CC BY
13- Молодечно: Типография «Победа», 2009.
- 728 с.
5. Васильев, В.П. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа: учеб. для студ. вузов, обучающихся по химико-технол. спец. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2002. - 384 с.
6. Surfactant-assisted pressurized liquid extraction for determination of flavonoids from Costusspeciosus by micellarelectrokinetic chromatography / Y.Q. Chang [et al.] // J. Sep. Sci. - 2011. - 34. - P.462 - 468.
7. Flavonoids: chemistry, biochemistry, and applications / edited by Goodwin M. Andersen and Kenneth R. Markham. Р. 2006 CRC Press Taylor & Francis Group. Р. 30, 108 - 109.
8. Study of the Effect of Surfactants on Extraction and Determination of Polyphenolic Compounds and Antioxidant Capacity of Fruits Extracts: Research article. 2013 / R. Hosseinzadeh [et al.] // [Электронный ресурс]. Режим доступа: www.plosone.org. -
Дата доступа: 15.02.2014.
9. Хаззаа Ияд Хапед. Экстракция травы зверобоя и сушеницы двухфазными системами растворителей с применением ПАВ: автореф. дис...канд. фарм. н. -Санкт-Петербург, 2004. - 39 с.
10. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в растительном сырье/ А. В. Булатов [и др.] // Аналитика и контроль. - 2012. - Т. 16, № 4. - С. 358 - 362.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра фармакогнозии c курсом ФПК и ПК, тел. раб.: 8(0212) 37-09-29, Кузьмичева Н.А.
Поступила 23.06.2014 г.
О.А. Веремчук, Д.В. Моисеев
МАКРО- И МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ ПОБЕГОВ ВЕРЕСКА ОБЫКНОВЕННОГО И ИХ ПРОЯВЛЯЕМОСТЬ ПРИ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ
ИЗМЕЛЬЧЕННОСТИ
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
Вереск обыкновенный широко используется в народной медицине, однако до настоящего времени не нашел своего применения в научной медицинской практике. Целью нашего исследования было выделить внешние и анатомо-диагностические признаки побегов вереска обыкновенного, а также установить влияние степени из-мельченности сырья на возможность их определения. В ходе исследования при помощи макро- и микроскопического анализа были выявлены внешние и анатомо-диагно-стические признаки побегов вереска обыкновенного. На фракциях сырья с различной степенью измельченности была изучена проявляемость диагностических признаков. Установлено, что измельчение частиц сырья до размера 200 мкм не влияет на обнаружение анатомо-диагностических признаков, а по внешним признакам побеги вереска обыкновенного можно идентифицировать при степени измельчения не менее 1500.
Ключевые слова: вереск обыкновенный, Calluna vulgaris, внешние признаки, ана-томо-диагностические признаки.
ВВЕДЕНИЕ
Вереск обыкновенный (Calluna vulgaris Hull.) - единственный представитель рода Calluna в семействе Ericaceae. Это вечнозеленое растение распространено в Европейской части СНГ, Западной и Восточной
Сибири, встречается в Азии (главным образом в западной части), в Северной Африке (Марокко), на Азорских островах, в Гренландии и на Атлантическом побережье Америки. Вереск обыкновенный произрастает преимущественно на песчаных и супесчаных почвах разной степени увлажне-
ния и мощных сфагновых торфяниках в сосновых и смешанных лесах [1]. В народной медицине широко применяется в качестве потогонного, седативного, отхаркивающего, мочегонного средства, при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей и при артритах. Порошок вереска обыкновенного используют в виде присыпки как ранозаживляющее и гемостатическое средство. Настоем из листьев вереска обыкновенного лечат воспалительные заболевания глаз. Вереск обыкновенный входит в состав различных гомеопатических сборов [1, 2].
