспекте представлены результаты исследований физико-химических и медико-биологических свойств сегнетоэлектрических полимерных мембран, сформированных методами электро- и аэродинамического формования. Дана оценка физико-химических свойств и клинической эффективности сегнето- и параэлектрических полупроницаемых фторпо-лимерных мембран. Представлены результаты по модифицированию поверхности фторполимерных ВДФ-ТеФЭ мембран для увеличения биосовместимости.
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-03-00171.
Литература:
1. Адаменко Н.А., Больбасов Е.Н., Бузник В.М и др. в кн.: Фтор-полимерные материалы. Под ред. В.М. Бузника Томск: Изд-во НТЛ. 2017. 600 с.
ИНСУЛИН-ЗАВИСИМАЯ СИГНАЛИЗАЦИЯ В МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ ЖИРОВОЙ ТКАНИ
А.Д. Бондарев, П.А. Тюрин-Кузьмин
Кафедра биохимии и молекулярной медицины, Факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: khal_007@yahoo.com
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимные стро-мальные клетки, инсулин, фосфолипаза C, старение, клеточное старение, метаболический синдром
Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) представляют собой важнейшую популяцию постнатальных стволовых клеток, характеризующуюся потенцией к дифференцировке в клетки костной, хрящевой и жировой тканей. Известно, что и старение, и сахарный диабет связаны с дисфункцией жировой ткани, способствуя развитию инсулиновой резистентности [1]. Известно также о схожих функциональных изменениях в МСК из жировой ткани при ожирении и метаболическом синдроме (МетС) [2, 3], и о накоплении сенесцентных клеток при развитии ожирения. Кроме того, на модели свиньи было показано, что при МетС в МСК наблюдаются изменения в экспрессии мРНК компонентов инсулиновой сигнализации [4]. При развитии инсулинорезистентности происходит снижение или полное подавление инсулин-зависимой активации PI3K/Akt-зависимой сигнализации и часто происходит подавление MAPK/Erk1/2 сигнального каскада. В данной работе мы решили проверить, изменяется ли кальциевая сигнализация, активируемая инсулиновым рецептором при развитии инсулинорези-стентности. Используя метод прижизненной флуоресцентной микроскопии с кальциевым биосенсором Fluo-8,