Среди основных групп биологически активных соединений в побегах вереска обыкновенного можно выделить флавоно-иды, фенольные кислоты, тритерпеновые сапонины и проантоцианидины. В цветках вереска обнаружены витамины, микроэлементы, пигменты, стероиды (сигмастерин, ситостерин, метиленхолестерин) [3, 4]. Среди флавоноидов преобладают гликозиды кверцетина, кемпферола и мирицетина. Доминирующей гидроксикоричной кислотой является хлорогеновая кислота. Кроме нее обнаружены кофейная, изохлорогеновая, феруловая, протокатеховая, гентизиновая, синаповая, пара-кумаровая, ванилиновая кислоты [5, 6]. Методом сверхкритической СО2-экстракции из побегов вереска обыкновенного были получены и исследованы фракции, содержащие тритерпеновые соединения (преимущественно урсоловую кислоту, олеаноловую кислоту и люпеол). Установлено, что тритерпеновые кислоты, содержание которых в наземной части вереска обыкновенного может достигать 2,5%, проявляют противовоспалительную, антиоксидантную и противоопухолевую активность [7]. Кроме того, эти соединения препятствуют перекис-ному окислению липидов и способны проявлять гепатопротекторную активность, что подтверждается экспериментальными данными, полученными в опыте in vitro на изолированной печени крыс [8]. Установлена способность урсоловой кислоты вызывать апоптоз опухолевых клеток, что указывает на ее противоопухолевую активность [9]. Имеются экспериментальные данные о способности жидкого экстракта вереска проявлять защитные свойства от УФ-радиации и предотвращать развитие рака кожи [10].
Для использования растительного сырья в официнальной медицине требуется проведение исследований по доказательству его эффективности, безопасности и качества.
При разработке нормативной документации по качеству необходимо всестороннее изучение как химического состава, так и макро- и микроскопических признаков, позволяющих с высокой степенью достоверности идентифицировать данный вид сырья.
Целью данной работы являлось изучение и выявление диагностических признаков побегов вереска обыкновенного и установление возможности их обнаружения при различной степени измельченности.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования служили побеги вереска обыкновенного различной степени измельченности, заготовленные в фазу цветения в местах естественного произрастания в 2013 году, согласно требованиям ТКП 450-2012 (02041) «Производство лекарственных средств. Надлежащая практика выращивания, сбора, хранения лекарственного растительного сырья». Разделение порошкованного сырья на фракции по размеру частиц проводили при помощи набора сит с размерами ячеек 8000, 2000, 1200, 750, 200 мкм [11].
Макроскопический анализ проводили путем внешнего осмотра сырья невооруженным глазом и при помощи луп; морфометри-ческие показатели листьев и цветков определяли при помощи штангенциркуля с ценой деления 0,05 мм. Микроскопический анализ проводили при помощи микроскопа Leica PFC 295 (Германия) со встроенной фотокамерой при собственном увеличении объективов 20*, 40* и 60х. Фотографии обрабатывали при помощи компьютерной программы Leica application Suite LAS Version 3.6.0.
При изучении внешних признаков, согласно рекомендациям Государственной фармакопеи Республики Беларусь (ГФ РБ), обращали внимание на тип ветвления стебля, форму его поперечного сечения и характер поверхности, листорасположение, тип листьев (простые или сложные), форму и размеры листовой пластинки, форму и размеры цветка, строение околоцветника (число, форму и характер срастания чашелистиков и лепестков), число и строение тычинок и пестиков, характер завязи. Также определяли цвет и запах сырья.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При рассмотрении цельного сырья
было установлено, что стебли сильноветвистые, на поперечном срезе имеют цилиндрическую форму. Поверхность стебля гладкая, ровная. Листья располагаются супротивно, плотно, образуя четыре ряда. Листья простые, без прилистников, сидячие, кожистые, с завернутыми вниз краями (эри-коидного типа), длиной 1,5-2,5 мм. Цветки образуют простое одностороннее кистевидное соцветие. Цветки обоеполые, акти-номорфные с двойным околоцветником: чашечка и венчик четырехчленные. Диаметр цветков составляет 2-3 мм. Чашелистики жесткие, раздельные, лоснящиеся. Венчик колокольчатый, меньше чашечки. Андро-цей состоит из 8 тычинок, расположенных в 2 круга. Цвет стеблей - от бурого до красновато-бурого; листьев - от светло-зеленого до зеленовато-бурого; цветков - от розового до лилово-розового. Запах ароматный, горьковатый. Результаты морфометрии листьев и цветков представлены в таблице 1.
Талица 1 - Морфометрические параметры листьев и цветков вереска обыкновенного
Параметр Значение, мм*
Длина листовой пластинки 2,40±0,14
Ширина листовой пластинки 1,14±0,06
Диаметр цветка 2,34±0,11
Длина лепестка 3,75±0,16
Ширина лепестка 1,57±0,10
Примечание. *Результаты представлены в виде х ±Дх , где х - выборочное среднее 20 измерении, Ах - полуширина доверительного интервала при р=0,05.
На основании вышеизложенного нами были выделены следующие внешние признаки побегов вереска обыкновенного, имеющие диагностическое значение:
1) мелкие сидячие листья эрикоидно-го типа, расположенные супротивно, образуя четыре ряда;
2) мелкие лиловые или лилово-розовые четырехчленные цветки, образующие одностороннее кистевидное соцветие;
3) цвет и запах сырья.
Следует отметить, что одной из возможных примесей при заготовке побегов вереска обыкновенного может оказаться филогенетически близкое растение водяника (Empetrum nigrum L), семейство Ericaceae. В отличие от вереска обыкновенного, листья водяники расположены очередно, более крупного размера (3-9 мм) и имеют короткий черешок, цветки трехчленные, плод - сочная ягода [12].
При микроскопическом изучении листьев вереска обыкновенного было выявлено следующее: клетки эпидермы полигональные, имеют сильноизвилистые равномерно утолщенные стенки, покрыты гладкой кутикулой. Многочисленные устьица округлой формы расположены преимущественно на нижней стороне листовой пластинки, выступают над плоскостью эпидермы. Околоустьичные клетки (от 3 до 5) не отличаются от остальных клеток эпидермы, не имеют закономерного расположения, следовательно, устьичный аппарат можно отнести к аномоцитному типу. Устьичные клетки имеют сферовидную форму. По всей поверхности листа встречаются простые одноклеточные остроконусовидные волоски (рисунок 1-А, см. обложку журнала). Многочисленные простые одноклеточные крючковидные волоски расположены, главным образом, по краю листовой пластинки и вдоль жилки (рисунок 1-Б, см. обложку журнала). Клетки паренхимы листа содержат крупные межклетники, образуя аэренхиму (рисунок 2, см. обложку журнала).
Клетки эпидермы стебля полигональные, прямоугольной формы с прямыми, равномерно утолщенными стенками. На поверхности имеются простые одноклеточные остроконусовидные волоски (рисунок 3, см. обложку журнала). На поперечном срезе наблюдается непучковое строение стебля.
В анатомическом строении цветков следует отметить, что клетки эпидермы чашелистиков полигональные, неправильной формы, с ровными стенками. Клетки эпидермы лепестков полигональные, прямоугольной формы, стенки прямые, равномерно утолщенные (рисунок 4-А, см. обложку журнала). Пыльцевые зерна округлой формы, с гладкой поверхностью, собраны в тетрады (рисунок 4-Б, см. обложку журнала). Тычинки состоят из вытянутой, цилиндрической формы тычиночной нити и двух пыльников, которые заканчиваются рожковидными придатками. Клетки эпидермы тычинок полигональные с сильноизвилистыми стенками, в области рожковидных придатков имеют сосочковидные выросты (рисунок 5, см. обложку журнала).
Таким образом, к анатомо-диагности-ческим признакам побегов вереска обыкновенного следует отнести:
1) клетки эпидермы листа с сильноизвилистыми стенками;
2) выступающие над плоскостью листовой пластинки устьица аномоцитного типа;
3) наличие простых одноклеточных остроконусовидных и крючковидных волосков;
4) характер эпидермы пыльников;
5) пыльцевые тетрады.
Далее устанавливали проявляемость внешних и анатомо-диагностических признаков в зависимости от степени измель-ченности сырья. После просеивания через систему сит нами были получены следующие фракции сырья (таблица 2) и проведен их макро- и микроскопический анализ:
Таблица 2 - Фракции измельченных побегов вереска обыкновенного
Размер частиц сырья, мкм Вид порошкованного сырья
8000 Резаное, дробленое сырье
2000 Крупный порошок
1200 Средне-крупный порошок
1500 Средне-крупный порошок
750 Средне-крупный порошок
200 Мелкий порошок
Фракция 8000: Видны части стеблей с листьями и без листьев (преобладают), отдельные целые цветки (мало). Можно установить листорасположение, тип, форму и размер листовой пластины, форму и размер цветков, характер околоцветника. Цвет сырья соответствует окраске отдельных частей растения, присутствующих в сырье. Запах ароматный, горьковатый. Микроскопическое исследование отдельных частей растения из данной фракции полностью соответствует анализу цельного сырья.
Фракция 2000: Видны части стеблей без листьев (преобладают) и с листьями (мало), целые цветки, а также их отдельные части (мало). Можно установить тип листьев, форму и размер листовой пластины, размер и форму цветка, характер околоцветника. Запах почти отсутствует, что объясняется значительным преобладанием стеблей и незначительной долей цветков. Поскольку в данной фракции встречаются целые листья и цветки, то микроскопический анализ будет соответствовать таковому для цельного сырья.
Фракция 1500: Видны части тонких стеблей с листьями (мало) и без листьев (преобладают), отдельные части цветков (мало), отдельные листья (мало). Можно установить цвет отдельных частей. Запах почти отсут-
ствует. При рассмотрении под микроскопом препаратов, приготовленных из данной фракции сырья, были обнаружены все признаки, имеющие диагностическое значение.
Фракция 1200: Видны части стеблей (мало), части цветков (преобладают), листьев (мало). Цвет преимущественно лилово-розовый, запах ароматный, горьковатый. При рассмотрении под микроскопом обнаруживаются все анатомо-диагностические признаки.
Фракция 750: Различимы части цветков (лилово-розового цвета), листьев (зеленого цвета), стеблей (коричневого цвета). Все части растения в порошке распределены равномерно. При рассмотрении под микроскопом хорошо видны клетки эпидермы листа с сильноизвилистыми стенками, устьица анамоцитного типа, выступающие над плоскостью эпидермы, простые одноклеточные остроконусовидные и крючковидные волоски. Обнаруживаются части лепестков и чашелистиков, а также фрагменты тычинок.
Фракция 200: По внешнему виду представляет собой практически однородный порошок светло-зеленого цвета с «мраморными» включениями; запах ароматный, горьковатый. При рассмотрении в микроскоп обнаруживаются клетки эпидермы листа, чашелистика и лепестка, наличие волосков, устьица, пыльцевые тетрады.
Макроскопический анализ позволяет идентифицировать исследуемый вид сырья до степени измельченности 1500. Однако следует отметить, что фракции 1200 и 1500 практически не обладают характерным запахом. Измельчение побегов вереска обыкновенного до частиц с размером 200 мкм не влияет на проявляемость анатомо-диагно-стических признаков. Также было установлено, что при макроскопическом анализе разных фракций сырья с увеличением степени измельченности доля стеблей уменьшается, а доля цветков и листьев возрастает. Наиболее однородное распределение всех частей наблюдается при измельчении до размера частиц 200 мкм.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Установлены внешние диагностические признаки побегов вереска обыкновенного, среди которых следует отметить характер расположения листьев (листья сидячие, супротивное листорасположение), строение цветка (цветок четырехчленный, чашечка выше венчика). Исследуемое сырье имеет
ароматный, горьковатый запах. Анатомо-диагностические признаки побегов вереска обыкновенного включают клетки эпидермы листа с сильноизвилистыми стенками, выступающие над плоскостью листовой пластинки устьица аномоцитного типа, наличие простых одноклеточных остроконусовидных и крючковидных волосков, характер эпидермы пыльников (сосочковидные выросты на рожковидных придатках), пыльцевые тетрады.
2. Идентификацию сырья по внешним признакам можно провести при размере сырья частиц не менее 1500 мкм, в то время как степень измельчения не влияет на обнаружение диагностических признаков микроскопическим методом.
SUMMARY
O.A. Veremchuk, D.V. Moiseev MACRO- AND MICROSCOPIC CHARACTERS OF HEATHER SHOOTS AND THEIR DEVELOPING
IN DIFFERENT FINENESS GRADE
Heather (Calluna vulgaris Hull.) is widely used in folk medicine, but is still beyond the scientific medicinal practice. The purpose of the present study was to distinguish external and microscopic characters of Calluna vulgaris shoots and to establish the influence of fineness grade on their detection. In this paper external and microscopic characters of Calluna vulgaris shoots were revealed. Detection of diagnostic characters was investigated using fractions of powdered plant material with different particle size. Milling heather shoots to 200 ц had not been shown to influence the detection of microscopic characters, while identification by external characters is applicable to powdered material with particle size not less than 1500.
Keywords: heather, Calluna vulgaris, external characters, microscopic characters.
ЛИТЕРАТУРА
1. Универсальная энциклопедия лекарственных растений / Сост. И. Пустыр-ский, В. Прохоров - Мн.: Книжный дом; М.: Махаон, 2000. - 656 с.
2. Ботанико-фармакогностический словарь: Справ. пособие / К.Ф. Блинова [и др.], под ред. К.Ф. Блиновой и Г.П. Яковлева. - М.: Высш. шк., 1990 - 272 с.: ил.
3. Флавоноиды Calluna vulgaris / В.Л. Шелюто [и др.] // Химия природных соединений. - 1975. - №5. - С. 652.
4. Флавоноиды Calluna vulgaris / В.Л. Шелюто [и др.] // Химия природных соединений. - 1977. - №6. - С. 859 - 860.
5. Онегин, С.В. Фармакогностиче-ское изучение вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hil.): автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / С.В. Онегин. -Пермь, 2008. - 24 с.
6. Phytochemistry of heather (Calluna vulgaris (L.) Hill.) and its altitudinal alteration / M. Monschein [et al.] // Phytochemistry Reviews. - 2010. - №9. - P. 205 - 215.
7. Jhao, J. The extraction of high value chemicals from heather (Calluna vulgaris): PhD Thesis / J. Jhao; University of York. -York. - 2006. - 226 p.
8. Lui, J. Oleanolic acid and ursolic acid: Research perspectives / J. Lui // Journal of Eth-nopharmacology. - 2005. - №100. - P. 92 - 94.
9. Introduction of apoptotic cell death by ursolic acid through mitochondrial death pathway and extrinsic death receptor pathway in MDA-MB-231 cell / K.H. Kim [et al.] // Arch Pharm Res. - 2011. - Vol. 34, №8. - P. 1363 - 1372.
10. Calluna vulgaris extracts modulated NF-kB/ERK signaling pathway and matrix metalloproteinase expression in SKH-1 hairless mice skin exposed to ultra-violet B irradiation / G.A. Filip [et al.] // Journal of Physiology. - 2012. - Vol. 63, №4. - P. 423 - 432.
11. Государственная фармакопея Республики Беларусь (ГФ РБ II): В 2 т. Т.1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / Министерство здравоохранения Республики Беларусь, УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» // под. общ. ред. А.А. Шерякова. - Молодечно: Тип. «Победа», 2012. - 1220 с.
12. Пособие по систематике цветковых растений / Н.В. Вехов [и др.] / под. ред. Н.Н. Кадена - М.: Издательство Московского университета, 1974. - 235 с.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра стандартизации лекарственных средств с курсом ФПК и ПК, тел. раб. 8(0212)37-00-06, e-mail: orlova-oa@mail.ru, Веремчук О.А.
Поступила 22.05.2014 г.
Рисунки к статье О.А. Веремчук, Д.В. Моисеева «Макро- и микроскопические признаки побегов вереска обыкновенного и их проявляемость при различной степени измельченности» (С. 49-53)
1 - клетки эпидермы; 2 - устьица; 3 - простой одноклеточный крючковид-
ный волосок; 4 - простой одноклеточный остроконусовидный волосок Рисунок 1 - Препарат с поверхности листа вереска обыкновенного
1 - клетки паренхимы; 2 - межклетники Рисунок 2 - Аэренхима листа вереска обыкновенного
1 - клетки эпидермы; 2 - простой однокле- Рисунок 4 - Лепесток вереска обыкно- 1 клетки эпидермы пьшшша; 2 сос°чко точный остроконусовидный волосок венноГо (А) и тшшьцевде зерно (Б) шджге выросты та клегеах: дожюжвднм
Рисунок 3 - Препарат с поверхности придатков; 3 - в^1рост^1 та тьииюэдш нити
стебля вереска обыкновенного Рисунок 5 - Тычинка вереска обыкно-
венного
Рисунки к статье Е.А. Рубан, М.В. Халавка, И.В. Ковалевской, Д.С. Пуляева «Обоснование способа введения действующих веществ в состав мази «Глитацид» (С. 54-56)
Рисунок 1 - Суспензии нитазола в различных растворителях
Рисунок 2 - Суспензии анестезина в различных растворителях
Рисунок 3 - Суспензии сухого экстракта корня солодки в различных растворителях
